項(xiàng)目六植物脫毒技術(shù)Unit6PlantDetoxificationTechnology目錄任務(wù)二植物脫毒的方法任務(wù)一植物脫毒的意義任務(wù)三脫毒苗的鑒定任務(wù)四脫毒苗的繁殖與保存任務(wù)五

植物脫毒與檢測(cè)實(shí)例目的要求教學(xué)目標(biāo)1.掌握熱處理和微莖尖培養(yǎng)脫毒的方法、無(wú)病毒植物的鑒定和利用2.一般掌握其他途徑脫毒方法3.理解微莖尖脫毒的原理、無(wú)毒苗培養(yǎng)的重要意義4.了解無(wú)病毒苗木的保存和利用方法一、病毒在植物上的危害二、植物脫毒的意義任務(wù)一植物脫毒的意義一、病毒在植物上的危害危害植物的病毒有幾百種，并且隨著生產(chǎn)栽培時(shí)間的延長(zhǎng)，危害程度越來(lái)越嚴(yán)重種類越來(lái)越多一、病毒在植物上的危害嚴(yán)重?zé)o藥可治生產(chǎn)損失大一、病毒在植物上的危害例如1955年，遍布?xì)W美的馬鈴薯退化并病毒被帶入我國(guó)薯區(qū)后，僅河北省中部地區(qū)就減產(chǎn)50%~70%，造成當(dāng)?shù)伛R鈴薯不能流種，產(chǎn)量低，造成巨大損失。1966年和1967年P(guān)MTV在秘魯曾引起產(chǎn)量損失30－40％和75％一、病毒在植物上的危害被花葉病毒感染的黃瓜一、病毒在植物上的危害植物種類感染病毒種類植物種類感染病毒種類植物種類感染病毒種類菊花19矮牽牛5蘋果36康乃馨11百合6柑橘23水仙4馬鈴薯17葡萄26唐菖蒲5大蒜24草莓24風(fēng)信子3豌豆15桃23月季10櫻桃44梨11一、病毒在植物上的危害內(nèi)部癥狀組織細(xì)胞增生，肥大細(xì)胞和篩管壞死等外部癥狀系統(tǒng)癥狀：葉小、產(chǎn)生黃白色斑點(diǎn)、畸形壞死等，葉脈隆起，植株矮小等二、植物脫毒的意義（一）生物、物理、化學(xué)等途徑防治病毒病收效甚微，甚至毫無(wú)成效（二）用組織培養(yǎng)方法生產(chǎn)無(wú)毒苗是一個(gè)積極有效的途徑，由于排除了使用藥劑，所以對(duì)減少污染，防止公害，保護(hù)環(huán)境都有積極的意義無(wú)毒苗不含該種植物的主要危害病毒。亦稱“檢定苗”任務(wù)二植物脫毒的方法一、莖尖培養(yǎng)脫毒二、熱處理脫毒三、其他脫毒方法一、莖尖培養(yǎng)脫毒1.染病植株體內(nèi)病毒的分布不均勻，越靠近莖頂病毒含量越少，生長(zhǎng)點(diǎn)（約0.1－1.0）幾乎不含或含病毒很少。原因是無(wú)維管束，病毒只能通過(guò)胞間連絲傳遞，不及細(xì)胞不斷分裂和生長(zhǎng)的速度因此可利用微莖尖培養(yǎng)脫毒2.莖尖大小與脫毒效果反比一、莖尖培養(yǎng)脫毒莖尖培養(yǎng)脫毒方法1、材料選擇、消毒在植株上直接取或在室內(nèi)培養(yǎng)一段時(shí)間的植株上取頂芽或側(cè)芽（3-5mm）然后消毒2、微莖尖的剝?nèi)〗馄淑R下剝?nèi)?，注意勿損傷生長(zhǎng)點(diǎn)一、莖尖培養(yǎng)脫毒莖尖培養(yǎng)脫毒方法3、接種隨剝隨接盡快接種4、培養(yǎng)22℃左右，每天以16h、1500－5000lx光照下培養(yǎng)。保證較高溫度和充足光照時(shí)間5、繼代、生根培養(yǎng)同器官培養(yǎng)一、莖尖培養(yǎng)脫毒一、莖尖培養(yǎng)脫毒常用培養(yǎng)基：MS

White、Morel（一）提高鉀鹽的含量會(huì)有利于莖尖生長(zhǎng)。在用MS培養(yǎng)基時(shí)，其中有些離子的濃度過(guò)高應(yīng)適當(dāng)稀釋（二）嚴(yán)格控制糖濃度，一般2-4%，蔗糖、葡萄糖較好（三）適當(dāng)提高生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素濃度。有時(shí)可加活性炭用NAA或IBA，Kt或BA，不用2,4－D。GA適當(dāng)（四）培養(yǎng)基一、莖尖培養(yǎng)脫毒培養(yǎng)方式固體培養(yǎng)液體培養(yǎng)一、莖尖培養(yǎng)脫毒一、莖尖培養(yǎng)脫毒影響莖尖成活的因素一、莖尖培養(yǎng)脫毒1.外植體大小：通常以帶1-3個(gè)幼葉原基的莖尖（約0.3-0.5mm)作外植體為宜。不同植物脫毒適宜的莖尖大小不同2.培養(yǎng)條件：增加光照3.外植體的生理狀態(tài)：莖尖最好在活躍生長(zhǎng)的芽上切取，取芽的時(shí)間最好是在萌動(dòng)期較好一、莖尖培養(yǎng)脫毒一、莖尖培養(yǎng)脫毒一、病毒在植物上的危害二、熱處理脫毒原理當(dāng)植物組織處于高于正常溫度的環(huán)境（35-40℃）時(shí)，組織內(nèi)部的病毒部分或全部鈍化，但寄主植物的組織很少或不會(huì)受到傷害。熱處理脫毒方法二、熱處理脫毒（一）溫湯（浸漬）處理：適用于離體材料（如接穗）和休眠器官的處理。在50℃左右的溫水中浸漬10min至數(shù)小時(shí)，使病毒失活熱處理脫毒方法二、熱處理脫毒（二）熱風(fēng)（熱空氣）處理：1.恒溫處理：將生長(zhǎng)的植物移入溫?zé)岑熓覂?nèi)，一般在35－40℃。對(duì)活躍生長(zhǎng)的莖尖效果較好，處理時(shí)間因植物而異2.變溫處理：如馬鈴薯每天40℃處理4h，可清除芽眼中馬鈴薯的葉片病毒，而且保持芽眼的活力缺陷不能脫除所有病毒，例如在馬鈴薯中只能消除卷葉病毒注：熱處理需與其它方法配合應(yīng)用二、熱處理脫毒二、熱處理脫毒三、其他脫毒方法愈傷組織脫毒原理（一）愈傷組織分化植株，40%單細(xì)胞含有病毒，病毒的復(fù)制趕不上細(xì)胞的增殖速度（二）有些細(xì)胞突變獲得了抗病毒性后代變異的幾率大；有的愈傷組織不能分化成苗三、其他脫毒方法莖尖微體嫁接木本植物莖尖培養(yǎng)難以生根成植株，將實(shí)生苗砧木在人工培養(yǎng)基上種植培養(yǎng)，再?gòu)某赡隉o(wú)病樹枝上切取0.4-1.0mm莖尖，在砧木上進(jìn)行微體嫁接，以獲得無(wú)病毒植株，果樹上應(yīng)用多。三、其他脫毒方法選幼年樹花蕾取下花蕾（鏡檢）取花藥接種再生接種再生花藥培養(yǎng)脫毒四、化學(xué)方法脫毒許多化學(xué)藥品（包括嘌呤、嘧啶類似物、氨基酸、抗菌素等）對(duì)離體組織和原生質(zhì)體具有脫毒效任務(wù)三脫毒苗的鑒定一、指示植物三、分子生物學(xué)二、血清學(xué)四、電子顯微鏡一、指示植物法利用病毒在其它植物上產(chǎn)生的枯斑作為鑒別病毒種類的方法，也即為枯斑和空斑測(cè)定法一、指示植物法（一）指示植物的確定1.專門用以產(chǎn)生局部病斑的寄主植物即為指示植物，又稱寄主植物。它只能鑒定靠汁液傳染的病毒。2.應(yīng)根據(jù)不同的病毒選擇適合的指示植物。并且一年四季都可栽培。一、指示植物法（二）草本指示植物鑒定1.汁液涂抹一、指示植物法（1）采取汁液在被鑒定植物上取1－3g幼葉，在研缽中加入10ml水及少量磷酸緩沖液（PH7.0），研碎后用雙層紗布過(guò)濾，再在汁液中加入少量的500－600目金鋼砂（摩擦劑）一、指示植物法（2）接種用棉球蘸取汁液在指示植物葉面上輕輕涂沬2－3次，后用清水沖洗葉面一、指示植物法（3）培養(yǎng)在防蚜蟲溫室內(nèi)培養(yǎng)，15－25C，2－6天觀察病癥一、指示植物法病毒類型指示植物癥狀馬鈴薯X病毒千日紅、曼陀羅、心葉煙脈間花葉馬鈴薯S病毒莧色藜、千日紅、昆諾阿藜葉脈深陷、粗縮馬鈴薯Y病毒野生馬鈴薯、洋酸菜輕微花葉，粗縮或壞死馬鈴卷葉病毒洋酸菜葉淡黃白色或呈紫色、紅色幾種馬鈴薯病毒的指示植物及其癥狀一、指示植物法（二）草本指示植物鑒定2、小葉嫁接一、指示植物法（三）木本指示植物鑒定雙重芽接法1~2cm指示植物待測(cè)植物一、指示植物法（三）木本指示植物鑒定直接嫁接待測(cè)植物一、指示植物法待測(cè)植物指示植物一、指示植物法部分蘋果病毒的木本指示植物及相應(yīng)癥（引自NY329—1997標(biāo)準(zhǔn)）病毒種類木本指示植物癥狀蘋果褪綠葉斑病毒（ACLSV）蘇俄蘋果（R12740-7A）5月中下旬以后，在蘇俄蘋果葉片上出現(xiàn)褪綠斑點(diǎn)，多發(fā)生于葉片一側(cè)，病株葉片較健康株葉片小。有的向一側(cè)彎曲呈舟形葉，植株矮化或生長(zhǎng)衰弱蘋果莖痘病毒（ASPV）司派227（Spy227）或光輝（Radiant）在Spy227指示植物上出現(xiàn)葉片反卷、皮層壞死等癥狀；在光輝指示植物上出現(xiàn)葉片反卷，植株矮化蘋果莖溝病毒（ASGV）弗吉尼亞小蘋果（Virginiacrab）在溫室鑒定中，表現(xiàn)葉部黃斑或環(huán)狀斑、葉片扭曲變形蘋果花葉病毒（ApMV）蘭蓬王、紅玉和金冠葉片上產(chǎn)生黃斑、沿葉脈條斑蘋果銹果類病毒（ASSV）國(guó)光（Ralls）彎葉、莖干銹斑或壞死斑二、血清學(xué)鑒定法植物病毒作為抗原，給動(dòng)物注射后會(huì)在血清之中產(chǎn)生的抗體稱抗血清。不同的病毒產(chǎn)生的抗血清有各自的特異性。用已知抗血清可以鑒定未知病毒的種類,是目前最有用的方法之一二、血清學(xué)鑒定法三、分子生物學(xué)法（一）植物體內(nèi)的RNA都是單鏈，而病毒在植物體內(nèi)自我復(fù)制，以雙鏈存在（二）將已知病毒的核酸序列制成分子標(biāo)記探針，與待測(cè)病原核酸雜交，放射自顯影后可以指示病原的存在四、電子顯微鏡觀察任務(wù)四脫毒苗的保存與繁殖脫毒苗的保存與繁殖本節(jié)請(qǐng)自行學(xué)習(xí)任務(wù)五植物脫毒與檢測(cè)實(shí)例一、馬鈴薯莖尖脫毒（一）莖尖剝離前的準(zhǔn)備工作1、配制植物激素2、制作誘導(dǎo)培養(yǎng)基3、配制消毒劑5、滅菌4、物品準(zhǔn)備6、外植體馬鈴薯薯塊取芽一、馬鈴薯莖尖脫毒解剖鏡剝?nèi)●R鈴薯莖尖（二）莖尖剝離步驟（來(lái)自薯塊）馬鈴薯莖尖分生組織（來(lái)自無(wú)菌苗）馬鈴薯莖尖分生組織一、馬鈴薯莖尖脫毒（三）普通培養(yǎng)條件（四）無(wú)菌苗的再次剝離（五）變溫鈍化培養(yǎng)條件二、馬鈴薯脫毒苗檢測(cè)雙抗體酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（DAS-ELISA）可檢測(cè)8種病毒和1種細(xì)菌性病害：PVX、PVY、PLRV、PVM、PVS、PVA、TMV、TSWV和CMS（環(huán)腐）二、馬鈴薯脫毒苗檢測(cè)植物生物芯片（GeneTopPVBKit）可檢測(cè)7種病毒、1種類病毒和4種細(xì)菌性病害：PVA、PVM、PVS、PVX、PVY-O、PVY-N、PLRV、PMTV、PSTVd（類病毒）、CMS（環(huán)腐）、RS（青枯）、Ech（軟腐）和Pcs（黑脛）二、馬鈴薯脫毒苗檢測(cè)（一）植物RNA提?。ㄋ模┙Y(jié)果判讀（二）對(duì)提取的RNA立

