有病理實驗室標準操作流程和技術(shù)操作規(guī)范病理實驗室標準操作流程和技術(shù)操作規(guī)范標本接收與登記1.標本接收病理標本的接收是病理診斷工作的起始環(huán)節(jié)，至關(guān)重要。標本由臨床科室送至病理科時，接收人員應(yīng)仔細核對標本與申請單信息。首先檢查申請單上患者的基本信息，包括姓名、性別、年齡、住院號、臨床診斷等是否完整準確。同時查看標本的標識，確保其與申請單上的信息一致。對于手術(shù)切除標本，要確認標本的來源部位，如肝臟、肺臟等，以及標本的數(shù)量。對于穿刺標本，需明確穿刺的具體部位和穿刺針數(shù)。例如，在接收肝臟穿刺標本時，要確認是左葉還是右葉穿刺，穿刺針數(shù)是否與申請單記錄相符。接收標本時，要注意標本的保存狀態(tài)。手術(shù)切除標本一般應(yīng)保存在固定液中，常用的固定液為10%中性福爾馬林。觀察固定液的量是否足夠，一般固定液的體積應(yīng)為標本體積的5-10倍。如果固定液不足，可能導(dǎo)致標本固定不充分，影響后續(xù)的病理診斷。對于一些特殊標本，如冰凍標本，要確保其在運輸過程中始終處于低溫狀態(tài)，避免標本解凍影響診斷準確性。2.標本登記標本接收后，需立即進行登記。使用專門的病理標本登記系統(tǒng)，將患者的基本信息、標本信息、接收時間等準確錄入系統(tǒng)。登記時要注意信息的準確性和完整性，避免錄入錯誤或遺漏重要信息。例如，對于手術(shù)標本，要詳細記錄標本的大小、形狀、顏色等特征。對于穿刺標本，要記錄穿刺組織的質(zhì)地、顏色等。同時，為每個標本分配唯一的病理編號，該編號將貫穿整個病理診斷過程，用于標本的追蹤和管理。登記完成后，將申請單和標本分別放置在相應(yīng)的位置。申請單按照編號順序整理存放，以便后續(xù)查閱。標本則根據(jù)類型和來源分類存放，例如手術(shù)標本和穿刺標本分開存放，不同部位的標本也應(yīng)分開擺放，便于后續(xù)的處理和查找。標本固定1.固定液選擇固定液的選擇直接影響標本的固定效果和后續(xù)的病理診斷。10%中性福爾馬林是最常用的固定液，它具有良好的固定效果，能使組織保持良好的形態(tài)結(jié)構(gòu)。其優(yōu)點是對組織的穿透性較強，能在較短時間內(nèi)使組織固定。此外，它還能較好地保存組織中的抗原成分，有利于后續(xù)的免疫組織化學(xué)檢測。對于一些需要進行特殊染色的標本，如顯示脂肪組織的標本，可選用含鋨酸的固定液，因為鋨酸能與脂肪結(jié)合，使脂肪組織呈現(xiàn)黑色，便于觀察。在選擇固定液時，要根據(jù)標本的類型和檢測目的進行綜合考慮。例如，對于需要進行電鏡觀察的標本，應(yīng)選用戊二醛固定液，因為戊二醛能較好地保存細胞的超微結(jié)構(gòu)。而對于一些需要進行快速診斷的標本，如冰凍切片標本，可選用乙醇等快速固定液。2.固定方法將標本放入合適的固定容器中，加入足量的固定液。固定容器的大小應(yīng)根據(jù)標本的大小進行選擇，確保標本能夠完全浸沒在固定液中。對于較大的手術(shù)標本，如子宮切除標本，可使用較大的塑料容器；對于較小的穿刺標本，可使用小的玻璃標本瓶。固定時間根據(jù)標本的大小和類型而定。一般來說，手術(shù)標本的固定時間為24-48小時，以確保標本充分固定。穿刺標本由于體積較小，固定時間可適當(dāng)縮短，一般為4-6小時。在固定過程中，要注意固定液的更換。如果固定液顏色變深或出現(xiàn)渾濁，說明固定液中的有效成分已經(jīng)消耗，應(yīng)及時更換新鮮的固定液，以保證固定效果。