ICS65.150

CCSB52

22

吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB22/T3386—2022

小球藻發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)規(guī)范

Thetechnicalspecificationforfermentationcultureoffreshwaterchlorellavulgaris

2022-06-23發(fā)布2022-07-23實(shí)施

吉林省市場(chǎng)監(jiān)督管理廳發(fā)布

DB22/T3386—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請(qǐng)注意本文件中的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。

本文件由吉林省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草主要單位：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，吉林省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站、通化師范學(xué)院。

本文件主要起草人：張東鳴、陳玉珂、藺麗麗、王秋舉、郭志欣、劉洪建、趙云龍、高永生。

I

DB22/T3386—2022

小球藻發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了小球藻（Chlorellavulgaris）發(fā)酵培養(yǎng)的儀器設(shè)備與耗材，培養(yǎng)基，培養(yǎng)，測(cè)定生

物量和采收。

本文件適用于淡水小球藻設(shè)施發(fā)酵培養(yǎng)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB11607漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

擴(kuò)大培養(yǎng)expandculture

培養(yǎng)基中接種少量的藻種，在適宜環(huán)境條件（溫度、鹽度、光照、pH值等）下，藻液達(dá)到一定的

濃度后，一次性采收或作進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)的過程。

發(fā)酵培養(yǎng)fermentationculture

小球藻通過生物氧化反應(yīng)獲得能量以維持藻細(xì)胞生長(zhǎng)的過程。

4儀器設(shè)備與耗材

儀器設(shè)備

小球藻發(fā)酵培養(yǎng)儀器設(shè)備應(yīng)滿足下列要求：

a)發(fā)酵罐,容量不低于50L；

b)恒溫干燥箱，不低于2000W；

c)高壓滅菌器,滅菌體積不低于50L；

d)高速離心機(jī)，轉(zhuǎn)速不低于5000r/min，離心體積不小于500mL；

e)充氣泵，功率大于200W。

耗材

玻璃三角燒瓶，培養(yǎng)皿，離心管。

1

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5培養(yǎng)基

擴(kuò)大培養(yǎng)用BG-11培養(yǎng)基，主要成分見表1。

表1BG-11培養(yǎng)基組成

貯存液配制體積（mL）成分含量（g）工作液體積（mL）

NaNO3(+N)/NaCl(-N)30/20.6

a

11000K2HPO4·3H2O0.8050

Na2CO30.40

檸檬酸0.30

2b100檸檬酸鐵銨0.302

EDTA-Na20.05

3100CaCl2·2H2O1.802

4100MgSO4·7H2O3.752

H3BO32.86

MnCl2·4H2O1.81

CuSO4·5H2O0.079

510001

Na2MoO4·2H2O0.391

Co(NO3)2·6H2O0.04947

ZnSO4·7H2O0.222

6c1000HEPES緩沖液119.1540

a貯存液1用2mol/L的NaOH調(diào)pH到7.4～8.0；

b貯存液2易生菌，高壓滅菌后保存于4℃；

c貯存液6為保種時(shí)用，平時(shí)培養(yǎng)可不加。

發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基主要成分見表2。

表2發(fā)酵培養(yǎng)基組成

貯存液成分含量

1葡萄糖41.53g/L

2尿素4.14g/L

3KH2PO40.7g/L

4MgSO4·7H2O0.7g/L

5Na2HPO4·12H2O1.84g/L

6CaCl2母液5mL

7Fe-EDTA母液15mL

8微量元素母液1.84mL

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DB22/T3386—2022

6培養(yǎng)

水質(zhì)

水質(zhì)符合GB11607的要求。

擴(kuò)大培養(yǎng)

6.2.1藻種

小球藻純度≥99.99%。

6.2.2接種

無(wú)菌環(huán)境下，將已無(wú)菌的600mLBG-11培養(yǎng)基裝入1L已滅菌處理的玻璃三角燒瓶中，然后將

200mL密度達(dá)到106ind/mL的小球藻接種于BG-11培養(yǎng)基中。

6.2.3培養(yǎng)條件

pH6.5，培養(yǎng)溫度28℃，充氣量1.5L/min,培養(yǎng)時(shí)間為96h。

發(fā)酵培養(yǎng)

6.3.1接種

在50L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，接種量為10%，將3L擴(kuò)大培養(yǎng)的小球藻藻種接入27L發(fā)酵

培養(yǎng)基中。

6.3.2培養(yǎng)條件

裝料體積30L，溫度28℃，攪拌速度150r/min~300r/min，發(fā)酵時(shí)間96h。

6.3.3補(bǔ)料

在發(fā)酵培養(yǎng)達(dá)36h時(shí)向發(fā)酵罐內(nèi)補(bǔ)充30g/L葡萄糖；在發(fā)酵培養(yǎng)達(dá)60h時(shí)向發(fā)酵罐內(nèi)補(bǔ)充

10g/L尿素，培養(yǎng)至滿96h結(jié)束。

7測(cè)定生物量

取8mL藻液裝入10mL離心管中以8000r/min離心10min，棄上清，再用蒸餾水混懸藻泥，離

心棄上清，重復(fù)三遍。將藻泥用少量蒸餾水洗入預(yù)先稱