即進(jìn)行RT-PCR實(shí)驗(yàn)（三）雜合反應(yīng)無(wú)病害有病害項(xiàng)目七主要經(jīng)濟(jì)植物脫毒與快繁技術(shù)教學(xué)目標(biāo)知識(shí)目標(biāo)熟悉常見果樹、蔬菜、花卉、樹木等植物的脫毒與快繁工藝流程掌握香蕉、馬鈴薯、甘薯、草莓、蘭花等植物的脫毒與快繁技術(shù)技能目標(biāo)會(huì)對(duì)蘋果、葡萄、草莓、馬鈴薯、甘薯等植物進(jìn)行脫毒會(huì)對(duì)主要經(jīng)濟(jì)植物進(jìn)行快速繁殖，并能進(jìn)行煉苗移栽教學(xué)內(nèi)容任務(wù)一果樹脫毒與快繁技術(shù)任務(wù)二蔬菜脫毒與快繁技術(shù)任務(wù)三花卉脫毒與快繁技術(shù)任務(wù)四樹木組培快繁技術(shù)任務(wù)五藥用植物組培快繁技術(shù)任務(wù)一果樹脫毒與快繁技術(shù)一、蘋果脫毒與快繁技術(shù)二、草莓脫毒與快繁技術(shù)三、香蕉脫毒與快繁技術(shù)四、葡萄脫毒與快繁技術(shù)任務(wù)一

果樹脫毒與快繁技術(shù)

一、蘋果脫毒與快繁技術(shù)一、蘋果脫毒與快繁技術(shù)（一）脫毒技術(shù)我國(guó)發(fā)生危害的主要蘋果病毒非潛隱病毒病蘋果銹果病毒病蘋果綠皺果病毒病蘋果花葉病毒病潛隱病毒病蘋果褪綠葉斑銹果病毒病蘋果莖痘病毒病蘋果莖溝槽病毒病一、蘋果脫毒與快繁技術(shù)蘋果銹果病毒病蘋果綠皺果病毒病蘋果花葉病毒病一、蘋果脫毒與快繁技術(shù)1.脫毒方法（1）莖尖培養(yǎng)脫毒（2）熱處理脫毒（3）熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒2.病毒檢測(cè)（1）指示植物鑒定法（2）酶聯(lián)免疫吸附法一、蘋果脫毒與快繁技術(shù)（1）莖尖培養(yǎng)脫毒一、蘋果脫毒與快繁技術(shù)（2）熱處理脫毒一、蘋果脫毒與快繁技術(shù)（3）熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒一、蘋果脫毒與快繁技術(shù)（二）快繁技術(shù)

二、草莓脫毒與快繁技術(shù)二、草莓脫毒與快繁技術(shù)（一）脫毒技術(shù)危害草莓的主要病毒草莓斑駁病毒草莓皺縮病毒草莓鑲脈病毒草莓輕型黃邊病毒二、草莓脫毒與快繁技術(shù)草莓感染病毒的植株二、草莓脫毒與快繁技術(shù)（一）脫毒技術(shù)1.脫毒技術(shù)（1）花藥培養(yǎng)脫毒（2）莖尖培養(yǎng)脫毒（3）熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒2.病毒檢測(cè)技術(shù)（1）指示植物小葉嫁接法二、草莓脫毒與快繁技術(shù)1.脫毒技術(shù)二、草莓脫毒與快繁技術(shù)2.病毒檢測(cè)技術(shù)二、草莓脫毒與快繁技術(shù)（二）快繁技術(shù)1.外植體的選擇與消毒2.試管苗的培養(yǎng)3.煉苗移栽三、香蕉脫毒與快繁技術(shù)三、香蕉脫毒與快繁技術(shù)（一）脫毒技術(shù)香蕉感染的主要病毒香蕉束頂病毒香蕉花葉心腐病毒香蕉條紋病毒香蕉苞葉嵌紋病毒三、香蕉脫毒與快繁技術(shù)（一）脫毒技術(shù)1.脫毒方法（1）莖尖培養(yǎng)脫毒（2）熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒2.病毒檢測(cè)技術(shù)TTC檢測(cè)法、指示植物鑒定法、抗血清法、電子顯微鏡檢測(cè)法等三、香蕉脫毒與快繁技術(shù)1.脫毒技術(shù)三、香蕉脫毒與快繁技術(shù)（二）快繁技術(shù)1.外植體的選擇與消毒含側(cè)芽球莖自來(lái)水沖洗70%乙醇浸泡1min無(wú)菌水沖洗1次0.1%升汞消毒9~15min無(wú)菌水沖洗3~5次剝苞葉露莖尖切2~10mm生長(zhǎng)點(diǎn)接種香蕉莖尖消毒程序三、香蕉脫毒與快繁技術(shù)2.試管苗的培養(yǎng)3.煉苗移栽取上部未結(jié)實(shí)花序剝?nèi)グ~，除去子房取頂端8~10cm長(zhǎng)花序軸段70%乙醇浸泡2min無(wú)菌水沖洗3次橫切2~3mm薄片縱切成數(shù)片接種香蕉花序消毒程序四、葡萄脫毒與快繁技術(shù)四、葡萄脫毒與快繁技術(shù)（一）脫毒技術(shù)危害葡萄的主要病毒葡萄卷葉病毒葡萄莖痘病毒葡萄栓皮病毒葡萄扇葉病毒四、葡萄脫毒與快繁技術(shù)（一）脫毒技術(shù)1.脫毒技術(shù)（1）熱處理脫毒（2）莖尖培養(yǎng)脫毒（3）熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒2.病毒檢測(cè)技術(shù)指示植物鑒定法、抗血清鑒定法、電鏡檢測(cè)法等四、葡萄脫毒與快繁技術(shù)1.脫毒技術(shù)四、葡萄脫毒與快繁技術(shù)（二）快繁技術(shù)1.外植體的選擇與消毒2.試管苗的培養(yǎng)3.煉苗移栽任務(wù)二

蔬菜脫毒與快繁技術(shù)一、馬鈴薯脫毒與快繁技術(shù)二、大蒜脫毒與快繁技術(shù)三、姜脫毒與快繁技術(shù)四、甘薯脫毒與快繁技術(shù)一、馬鈴薯脫毒與快繁技術(shù)（一）脫毒技術(shù)莖尖脫毒組織培養(yǎng)是解決馬鈴薯病毒危害的有效途徑。一、馬鈴薯脫毒與快繁技術(shù)（一）脫毒技術(shù)1．脫毒方法（1）莖尖培養(yǎng)脫毒一、馬鈴薯脫毒與快繁技術(shù)（一）脫毒技術(shù)1．脫毒方法（1）莖尖培養(yǎng)脫毒（1）莖尖培養(yǎng)脫毒將帶毒薯在室內(nèi)催芽、消毒處理；然后在超凈工作臺(tái)無(wú)菌條件下，切取0.1~0.3mm、帶1~2個(gè)葉原基的莖尖分生組織，移植于適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。1個(gè)月可見明顯伸長(zhǎng)的小莖，2個(gè)月長(zhǎng)成3~4片葉的小植株。此時(shí)可將莖切段轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)，每20~25d增殖一代。大約4個(gè)月后，當(dāng)瓶苗擴(kuò)繁到一定數(shù)量后，一部分苗用于病毒檢測(cè)，另一部分先保存起來(lái)。（1）莖尖培養(yǎng)脫毒莖尖培養(yǎng)的關(guān)鍵是將脫毒后的莖尖誘導(dǎo)生成帶有完整根、莖、葉的植株，因此選擇適合的培養(yǎng)基十分重要。對(duì)于馬鈴薯的莖尖培養(yǎng)來(lái)說(shuō)，需要較多的NO3-和NH4+

