1非淀粉多糖水解酶活力測定本標準適用于酶制劑原料（包括發(fā)酵液、粗提液、純化液、成品）中的纖維素酶、α-半乳糖苷酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶和果膠酶的GB1886.174食品安全國家標準食品添加劑食品工業(yè)用酶制劑GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗GB/T27025檢測和校準實驗室能力的GB/T36861飼料添加劑β-甘露聚糖酶活力的測定NY/T912飼料添加劑纖維素酶活力的測定分光光度計法NY/T4361飼料添加劑α-半乳糖苷酶活力的測定分光光度計法3.1非淀粉多糖non-starchpoly3.23.33.423.53.63.73.84實驗室基本要求a)樣品制備區(qū)：用于底物溶解、酶液稀釋，配備超純水系統(tǒng)和無菌操作臺；b)反應(yīng)控制區(qū)：放置恒溫設(shè)備，避免振動和光照干擾；c)分析檢測區(qū)：獨立分光光度計操作臺，避免灰塵污染光路；4.3實驗室應(yīng)配備應(yīng)急處理設(shè)施，包括洗眼器、急救箱及防毒面具。5.1實驗耗材、試劑應(yīng)從經(jīng)過資質(zhì)機構(gòu)認可的廠家貨供應(yīng)商采購，必要時對供應(yīng)商6.1.2應(yīng)使用無菌、潔凈的專用取樣器具，器具所用材質(zhì)不應(yīng)對酶活力產(chǎn)6.1.3樣品采集后應(yīng)立即處理或測6.1.4樣品應(yīng)及時加貼唯一的標簽，標簽內(nèi)容應(yīng)包括樣品編號、樣品名稱、取樣時間與人員，以及其他任何必要的信息。標簽應(yīng)防潮，書寫的內(nèi)容應(yīng)不可6.2取樣點所取樣品應(yīng)具有代表性，取樣點包括但不限于發(fā)酵過程中規(guī)定的取樣點、發(fā)酵終點、離心/過濾終36.3取樣頻率6.5取樣量應(yīng)滿足檢測所需量的至少3倍，一份用于檢測，一份用于備檢，一份用7.3木聚糖酶7,4β-葡聚糖酶7.6果膠酶8.2實驗人員應(yīng)遵守化學試劑的儲存、使用及廢棄物處理規(guī)范。9記錄與測試報告9.1應(yīng)記錄實驗的具體操作程序和結(jié)果，出具測試報告?！獙嶒灅悠返娜啃畔ⅲ?A.1試劑和材料A.1.3乙酸鈉溶液：濃度為0.1mo稱取三水乙酸鈉1.36g，加水溶解，定容稱取三水乙酸鈉23.14g，加入冰乙酸1.70mL果pH偏離5.50，再用乙酸溶液（A.1.2）或乙酸鈉溶液（A.1A.1.5氫氧化鈉溶液：濃度為200g稱取氫氧化鈉20.0g，加水溶解，定容至A.1.6木糖溶液：濃度為10.0mg稱取無水木糖1g（精確至0.0001g加磷酸氫二鈉-檸A.1.7木聚糖溶液：濃度為10.0m定其pH。如果pH為5.50，用乙酸-乙酸鈉緩沖溶液（A.1.4）定容至100mL。如果pH偏離5.50，再用乙酸溶液（A.1.2）或乙酸鈉溶液（A.1.3）調(diào)節(jié)至5.50，然后再用乙酸使用前適當搖勻。4℃避光保存，有效期為12h?；c溶液（A.1.5同時不斷攪拌，直到溶液清澈透。注意：在加入氫氧化鈉過程中，溶液溫度不應(yīng)警示——處理酸堿和配制DNS試劑時，應(yīng)在通風櫥或通風良好的房間進行，戴上保護眼鏡和乳膠手1)上海源葉S25874是適合的市售產(chǎn)品的實例。給出這一信息是為了方便本文件的使用者，并不表示對這一產(chǎn)品的認可。如2A.2儀器設(shè)備A.2.1分光光度計：波長540nm。A.2.2分析天平：感量0.001g和0.0001A.2.3離心機：轉(zhuǎn)速不低于3000A.2.4pH計：精確值0.01。A.2.6磁力攪拌器：附加熱功能。A.2.7恒溫水浴鍋：溫度控制范圍在30~80℃之間，精度為0.1℃。A.2.8渦旋混合器：轉(zhuǎn)速不低于300rpA.2.10計時器：精度1s。A.3繪制標準曲線分別用乙酸-乙酸鈉緩沖溶液（A.1.4）定容至100mL，配制成濃度為0.10mg/mL、0.20mgA.3.3分別吸取上述濃度系列的木糖標準溶液各2.00mL（做光度OD值。以木糖濃度為Y軸、吸光度A值為X軸，繪制標A.4反應(yīng)用酶液制備A.4.1固體樣品的反應(yīng)用酶液制備再用乙酸-乙酸鈉緩沖溶液定容至100mL,在4℃條件下避光保存1~2h。用離心機1000g離心3~5min，A.4.2液體樣品的反應(yīng)用酶液制備活力宜控制在0.04~0.10U/mL之間）。如果稀釋后酶液的pH偏離5.50，需用乙酸溶液（A.1.2）或乙酸鈉溶液（A.1.3）調(diào)節(jié)至5.50，然后再用乙酸-乙酸鈉緩沖溶液做適當稀A.5測定步驟A.5.1吸取10.0mL木聚糖溶液（A.1.737℃水浴保溫平衡A.5.2吸取10.0mL經(jīng)過適當稀釋的酶液，37℃水浴保溫平衡10min。3A.5.3吸取2.0mL經(jīng)過已經(jīng)過37℃平衡的適當稀釋酶液，加入到刻度為空白對照，在540nm處測定吸光度A.5.4吸取2.00mL經(jīng)過已經(jīng)過37℃平衡的適當稀釋的酶液，加入到刻度試管中，再加入已經(jīng)過37℃電磁振蕩3s，以終止酶解反應(yīng)。沸水浴加熱5min，用自來水冷至室溫，加水定容至25mL，電磁振蕩3s。以標準空白樣（A.3.1）為空白對照，在540nm測定吸光度AE。A.6結(jié)果計算XDXD——樣品的木聚糖酶活力，單位為