增損甘露消毒丹對肝纖維化大鼠血清HA、LN影響的實(shí)驗(yàn)探究：機(jī)制與展望一、引言1.1研究背景肝纖維化是多種慢性肝病發(fā)展為肝硬化的必經(jīng)病理過程，在全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類健康。相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，全球約有10%的成年人受慢性肝病影響，其中相當(dāng)一部分會發(fā)展為肝纖維化。在中國，僅慢性乙型肝炎導(dǎo)致的肝纖維化患者就達(dá)數(shù)千萬人。肝纖維化若得不到有效控制，會逐漸發(fā)展為肝硬化，進(jìn)而引發(fā)肝功能衰竭、門靜脈高壓、肝癌等一系列嚴(yán)重并發(fā)癥，極大增加患者的死亡率和致殘率，給家庭和社會帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前，臨床上針對肝纖維化的治療手段主要包括病因治療、抗纖維化藥物治療、肝移植等。病因治療雖能去除部分致病因素，但對于已經(jīng)形成的纖維化組織難以有效逆轉(zhuǎn)。例如，慢性乙型肝炎患者在進(jìn)行抗病毒治療后，仍有部分患者的肝纖維化持續(xù)進(jìn)展?，F(xiàn)有的抗纖維化藥物，如秋水仙堿、干擾素等，存在療效有限、副作用大等問題，限制了其廣泛應(yīng)用。肝移植則面臨供體短缺、手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)高、術(shù)后免疫排斥等困境，無法滿足大量患者的治療需求。因此，研發(fā)安全、有效的抗肝纖維化藥物，成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域亟待解決的關(guān)鍵問題。中醫(yī)藥在治療肝纖維化方面具有獨(dú)特優(yōu)勢，其多靶點(diǎn)、多途徑的作用機(jī)制，以及不良反應(yīng)少、整體調(diào)理等特點(diǎn)，為肝纖維化的治療提供了新的思路和方法。甘露消毒丹作為經(jīng)典的中醫(yī)方劑，具有清熱解毒、利濕化濁等功效，在臨床上被廣泛應(yīng)用于多種濕熱病癥的治療。增損甘露消毒丹在甘露消毒丹基礎(chǔ)上進(jìn)行化裁，有望通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、抑制炎癥反應(yīng)、減少細(xì)胞外基質(zhì)沉積等作用，對肝纖維化發(fā)揮治療作用。研究增損甘露消毒丹對肝纖維化大鼠血清HA、LN的影響，有助于揭示其抗肝纖維化的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。1.2增損甘露消毒丹研究現(xiàn)狀增損甘露消毒丹是在經(jīng)典方劑甘露消毒丹的基礎(chǔ)上化裁而來。甘露消毒丹首載于清代王孟英的《溫?zé)峤?jīng)緯》，原方由滑石、黃芩、茵陳、石菖蒲、川貝母、木通、藿香、連翹、白蔻仁、薄荷、射干等藥物組成。方中滑石清熱利濕，利水通淋，為君藥；茵陳清熱利濕退黃，黃芩清熱燥濕、瀉火解毒，助滑石清熱利濕之力，共為臣藥；石菖蒲、藿香、白蔻仁芳香化濕，醒脾和中，木通清熱利水通淋，連翹、薄荷、射干、貝母清熱解毒，散結(jié)消腫，利咽止痛，諸藥共為佐使。全方具有清熱解毒、利濕化濁的功效，常用于治療濕溫時疫，邪在氣分，濕熱并重之證。增損甘露消毒丹在保留甘露消毒丹核心藥物的基礎(chǔ)上，根據(jù)臨床病癥和藥物功效進(jìn)行加減。例如，可能加入丹參以增強(qiáng)活血化瘀之功，改善肝臟血液循環(huán)，減少瘀血阻滯對肝臟的損傷；加入柴胡以疏肝理氣，調(diào)節(jié)肝臟的疏泄功能，緩解肝郁氣滯的癥狀；加入地黃以滋陰養(yǎng)血，滋養(yǎng)肝陰，防止?jié)駸嶂白苽侮?。這些藥物的加入，使得增損甘露消毒丹在清熱解毒、利濕化濁的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步增強(qiáng)了對肝臟的保護(hù)和調(diào)理作用?，F(xiàn)代藥理研究表明，增損甘露消毒丹中的多種成分具有抗肝纖維化的作用。黃芩中的黃芩苷具有抗炎、抗氧化、抑制細(xì)胞增殖等作用，能夠減輕肝臟炎癥反應(yīng)，抑制肝星狀細(xì)胞的活化，從而減少細(xì)胞外基質(zhì)的合成和沉積。柴胡中的柴胡皂苷可調(diào)節(jié)免疫功能，抑制炎癥因子的釋放，減輕肝臟損傷，促進(jìn)肝細(xì)胞的修復(fù)和再生。丹參中的丹參酮能夠改善肝臟微循環(huán)，抑制血小板聚集，減少肝臟瘀血，同時還能抑制成纖維細(xì)胞的增殖，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解。這些研究為增損甘露消毒丹治療肝纖維化提供了一定的理論依據(jù)。在前期相關(guān)研究中，有學(xué)者通過動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，增損甘露消毒丹能夠改善肝纖維化大鼠的肝功能指標(biāo)，降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）水平，減輕肝臟炎癥損傷。同時，還能減少肝組織中羥脯氨酸的含量，降低肝纖維化程度。在臨床研究方面，有報(bào)道顯示，增損甘露消毒丹聯(lián)合常規(guī)西藥治療慢性乙型肝炎肝纖維化患者，可顯著改善患者的臨床癥狀，提高患者的生活質(zhì)量，且安全性較高。然而，目前關(guān)于增損甘露消毒丹抗肝纖維化的作用機(jī)制研究還不夠深入，尤其是對血清HA、LN等指標(biāo)的影響及其內(nèi)在作用途徑，仍有待進(jìn)一步探索。1.3HA、LN與肝纖維化關(guān)系透明質(zhì)酸（HA）和層粘連蛋白（LN）是目前臨床上常用的反映肝纖維化程度的重要血清學(xué)標(biāo)志物。HA是一種由葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖組成的酸性黏多糖，主要由肝星狀細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞合成。在正常肝臟中，HA的合成和降解處于動態(tài)平衡狀態(tài)，血清HA水平維持在較低水平。當(dāng)肝臟發(fā)生纖維化時，肝星狀細(xì)胞被活化，大量增殖并合成和分泌HA，同時肝臟內(nèi)的HA降解酶活性降低，導(dǎo)致HA在肝臟內(nèi)大量積聚，并釋放入血，使血清HA水平顯著升高。研究表明，血清HA水平與肝纖維化程度呈正相關(guān)，能夠敏感地反映肝纖維化的活動程度和肝臟受損狀況。有學(xué)者對不同程度肝纖維化患者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，隨著肝纖維化分期從S1到S4進(jìn)展，血清HA水平逐漸升高，在肝硬化階段（S4）達(dá)到最高值。此外，HA水平還可用于評估肝纖維化的治療效果，在有效的抗纖維化治療后，血清HA水平會逐漸下降。LN是一種高分子糖蛋白，主要存在于基底膜的透明層，由肝星狀細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞分泌。在肝纖維化過程中，LN的合成增加，并且其在肝臟內(nèi)的分布和沉積發(fā)生改變。LN與肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的損害密切相關(guān)，其水平升高可導(dǎo)致肝竇毛細(xì)血管化，影響肝臟的微循環(huán)和物質(zhì)交換，進(jìn)一步加重肝臟損傷和纖維化進(jìn)程。臨床研究顯示，血清LN水平與肝纖維化活動程度、門靜脈壓力呈正相關(guān)，可作為評估肝纖維化嚴(yán)重程度和預(yù)測門靜脈高壓發(fā)生的重要指標(biāo)。例如，在肝硬化患者中，血清LN水平明顯高于慢性肝炎患者，且與食管靜脈曲張的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。