營(yíng)養(yǎng)，MS和Miller基本培養(yǎng)基都是較好的培養(yǎng)基，附加少量（0.1~0.5mg/L）的生長(zhǎng)素或細(xì)胞分裂素，培養(yǎng)效果更好。一、馬鈴薯脫毒與快繁技術(shù)（一）脫毒技術(shù)1．脫毒方法（1）莖尖培養(yǎng)脫毒（2）熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒選擇種薯催芽熱處理材料消毒剝離莖尖接種初代培養(yǎng)脫毒苗病毒檢測(cè)田間繁殖一、馬鈴薯脫毒與快繁技術(shù)（一）脫毒技術(shù)2．脫毒苗鑒定技術(shù)（1）指示植物鑒定法汁液涂抹法鑒別寄主千日紅、藜屬的莧色藜等植物塊莖嫁接鑒定法待檢塊莖→健康塊莖（石蠟封）→培養(yǎng)（2）抗血清鑒定法除紡錘形塊莖類病毒外，感染馬鈴薯的病毒都可制成抗血清。不同病毒產(chǎn)生的抗血清都有各自的特異性。一、馬鈴薯脫毒與快繁技術(shù)（二）快繁技術(shù)脫毒馬鈴薯苗主要采取無(wú)菌短枝扦插進(jìn)行繁殖瓶苗繁殖一、馬鈴薯脫毒與快繁技術(shù)（二）快繁技術(shù)瓶苗的煉苗移栽，為了提高移栽成活率，在培養(yǎng)基中加10mg/L的比久或矮壯素，溫度降至15℃~18℃，加強(qiáng)光照到3000~4000lx，光照時(shí)間16h/d；或?qū)⑵棵绶诺缴⑸涔鈴?qiáng)的地方，幼苗經(jīng)過(guò)5d左右后即可移栽。也可將瓶塞取下，注入少量自來(lái)水，幾天后移栽。一、馬鈴薯脫毒與快繁技術(shù)（二）快繁技術(shù)剪芽扦插繁殖，將土壤消毒，裝入盆或缽內(nèi)，置于防蚜蟲溫室內(nèi)。緩苗后剪去頂芽，促使腋芽生長(zhǎng)。短時(shí)間內(nèi)即可獲得十幾個(gè)扦插枝。將帶有3個(gè)葉片的扦插枝除去最下部的1片葉子，扦插于經(jīng)過(guò)消毒的土壤中，1周后，扦插枝生根，可在其上繼續(xù)剪取扦插枝繁殖，也可使其直接產(chǎn)生微型薯。一、馬鈴薯脫毒與快繁技術(shù)（三）脫毒馬鈴薯繁育體系脫毒馬鈴薯的繁育分為原原種、原種、良種三級(jí)繁育體系脫毒苗快速繁殖一代原種二代原種一級(jí)種薯二級(jí)種薯原原種（三）脫毒馬鈴薯繁育體系1．原原種生產(chǎn)（1）試管生產(chǎn)原原種（微型薯）將帶有1～2個(gè)葉片和腋芽的莖段接種到MS＋香豆素50～100mg/L＋蔗糖3%＋瓊脂0.6%培養(yǎng)基上，可以在試管中誘導(dǎo)產(chǎn)生微型薯。（三）脫毒馬鈴薯繁育體系1．原原種生產(chǎn)（2）溫室生產(chǎn)原原種（微型薯）移栽的試管苗在移栽成活后，經(jīng)過(guò)60～90d的生長(zhǎng)，可在基部產(chǎn)生微型薯。原原種的繁育應(yīng)具備3方面的條件:第一，所用苗必須是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格檢測(cè)的無(wú)病毒試管苗；第二，必須要在防蟲網(wǎng)棚內(nèi)生產(chǎn)原原種；第三，所用基質(zhì)必須是無(wú)病原。一、馬鈴薯脫毒與快繁技術(shù)（三）脫毒馬鈴薯繁育體系2．原種生產(chǎn)原種分一級(jí)原種和二級(jí)原種。原種繁育時(shí)應(yīng)特別注意，所用地塊至少3年以上沒(méi)種過(guò)帶毒馬鈴薯，繁殖田每15d定期噴灑防蚜蟲藥劑，以防蚜蟲傳毒。3．良種生產(chǎn)良種生產(chǎn)包括一級(jí)種薯生產(chǎn)和二級(jí)種薯生產(chǎn)。良種生產(chǎn)得到的種薯可以直接進(jìn)行推廣，作為栽培薯使用。二、大蒜脫毒與快繁技術(shù)三、姜脫毒與快繁技術(shù)四、甘薯脫毒與快繁技術(shù)侵染甘薯的病毒有十多種，甘薯羽狀斑駁病毒（SPFMV）、甘薯潛隱病毒（SPLV）、甘薯花椰菜花葉病毒（SPCLV）、甘薯脈花葉病毒（SPVMV）等。甘薯病毒往往呈復(fù)合侵染，造成種性退化，品質(zhì)和產(chǎn)量降低。目前世界上甘薯病毒尚無(wú)有效的藥劑可供防治，只有通過(guò)莖尖分生組織培養(yǎng)這項(xiàng)生物技術(shù)，才能將病毒徹底去除。四、甘薯脫毒與快繁技術(shù)任務(wù)三花卉組培快繁技術(shù)一、蘭花組培快繁技術(shù)二、紅掌組培快繁技術(shù)三、仙客來(lái)組培快繁技術(shù)四、非洲菊組培快繁技術(shù)五、香石竹脫毒與快繁技術(shù)六、觀賞鳳梨組培快繁技術(shù)七、彩色馬蹄蓮快繁技術(shù)八、百合組培快繁技術(shù)任務(wù)三花卉組培快繁技術(shù)一、蘭花組培快繁技術(shù)一、蘭花組培快繁技術(shù)（一）蝴蝶蘭組培快繁技術(shù)一、蘭花組培快繁技術(shù)（一）蝴蝶蘭組培快繁技術(shù)花梗側(cè)芽側(cè)芽誘導(dǎo)原球莖誘導(dǎo)繼代增殖分化培養(yǎng)生根移栽蝴蝶蘭組培快繁工藝流程一、蘭花組培快繁技術(shù)（二）大花蕙蘭組培快繁技術(shù)頂芽或側(cè)芽誘導(dǎo)原球莖原球莖增殖分化成苗生根培養(yǎng)煉苗移栽大花蕙蘭組培快繁工藝流程一、蘭花組培快繁技術(shù)（三）中國(guó)蘭組培快繁技術(shù)莖尖或種子誘導(dǎo)原球莖原球莖增殖原球莖分化壯苗生根煉苗移栽中國(guó)蘭組培快繁工藝流程一、蘭花組培快繁技術(shù)（四）卡特蘭組培快繁技術(shù)1.外植體選擇與消毒2.試管苗培養(yǎng)（1）初代培養(yǎng)（2）繼代培養(yǎng)3.煉苗移栽二、紅掌組培快繁技術(shù)二、紅掌組培快繁技術(shù)紅掌組培快繁誘導(dǎo)芽苗增殖培養(yǎng)壯苗生根煉苗移栽頂芽、側(cè)芽→剝離莖尖葉片、莖段→愈傷組織紅掌組培快繁工藝流程三、仙客來(lái)組培快繁技術(shù)三、仙客來(lái)組培快繁技術(shù)仙客來(lái)組培快繁芽苗增殖壯苗生根煉苗移栽成苗葉片、塊莖→愈傷組織種子仙客來(lái)組培快繁工藝流程分化萌發(fā)四、非洲菊組培快繁技術(shù)四、非洲菊組培快繁技術(shù)非洲菊組培快繁種子無(wú)菌小苗短縮芽莖增殖培養(yǎng)壯苗生根煉苗移栽非洲菊組培快繁工藝流程五、香石竹脫毒與快繁技術(shù)五、香石竹脫毒與快繁技術(shù)（一）脫毒技術(shù)五、香石竹脫毒與快繁技術(shù)（二）快繁技術(shù)外植體的選擇與消毒試管苗的培養(yǎng)（1）初代培養(yǎng)（2）繼代培養(yǎng)（3）生根培養(yǎng)煉苗移栽六、觀賞鳳梨組培快繁技術(shù)六、觀賞鳳梨組培快繁技術(shù)觀賞鳳梨組培快繁叢生芽繼代培養(yǎng)壯苗生根煉苗移栽短縮莖→側(cè)芽萌發(fā)基部側(cè)芽→愈傷組織觀賞鳳梨組培快繁工藝流程七、彩色馬蹄蓮快繁技術(shù)七、彩色馬蹄蓮快繁技術(shù)彩色馬蹄蓮組培快繁芽尖誘導(dǎo)叢生芽芽苗增殖生根培養(yǎng)煉苗移栽彩色馬蹄蓮組培快繁工藝流程八、百合組培快繁技術(shù)八、百合組培快繁技術(shù)百合組培快繁鱗莖誘導(dǎo)小鱗莖分化成苗增殖培養(yǎng)生根培養(yǎng)煉苗移栽百合組培快繁工藝流程任務(wù)四樹木組培快繁技術(shù)一、楊樹組培快繁技術(shù)二、桉樹組培快繁技術(shù)三、美國(guó)紅櫨組培快繁技術(shù)四、櫻花組培快繁技術(shù)一、楊樹組培快繁技術(shù)（一）毛白楊組培快繁技術(shù)莖尖誘導(dǎo)芽苗切段增殖生根培養(yǎng)煉苗移栽一、楊樹組培快繁技術(shù)（二）青楊組培快繁技術(shù)水培嫩枝芽誘導(dǎo)培養(yǎng)繼代增殖生根培養(yǎng)煉苗移栽二、桉樹組培快繁技術(shù)帶芽莖段誘導(dǎo)成苗芽叢增殖壯苗生根煉苗移栽三、美國(guó)紅櫨組培快繁技術(shù)幼嫩葉片愈傷組織分化芽苗芽苗增殖壯苗生根煉苗移栽四、櫻花組培快繁技術(shù)新生嫩枝莖段培養(yǎng)芽苗增殖生根培養(yǎng)煉苗移栽任務(wù)五藥用植物組培快繁技術(shù)一、浙貝母組培快繁技術(shù)二、枸杞組培快繁技術(shù)三、石斛組培快繁技術(shù)四、半夏組培快繁技術(shù)任務(wù)五藥用植物組培快繁技術(shù)一、浙貝母組培快繁技術(shù)一、浙貝母組培快繁技術(shù)浙貝母組培快繁浙貝母組培快繁工藝流程二、枸杞組培快繁技術(shù)二、枸杞組培快繁技術(shù)枸杞組培快繁枸杞組培快繁工藝流程莖段誘導(dǎo)叢生芽增殖培養(yǎng)生根培養(yǎng)煉苗移栽三、石斛組培快繁技術(shù)三、石斛組培快繁技術(shù)（一）鐵皮石斛的組培快繁鐵皮石斛組培快繁工藝流程三、石斛組培快繁技術(shù)（二）霍山石斛的組培快繁霍山石斛組培快繁工藝流程四、半夏組培快繁技術(shù)四、半夏組培快繁技術(shù)半夏組培快繁半夏組培快繁工藝流程塊莖、珠芽形成幼芽幼芽增殖生根培養(yǎng)煉苗移栽小結(jié)果樹脫毒與快繁技術(shù)蔬菜脫毒與快繁技術(shù)外植體的選擇與消毒→脫毒處理→病毒檢測(cè)→增殖培養(yǎng)→生根壯苗→煉苗移栽花卉組培快繁技術(shù)樹木組培快繁技術(shù)藥用植物組培快繁技術(shù)外植體的選擇與消毒→初代培養(yǎng)→增殖培養(yǎng)→生根壯苗→煉苗移栽項(xiàng)目八

植物組培苗工廠化生產(chǎn)與經(jīng)營(yíng)Planttissuecultureseedlingproductionandmanagement目錄任務(wù)一

植物組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)任務(wù)二

生產(chǎn)計(jì)劃的制定與實(shí)施任務(wù)三組培苗成本核算與提高效益的措施任務(wù)四

組培苗工廠化生產(chǎn)的管理與經(jīng)營(yíng)（二）技能目標(biāo)（一）知識(shí)目標(biāo)教學(xué)目標(biāo)1.掌握植物組培苗工廠化生產(chǎn)的技術(shù)2.理解提高組培苗工廠化生產(chǎn)效益的措施3.了解組培苗工廠化生產(chǎn)的管理與經(jīng)營(yíng)1.能制定組培苗生產(chǎn)工藝流程和生產(chǎn)計(jì)劃2.會(huì)核算組培苗生產(chǎn)成本任務(wù)一