固定溫度一般為室溫（20-25℃）。對于一些特殊標本，如需要進行酶組織化學(xué)檢測的標本，可在低溫（4℃）下固定，以減少酶的活性損失。標本脫水1.脫水劑選擇脫水是將固定后的標本中的水分去除，以便后續(xù)的透明和浸蠟處理。常用的脫水劑有乙醇、丙酮等。乙醇是最常用的脫水劑，它具有良好的脫水效果，且對組織的損傷較小。根據(jù)脫水的不同階段，可選用不同濃度的乙醇。一般從低濃度到高濃度依次進行脫水，常用的乙醇濃度為70%、80%、90%、95%和100%。丙酮的脫水速度比乙醇快，但對組織的收縮作用較大，因此一般用于一些需要快速脫水的標本，如小的穿刺標本。在使用丙酮脫水時，要注意控制脫水時間，避免組織過度收縮。2.脫水步驟將固定好的標本從固定液中取出，用濾紙吸干表面的固定液。然后將標本依次放入不同濃度的脫水劑中進行脫水。一般每個濃度的脫水時間為1-2小時，但對于較大的標本，脫水時間可適當(dāng)延長。例如，對于肝臟切除標本，在70%乙醇中的脫水時間可延長至3-4小時。在脫水過程中，要注意脫水劑的更換。當(dāng)脫水劑中的水分含量達到一定程度時，其脫水效果會降低，應(yīng)及時更換新鮮的脫水劑。同時，要確保標本完全浸沒在脫水劑中，避免部分組織脫水不充分。透明1.透明劑選擇透明是使脫水后的標本變得透明，便于石蠟的浸入。常用的透明劑有二甲苯、氯仿等。二甲苯是最常用的透明劑，它具有良好的透明效果，能使組織迅速透明。但二甲苯對組織有一定的收縮作用，因此在使用時要注意控制透明時間。氯仿的透明效果也較好，且對組織的收縮作用相對較小，但它具有一定的毒性，使用時要注意通風(fēng)。2.透明步驟將脫水后的標本從脫水劑中取出，用濾紙吸干表面的脫水劑。然后將標本放入透明劑中進行透明。透明時間根據(jù)標本的大小和類型而定，一般為1-2小時。對于較大的標本，透明時間可適當(dāng)延長。在透明過程中，要觀察標本的透明度變化。當(dāng)標本變得完全透明時，說明透明已經(jīng)完成。透明完成后，要及時將標本從透明劑中取出，放入浸蠟容器中，避免標本在透明劑中停留時間過長，導(dǎo)致組織過度收縮。浸蠟1.石蠟選擇浸蠟是將透明后的標本浸入融化的石蠟中，使石蠟取代透明劑，從而使標本能夠制成石蠟塊。選擇合適的石蠟對于制作高質(zhì)量的石蠟塊至關(guān)重要。常用的石蠟熔點為56-58℃，這種石蠟具有良好的硬度和韌性，能夠滿足切片的要求。對于一些需要進行連續(xù)切片的標本，可選用熔點稍高的石蠟，如58-60℃的石蠟，以提高切片的質(zhì)量。2.浸蠟步驟將透明后的標本放入裝有融化石蠟的浸蠟容器中。一般需要進行2-3次浸蠟，每次浸蠟時間為1-2小時。第一次浸蠟時，可使用熔點較低的石蠟，以便石蠟?zāi)軌蚋玫亟虢M織。后續(xù)的浸蠟可使用熔點較高的石蠟，以提高石蠟塊的硬度。在浸蠟過程中，要注意保持石蠟的溫度穩(wěn)定。一般浸蠟溫度應(yīng)比石蠟的熔點高2-3℃，以確保石蠟處于融化狀態(tài)。同時，要確保標本完全浸沒在石蠟中，避免部分組織浸蠟不充分。包埋1.包埋模具選擇包埋是將浸蠟后的標本放入包埋模具中，加入融化的石蠟，制成石蠟塊。包埋模具的選擇應(yīng)根據(jù)標本的大小和類型進行。常用的包埋模具有塑料包埋模具和金屬包埋模具。塑料包埋模具價格便宜，使用方便，適用于大多數(shù)標本的包埋。金屬包埋模具的導(dǎo)熱性能好，能使石蠟快速凝固，適用于一些需要快速包埋的標本。2.包埋步驟將浸蠟后的標本從浸蠟容器中取出，放入包埋模具中。注意標本的擺放方向，應(yīng)根據(jù)后續(xù)的切片要求進行合理擺放。