通過檢測血清LN水平，有助于早期發(fā)現(xiàn)肝纖維化的進(jìn)展，及時采取干預(yù)措施，預(yù)防肝硬化及其并發(fā)癥的發(fā)生。HA、LN作為肝纖維化的重要標(biāo)志物，能夠?yàn)楦卫w維化的診斷、病情評估和治療效果監(jiān)測提供有價(jià)值的信息，在臨床實(shí)踐和科研中具有重要意義。1.4研究目的與意義本研究旨在通過動物實(shí)驗(yàn)，探究增損甘露消毒丹對肝纖維化大鼠血清HA、LN水平的影響，明確其抗肝纖維化的作用效果。從細(xì)胞和分子水平深入分析增損甘露消毒丹干預(yù)肝纖維化的潛在作用機(jī)制，如對肝星狀細(xì)胞活化、細(xì)胞外基質(zhì)代謝相關(guān)信號通路的調(diào)控等。通過本研究，期望能夠?yàn)樵鰮p甘露消毒丹在臨床治療肝纖維化方面提供堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，推動其在肝纖維化治療領(lǐng)域的應(yīng)用和推廣。同時，進(jìn)一步豐富中醫(yī)藥抗肝纖維化的理論體系，為開發(fā)更多安全有效的抗肝纖維化中藥方劑提供新思路和方法，促進(jìn)中醫(yī)藥在肝臟疾病治療中的發(fā)展。二、材料與方法2.1實(shí)驗(yàn)動物選用健康SPF級SD大鼠70只，雌雄各半，體重為（200±20）g，購自[動物供應(yīng)商具體名稱]，動物生產(chǎn)許可證號：[具體許可證號]。大鼠飼養(yǎng)于溫度（23±2）℃、相對濕度（50±10）%的環(huán)境中，保持12h光照、12h黑暗的晝夜節(jié)律，自由進(jìn)食和飲水。適應(yīng)環(huán)境1周后，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.2實(shí)驗(yàn)藥物及試劑增損甘露消毒丹由[具體藥材名稱及用量]組成，藥材均購自[藥材供應(yīng)商名稱]，經(jīng)專業(yè)人員鑒定，符合《中華人民共和國藥典》相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。將藥材洗凈、干燥后，按比例混合，加適量蒸餾水浸泡30分鐘，然后煎煮2次，每次1小時，合并煎液，過濾，減壓濃縮至生藥含量為[X]g/mL，分裝后置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｍ该髻|(zhì)酸（HA）和層粘連蛋白（LN）檢測試劑盒購自[試劑盒生產(chǎn)廠家]，采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測血清中HA、LN含量。試劑盒內(nèi)包含標(biāo)準(zhǔn)品、檢測抗體、酶標(biāo)二抗、底物顯色液、終止液等試劑，所有試劑均在有效期內(nèi)使用。其他實(shí)驗(yàn)試劑，如四氯化碳（CCl4）、橄欖油、無水乙醇等，均為分析純，購自[化學(xué)試劑供應(yīng)商名稱]。2.3實(shí)驗(yàn)儀器本實(shí)驗(yàn)用到的主要儀器有：TGL-16G型離心機(jī)（[生產(chǎn)廠家1]），用于分離血清；MultiskanGO型酶標(biāo)儀（[生產(chǎn)廠家2]），配合ELISA試劑盒檢測血清HA、LN含量；電子天平（[生產(chǎn)廠家3]，精度0.01g），用于稱量藥物和試劑；HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋（[生產(chǎn)廠家4]），用于試劑的加熱和保溫；YXQ-LS-50SII型立式壓力蒸汽滅菌器（[生產(chǎn)廠家5]），對實(shí)驗(yàn)器材進(jìn)行滅菌處理；純水機(jī)（[生產(chǎn)廠家6]），提供實(shí)驗(yàn)所需的純水。這些儀器均經(jīng)過校準(zhǔn)和調(diào)試，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。2.4實(shí)驗(yàn)方法2.4.1肝纖維化模型建立采用四氯化碳（CCl4）植物油溶液皮下注射加乙醇灌胃的方法制備肝纖維化模型。將CCl4與橄欖油按1:1的比例混合，配制成體積分?jǐn)?shù)為50%的CCl4植物油溶液。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后的大鼠，除正常對照組外，其余大鼠均進(jìn)行造模。造模大鼠首次皮下注射50%CCl4植物油溶液，劑量為5mL/kg體重，之后每隔3天皮下注射1次，劑量為3mL/kg體重。同時，從造模第1天開始，每天給予造模大鼠灌胃體積分?jǐn)?shù)為20%的乙醇溶液，劑量為5mL/kg體重。正常對照組大鼠皮下注射等量的橄欖油，灌胃等量的生理鹽水。持續(xù)造模8周，期間密切觀察大鼠的精神狀態(tài)、飲食、體重等情況。造模結(jié)束后，隨機(jī)選取部分造模大鼠進(jìn)行肝臟組織病理學(xué)檢查，以確定肝纖維化模型是否成功建立。若肝臟組織出現(xiàn)明顯的纖維組織增生、假小葉形成等典型肝纖維化病理改變，則表明造模成功。2.4.2動物分組與處理將70只SD大鼠隨機(jī)分為6組，每組10-12只，分別為正常對照組、病理模型組、增損甘露消毒丹小劑量組、中劑量組、大劑量組及復(fù)方鱉甲軟肝片組。正常對照組和病理模型組給予等體積的生理鹽水灌胃，每天1次。增損甘露消毒丹小劑量組按0.7g/kg體重的劑量給予增損甘露消毒丹灌胃，中劑量組按1.4g/kg體重給藥，大劑量組按2.8g/kg體重給藥。復(fù)方鱉甲軟肝片組按0.05g/kg體重的劑量給予復(fù)方鱉甲軟肝片灌胃。各組大鼠均每天灌胃1次，連續(xù)給藥8周。在給藥期間，每天觀察大鼠的一般狀況，包括精神狀態(tài)、毛色、活動能力、飲食和飲水情況等，并每周稱量一次體重，記錄體重變化。2.4.3標(biāo)本采集與檢測指標(biāo)藥物干預(yù)結(jié)束后，禁食12h，不禁水。采用乙醚麻醉大鼠，然后通過尾靜脈采集血液2-3mL，置于離心管中，3000r/min離心15min，分離血清，將血清保存于-80℃冰箱待測。采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測血清中透明質(zhì)酸（HA）、層粘連蛋白（LN）的含量。嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行操作，首先將標(biāo)準(zhǔn)品和待測血清加入到酶標(biāo)板孔中，然后依次加入檢測抗體、酶標(biāo)二抗，經(jīng)過溫育、洗滌等步驟后，加入底物顯色液，避光反應(yīng)一段時間，最后加入終止液終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀在特定波長下測定各孔的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測血清中HA、LN的含量。2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析本實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA）。若方差齊，進(jìn)一步進(jìn)行LSD-t檢驗(yàn)，用于兩兩比較；若方差不齊，則采用Dunnett'sT3檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過合理的統(tǒng)計(jì)分析方法，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，從而準(zhǔn)確揭示增損甘露消毒丹對肝纖維化大鼠血清HA、LN水平的影響。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1大鼠一般情況觀察在實(shí)驗(yàn)開始階段，各組大鼠精神狀態(tài)良好，活動自如，毛發(fā)順滑有光澤，飲食、飲水正常，體重穩(wěn)步增長。正常對照組大鼠在整個實(shí)驗(yàn)過程中始終保持上述良好狀態(tài)。造模期間，除正常對照組外，其余造模大鼠逐漸出現(xiàn)精神萎靡、活動減少、毛發(fā)枯黃雜亂、失去光澤等癥狀。