植物組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)一、組培苗工廠化生產(chǎn)流程培養(yǎng)基制備車間培養(yǎng)器皿洗滌培養(yǎng)基及其他物品滅菌外植體處理與清洗培養(yǎng)基配制及分裝生產(chǎn)流程生產(chǎn)車間工作內(nèi)容（一）培養(yǎng)基制備一、組培苗工廠化生產(chǎn)流程接種車間外植體消毒組培苗轉(zhuǎn)接生產(chǎn)流程生產(chǎn)車間工作內(nèi)容（二）組培苗接種外植體接種一、組培苗工廠化生產(chǎn)流程培養(yǎng)車間建立無(wú)菌培養(yǎng)體系組培苗壯苗生根生產(chǎn)流程生產(chǎn)車間工作內(nèi)容（三）組培苗培養(yǎng)組培苗繼代增殖一、組培苗工廠化生產(chǎn)流程調(diào)配移栽基質(zhì)組培商品幼苗管理組培苗煉苗組培苗移栽生產(chǎn)流程生產(chǎn)車間工作內(nèi)容（四）組培苗培養(yǎng)移栽車間一、組培苗工廠化生產(chǎn)流程葡萄脫毒苗工廠化生產(chǎn)流程二、組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)組培苗工廠化生產(chǎn)包括種源選擇、離體快繁、煉苗移栽、苗木質(zhì)量檢測(cè)、苗木運(yùn)輸5大技術(shù)環(huán)節(jié)二、組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)（一）種源選擇選擇優(yōu)良的種源是植物組織培養(yǎng)的技術(shù)關(guān)鍵。選擇的植物種類既要適應(yīng)市場(chǎng)的需求，又要考慮適應(yīng)當(dāng)?shù)氐沫h(huán)境條件，以便簡(jiǎn)化生產(chǎn)條件，降低生產(chǎn)成本。種源主要有兩個(gè)途徑：一是通過(guò)技術(shù)轉(zhuǎn)讓或外購(gòu)等方式獲得無(wú)菌原種苗。此途徑方便、快捷、省時(shí)。另一條途徑是自主研發(fā)，此途徑對(duì)技術(shù)力量要求高，周期往往比較長(zhǎng)。外植體的選擇可參閱第三章內(nèi)容二、組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)（二）離體快繁組培苗快速繁殖包括無(wú)菌培養(yǎng)體系建立、繼代增殖、壯苗生根等工序，目的是培養(yǎng)出大量健壯地生根組培苗。本階段工作在接種車間和培養(yǎng)車間完成，其培養(yǎng)方法與實(shí)驗(yàn)室快繁組培苗的流程相同，只是生產(chǎn)規(guī)模更大一些，具體生產(chǎn)過(guò)程見第四章內(nèi)容（三）組培苗的煉苗與移栽組培苗在培養(yǎng)車間長(zhǎng)出一定數(shù)量的根或根原基后，要及時(shí)轉(zhuǎn)移到移栽車間煉苗、移栽二、組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)1.準(zhǔn)備工作2.組培苗的煉苗與移栽3.移植幼苗的管理4.成苗管理二、組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)1.準(zhǔn)備工作——場(chǎng)地、工具及基質(zhì)消毒方法場(chǎng)地、物品消毒方法移栽場(chǎng)地及所有工具10%漂白粉或0.1%高錳酸鉀泡10～15min不含土壤的基質(zhì)1000倍百菌清噴霧含土壤的基質(zhì)用1%甲醛將基質(zhì)噴濕、拌勻，蓋上薄膜密閉5～7d，或高壓蒸汽滅菌(125℃，1~2h)二、組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)1.準(zhǔn)備工作——營(yíng)養(yǎng)液配方

單位（g/1000L）配方一配方二配方三配方四藥品名稱用量藥品名稱用量藥品名稱用量藥品名稱用量硫酸鉀200尿素450硝酸鈣950硝酸鈣950復(fù)合肥1000磷酸二氫鉀500磷酸二氫鉀360磷酸二氫銨155硫酸鎂500硫酸鈣700硫酸鎂500硫酸鎂500過(guò)磷酸鈣800硼酸3硼酸3硝酸鉀810硼酸3硫酸錳2硫酸錳2硼酸3硫酸錳2鉬酸鈉3鉬酸鈉3硫酸錳2鉬酸鈉3硫酸銅0.05硫酸銅0.05鉬酸鈉3硫酸銅0.05硫酸鋅0.22硫酸鋅0.22硫酸銅0.05硫酸鋅0.22螯合鐵40螯合鐵40硫酸鋅0.22螯合鐵40

贅合鐵40（四）組培苗的質(zhì)量鑒定隨著組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)的推廣應(yīng)用，越來(lái)越多的組培苗進(jìn)入商業(yè)化生產(chǎn)和流通。鑒定組培苗質(zhì)量是保護(hù)種植者利益的重要環(huán)節(jié)，也是確定組培苗價(jià)格重要依據(jù)二、組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)1.組培苗質(zhì)量鑒定項(xiàng)目2.組培瓶?jī)?nèi)生根苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)3.組培移栽苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)二、組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)2.組培瓶?jī)?nèi)生根苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)——幾種植物組培苗的出瓶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（引自熊麗，2003）植物品種根系狀況整體感株高（cm）葉片數(shù)（片）非洲菊1級(jí)有根直立單生，葉色綠，有心2～4≥32級(jí)有根苗略小，部分葉形不周正1～3≥3滿天星1級(jí)有根苗粗壯硬直，葉色深綠2～34～82級(jí)根原基1.5～34～8菊花1級(jí)有根苗粗壯硬直，葉色灰綠2～4≥42級(jí)有根1～2≥4馬蹄蓮1級(jí)有根苗單生，葉色綠3～5≥32級(jí)根少或無(wú)苗單生，苗色稍淺2～4≥3勿忘我1級(jí)有根或無(wú)苗單生，有心，葉色綠2～3≥32級(jí)有根2～4≥3龍膽草1級(jí)有根苗單生，葉色綠3～4≥62級(jí)有根1.5～34～6百合亞洲有根葉色不定，基部有小球不定有葉或枯黃東方有根葉色正常，基部有小球不定2～5二、組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)2.組培瓶?jī)?nèi)生根苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)——河北省主要花卉組培瓶?jī)?nèi)生根苗質(zhì)量等級(jí)等級(jí)指標(biāo)月季菊花非洲菊麗格海棠蝴蝶蘭一級(jí)苗高(cm)≥2.5≥2.5--≥2.0

葉片(片)≥5≥5≥7≥5－生根率(%)≥95≥95≥95≥95100生根數(shù)（條）≥5≥5≥7≥55月6日其他無(wú)愈傷組織無(wú)愈傷組織無(wú)愈傷組織無(wú)愈傷組織葉片長(zhǎng)≥5cm，2葉1蕊二級(jí)苗高(cm)≥2.0≥2.0

≥1.5-葉片(片)≥4≥4≥5≥4－生根率(%)≥90≥95≥95≥90≥90生根數(shù)（條）≥4≥4≥5≥44月5日其他無(wú)愈傷組織無(wú)愈傷組織無(wú)愈傷組織無(wú)愈傷組織葉片長(zhǎng)4-5cm，2葉1蕊三級(jí)苗高(cm)≥1.5≥1.5

≥1.5-葉片(片)≥3≥3≥4≥3－生根率(%)≥85≥90≥85≥85≥80生根數(shù)（條）≥4≥4≥4≥43月4日其他輕微愈傷組織輕微愈傷組織輕微愈傷組織輕微愈傷組織葉片長(zhǎng)3-4cm，2葉1蕊二、組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)3.組培移栽苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)——主要花卉組培移栽苗質(zhì)量等級(jí)種名一級(jí)二級(jí)苗高(cm)葉片(片)根系狀況其他苗高(cm)葉片(片)根系狀況其他月季≥5≥8完整、發(fā)達(dá)、新鮮無(wú)病蟲害≥4≥6完整、較發(fā)達(dá)、新鮮無(wú)病蟲害菊花≥5≥8≥4≥6非洲菊--≥10--≥7麗格海棠≥4≥8≥3≥6蝴蝶蘭-3葉1蕊根長(zhǎng)≥18cm根數(shù)≥10條葉片挺立，發(fā)育好，無(wú)病蟲害-2葉1蕊根長(zhǎng)≥15cm根數(shù)≥6cm葉片挺立，發(fā)育好，無(wú)病蟲害（五）組培苗的包裝與運(yùn)輸二、組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)1．運(yùn)輸前的準(zhǔn)備運(yùn)輸前要密切注意天氣預(yù)報(bào)，做好運(yùn)前的防護(hù)準(zhǔn)備，特別在冬春季，應(yīng)做好組培苗防寒防凍。起苗前幾天應(yīng)鍛煉組培苗，逐漸降溫，適當(dāng)少澆或不澆營(yíng)養(yǎng)液，以增強(qiáng)組培苗抗逆性（五）組培苗的包裝與運(yùn)輸二、組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)2．組培苗的包裝組培瓶苗最好用泡沫箱或紙箱包裝，防止在運(yùn)輸途中因松動(dòng)而損壞組培瓶苗運(yùn)輸組培移栽苗應(yīng)注意保護(hù)根系，以提高定植后的成活率及緩苗速度。水培苗或基質(zhì)培苗，可由數(shù)十株至百株扎成一捆，根部蘸滿泥漿，用草袋或塑料袋裝好掛上標(biāo)簽，注明品種、等級(jí)、規(guī)格、產(chǎn)地等（五）組培苗的包裝與運(yùn)輸二、組培苗工廠化生產(chǎn)技術(shù)3．組培苗的運(yùn)輸組培苗應(yīng)在較短時(shí)間內(nèi)運(yùn)輸?shù)侥康牡?，及時(shí)定植，運(yùn)輸時(shí)間一般不應(yīng)超過(guò)48h。運(yùn)輸過(guò)程中要保溫、保濕，避免風(fēng)吹、日曬。一般植物苗木運(yùn)輸需9～18℃低溫條件，低于4℃或高于25℃均不適宜。但結(jié)球萵苣、甘藍(lán)等耐寒葉菜秧苗為5～6℃任務(wù)二