例如，對于手術(shù)切除標本，應(yīng)將病變部位朝上，以便在切片時能夠完整地觀察病變組織。然后向包埋模具中加入融化的石蠟，使石蠟完全覆蓋標本。將包埋模具放在冷臺上，使石蠟快速凝固。在石蠟?zāi)踢^程中，要注意避免產(chǎn)生氣泡。如果發(fā)現(xiàn)有氣泡，可用加熱的鑷子將氣泡挑出。石蠟完全凝固后，將包埋塊從包埋模具中取出，進行修整，去除多余的石蠟，使包埋塊的表面平整。切片1.切片機操作切片是將包埋好的石蠟塊切成薄片，用于顯微鏡觀察。切片機的操作需要熟練掌握。首先，將包埋塊安裝在切片機的標本夾上，調(diào)整標本夾的位置，使包埋塊的切面與切片刀平行。然后，調(diào)整切片厚度，一般病理切片的厚度為4-6μm。對于一些需要進行特殊染色的切片，如免疫組織化學(xué)切片，切片厚度可適當(dāng)調(diào)整為3-4μm。在切片過程中，要注意切片機的轉(zhuǎn)速和進刀速度。轉(zhuǎn)速過快可能導(dǎo)致切片破碎，進刀速度過快可能導(dǎo)致切片厚度不均勻。同時，要定期檢查切片刀的鋒利程度。如果切片刀變鈍，會影響切片的質(zhì)量，應(yīng)及時更換切片刀。2.切片質(zhì)量控制切片質(zhì)量的好壞直接影響病理診斷的準確性。在切片過程中，要密切觀察切片的質(zhì)量。優(yōu)質(zhì)的切片應(yīng)完整、平整，無皺折、破裂等缺陷。如果切片出現(xiàn)皺折，可能是由于切片刀不鋒利或切片速度過快導(dǎo)致的，應(yīng)及時調(diào)整切片機的參數(shù)。如果切片出現(xiàn)破裂，可能是由于包埋塊過硬或切片厚度過厚導(dǎo)致的，可適當(dāng)調(diào)整包埋時的石蠟熔點或切片厚度。切片完成后，將切片放在載玻片上，用溫水展平。然后將載玻片放在烤片機上烤片，使切片牢固地附著在載玻片上。烤片溫度一般為60℃，烤片時間為1-2小時。染色1.蘇木精-伊紅（HE）染色HE染色是病理診斷中最常用的染色方法，它能使細胞核和細胞質(zhì)呈現(xiàn)不同的顏色，便于觀察細胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。染色前，將烤好的切片放入二甲苯中脫蠟，然后依次經(jīng)過不同濃度的乙醇水化。一般從100%乙醇開始，依次經(jīng)過95%、90%、80%和70%乙醇，每個濃度的處理時間為2-3分鐘。水化后的切片放入蘇木精染液中染色，染色時間一般為5-10分鐘。染色后，用自來水沖洗切片，去除多余的蘇木精染液。然后將切片放入鹽酸乙醇分化液中進行分化，分化時間為幾秒鐘。分化的目的是去除細胞核中過多的蘇木精，使細胞核的染色更加清晰。分化后，用自來水沖洗切片，再放入氨水中進行返藍，返藍時間為1-2分鐘。返藍后的切片放入伊紅染液中染色，染色時間為2-3分鐘。染色后，用自來水沖洗切片，去除多余的伊紅染液。然后依次經(jīng)過不同濃度的乙醇脫水，從70%乙醇開始，依次經(jīng)過80%、90%、95%和100%乙醇，每個濃度的處理時間為2-3分鐘。最后將切片放入二甲苯中透明，透明時間為2-3分鐘。透明完成后，用中性樹膠封片，制成永久切片。2.免疫組織化學(xué)染色免疫組織化學(xué)染色是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標記抗體的顯色劑顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原的存在和分布。染色前，將切片進行脫蠟、水化處理，方法與HE染色相同。