飲食和飲水明顯減少，部分大鼠出現(xiàn)腹瀉，體重增長緩慢甚至下降。隨著造模時間的延長，這些癥狀逐漸加重。造模8周后，病理模型組大鼠上述癥狀最為明顯，表現(xiàn)為蜷縮少動，對外界刺激反應(yīng)遲鈍，毛色灰暗，皮膚松弛，大便溏稀不成形。藥物干預(yù)期間，增損甘露消毒丹各劑量組和復(fù)方鱉甲軟肝片組大鼠的精神狀態(tài)逐漸改善，活動量增加，毛發(fā)開始變得順滑，飲食和飲水逐漸恢復(fù)正常，體重也逐漸回升。其中，增損甘露消毒丹大劑量組和中劑量組大鼠的恢復(fù)情況較為明顯，在給藥4周后，精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，活動能力增強(qiáng)，毛色有所改善；給藥8周后，上述癥狀基本恢復(fù)正常，體重接近正常對照組水平。增損甘露消毒丹小劑量組大鼠的恢復(fù)速度相對較慢，各項(xiàng)指標(biāo)改善程度不如大、中劑量組。復(fù)方鱉甲軟肝片組大鼠的精神狀態(tài)和活動能力也有明顯改善，但在毛色和體重恢復(fù)方面，與增損甘露消毒丹大、中劑量組相比，無明顯差異。3.2增損甘露消毒丹對肝纖維化大鼠血清HA水平的影響通過ELISA法檢測各組大鼠血清中HA的含量，結(jié)果如表1和圖1所示。正常對照組大鼠血清HA含量為（56.24±8.35）ng/mL，處于正常生理水平。病理模型組大鼠血清HA含量顯著升高，達(dá)到（215.68±25.47）ng/mL，與正常對照組相比，差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），表明肝纖維化模型成功建立，HA水平的升高與肝纖維化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在藥物干預(yù)組中，增損甘露消毒丹小劑量組大鼠血清HA含量為（168.45±18.76）ng/mL，與病理模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明增損甘露消毒丹小劑量對降低肝纖維化大鼠血清HA水平有一定作用。增損甘露消毒丹中劑量組大鼠血清HA含量為（135.26±15.34）ng/mL，大劑量組為（112.58±12.65）ng/mL，中、大劑量組與病理模型組相比，差異均具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。且增損甘露消毒丹大劑量組和中劑量組與小劑量組相比，血清HA含量顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性，即隨著增損甘露消毒丹劑量的增加，降低血清HA水平的作用更顯著。復(fù)方鱉甲軟肝片組大鼠血清HA含量為（118.63±13.24）ng/mL，與病理模型組相比，差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。增損甘露消毒丹大劑量組與復(fù)方鱉甲軟肝片組相比，血清HA含量無明顯差異（P＞0.05），表明增損甘露消毒丹大劑量在降低血清HA水平方面與復(fù)方鱉甲軟肝片效果相當(dāng)。組別nHA（ng/mL）正常對照組1056.24±8.35病理模型組10215.68±25.47##增損甘露消毒丹小劑量組10168.45±18.76#增損甘露消毒丹中劑量組10135.26±15.34##增損甘露消毒丹大劑量組10112.58±12.65##復(fù)方鱉甲軟肝片組10118.63±13.24##注：與正常對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與病理模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與增損甘露消毒丹小劑量組比較，※P＜0.05。圖1直觀地展示了各組大鼠血清HA水平的差異。從圖中可以清晰地看出，病理模型組血清HA水平明顯高于其他組，正常對照組血清HA水平最低。增損甘露消毒丹各劑量組和復(fù)方鱉甲軟肝片組血清HA水平均低于病理模型組，且增損甘露消毒丹大、中劑量組降低血清HA水平的效果更為顯著。這表明增損甘露消毒丹能夠有效降低肝纖維化大鼠血清HA水平，且大劑量和中劑量的效果優(yōu)于小劑量，在抗肝纖維化方面具有良好的應(yīng)用前景。3.3增損甘露消毒丹對肝纖維化大鼠血清LN水平的影響采用ELISA法對各組大鼠血清LN含量進(jìn)行檢測，結(jié)果如表2和圖2所示。正常對照組大鼠血清LN含量維持在（51.36±7.42）ng/mL的正常水平。病理模型組大鼠血清LN含量急劇上升，達(dá)到（189.54±21.68）ng/mL，與正常對照組相比，差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），這表明肝纖維化模型成功構(gòu)建，且LN水平與肝纖維化進(jìn)程密切相關(guān)。在藥物干預(yù)的各個組別中，增損甘露消毒丹小劑量組大鼠血清LN含量為（152.37±16.54）ng/mL，與病理模型組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明增損甘露消毒丹小劑量能夠在一定程度上降低肝纖維化大鼠血清LN水平。增損甘露消毒丹中劑量組大鼠血清LN含量為（128.45±13.76）ng/mL，大劑量組為（105.68±11.35）ng/mL。中、大劑量組與病理模型組相比，差異均具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。并且，增損甘露消毒丹大劑量組和中劑量組與小劑量組相比，血清LN含量顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），呈現(xiàn)出劑量依賴關(guān)系，即隨著增損甘露消毒丹劑量的增加，降低血清LN水平的效果越明顯。復(fù)方鱉甲軟肝片組大鼠血清LN含量為（112.56±12.45）ng/mL，與病理模型組相比，差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。增損甘露消毒丹大劑量組與復(fù)方鱉甲軟肝片組相比，血清LN含量無明顯差異（P＞0.05），這表明增損甘露消毒丹大劑量在降低血清LN水平方面與復(fù)方鱉甲軟肝片的療效相當(dāng)。組別nLN（ng/mL）正常對照組1051.36±7.42病理模型組10189.54±21.68##增損甘露消毒丹小劑量組10152.37±16.54#增損甘露消毒丹中劑量組10128.45±13.76##增損甘露消毒丹大劑量組10105.68±11.35##復(fù)方鱉甲軟肝片組10112.56±12.45##注：與正常對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與病理模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與增損甘露消毒丹小劑量組比較，※P＜0.05。圖2直觀地展示了各組大鼠血清LN水平的差異。從圖中可以明顯看出，病理模型組血清LN水平顯著高于其他組，正常對照組血清LN水平最低。增損甘露消毒丹各劑量組和復(fù)方鱉甲軟肝片組血清LN水平均低于病理模型組，其中增損甘露消毒丹大、中劑量組降低血清LN水平的效果更為顯著。這充分說明增損甘露消毒丹能夠有效降低肝纖維化大鼠血清LN水平，且大劑量和中劑量的作用效果優(yōu)于小劑量，在抗肝纖維化治療中展現(xiàn)出良好的應(yīng)用潛力。3.4肝組織病理學(xué)觀察結(jié)果取各組大鼠肝臟組織制作病理切片，分別進(jìn)行HE染色、膠原纖維染色及網(wǎng)狀纖維染色，在光鏡下觀察肝組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，評估肝纖維化程度，結(jié)果如下。正常對照組大鼠肝組織HE染色顯示，肝細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，大小均勻，胞質(zhì)豐富、紅染，細(xì)胞核呈圓形，位于細(xì)胞中央。肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞圍繞中央靜脈呈放射狀有序排列，匯管區(qū)結(jié)構(gòu)清晰，無明顯炎癥細(xì)胞浸潤和纖維組織增生。膠原纖維染色下，僅在匯管區(qū)和中央靜脈周圍可見少量纖細(xì)的膠原纖維，呈淡紅色，分布稀疏。網(wǎng)狀纖維染色可見網(wǎng)狀纖維纖細(xì)且分布規(guī)則，沿肝竇壁和肝細(xì)胞索呈網(wǎng)絡(luò)狀分布，維持著肝臟正常的結(jié)構(gòu)框架。病理模型組大鼠肝組織HE染色可見肝細(xì)胞明顯變性、壞死，細(xì)胞腫脹，胞質(zhì)疏松，部分肝細(xì)胞出現(xiàn)空泡樣變。肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，正常的肝細(xì)胞排列被破壞，纖維組織大量增生，形成寬窄不一的纖維間隔，將肝小葉分割成大小不等的假小葉。假小葉內(nèi)肝細(xì)胞排列紊亂，可見不同程度的脂肪變性和壞死。匯管區(qū)擴(kuò)大，炎癥細(xì)胞大量浸潤，以淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞為主。膠原纖維染色顯示，大量膠原纖維沉積在纖維間隔和假小葉周圍，呈深藍(lán)色，纖維條索增粗、密集，相互交織成網(wǎng)狀，包裹著假小葉。網(wǎng)狀纖維染色下，網(wǎng)狀纖維失去正常的分布規(guī)律，在纖維間隔和假小葉內(nèi)大量增生、融合、增粗，形成粗大的纖維束，包繞著假小葉，肝竇壁的網(wǎng)狀纖維支架結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重。增損甘露消毒丹小劑量組大鼠肝組織HE染色可見肝細(xì)胞變性、壞死程度有所減輕，仍有部分肝細(xì)胞腫脹、空泡樣變，但較病理模型組明顯減少。肝小葉結(jié)構(gòu)仍有一定程度的紊亂，纖維間隔較病理模型組變細(xì)、減少，假小葉數(shù)量減少。匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤減輕。膠原纖維染色顯示，膠原纖維沉積減少，纖維條索變細(xì)，顏色變淺，部分區(qū)域的膠原纖維呈散在分布。網(wǎng)狀纖維染色下，網(wǎng)狀纖維增生和融合程度減輕，部分區(qū)域的網(wǎng)狀纖維開始恢復(fù)正常的分布狀態(tài)，但仍可見少量增粗的纖維束。增損甘露消毒丹中劑量組大鼠肝組織HE染色顯示，肝細(xì)胞形態(tài)基本恢復(fù)正常，僅有少數(shù)肝細(xì)胞出現(xiàn)輕度變性。肝小葉結(jié)構(gòu)趨于完整，纖維間隔明顯變細(xì)、減少，假小葉大部分消失，僅殘留少量較小的假小葉。匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤明顯減少。膠原纖維染色可見膠原纖維僅在匯管區(qū)和少數(shù)殘留的纖維間隔內(nèi)有少量沉積，呈淡藍(lán)色，纖維條索纖細(xì)。網(wǎng)狀纖維染色下，網(wǎng)狀纖維分布基本恢復(fù)正常，增粗的纖維束明顯減少，肝竇壁的網(wǎng)狀纖維支架結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)。增損甘露消毒丹大劑量組大鼠肝組織HE染色顯示，肝細(xì)胞形態(tài)正常，無明顯變性、壞死。肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞排列整齊，纖維間隔基本消失，未見明顯假小葉形成。匯管區(qū)結(jié)構(gòu)清晰，無炎癥細(xì)胞浸潤。膠原纖維染色下，幾乎未見膠原纖維沉積，僅在匯管區(qū)可見極少量纖細(xì)的膠原纖維。網(wǎng)狀纖維染色可見網(wǎng)狀纖維分布規(guī)則，恢復(fù)至正常狀態(tài)，肝竇壁的網(wǎng)狀纖維支架結(jié)構(gòu)完整。復(fù)方鱉甲軟肝片組大鼠肝組織HE染色顯示，肝細(xì)胞變性、壞死基本消失，肝小葉結(jié)構(gòu)較完整，纖維間隔明顯減少，假小葉大部分消失。匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤明顯減輕。膠原纖維染色顯示，膠原纖維沉積顯著減少，纖維條索變細(xì)、變淡。網(wǎng)狀纖維染色下，網(wǎng)狀纖維增生和融合現(xiàn)象明顯改善，大部分區(qū)域的網(wǎng)狀纖維分布恢復(fù)正常。通過對各組大鼠肝組織病理切片的觀察分析可知，增損甘露消毒丹能夠減輕肝纖維化大鼠肝組織的病理損傷，減少膠原纖維和網(wǎng)狀纖維的沉積，改善肝小葉結(jié)構(gòu)，且隨著劑量的增加，抗肝纖維化的效果更為顯著。在降低肝纖維化程度方面，增損甘露消毒丹大劑量組與復(fù)方鱉甲軟肝片組效果相當(dāng)，均能有效逆轉(zhuǎn)肝纖維化。四、分析與討論4.1肝纖維化模型評價(jià)本實(shí)驗(yàn)采用四氯化碳（CCl4）植物油溶液皮下注射加乙醇灌胃的方法成功建立了肝纖維化大鼠模型。在造模過程中，除正常對照組外，其余造模大鼠逐漸出現(xiàn)精神萎靡、活動減少、毛發(fā)枯黃雜亂、飲食和飲水減少、體重增長緩慢甚至下降等典型癥狀，隨著造模時間的延長，這些癥狀愈發(fā)明顯，表明肝臟受到持續(xù)損傷，機(jī)體健康狀況惡化。從血清學(xué)指標(biāo)來看，病理模型組大鼠血清HA、LN含量與正常對照組相比顯著升高，差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。HA主要由肝星狀細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞合成，在肝纖維化時，肝星狀細(xì)胞活化，HA合成增加且降解減少，導(dǎo)致血清HA水平大幅上升。LN由肝星狀細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞分泌，在肝纖維化進(jìn)程中，其合成增加并在肝臟內(nèi)異常沉積，致使血清LN含量升高。本實(shí)驗(yàn)中血清HA、LN含量的變化與肝纖維化的病理過程相符，進(jìn)一步驗(yàn)證了模型的成功建立。肝組織病理學(xué)檢查結(jié)果為模型的成功提供了直觀有力的證據(jù)。正常對照組大鼠肝組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞排列整齊，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，匯管區(qū)無明顯炎癥細(xì)胞浸潤和纖維組織增生。而病理模型組大鼠肝組織出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞變性、壞死，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，纖維組織大量增生并形成假小葉，匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤明顯，這些都是肝纖維化的典型病理特征。與相關(guān)文獻(xiàn)中模型建立方法相比，本實(shí)驗(yàn)所用的CCl4植物油溶液皮下注射加乙醇灌胃法具有操作相對簡便、成本較低、成功率較高等優(yōu)點(diǎn)。有研究采用單純CCl4腹腔注射造模，雖能成功誘導(dǎo)肝纖維化，但存在腹腔感染風(fēng)險(xiǎn)，且藥物吸收不均勻，可能導(dǎo)致個體差異較大。而本實(shí)驗(yàn)采用皮下注射，減少了感染風(fēng)險(xiǎn)，同時配合乙醇灌胃，增強(qiáng)了對肝臟的損傷作用，使造模效果更穩(wěn)定。還有文獻(xiàn)采用二甲基亞硝胺（DMN）誘導(dǎo)肝纖維化模型，雖然該模型能較好地模擬人類肝纖維化的病理過程，但DMN具有較強(qiáng)的致癌性，對實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境存在潛在危害，且價(jià)格相對昂貴，限制了其廣泛應(yīng)用。綜合比較，本實(shí)驗(yàn)建立的肝纖維化模型在可靠性和有效性方面表現(xiàn)良好，能夠滿足后續(xù)研究需求。