生產(chǎn)計(jì)劃的制定與實(shí)施（一）繁殖品種一、生產(chǎn)計(jì)劃的制定生產(chǎn)品種來(lái)源可以是通過(guò)引種試種，篩選出適宜本地發(fā)展的新品種；也可以是通過(guò)市場(chǎng)調(diào)查，確定將在市場(chǎng)上流行的當(dāng)家品種，然后在主栽區(qū)進(jìn)行生產(chǎn)性跟蹤調(diào)查和比較篩選，選出該品種最優(yōu)良的單株進(jìn)行取芽，具有條件的企業(yè)和單位還應(yīng)通過(guò)開展新品種選育，培育出具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新品種（二）計(jì)劃數(shù)量一、生產(chǎn)計(jì)劃的制定具體到每個(gè)品種什么時(shí)候開始進(jìn)行生產(chǎn)前的準(zhǔn)備，需要多少外植體，須依據(jù)計(jì)劃的生產(chǎn)數(shù)量來(lái)考慮。一般應(yīng)提前6～8個(gè)月開始準(zhǔn)備。制定生產(chǎn)數(shù)量時(shí)要正確估算組培苗增殖率:是指植物快速繁殖中間繁殖體的繁殖率在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，受到材料污染、培養(yǎng)場(chǎng)地、人員、培養(yǎng)條件等因素的限制，實(shí)際生產(chǎn)的數(shù)量應(yīng)比估算的數(shù)字低（三）出苗時(shí)間一、生產(chǎn)計(jì)劃的制定每一種植物都有固有的生理現(xiàn)象和最佳生長(zhǎng)季節(jié)，生產(chǎn)必須滿足生理需求，出苗時(shí)間要與生長(zhǎng)季節(jié)相適應(yīng)。過(guò)早定植或過(guò)晚定植都會(huì)影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育，并且也會(huì)影響植物市場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益，例如草莓，蝴蝶蘭等二、生產(chǎn)計(jì)劃的實(shí)施（一）控制適當(dāng)?shù)拇婕茉鲋晨偲繑?shù)（T）存架增殖總瓶數(shù)不應(yīng)過(guò)多過(guò)少，增殖材料積壓，一部分苗老化，超過(guò)最佳接轉(zhuǎn)繼代的時(shí)期，造成生根不良、生長(zhǎng)勢(shì)減弱、增殖倍率降低等等不利后果。增殖瓶數(shù)不足，會(huì)造成母株數(shù)量不夠，也會(huì)延誤產(chǎn)苗存架增殖總瓶數(shù)（T）＝增殖周期內(nèi)工作日天數(shù)（W）×每工作日需用的母株瓶數(shù)（S）（二）控制適宜的增殖與生根的比例二、生產(chǎn)計(jì)劃的實(shí)施需按實(shí)際情況確定，增殖倍率高的，生根的比例大，每工作日需用的母株瓶數(shù)較少，產(chǎn)苗數(shù)（即生根的瓶數(shù)×每瓶植株數(shù)）較多，反之，增殖倍率低，因需要維持原增殖瓶數(shù)，就占用了較多的材料，用于生根的材料就少。生產(chǎn)上也可以通過(guò)改變培養(yǎng)基中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的用量、糖濃度和培養(yǎng)條件等加以調(diào)整二、生產(chǎn)計(jì)劃的實(shí)施（三）正確估算全年實(shí)際生產(chǎn)量同工業(yè)生產(chǎn)流水線一樣，組培苗繁殖是一個(gè)不斷運(yùn)行、流動(dòng)著的體系，不允許任何環(huán)節(jié)的半成品堆積。要求各環(huán)節(jié)都處于力所能及的負(fù)荷條件下運(yùn)轉(zhuǎn)，首先注意質(zhì)量，出苗實(shí)績(jī)，每天均衡出苗，按部就班，工作有節(jié)奏感，不紊亂，不積壓每個(gè)工人的全年實(shí)際生產(chǎn)量＝全年總工作日×平均每工作日出瓶苗數(shù)×（1－損耗率）×移栽成活率任務(wù)三組培苗成本核算與提高效益的措施一、成本核算成本核算是制定產(chǎn)品價(jià)格的依據(jù)；是反映經(jīng)營(yíng)管理工作質(zhì)量的一個(gè)綜合性指標(biāo)；是了解生產(chǎn)中各種消耗，改進(jìn)工藝流程、改善薄弱環(huán)節(jié)的依據(jù)；是提高效益、節(jié)省投資的必要措施一、成本核算組培苗生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)成本項(xiàng)目?jī)?nèi)

容人工費(fèi)技術(shù)人員、管理人員、操作人員的工資及獎(jiǎng)金折舊費(fèi)儀器設(shè)備的維護(hù)和折舊（每年按5%計(jì)算）生產(chǎn)辦公用房（每年按5%～10%計(jì)算）溫室大棚（每年按10%～30%計(jì)算）器皿、燈管、小型工具的損耗及折舊（每年按30%計(jì)算）原料費(fèi)化學(xué)藥品、生產(chǎn)無(wú)離子水或蒸餾水肥料、農(nóng)藥、移栽基質(zhì)等水電費(fèi)培養(yǎng)室光照、控溫，滅菌，照明，洗滌器皿，澆水其他辦公費(fèi)、培訓(xùn)費(fèi)、種苗費(fèi)、差旅費(fèi)、廣告費(fèi)、展銷費(fèi)等一、成本核算安祖花商品組培苗的成本核算表培養(yǎng)月份培養(yǎng)植株數(shù)培養(yǎng)基費(fèi)用（元）人工費(fèi)（元）水電費(fèi)（元）設(shè)備折舊（元）合計(jì)（元）單價(jià)（元）350.9600135001951

4200.960060001201

58046006000120415.05632015600600512203.81712805560011702018451.4485120221120013608028610.569204808871800211032051170.2510819203538675052001278167660.20113276801415527000176805119639540.201213107205662210800067500208802530020.19（一）培養(yǎng)熟練技術(shù)工人，提高勞動(dòng)生產(chǎn)率二、提高生產(chǎn)效益的措施組培苗生產(chǎn)中的人工費(fèi)用是一項(xiàng)很大的開支，如國(guó)外人工費(fèi)用占組培苗總成本的70%左右，國(guó)內(nèi)占25%～40%。利用經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)的勞動(dòng)力，加強(qiáng)競(jìng)爭(zhēng)力，降低勞動(dòng)成本。我國(guó)生產(chǎn)國(guó)際市場(chǎng)需要的優(yōu)良品質(zhì)的組培苗，無(wú)疑具有較大的價(jià)格優(yōu)勢(shì)（二）減少設(shè)備投資，加強(qiáng)設(shè)備維護(hù)，延長(zhǎng)使用壽命二、提高生產(chǎn)效益的措施組培苗生產(chǎn)需要一定的設(shè)備投資，少則數(shù)萬(wàn)元，多則數(shù)十萬(wàn)元。除了應(yīng)購(gòu)置一些基本設(shè)備外，可不購(gòu)的就不購(gòu)，能代用的就代用，如用精密pH試紙代替昂貴的酸度計(jì)。要會(huì)正確使用各種儀器設(shè)備，及時(shí)檢修、保養(yǎng)，避免損壞，延長(zhǎng)使用壽命二、提高生產(chǎn)效益的措施（三）節(jié)約水電開支節(jié)約水電開支也是降低成本的重要措施。一般采用以下辦法：①利用當(dāng)?shù)氐淖匀毁Y源②充分利用培養(yǎng)室空間③減少水的消耗④節(jié)約電能（四）降低器皿消耗，使用廉價(jià)的代用品二、提高生產(chǎn)效益的措施組培繁殖中使用大量培養(yǎng)器皿，少則數(shù)千，多則上萬(wàn)，投資大，加上這些器皿易損耗，費(fèi)用較大。培養(yǎng)瓶除有一部分三角瓶做試驗(yàn)用之外，生產(chǎn)中的培養(yǎng)瓶可采用果醬瓶代用。組培藥品中用白糖代替蔗糖，有的甚至省去有機(jī)成分和微量元素，生產(chǎn)的產(chǎn)品效果是同樣的（五）降低污染率二、提高生產(chǎn)效益的措施組培繁殖過(guò)程中，有幾個(gè)環(huán)節(jié)容易引起污染。轉(zhuǎn)接苗時(shí)注意技術(shù)操作規(guī)程，接種工具消毒徹底，提高轉(zhuǎn)接苗的成功率。組培苗在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)環(huán)境要定期消毒，減少空間菌量的存在。夏季溫度高，培養(yǎng)室內(nèi)要及時(shí)通風(fēng)換氣，減少螨蟲攜帶真菌污染培養(yǎng)器皿，避免母瓶的污染（六）提高繁殖系數(shù)和移栽成活率二、提高生產(chǎn)效益的措施在保證原有良種特性的基礎(chǔ)上，盡量提高繁殖系數(shù)，組培繁殖率越大，成本越低。提高生根率和煉苗成活率也是提高經(jīng)濟(jì)效益的重要因素。組培繁殖快，要達(dá)到生根率95%以上，煉苗成活率要達(dá)85%以上。在煉苗環(huán)節(jié)上可技術(shù)更新、簡(jiǎn)化手續(xù)、降低成本，提高成活率大有文章可做（七）發(fā)展多種經(jīng)營(yíng)，開展橫向聯(lián)合二、提高生產(chǎn)效益的措施結(jié)合當(dāng)?shù)氐姆N植結(jié)構(gòu)，安排好每種植物的定制茬口，發(fā)展多種植物組培繁殖。如發(fā)展花卉、果樹、經(jīng)濟(jì)林木、藥材等，將多種作物結(jié)合起來(lái)，以主代副，搞成一個(gè)總額靈活的試驗(yàn)苗工廠，也是降低成本提高經(jīng)濟(jì)效益的途徑，要加強(qiáng)技術(shù)間的緊密合作，使之在多方面發(fā)揮效益。任務(wù)四