然后進行抗原修復(fù)，抗原修復(fù)的目的是暴露被掩蓋的抗原表位，提高抗體與抗原的結(jié)合率。常用的抗原修復(fù)方法有微波修復(fù)、高壓修復(fù)等?？乖迯?fù)后，用PBS緩沖液沖洗切片，然后滴加封閉血清，封閉非特異性結(jié)合位點。封閉時間一般為15-30分鐘。封閉完成后，去除封閉血清，滴加一抗，一抗的選擇應(yīng)根據(jù)檢測的抗原種類進行。一抗孵育時間一般為1-2小時，或在4℃冰箱中過夜。一抗孵育后，用PBS緩沖液沖洗切片，然后滴加二抗，二抗能與一抗特異性結(jié)合。二抗孵育時間一般為30-60分鐘。二抗孵育后，用PBS緩沖液沖洗切片，然后滴加顯色劑，顯色劑的顏色變化可顯示抗原的存在和分布。顯色時間根據(jù)顯色劑的種類和標本的情況而定，一般為幾分鐘到幾十分鐘。顯色完成后，用自來水沖洗切片，終止顯色反應(yīng)。最后進行復(fù)染，常用的復(fù)染劑為蘇木精。復(fù)染時間為1-2分鐘。復(fù)染后，用自來水沖洗切片，然后依次經(jīng)過脫水、透明和封片處理，制成免疫組織化學(xué)染色切片。診斷與報告1.病理診斷病理診斷是病理工作的核心環(huán)節(jié)。病理醫(yī)生在進行診斷時，首先要仔細觀察HE染色切片，了解組織和細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。觀察時要遵循從低倍鏡到高倍鏡的原則，先在低倍鏡下觀察切片的整體情況，包括組織的類型、病變的范圍等。然后在高倍鏡下觀察細胞的細節(jié)，如細胞核的大小、形態(tài)、染色質(zhì)分布等。對于一些復(fù)雜的病例，病理醫(yī)生還需要結(jié)合免疫組織化學(xué)染色結(jié)果、臨床資料等進行綜合分析。例如，對于腫瘤病例，免疫組織化學(xué)染色可以幫助確定腫瘤的來源、分級和分期等。同時，要參考臨床醫(yī)生提供的患者癥狀、體征、影像學(xué)檢查結(jié)果等信息，以提高診斷的準確性。在診斷過程中，病理醫(yī)生要嚴格遵循診斷標準和規(guī)范。對于疑難病例，可組織多學(xué)科會診，邀請臨床醫(yī)生、影像科醫(yī)生等共同討論，制定最佳的診斷和治療方案。2.病理報告病理報告是病理診斷的最終結(jié)果，應(yīng)準確、完整地反映病理診斷情況。病理報告一般包括患者的基本信息、標本信息、病理診斷結(jié)果等內(nèi)容。病理診斷結(jié)果應(yīng)使用規(guī)范的醫(yī)學(xué)術(shù)語，明確病變的性質(zhì)，如良性、惡性等。對于腫瘤病例，要詳細描述腫瘤的類型、分級、分期等信息。病理報告完成后，要進行審核。審核人員應(yīng)具有豐富的病理診斷經(jīng)驗，對報告的內(nèi)容進行嚴格把關(guān)。審核通過后，將病理報告發(fā)放給臨床科室。同時，要將病理報告的電子版和紙質(zhì)版進行存檔，以便后續(xù)的查閱和隨訪。質(zhì)量控制與安全管理1.質(zhì)量控制質(zhì)量控制是保證病理診斷準確性和可靠性的重要措施。病理實驗室應(yīng)建立完善的質(zhì)量控制體系，包括標本管理、試劑管理、設(shè)備維護等方面。定期對標本的處理流程進行檢查，確保標本的固定、脫水、透明、浸蠟等環(huán)節(jié)符合標準要求。對試劑的質(zhì)量進行監(jiān)控，定期檢查試劑的有效期和性能，避免使用過期或不合格的試劑。定期對設(shè)備進行維護和校準，確保設(shè)備的正常運行。例如，定期對切片機的切片厚度進行校準，對顯微鏡的光學(xué)系