4.2增損甘露消毒丹對血清HA、LN影響分析本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，增損甘露消毒丹能夠顯著降低肝纖維化大鼠血清HA、LN水平，且呈明顯的劑量依賴性，大劑量和中劑量的效果優(yōu)于小劑量。這一結(jié)果與相關(guān)研究中其他抗肝纖維化藥物對HA、LN水平的影響趨勢一致。有研究表明，中藥復(fù)方中的某些活性成分可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，抑制肝星狀細(xì)胞的活化和增殖，從而減少HA、LN的合成和分泌。增損甘露消毒丹可能通過類似的機(jī)制發(fā)揮抗肝纖維化作用。從中醫(yī)理論角度分析，肝纖維化的發(fā)生發(fā)展與濕熱內(nèi)蘊(yùn)、肝郁脾虛、瘀血阻絡(luò)等多種因素密切相關(guān)。增損甘露消毒丹中含有多種具有清熱利濕、疏肝理氣、活血化瘀等功效的藥物。黃芩、茵陳清熱利濕，可清除體內(nèi)濕熱之邪，減輕肝臟炎癥反應(yīng)，抑制炎癥因子對肝星狀細(xì)胞的激活，從而減少HA、LN的合成。柴胡疏肝理氣，能調(diào)節(jié)肝臟的疏泄功能，改善肝臟的氣血運(yùn)行，防止肝郁氣滯導(dǎo)致的瘀血阻滯，減少細(xì)胞外基質(zhì)的沉積。丹參活血化瘀，可改善肝臟微循環(huán)，促進(jìn)血液流通，減少瘀血對肝臟組織的損傷，同時抑制成纖維細(xì)胞的增殖，降低HA、LN等細(xì)胞外基質(zhì)成分的表達(dá)。這些藥物相互配伍，協(xié)同作用，共同調(diào)節(jié)肝臟的生理功能，減輕肝纖維化程度。在細(xì)胞和分子水平上，增損甘露消毒丹可能通過多種途徑影響血清HA、LN水平。一方面，它可能抑制肝星狀細(xì)胞的活化。肝星狀細(xì)胞是肝臟中合成和分泌細(xì)胞外基質(zhì)的主要細(xì)胞，在肝纖維化過程中，肝星狀細(xì)胞被活化，轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞，大量合成和分泌HA、LN等細(xì)胞外基質(zhì)成分。增損甘露消毒丹中的有效成分可能通過調(diào)節(jié)相關(guān)信號通路，如TGF-β1/Smad信號通路，抑制肝星狀細(xì)胞的活化，從而減少HA、LN的產(chǎn)生。另一方面，增損甘露消毒丹可能促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解。它可能上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)和活性，MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，包括HA、LN等。同時，增損甘露消毒丹可能下調(diào)組織金屬蛋白酶抑制劑（TIMPs）的表達(dá)，TIMPs可抑制MMPs的活性，通過降低TIMPs的水平，間接增強(qiáng)MMPs對細(xì)胞外基質(zhì)的降解作用，使血清HA、LN水平降低。與復(fù)方鱉甲軟肝片相比，增損甘露消毒丹大劑量在降低血清HA、LN水平方面效果相當(dāng)。復(fù)方鱉甲軟肝片是臨床上常用的抗肝纖維化藥物，其主要成分包括鱉甲、莪術(shù)、赤芍等，具有軟堅(jiān)散結(jié)、化瘀解毒、益氣養(yǎng)血等功效。增損甘露消毒丹在藥物組成和作用機(jī)制上與復(fù)方鱉甲軟肝片有所不同，但在降低血清HA、LN水平，抗肝纖維化方面取得了相似的療效。這表明增損甘露消毒丹在治療肝纖維化方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢和潛力，為臨床治療肝纖維化提供了新的選擇。綜上所述，增損甘露消毒丹通過多靶點(diǎn)、多途徑降低肝纖維化大鼠血清HA、LN水平，發(fā)揮抗肝纖維化作用。但其具體的作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究，未來可從基因表達(dá)、蛋白質(zhì)組學(xué)等層面進(jìn)行更全面的探討，為其臨床應(yīng)用提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。4.3與其他抗肝纖維化藥物對比為進(jìn)一步探究增損甘露消毒丹在抗肝纖維化治療中的優(yōu)勢與不足，本研究將其與臨床常用的復(fù)方鱉甲軟肝片進(jìn)行對比分析。復(fù)方鱉甲軟肝片是一種以鱉甲、莪術(shù)、赤芍、當(dāng)歸、三七、黨參、黃芪、紫河車、冬蟲夏草、板藍(lán)根、連翹為主要成分的抗肝纖維化中成藥，具有軟堅(jiān)散結(jié)、化瘀解毒、益氣養(yǎng)血等功效。臨床實(shí)踐和多項(xiàng)研究表明，復(fù)方鱉甲軟肝片能夠有效抑制肝星狀細(xì)胞的活化，減少細(xì)胞外基質(zhì)的合成與沉積，從而發(fā)揮抗肝纖維化作用。在降低肝纖維化大鼠血清HA、LN水平方面，增損甘露消毒丹大劑量組與復(fù)方鱉甲軟肝片組效果相當(dāng)。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，增損甘露消毒丹大劑量組血清HA含量為（112.58±12.65）ng/mL，復(fù)方鱉甲軟肝片組為（118.63±13.24）ng/mL；增損甘露消毒丹大劑量組血清LN含量為（105.68±11.35）ng/mL，復(fù)方鱉甲軟肝片組為（112.56±12.45）ng/mL，兩組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。這表明增損甘露消毒丹大劑量在調(diào)節(jié)肝纖維化相關(guān)血清標(biāo)志物水平上，與復(fù)方鱉甲軟肝片具有相似的療效。從作用機(jī)制來看，復(fù)方鱉甲軟肝片主要通過抑制TGF-β1/Smad信號通路的激活，減少肝星狀細(xì)胞的活化和增殖，進(jìn)而降低細(xì)胞外基質(zhì)的合成。而增損甘露消毒丹則是通過多種藥物的協(xié)同作用，從清熱利濕、疏肝理氣、活血化瘀等多個角度入手。黃芩、茵陳清熱利濕，減輕肝臟炎癥，抑制炎癥因子對肝星狀細(xì)胞的激活；柴胡疏肝理氣，改善肝臟氣血運(yùn)行；丹參活血化瘀，促進(jìn)肝臟微循環(huán)，抑制成纖維細(xì)胞增殖。這種多靶點(diǎn)、多途徑的作用方式，使得增損甘露消毒丹在抗肝纖維化方面具有獨(dú)特優(yōu)勢。在臨床應(yīng)用方面，復(fù)方鱉甲軟肝片已廣泛應(yīng)用于肝纖維化的治療，具有一定的臨床經(jīng)驗(yàn)和認(rèn)可度。然而，部分患者在使用過程中可能出現(xiàn)胃腸道不適等不良反應(yīng)，如惡心、嘔吐、腹脹等。增損甘露消毒丹作為中藥復(fù)方，不良反應(yīng)相對較少。其藥物成分多為天然草藥，安全性較高。但由于其成分復(fù)雜，質(zhì)量控制難度較大，不同批次的藥物可能在療效和安全性上存在一定差異。此外，增損甘露消毒丹在改善肝纖維化大鼠的整體癥狀方面表現(xiàn)出色。在實(shí)驗(yàn)過程中觀察到，增損甘露消毒丹各劑量組大鼠的精神狀態(tài)、活動能力、飲食和飲水情況等一般狀況恢復(fù)較好，毛發(fā)逐漸順滑，體重回升明顯。這可能與增損甘露消毒丹的整體調(diào)理作用有關(guān)，其不僅能夠調(diào)節(jié)肝纖維化相關(guān)指標(biāo)，還能改善機(jī)體的整體狀態(tài)，增強(qiáng)機(jī)體的抵抗力。增損甘露消毒丹在抗肝纖維化方面與復(fù)方鱉甲軟肝片具有相似的療效，但在作用機(jī)制、不良反應(yīng)和整體調(diào)理等方面具有獨(dú)特之處。在未來的臨床應(yīng)用中，可根據(jù)患者的具體情況，合理選擇使用增損甘露消毒丹或與其他藥物聯(lián)合使用，以提高肝纖維化的治療效果。同時，需要進(jìn)一步加強(qiáng)對增損甘露消毒丹的質(zhì)量控制和作用機(jī)制研究，為其臨床推廣應(yīng)用提供更有力的支持。4.4增損甘露消毒丹抗肝纖維化機(jī)制探討炎癥反應(yīng)在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。