組培苗工廠化生產(chǎn)的管理與經(jīng)營(yíng)一、組培苗工廠化生產(chǎn)的管理組培苗工廠化生產(chǎn)時(shí)可實(shí)行責(zé)任制管理。對(duì)責(zé)任人要簽訂責(zé)任協(xié)議，對(duì)生產(chǎn)有管理保障，對(duì)生產(chǎn)有技術(shù)保障，對(duì)生產(chǎn)人員有安全措施保障，不能出現(xiàn)任何問(wèn)題。責(zé)任人要明確責(zé)任權(quán)限，將工作中的每一個(gè)環(huán)節(jié)分解到人，落實(shí)到人，層層分解，層層落實(shí)，明確每人的崗位職責(zé)和任務(wù)，使每人都有自己的生產(chǎn)目標(biāo)一、組培苗工廠化生產(chǎn)的管理組培苗生產(chǎn)工廠主要部門、技術(shù)工種及其崗位職責(zé)部門技術(shù)工種崗位職責(zé)生產(chǎn)部培養(yǎng)基制作工負(fù)責(zé)配制培養(yǎng)基母液和培養(yǎng)基負(fù)責(zé)培養(yǎng)基、無(wú)菌水、無(wú)菌紙的滅菌工作負(fù)責(zé)藥品保管和登記使用負(fù)責(zé)培養(yǎng)基制作間儀器設(shè)備維護(hù)和保養(yǎng)接種工負(fù)責(zé)外植體消毒、材料的切割和轉(zhuǎn)接等工作及時(shí)標(biāo)記接種后的材料，填寫接種工作日?qǐng)?bào)表負(fù)責(zé)緩沖間、接種間的整潔和消毒工作負(fù)責(zé)接種間儀器設(shè)備的維護(hù)和保養(yǎng)培養(yǎng)工負(fù)責(zé)調(diào)控培養(yǎng)間溫度、光照和濕度及時(shí)檢查清理污染及生長(zhǎng)異常材料負(fù)責(zé)培養(yǎng)間整潔和消毒工作做好培養(yǎng)材料的出入庫(kù)登記和日常記錄煉苗管理工負(fù)責(zé)移栽基質(zhì)配制和消毒工作精心做好組培苗煉苗工作細(xì)心移栽和管理幼苗，并做好記錄做好移栽溫室（或大棚）的日常管理苗圃管理工做好苗木移栽前的征地、施肥等必要的準(zhǔn)備工作精心管理移栽苗木，保證苗木生長(zhǎng)健壯做好苗圃地的規(guī)劃和栽植記錄勤雜工負(fù)責(zé)洗滌培養(yǎng)器皿、用具負(fù)責(zé)生產(chǎn)作業(yè)區(qū)公共環(huán)境衛(wèi)生負(fù)責(zé)組培苗包裝以及原材料、組培苗的裝卸一、組培苗工廠化生產(chǎn)的管理組培苗生產(chǎn)工廠主要部門、技術(shù)工種及其崗位職責(zé)部門技術(shù)工種崗位職責(zé)質(zhì)檢部質(zhì)檢工負(fù)責(zé)組培苗木的質(zhì)量檢驗(yàn)，簽發(fā)質(zhì)量合格證或等級(jí)證制定各種組培苗木出廠的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)保存各項(xiàng)檢驗(yàn)檔案銷售部營(yíng)銷員負(fù)責(zé)市場(chǎng)調(diào)研與市場(chǎng)預(yù)測(cè)，做好廣告策劃和宣傳負(fù)責(zé)銷售談判，完成銷售指標(biāo)制定銷售合同書和營(yíng)銷計(jì)劃做好組培苗的售后服務(wù)研發(fā)部技術(shù)研發(fā)工負(fù)責(zé)建立新的無(wú)性繁殖系，并研究出最佳快繁方案做好種源和技術(shù)儲(chǔ)備負(fù)責(zé)解決生產(chǎn)上出現(xiàn)的問(wèn)題建立技術(shù)檔案，并做好技術(shù)保密后勤部物資供應(yīng)工負(fù)責(zé)采購(gòu)儀器設(shè)備和生產(chǎn)用品，并做好出入庫(kù)登記負(fù)責(zé)儀器設(shè)備的維修保證水電正常供應(yīng)二、組培苗工廠化生產(chǎn)的經(jīng)營(yíng)（一）做好市場(chǎng)經(jīng)營(yíng)預(yù)測(cè)1.市場(chǎng)需求的預(yù)測(cè)：植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行預(yù)測(cè)時(shí)，首先要做好區(qū)域種植結(jié)構(gòu)、自然氣候、種植的植物種類及市場(chǎng)發(fā)展趨勢(shì)的預(yù)測(cè)2.市場(chǎng)占有率的預(yù)測(cè)：市場(chǎng)占有率是指一家企業(yè)的某種產(chǎn)品的銷售量或銷售額與市場(chǎng)上同類產(chǎn)品的全部銷售量或銷售額之間的比率二、組培苗工廠化生產(chǎn)的經(jīng)營(yíng)（二）樹立企業(yè)品牌市場(chǎng)占有率是指企業(yè)的某種產(chǎn)品的銷售量或銷售額與市場(chǎng)上同類產(chǎn)品的全部銷售量或銷售額之間的比率。影響市場(chǎng)占有率的因素主要有組培植物的品種、種苗質(zhì)量、種苗價(jià)格、種苗的生產(chǎn)量等，主要取決于與其他企業(yè)生產(chǎn)的同類種苗相比，在質(zhì)量、價(jià)格、供應(yīng)時(shí)間、包裝等方面處于什么地位二、組培苗工廠化生產(chǎn)的經(jīng)營(yíng)（三）以銷定產(chǎn)，產(chǎn)銷結(jié)合產(chǎn)品的營(yíng)銷，是指運(yùn)用各種方式和方法，向消費(fèi)者傳遞產(chǎn)品信息，激發(fā)購(gòu)買欲望，促進(jìn)其購(gòu)買的活動(dòng)過(guò)程。產(chǎn)品的促銷，首先要正確分析市場(chǎng)環(huán)境，確定適當(dāng)?shù)臓I(yíng)銷形式，企業(yè)的銷售部門密切注視市場(chǎng)變化，及時(shí)將市場(chǎng)走勢(shì)情況反饋給生產(chǎn)部門，以便根據(jù)需要及時(shí)調(diào)整生產(chǎn)計(jì)劃和種苗上市時(shí)間二、組培苗工廠化生產(chǎn)的經(jīng)營(yíng)（四）樹立企業(yè)信譽(yù)，贏得效益組培種苗的生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)，堅(jiān)持信譽(yù)第一，質(zhì)量第一，對(duì)用戶負(fù)責(zé)，對(duì)生產(chǎn)負(fù)責(zé)，強(qiáng)調(diào)生產(chǎn)中的經(jīng)濟(jì)核算，降低產(chǎn)品成本，加強(qiáng)技術(shù)創(chuàng)新，提高產(chǎn)品質(zhì)量和經(jīng)濟(jì)效益。按國(guó)家頒布的組培種苗的標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)產(chǎn)品，定植移栽成活率高，并且在種苗售后做好服務(wù)工作，能長(zhǎng)久地占領(lǐng)市場(chǎng)、鞏固市場(chǎng)和開拓市場(chǎng)，取得較高的信譽(yù)項(xiàng)目九植物組織培養(yǎng)與植物育種教學(xué)目標(biāo)知識(shí)目標(biāo)了解植物胚培養(yǎng)、單倍體植株、遺傳轉(zhuǎn)化在育種中的應(yīng)用理解原生質(zhì)體培養(yǎng)的原理和方法掌握胚培養(yǎng)和花藥培養(yǎng)方法技能目標(biāo)能進(jìn)行胚培養(yǎng)和花粉分離操作會(huì)用酶解法分離原生質(zhì)體教學(xué)內(nèi)容任務(wù)一花藥、花粉培養(yǎng)與單倍體育種任務(wù)二胚培養(yǎng)與離體受精任務(wù)三體細(xì)胞無(wú)性系變異與突變體篩選任務(wù)四原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交任務(wù)五植物遺傳轉(zhuǎn)化任務(wù)一花藥、花粉培養(yǎng)與單倍體育種一、花藥培養(yǎng)二、花粉培養(yǎng)三、單倍體植株鑒定及染色體加倍四、花藥與花粉培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用實(shí)例花藥與花粉培養(yǎng)一、花藥培養(yǎng)（一）花藥培養(yǎng)的意義（二）花藥培養(yǎng)技術(shù)（三）影響花藥培養(yǎng)的因素1964年：Guha&Maheshwari毛葉曼陀羅花藥培養(yǎng)發(fā)育成胚1967年：Bourgin&Nitsch花藥培養(yǎng)獲得煙草植株1973年：我國(guó)首次報(bào)道了小麥花藥培養(yǎng)獲得再生植株（一）花藥培養(yǎng)的意義據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，目前已有23個(gè)科，52個(gè)屬的250多種高等植物的花藥培養(yǎng)取得了成功。我國(guó)在花藥培養(yǎng)技術(shù)和應(yīng)用方面居于世界先進(jìn)行列，在煙草、水稻、小麥、玉米和辣椒等植物培養(yǎng)出新品系（種），其中水稻新品系（種）有100多個(gè)，累計(jì)推廣面積近91萬(wàn)hm2。（一）花藥培養(yǎng)的意義1.含義花藥培養(yǎng)是指把發(fā)育到一定階段的花藥接種到人工培養(yǎng)上，使其發(fā)育和分化成為植株的過(guò)程。2.意義誘導(dǎo)形成單倍體，快速獲得純系，縮短育種周期。有利于篩選隱性突變體，提高選擇效率。獲得無(wú)病毒個(gè)體。（二）花藥培養(yǎng)技術(shù)1．材料準(zhǔn)備通過(guò)花藥培養(yǎng)成功獲得單倍體植株最多的是茄科植物，其次是十字花科、禾本科和百合科植物等。不同植物類型和同一類型的不同品種對(duì)花藥培養(yǎng)的反應(yīng)也是不同的。（二）花藥培養(yǎng)技術(shù)1．材料準(zhǔn)備在花藥培養(yǎng)中，花粉的發(fā)育時(shí)期對(duì)于培養(yǎng)的成功與否是至關(guān)重要的。一般而言，單核后期的花藥對(duì)培養(yǎng)的反應(yīng)較好，比較容易誘導(dǎo)成功。（二）花藥培養(yǎng)技術(shù)2．材料的消毒適宜于接種用的花藥，都還處在未開花的幼花或花蕾中，由花被或穎片等包被，本身是無(wú)菌的，因此，只要對(duì)幼穗或花蕾進(jìn)行表面消毒就可以。舉例：禾本科作物消毒葉鞘用70％乙醇擦拭一遍剝?nèi)θ~鞘，取出穗子1％次氯酸鈉浸泡消毒無(wú)菌水漂洗（二）花藥培養(yǎng)技術(shù)3．材料的接種在無(wú)菌條件下，從消毒過(guò)的幼穗、花蕾中剝?nèi)』ㄋ?，迅速接種到培養(yǎng)基上。注意不要損傷花藥，去掉花絲?；ㄋ幍慕臃N密度因培養(yǎng)方式而異（二）花藥培養(yǎng)技術(shù)4．花藥培養(yǎng)在花藥培養(yǎng)中，使用的基本培養(yǎng)基一般隨植物種類不同而異：總的來(lái)說(shuō)以MS培養(yǎng)基應(yīng)用最為普遍MS、White、Nitsch和N6培養(yǎng)基比較適合于茄科植物B5培養(yǎng)基比較適合于蕓苔屬和豆科植物N6培養(yǎng)基較適合于禾谷類植物（二）花藥培養(yǎng)技術(shù)4．花藥培養(yǎng)花藥培養(yǎng)一般在溫度25～28℃、光照1000～2000lx和光周期14h的條件下進(jìn)行培養(yǎng)但小麥的花藥培養(yǎng)在開始培養(yǎng)的6d，給予30～32℃的高溫，然后轉(zhuǎn)移到28～30℃培養(yǎng)，出現(xiàn)愈傷組織率有明顯提高。（二）花藥培養(yǎng)技術(shù)5．植株的誘導(dǎo)由花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)花粉植株的形成有兩條途徑：一是由花粉粒的異常發(fā)育形成胚狀體，再由胚狀體發(fā)育長(zhǎng)成花粉植株二是由花粉粒的多次分裂形成愈傷組織，再由愈傷組織進(jìn)一步器官分化，形成芽和根，最后形成完整植株5．植株的誘導(dǎo)（三）影響花藥培養(yǎng)的因素1.植株的基因型基因型是限制花藥培養(yǎng)成功的主要因素之一如在水稻中，依糯稻—粳稻—粳秈雜種—秈秈雜種—秈稻的順序，花藥誘導(dǎo)率逐漸下降，粳稻中花粉愈傷組織誘導(dǎo)率平均可達(dá)10%，而秈稻只有1%～2%（三）影響花藥培養(yǎng)的因素2.花粉發(fā)育時(shí)期花粉發(fā)育時(shí)期是影響培養(yǎng)效果的重要因素在誘導(dǎo)花粉進(jìn)行雄性發(fā)育(指小孢子沿孢子體途徑發(fā)育成花粉植株)過(guò)程中，不同物種花粉最適的發(fā)育時(shí)期不同，對(duì)多數(shù)植物來(lái)說(shuō)，單核中期或晚期的花粉最容易形成花粉胚或花粉愈傷組織（三）影響花藥培養(yǎng)的因素3.培養(yǎng)基（1）不同的植物種類對(duì)基本培養(yǎng)基的要求不同：Nitsch、H和MS培養(yǎng)基廣泛應(yīng)用于雙子葉植物的花藥培養(yǎng)B5培養(yǎng)基用于十字花科及豆科植物的花藥培養(yǎng)禾谷類作物一般選用N6、C17及馬鈴薯-2號(hào)培養(yǎng)基，就會(huì)產(chǎn)生較多的愈傷組織（三）影響花藥培養(yǎng)的因素3.培養(yǎng)基（2）植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的種類會(huì)影響花粉發(fā)育的途徑（3）糖的種類對(duì)花粉胚的誘導(dǎo)和分化有顯著影響（4）在培養(yǎng)基中加入活性炭能促進(jìn)花藥培養(yǎng)（三）影響花藥培養(yǎng)的因素4.培養(yǎng)條件（1）離體培養(yǎng)的花藥和花粉對(duì)溫度比較敏感如小麥低溫預(yù)處理、培養(yǎng)初期高溫（2）禾谷類作物的花藥培養(yǎng)，在愈傷組織誘導(dǎo)期間進(jìn)行暗培養(yǎng)在弱光或散射光下培養(yǎng)效果較好，當(dāng)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上之后，光照則有利于綠苗的分化，小植株的生長(zhǎng)也比較健壯二、花粉培養(yǎng)（一）花粉培養(yǎng)的意義（二）花粉培養(yǎng)技術(shù)（三）影響花粉植株培養(yǎng)的因素（一）花粉培養(yǎng)的意義花粉培養(yǎng)又叫小孢子培養(yǎng)，是將花粉粒從花藥中分離出來(lái)，成為分散的或游離的狀態(tài)，然后通過(guò)培養(yǎng)使花粉粒脫分化，進(jìn)而發(fā)育成完整植株的過(guò)程?；ǚ叟囵B(yǎng)避免了花藥培養(yǎng)中倍性混亂，便于研究和分析結(jié)果，培養(yǎng)的效率高花粉培養(yǎng)比花藥培養(yǎng)難度大，成功率低，只能作為單倍體育種的輔助方法花粉培養(yǎng)的取材適宜期大多為花粉發(fā)育處于四分體到單核早期的材料（二）花粉培養(yǎng)技術(shù)1.分離花粉（1）擠壓法（2）自然釋放法（3）磁拌法（二）花粉培養(yǎng)技術(shù)2.花粉培養(yǎng)（1）預(yù)培養(yǎng)將花藥在液體培養(yǎng)基中先培養(yǎng)2～4d，然后擠出花粉，經(jīng)離心洗滌純化后懸浮于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，密度可調(diào)整為104～105個(gè)/mL（2）直接培養(yǎng)培養(yǎng)基上加入花藥提取物，再接種花粉粒（二）花粉培養(yǎng)技術(shù)2.花粉培養(yǎng)（3）看護(hù)培養(yǎng)有些植物細(xì)胞，一旦分離出來(lái)，不僅不能分裂、增殖，還可能死亡。如果用花藥或一塊愈傷組織來(lái)哺育單細(xì)胞，從而使其正常分裂、增殖的方法，稱“看護(hù)培養(yǎng)”。（三）影響花粉植株培養(yǎng)的因素1.基因型基因型會(huì)影響花粉植株誘導(dǎo)成功率2.花粉的發(fā)育時(shí)期花粉植株的培養(yǎng)成功率與花粉發(fā)育時(shí)期有很大關(guān)系花粉培養(yǎng)中花粉發(fā)育時(shí)期要求比花藥培養(yǎng)的花粉發(fā)育時(shí)期略晚一些三、單倍體植株鑒定及染色體加倍（一）花粉植株的倍性（二）單倍體植株的鑒定（三）單倍體植株的染色體加倍（四）單倍體植物在育種中的作用（一）花粉植株的倍性由花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)得到的花粉植株，不一定都是單倍體植株，由于細(xì)胞來(lái)源不同和雄核發(fā)育途徑的差異，花粉植株的染色體數(shù)的變化是很大的由花藥培養(yǎng)產(chǎn)生的花粉植株多數(shù)是單倍體，還有二倍體、三倍體及非整倍體需要進(jìn)行鑒定水稻再生植株（三）影響花粉植株培養(yǎng)的因素1.形態(tài)鑒別單倍體植株在植物形態(tài)上與二倍體、多倍體是有較明顯區(qū)別的（三）影響花粉植株培養(yǎng)的因素2.細(xì)胞學(xué)鑒定這是確定倍性最基本和最可靠的方法對(duì)根尖細(xì)胞有絲分裂中期的染色體花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂中期的染色體從數(shù)目和形態(tài)上利用細(xì)胞學(xué)顯微技術(shù)鑒定，以最后確定是單倍體、二倍體、多倍體或非整倍體（三）單倍體植株的染色體加倍1.自然加倍通過(guò)花粉細(xì)胞核有絲分裂或核融合染色體可自然加倍，從而獲得一定數(shù)量的純合二倍體自然加倍的優(yōu)點(diǎn)是不會(huì)出現(xiàn)核畸變2.人工加倍誘導(dǎo)染色體加倍的傳統(tǒng)方法是用秋水仙素處理處理方法有小苗浸泡方法、芽處理、浸根方法或浸泡分蘗節(jié)方法不同作物用秋水仙素處理的濃度和時(shí)間不同（三）單倍體植株的染色體加倍3.愈傷組織加倍將單倍體植株的葉、莖、葉柄和根等器官切成小塊后置于一種適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上，誘導(dǎo)形成愈傷組織，經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)之后，轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，由此所獲得的再生植株中，將會(huì)有染色體加倍的植株在花藥（粉）愈傷組織增殖過(guò)程中，往往可通過(guò)核內(nèi)有絲分裂使染色體加倍（四）單倍體植物在育種中的作用1．加快育種速度（四）單倍體植物在育種中的作用2．提高選擇效率（四）單倍體植物在育種中的作用3.快速獲得自交系的超雄株用單倍體誘導(dǎo)的辦法，從雄株花藥培養(yǎng)得到只含有Y染色體的單倍體植株，加倍后得到超雄株（YY）,將超雄株與雌株雜交，后代就得到100%的雄株如，蘆筍（石刁柏）四、花藥與花粉培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用實(shí)例（一）水稻花藥培養(yǎng)取材及預(yù)處理培養(yǎng)基制備外植體消毒、花藥剝離及接種誘導(dǎo)培養(yǎng)煉苗、移植單倍體染色體加倍四、花藥與花粉培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用實(shí)例（二）油菜游離小孢子培養(yǎng)任務(wù)二胚培養(yǎng)與離體受精一、胚培養(yǎng)二、離體受精一、胚培養(yǎng)（一）胚培養(yǎng)的意義（二）胚培養(yǎng)方法（三）影響胚培養(yǎng)的因素（四）胚培養(yǎng)技術(shù)操作實(shí)例（一）胚培養(yǎng)的意義1.胚培養(yǎng)的含義胚培養(yǎng)是在無(wú)菌條件下，把植物成熟胚或未成熟胚從種子中分離出來(lái)，接種人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使其發(fā)育成正常幼苗的過(guò)程。2.胚培養(yǎng)的應(yīng)用（1）克服遠(yuǎn)緣雜種的不育性

（2）使胚發(fā)育不全的植物獲得后代

（3）縮短育種年限（二）胚培養(yǎng)方法1.成熟胚培養(yǎng)成熟胚一般指子葉期后至發(fā)育完全的胚。圖紅豆杉成熟胚培養(yǎng)（二）胚培養(yǎng)方法2.幼胚培養(yǎng)幼胚培養(yǎng)是指未發(fā)育成熟（子葉形成以前）的胚培養(yǎng)幼胚主要來(lái)源于未成熟的或不能正常萌發(fā)的雜種種子幼胚從生理至形態(tài)均未成熟，培養(yǎng)難度較大（二）胚培養(yǎng)方法2.幼胚培養(yǎng)（1）表面消毒取大田或溫室里種植的雜交植株的授粉后的子房，進(jìn)行消毒（2）胚的剝離2.幼胚培養(yǎng)（3）接種培養(yǎng)

剝離出來(lái)的幼胚要立即接種到培養(yǎng)基上，放在培養(yǎng)室中進(jìn)行培養(yǎng)培養(yǎng)室溫度20～30℃，光照強(qiáng)度2000lx，光照10～14h/d2.幼胚培養(yǎng)（4）幼胚離體培養(yǎng)的生長(zhǎng)發(fā)育方式

幼胚離體培養(yǎng)的生長(zhǎng)發(fā)育方式有3種：①胚性發(fā)育②早熟萌發(fā)③形成愈傷組織（三）影響胚培養(yǎng)的因素1．培養(yǎng)基成熟胚對(duì)培養(yǎng)條件的要求一般不是很高，離體培養(yǎng)幼胚對(duì)培養(yǎng)基要求高（1）蔗糖蔗糖使用的濃度大多在4%～12%滲透壓的保持對(duì)于幼胚培養(yǎng)相當(dāng)重要最適蔗糖濃度隨著胚的發(fā)育時(shí)期而降低1．培養(yǎng)基（1）蔗糖1．培養(yǎng)基（2）天然植物提取物和氨基酸銀杏幼胚培養(yǎng)中添加銀杏胚乳有促進(jìn)作用（1934）曼佗羅幼胚培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)添加椰子乳能很好的促進(jìn)幼胚的發(fā)育(200-500um的幼胚)（1941）此外，大麥胚乳、麥芽提取物、酵母提取物、水解酪蛋白等都能促進(jìn)幼胚的發(fā)育。1．培養(yǎng)基（3）維生素類維生素對(duì)培養(yǎng)發(fā)育初期的胚來(lái)說(shuō)，一般認(rèn)為是必需的維生素及其衍生物對(duì)胚生長(zhǎng)的促進(jìn)作用不同鹽酸硫胺素對(duì)幾種植物胚的培養(yǎng)表現(xiàn)出促進(jìn)根的伸長(zhǎng)生物素、泛酸鈣和煙酸對(duì)莖生長(zhǎng)的促進(jìn)作用比對(duì)根更為顯著1．培養(yǎng)基（4）植物生長(zhǎng)物質(zhì)成熟胚一般不需要外源激素即可萌發(fā)。但激素能促進(jìn)休眠胚的萌發(fā)幼胚需要外源激素，應(yīng)保持外源激素與內(nèi)源激素的平衡。過(guò)低則不能促進(jìn)生長(zhǎng)，過(guò)高則易導(dǎo)致幼胚脫分化形成愈傷1．培養(yǎng)基（5）pH在胚培養(yǎng)中，培養(yǎng)基pH一般為5.0～7.5，不同的植物胚培養(yǎng)要求的pH不同薺菜胚培養(yǎng)pH為5.4～7.5大麥胚培養(yǎng)pH為4.9番茄胚培養(yǎng)pH為6.5水稻胚培養(yǎng)pH為5.0（三）影響胚培養(yǎng)的因素2.培養(yǎng)條件（1）光照一般認(rèn)為黑暗或弱光條件較為合適（2）溫度多數(shù)為25-30℃，因植物種類有所差別3.胚柄在幼胚培養(yǎng)中，帶有胚柄結(jié)構(gòu)有利于幼胚的生長(zhǎng)（四）胚培養(yǎng)技術(shù)操作實(shí)例1.蘋果成熟胚培養(yǎng)（1）取材與消毒

（2）種胚剝離培養(yǎng)2.柿幼胚培養(yǎng)(谷曉峰等在2001年)（1）取材與消毒，取花后70d的羅田甜柿幼果，常規(guī)消毒（2）剝?nèi)∮着呓臃N培養(yǎng)，MS+IBA0.3mg/L+ZT0.44mg/L+蔗糖7g/L+AC3g/L