在肝纖維化過程中，各種致病因素如病毒感染、化學(xué)毒物等會導(dǎo)致肝臟炎癥細(xì)胞浸潤，釋放大量炎癥因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等。這些炎癥因子可激活肝星狀細(xì)胞，使其轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的合成和沉積，加重肝纖維化。增損甘露消毒丹中的黃芩、茵陳等藥物具有顯著的清熱利濕、抗炎作用。黃芩中的黃芩苷能夠抑制炎癥細(xì)胞的活化和炎癥因子的釋放，減輕肝臟炎癥反應(yīng)。研究表明，黃芩苷可降低脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞中TNF-α、IL-6等炎癥因子的表達(dá)，抑制核因子-κB（NF-κB）信號通路的激活，從而發(fā)揮抗炎作用。茵陳中的有效成分如茵陳蒿素、綠原酸等，也具有抗炎、抗氧化作用，能夠減輕肝臟炎癥損傷，抑制炎癥介導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞活化。通過抑制炎癥反應(yīng)，增損甘露消毒丹能夠減少炎癥因子對肝臟組織的損傷，阻斷肝纖維化的啟動和進(jìn)展。氧化應(yīng)激是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的重要病理機(jī)制之一。當(dāng)肝臟受到損傷時，體內(nèi)的氧化-抗氧化平衡被打破，活性氧（ROS）如超氧陰離子、羥自由基等大量產(chǎn)生。ROS可直接損傷肝細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化、蛋白質(zhì)和核酸氧化修飾，影響細(xì)胞的正常功能。同時，ROS還能激活肝星狀細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的合成和分泌。增損甘露消毒丹中的多種成分具有抗氧化作用，能夠減輕氧化應(yīng)激對肝臟的損傷。丹參中的丹參酮、丹酚酸等成分具有較強(qiáng)的抗氧化活性，能夠清除體內(nèi)的ROS，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮可提高肝纖維化大鼠肝臟中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等抗氧化酶的活性，降低丙二醛（MDA）含量，減輕氧化應(yīng)激損傷。此外，增損甘露消毒丹中的其他藥物如柴胡、地黃等也可能通過調(diào)節(jié)抗氧化酶系統(tǒng)或直接清除ROS，發(fā)揮抗氧化作用，從而保護(hù)肝細(xì)胞，抑制肝纖維化的發(fā)展。肝細(xì)胞再生是肝臟修復(fù)和抗纖維化的重要過程。在肝纖維化時，肝細(xì)胞的損傷和壞死導(dǎo)致肝臟功能受損，而肝細(xì)胞的再生能力對于維持肝臟的正常結(jié)構(gòu)和功能至關(guān)重要。增損甘露消毒丹可能通過促進(jìn)肝細(xì)胞再生來發(fā)揮抗肝纖維化作用。方中的地黃具有滋陰養(yǎng)血的功效，現(xiàn)代研究表明，地黃中的活性成分梓醇能夠促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖和修復(fù)。梓醇可通過激活磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號通路，促進(jìn)肝細(xì)胞的DNA合成和細(xì)胞周期進(jìn)程，從而促進(jìn)肝細(xì)胞再生。此外，增損甘露消毒丹中的其他藥物可能通過調(diào)節(jié)肝臟局部微環(huán)境，提供有利于肝細(xì)胞再生的營養(yǎng)物質(zhì)和生長因子，促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖和分化，加速肝臟組織的修復(fù)，減少纖維組織的沉積，達(dá)到抗肝纖維化的目的。增損甘露消毒丹通過抑制炎癥反應(yīng)、減輕氧化應(yīng)激、促進(jìn)肝細(xì)胞再生等多種機(jī)制，對肝纖維化發(fā)揮綜合治療作用。但目前對其具體作用機(jī)制的研究仍不夠深入和全面，未來需要進(jìn)一步開展細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)以及臨床研究，從不同層面深入探究其作用靶點(diǎn)和信號通路，為其臨床應(yīng)用提供更堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)。4.5研究局限性與展望本研究雖取得了一定成果，但仍存在局限性。在動物模型方面，盡管四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠模型能較好模擬肝纖維化進(jìn)程，但其與人類肝纖維化病因及病理生理過程存在差異，難以完全反映臨床實(shí)際情況。此外，本實(shí)驗(yàn)僅選用了SD大鼠，未考慮其他品系動物對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，模型的普適性有待提高。實(shí)驗(yàn)周期相對較短，僅觀察了8周的藥物干預(yù)效果。肝纖維化是一個慢性、漸進(jìn)性的病理過程，長期的藥物作用效果及潛在不良反應(yīng)尚不清楚。后續(xù)研究可延長實(shí)驗(yàn)周期，進(jìn)行長期的動態(tài)觀察，以更全面地評估增損甘露消毒丹的療效和安全性。在作用機(jī)制研究深度上，本研究主要從血清學(xué)指標(biāo)和肝組織病理學(xué)角度進(jìn)行分析，初步探討了增損甘露消毒丹抗肝纖維化的作用機(jī)制。然而，對于其在基因、蛋白質(zhì)等分子水平的作用靶點(diǎn)和信號通路研究不夠深入。未來研究可運(yùn)用轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)等技術(shù)，深入挖掘增損甘露消毒丹抗肝纖維化的潛在分子機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供更堅(jiān)實(shí)的理論支撐。展望未來，一方面可進(jìn)一步優(yōu)化動物實(shí)驗(yàn)，選用多種病因誘導(dǎo)的肝纖維化動物模型，如病毒感染、自身免疫性肝病等相關(guān)模型，以更全面地驗(yàn)證增損甘露消毒丹的抗肝纖維化作用。同時，開展多中心、大樣本的臨床研究，觀察增損甘露消毒丹在不同病因?qū)е碌母卫w維化患者中的療效和安全性，加速其臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用。另一方面，深入研究增損甘露消毒丹的作用機(jī)制，明確其有效成分和作用靶點(diǎn)，為開發(fā)新型抗肝纖維化藥物提供新思路和方法。此外，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)，如納米技術(shù)、基因治療等，探索增損甘露消毒丹的新劑型和給藥方式，提高藥物的生物利用度和療效。五、結(jié)論5.1主要研究成果總結(jié)本研究通過動物實(shí)驗(yàn)，深入探究了增損甘露消毒丹對肝纖維化大鼠血清HA、LN水平的影響，取得了一系列有價(jià)值的研究成果。在肝纖維化模型成功建立的基礎(chǔ)上，觀察到增損甘露消毒丹能夠顯著改善肝纖維化大鼠的一般狀況。造模大鼠原本精神萎靡、活動減少、毛發(fā)枯黃雜亂、飲食和飲水減少、體重增長緩慢甚至下降，而在接受增損甘露消毒丹干預(yù)后，精神狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)，活動量增加，毛發(fā)開始變得順滑，飲食和飲水恢復(fù)正常，體重也逐漸回升。這表明增損甘露消毒丹能夠從整體上調(diào)節(jié)機(jī)體狀態(tài)，增強(qiáng)機(jī)體的抵抗力，對肝纖維化大鼠的健康狀況有積極的改善作用。在血清學(xué)指標(biāo)方面，增損甘露消毒丹對肝纖維化大鼠血清HA、LN水平有顯著影響。病理模型組大鼠血清HA、LN含量顯著高于正常對照組，而增損甘露消毒丹各劑量組大鼠血清HA、LN含量均明顯低于病理模型組。其中，增損甘露消毒丹中劑量組和大劑量組與病理模型組相比，差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。且增損甘露消毒丹大劑量組和中劑量組與小劑量組相比，血清HA、LN含量顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。這說明增損甘露消毒丹能夠有效降低肝纖維化大鼠血清HA、LN水平，且隨著劑量的增加，其降低效果更為顯著。肝組織病理學(xué)觀察結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了增損甘露消毒丹的抗肝纖維化作用。正常對照組大鼠肝組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞排列整齊，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，匯管區(qū)無明顯炎癥細(xì)胞浸潤和纖維組織增生。病理模型組大鼠肝組織出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞變性、壞死，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，纖維組織大量增生并形成假小葉，匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤明顯。而增損甘露消毒丹各劑量組大鼠肝組織的病理損傷程度逐漸減輕，肝細(xì)胞變性、壞死減少，肝小葉結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)，纖維間隔變細(xì)、減少，假小葉數(shù)量減少，匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤減輕。增損甘露消毒丹大劑量組大鼠肝組織幾乎恢復(fù)正常，肝細(xì)胞形態(tài)正常，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，纖維間隔基本消失，未見明顯假小葉形成。與臨床常用的抗肝纖維化藥物復(fù)方鱉甲軟肝片相比，增損甘露消毒丹大劑量在降低血清HA、LN水平以及改善肝組織病理學(xué)方面效果相當(dāng)。這表明增損甘露消毒丹在抗肝纖維化治療中具有與復(fù)方鱉甲軟肝片相似的療效，為肝纖維化的治療提供了新的選擇。增損甘露消毒丹能夠有效降低肝纖維化大鼠血清HA、LN水平，減輕肝組織病理損傷，具有確切的抗肝纖維化作用，且存在一定的量效關(guān)系。本研究為增損甘露消毒丹在臨床治療肝纖維化方面提供了有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具有重要的理論和實(shí)踐意義。5.2研究意義與應(yīng)用前景本研究通過動物實(shí)驗(yàn)，深入探究了增損甘露消毒丹對肝纖維化大鼠血清HA、LN水平的影響，為肝纖維化的治療提供了新的理論依據(jù)和治療思路。在理論層面，進(jìn)一步豐富了中醫(yī)藥抗肝纖維化的理論體系。明確了增損甘露消毒丹能夠通過調(diào)節(jié)血清HA、LN水平發(fā)揮抗肝纖維化作用，從中醫(yī)理論和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度揭示了其多靶點(diǎn)、多途徑的作用機(jī)制。例如，通過抑制炎癥反應(yīng)、減輕氧化應(yīng)激、促進(jìn)肝細(xì)胞再生等多種方式，調(diào)節(jié)肝臟的生理功能，減少細(xì)胞外基質(zhì)的沉積。這為深入理解中醫(yī)藥治療肝纖維化的科學(xué)內(nèi)涵提供了新的視角，有助于推動中醫(yī)藥理論與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)的融合，為開發(fā)更多有效的抗肝纖維化中藥方劑提供理論指導(dǎo)。在實(shí)踐方面，本研究結(jié)果為增損甘露消毒丹在臨床治療肝纖維化提供了有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目前臨床上針對肝纖維化的治療藥物存在療效有限、副作用大等問題，而增損甘露消毒丹在降低肝纖維化大鼠血清HA、LN水平以及改善肝組織病理損傷方面表現(xiàn)出顯著效果，且與常用抗肝纖維化藥物復(fù)方鱉甲軟肝片療效相當(dāng)。這表明增損甘露消毒丹有望成為一種安全、有效的抗肝纖維化藥物，為肝纖維化患者提供新的治療選擇。其不良反應(yīng)相對較少，中藥成分天然，對患者的耐受性較好，更適合長期治療。在未來的臨床應(yīng)用中，可根據(jù)患者的具體情況，合理應(yīng)用增損甘露消毒丹，提高肝纖維化的治療效果，改善患者的生活質(zhì)量，減輕患者的痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。增損甘露消毒丹具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。在慢性乙型肝炎、丙型肝炎等病毒感染性肝病導(dǎo)致的肝纖維化治療中，增損甘露消毒丹可與抗病毒藥物聯(lián)合使用，發(fā)揮協(xié)同作用。一方面，抗病毒藥物可抑制病毒復(fù)制，減輕病毒對肝臟的損傷；另一方面，增損甘露消毒丹可調(diào)節(jié)肝臟微環(huán)境，減輕炎癥反應(yīng)，抑制肝纖維化進(jìn)程，促進(jìn)肝臟組織的修復(fù)和再生。在非酒精性脂肪性肝病、酒精性肝病等其他病因引起的肝纖維化治療中，增損甘露消毒丹也可通過調(diào)節(jié)機(jī)體代謝、減輕肝臟脂肪沉積、抑制炎癥和纖維化反應(yīng)等作用，改善肝臟功能，延緩肝纖維化的進(jìn)展。此外，增損甘露消毒丹還可用于肝纖維化的預(yù)防。對于有肝纖維化高危因素的人群，如長期飲酒者、肥胖者、患有代謝綜合征者等，可早期應(yīng)用增損甘露消毒丹進(jìn)行干預(yù)，調(diào)節(jié)機(jī)體的生理功能，預(yù)防肝纖維化的發(fā)生。本研究成果對于肝纖維化的治療具有重要的理論和實(shí)踐意義，增損甘露消毒丹在臨床應(yīng)用中展現(xiàn)出巨大的潛力。未來需要進(jìn)一步開展深入研究，加強(qiáng)臨床驗(yàn)證和推廣應(yīng)用，使其更好地服務(wù)于肝纖維化患者，為肝臟疾病的防治做出更大的貢獻(xiàn)。六、參考文獻(xiàn)[1]陳灝珠，林果為，王吉耀。實(shí)用內(nèi)科學(xué)[M].15版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2017:1972-1985.[2]中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會，中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會。慢性乙型肝炎防治指南(2022年版)[J].中華肝臟病雜志，2022,30(12):1244-1262.[3]FriedmanSL.Liverfibrosis-frombenchtobedside[J].JournalofHepatology,2003,38(Suppl1):S38-S53.[4]王寧生，梁瑞燕，吳清和。中藥新藥臨床前研究的技術(shù)要求[M].廣州：廣東科技出版社，2000:150-155.[5]鄭筱萸。中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則(試行)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2002:143-150.[6]高學(xué)敏。中藥學(xué)[M].2版。北京：中國中醫(yī)藥出版社，2007:342-345.[7]王孟英。溫?zé)峤?jīng)緯[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2006:68-70.[8]陳奇。中藥藥理研究方法學(xué)[M].3版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2011:680-685.[9]劉成海，徐列明。肝纖維化中西醫(yī)結(jié)合診療指南(2019年版)[J].中華肝臟病雜志，2019,27(11):821-827.[10]王吉耀。內(nèi)科學(xué)[M].2版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2010:470-475.[11]國家藥典委員會。中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020:120-125.[12]胡大一，馬長生。心臟病學(xué)實(shí)踐2022——規(guī)范化治療[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2022:345-350.[13]陸再英，鐘南山。內(nèi)科學(xué)[M].7版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2008:450-455.[14]鄭書國。中醫(yī)藥防治肝纖維化實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J].安徽中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2003,22(1):57-59.[15]熊耀斌，傅纓，俞紅，等。愈風(fēng)寧心滴丸及發(fā)酵蟲草菌粉抗肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究[J].江西醫(yī)藥，2012,47(5):373-376.[16]尹磊，朱月健，李冬梅，等。六神曲炮制及現(xiàn)代研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2021,17(1):186-189.[17]萬紅嬌，朱金華，賀又舜。甘露消毒丹的現(xiàn)代臨床應(yīng)用[J].江西中醫(yī)藥，2006,37(11):59-61.[18]蘇云放。甘露消毒丹方源與現(xiàn)代臨床應(yīng)用[J].中成藥，1994,16(9):41-42.[19]彭新念，呂文亮，高清華，等。甘露消毒丹合劑抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].湖北中醫(yī)雜志，2009,31(10):6-7.[20]程方平，周潔，陳娟，等。甘露消毒丹對濕熱證大鼠內(nèi)毒素轉(zhuǎn)導(dǎo)信號的動態(tài)干預(yù)[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2008,36(4):43-45.[21]程方平，劉松林，楊紅兵，等。甘露消毒丹對溫病濕熱證大鼠LBPmRNA、CD14mRNA、NF-κBp動態(tài)干預(yù)[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2008,14(4):56-59.[22]程方平，周潔，陳娟，等。甘露消毒丹對溫病濕熱證大鼠TLR4mRNA、NF-κBp65表達(dá)的影響[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007,24(6):478-482.[23]徐建瑞，王紅梅，曾琳。甘露消毒丹對溫病濕熱證模型大鼠血清G-CSF、NO的影響[J].貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009,31(4):76-77.[24]張俊麗，劉妮，周紅燕，等。甘露消毒丹加減方體內(nèi)抗DHBV病毒作用實(shí)驗(yàn)研究[J].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008,9(6):11-12.[25]程方平，劉松林，李云海，等。清熱化濕方對溫病濕熱證大鼠肝線粒體K^+-Na^+-ATP酶作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].湖北中醫(yī)雜志，2007,29(5):3-5.[26]郭建生，羅杰英，裴剛。甘露消毒丹水煎劑對實(shí)驗(yàn)動物肝損傷的影響[J].中國中藥雜志，1993,18(10):625-626.[27]林甦。甘露消毒丹在兒科外感時疫病中的應(yīng)用[J].福建中醫(yī)藥，2013,44(3):43-44.[28]劉柏年，徐瑞林。甘露消毒膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中成藥，2005,27(7):859-861.[29]劉丹卓，趙新廣。中醫(yī)藥防護(hù)肝損傷的機(jī)理分析[J].河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006,21(3):81-82.[30]路軍章，楊明會。甘露消毒丹加減治療慢性咽炎(濕熱型)臨床觀察[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2006,13(10):80-81.[31]郝明霞，李長秦，王敏陜，等。加味甘露消毒丹對慢性乙型肝炎血清HBV-DNV影響的臨床研究[J].陜西中醫(yī)，2007,28(1):14-16.[32]李長秦，郝明霞，劉國強(qiáng)，等。加味甘露消毒丹治療慢性乙型肝炎停藥后的遠(yuǎn)期臨床療效隨訪[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007,30(1):17-19.[33]丁熙璇。甘露消毒丹加減治療濕熱瘟毒型肝炎的臨床探討[J].實(shí)用肝臟病雜志，2008,11(1):47-49.[34]程方平，李家庚，劉松林，等。甘露消毒丹對濕熱證大鼠模型的干預(yù)[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2008,36(6):36-38.[35]曹軍連。甘露消毒丹加減治療手足口病41例臨床觀察[J].醫(yī)學(xué)研究雜志，2009,38(3):106-107.[36]張明發(fā)，沈雅琴。甘草酸防治肝損傷藥理作用的研究進(jìn)展[J].抗感染藥學(xué)，2010,7(4):232-236.[37]LeBihanD,BretonE,LallemandD,etal.MRimagingofintravoxelincoherentmotions:applicationtodiffusionandperfusioninneurologicdisorders[J].Radiology,1986,161(2):401-407.[38]JiangX,YangZ,ZhangX,etal.Diagnosticperformanceofdiffusion-weightedimaginginliverfibrosis:ameta-analysis[J].PLoSOne,2013,8(7):e68967.[39]CharatcharoenwitthayaP,FidlerJL,FletcherJG,etal.Diffusion-weightedimaging:utilityforpredictingliverfibrosisinpatientswithchronicliverdisease[J].AJRAmJRoentgenol,2009,193(1):159-166.[40]ParkS,KimSH,KimYK,etal.Diagnosticperformanceofthestretchedexponentialmodelofdiffusion-weightedimagingforstagingliverfibrosis:comparisonwithtransientelastography[J].EurRadiol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