28℃、光照14h/d、光強(qiáng)31.2～39.0mol/（m2?s）（3）生根培養(yǎng)，MS+IAA1.0mg/L暗處理4d，生根率達(dá)77.9%二、離體受精（一）離體受精的意義（二）離體受精的方法（一）離體受精的意義1.離體受精的含義從花粉粒萌發(fā)到受精形成種子，從種子萌發(fā)到幼苗形成的整個(gè)過(guò)程，均在試管內(nèi)完成，稱離體受精或試管受精。2.離體受精的意義可克服植物自交不親和性可克服植物遠(yuǎn)緣雜交不親和性（二）離體受精的方法1．子房?jī)?nèi)受精將不同發(fā)育階段的子房連同一段花梗，經(jīng)表面滅菌后接種到瓊脂培養(yǎng)基上，然后將無(wú)菌的花粉人工授到子房的柱頭上（二）離體受精的方法2.離體胚珠受精將胚珠從子房中剝離出來(lái)進(jìn)行培養(yǎng)，然后將花粉授在胚珠珠孔處，也可以實(shí)現(xiàn)雙受精，獲得健康的種子這種方法可以避免花粉和柱頭之間的不親和性，在遠(yuǎn)緣雜交上使用具有重要的意義任務(wù)三體細(xì)胞無(wú)性系變異與突變體篩選一、體細(xì)胞無(wú)性系變異二、突變體篩選三、突變體篩選應(yīng)用實(shí)例一、體細(xì)胞無(wú)性系變異體細(xì)胞無(wú)性系：通過(guò)任何形式細(xì)胞培養(yǎng)所獲得的再生植株體細(xì)胞無(wú)性系變異：外植體經(jīng)組織、細(xì)胞培養(yǎng)的分化和再分化過(guò)程，在再生植株中所表現(xiàn)出來(lái)的各種變異變異體：不加任何選擇壓力而篩選出的變異個(gè)體突變體：經(jīng)過(guò)施加某種選擇壓力所篩選出的無(wú)性系變異一、體細(xì)胞無(wú)性系變異體細(xì)胞無(wú)性系變異大體上有兩種來(lái)源：1．外植體中預(yù)先存在的變異2．組織培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的變異體細(xì)胞無(wú)性系變異的原因：培養(yǎng)基中植物激素外植體體細(xì)胞變異隨機(jī)基因突變體細(xì)胞無(wú)性系變異二、突變體篩選（一）突變體篩選的意義1.與傳統(tǒng)的育種方法相比，體細(xì)胞突變體篩選具有突出的優(yōu)點(diǎn)一是誘變數(shù)量大、誘變幾率高二是與種子、苗木、插條比較，從細(xì)胞水平上誘發(fā)突變，重復(fù)性好，穩(wěn)定性好（一）突變體篩選的意義2.突變體的應(yīng)用主要有三個(gè)方面①為細(xì)胞雜交和基因?qū)胩峁┻x擇記號(hào)，如攜帶標(biāo)記基因Gus的細(xì)胞系②用于遺傳和代謝研究③對(duì)農(nóng)作物性狀進(jìn)行遺傳改良二、突變體篩選（二）突變體篩選目標(biāo)1．改良農(nóng)作物品質(zhì)作物品質(zhì)實(shí)際是指食品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，食品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值主要取決于蛋白質(zhì)和氨基酸的含量，特別是氨基酸的組成。如對(duì)高賴氨酸水稻突變體篩選的研究（二）突變體篩選目標(biāo)2．抗病突變體篩選抗病細(xì)胞突變體的篩選原理是在培養(yǎng)基中加入一定量的致病毒素，對(duì)于毒素敏感的細(xì)胞則被淘汰，對(duì)于毒素有抵抗力的細(xì)胞就存活和繁殖起來(lái)，這些抗病的愈傷組織細(xì)胞分化形成的植株具有抗病性如煙草抗野火病突變體篩選如Gengenbach,B.G.（1975）玉米抗小斑病T小種突變體篩選（二）突變體篩選目標(biāo)3．抗性突變體篩選在含有NaCl液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)辣椒和煙草，可篩選出能在1%～2%NaCl條件下生存的抗鹽突變細(xì)胞株，培養(yǎng)幾代后再回到含鹽培養(yǎng)基中，仍具有抗鹽性在辣椒愈傷組織懸浮培養(yǎng)時(shí)，用甲基磺酸乙酯（EMS）作為誘變劑，得到抗低溫的突變株（二）突變體篩選目標(biāo)4．高光效突變體篩選如何將C3植物變?yōu)镃4植物，使C3植物具有高光效、低光呼吸的特點(diǎn)，將會(huì)大大提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)三、突變體篩選應(yīng)用實(shí)例舉例：抗稻瘟病突變體的篩選（1）獲得水稻花粉愈傷組織

（2）細(xì)胞誘變

（3）稻瘟菌培養(yǎng)與毒素提取液的制備（4）抗病突變體篩選任務(wù)四原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交一、原生質(zhì)體分離二、原生質(zhì)體培養(yǎng)三、體細(xì)胞雜交四、原生質(zhì)體培養(yǎng)及體細(xì)胞雜交應(yīng)用實(shí)例一、原生質(zhì)體分離（一）原生質(zhì)體植物細(xì)胞去掉細(xì)胞壁的由質(zhì)膜包裹、具有生活力的裸露細(xì)胞，稱為原生質(zhì)體。一、原生質(zhì)體分離（二）原生質(zhì)體分離1.材料的選擇一般來(lái)說(shuō)，植物的根、莖、葉、花、果實(shí)、種子、子葉、下胚軸及愈傷組織和懸浮細(xì)胞都可以作為分離原生質(zhì)體的材料（二）原生質(zhì)體分離1.材料的選擇大量試驗(yàn)表明，葉肉細(xì)胞是分離原生質(zhì)體較好的材料從葉片中可以分離出大量的比較均勻一致的原生質(zhì)體雙子葉外植體（二）原生質(zhì)體分離1.材料的選擇對(duì)于禾本科植物，比較理想的材料是疏松易碎的愈傷組織或懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞胚性細(xì)胞（二）原生質(zhì)體分離2.材料的預(yù)處理（1）枝條暗處理（2）枝條萎蔫預(yù)處理（3）葉片預(yù)培養(yǎng)（4）預(yù)先質(zhì)璧分離（5）胚性愈傷組織和懸浮細(xì)胞系的預(yù)培養(yǎng)（二）原生質(zhì)體分離3.分離方法（1）機(jī)械分離法預(yù)先質(zhì)壁分離，再用機(jī)械法磨碎組織，從傷口處可以釋放出完整的原生質(zhì)體。優(yōu)點(diǎn)：是能排除酶的有害影響缺點(diǎn)：原生質(zhì)體的產(chǎn)量低、方法繁瑣費(fèi)力、局限性大（二）原生質(zhì)體分離3.分離方法（2）酶解分離法酶解分離法是分離原生質(zhì)體最常用的方法。利用細(xì)胞壁降解酶，脫除植物細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體的方法。常用的細(xì)胞壁降解酶種類有纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、崩潰酶、蝸牛酶等。葉肉原生質(zhì)體分離3.分離方法（2）酶解分離法酶解分離原生質(zhì)體既可以采用一步分離法，也可采用兩步分離法過(guò)濾、離心加果膠酶和纖維素酶圖示酶解分離原生質(zhì)體過(guò)程（以葉片為例）（二）原生質(zhì)體分離4.原生質(zhì)體活力的測(cè)定（1）形態(tài)識(shí)別形態(tài)上完整，呈圓形，含有飽滿的細(xì)胞質(zhì)，顏色鮮艷的即為存活的原生質(zhì)體。4.原生質(zhì)體活力的測(cè)定（2）熒光素雙醋酸酯（FDA）染色法在熒光顯微鏡下有熒光的即為有活性的原生質(zhì)體熒光素雙乙酸酯酯酶→熒光素UV→綠色熒光活細(xì)胞中綠色熒光死細(xì)胞中無(wú)熒光原生質(zhì)體活力=（有活力的原生質(zhì)體數(shù)/觀察原生質(zhì)體的總數(shù)）×100%二、原生質(zhì)體培養(yǎng)（一）培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)方法（三）原生質(zhì)體密度（四）培養(yǎng)條件（五）原生質(zhì)體再生（一）培養(yǎng)基茄科植物的原生質(zhì)體培養(yǎng)大多以MS、NT、和K3為基本培養(yǎng)基，十字花科和豆科植物多數(shù)以B5、KM8p、K8p和KM為基本培養(yǎng)基，禾谷類植物多數(shù)以MS、N6、KM為基本培養(yǎng)基。培養(yǎng)基碳源氮源生長(zhǎng)物質(zhì)鈣鎂滲透壓pH（二）培養(yǎng)方法培養(yǎng)方法液體淺層培養(yǎng)平板培養(yǎng)懸滴培養(yǎng)飼養(yǎng)層培養(yǎng)（二）培養(yǎng)方法1.液體淺層培養(yǎng)原生質(zhì)體懸浮液1mm厚液體培養(yǎng)基2×105/mL（二）培養(yǎng)方法2.平板培養(yǎng)原生質(zhì)體純化、離心、稀釋后，再與1.4%瓊脂或瓊脂糖（37℃左右）等體積混合成0.7%，培養(yǎng)于培養(yǎng)皿中（二）培養(yǎng)方法3．懸滴培養(yǎng)將含有液體培養(yǎng)基和一定密度原生質(zhì)體的懸浮液，用滴管或定量加液器滴在培養(yǎng)皿蓋的內(nèi)側(cè)上，一般直徑為6cm培養(yǎng)皿蓋滴6～7滴，皿底加入培養(yǎng)液或滲透劑等液體以保濕，輕而快地將皿蓋蓋在培養(yǎng)皿上，此時(shí)培養(yǎng)小滴懸掛在皿蓋內(nèi)（二）培養(yǎng)方法4.飼養(yǎng)層培養(yǎng)方法一：X-射線殺死原生質(zhì)體，與生活力正常的原生質(zhì)體混合，加入0.7%瓊脂，制成混合液，培養(yǎng)于培養(yǎng)皿中方法二：X-射線殺死原生質(zhì)體，與0.7%瓊脂混合，在培養(yǎng)皿中鋪成平板，作為飼養(yǎng)層，再將生活力正常的原生質(zhì)體與0.7%瓊脂混合，培養(yǎng)于飼養(yǎng)層上（三）原生質(zhì)體密度培養(yǎng)原生質(zhì)體必須要有一定的密度，不然難于分裂要求在5000～10000個(gè)/mL的高密度下才能培養(yǎng)成功隨著培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物添加的合理化，更能適合原生質(zhì)體的培養(yǎng)，原生質(zhì)體密度可適當(dāng)降低（四）培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度保持在25～27℃，光照10～16h/d，光強(qiáng)一般為1000～3000lx，靜止為主，但為了不使細(xì)胞集聚，最初幾天需經(jīng)常輕輕搖動(dòng)，以助通氣有些材料如非葉肉細(xì)胞，不一定要光照，可置于黑暗中進(jìn)行有些材料可在最初3d內(nèi)置于暗處，以后在散射光下靜置培養(yǎng)（五）原生質(zhì)體再生1.細(xì)胞壁的再生和分裂培養(yǎng)一旦開始，細(xì)胞壁就開始合成，矮牽牛在1-2天內(nèi)形成細(xì)胞壁，然后開始細(xì)胞分裂蠶豆培養(yǎng)細(xì)胞制備的原生質(zhì)體，在培養(yǎng)開始20分鐘時(shí)就開始細(xì)胞壁的合成，在72小時(shí)之后，完成細(xì)胞壁的合成（五）原生質(zhì)體再生2.愈傷組織及胚狀體的形成3.植株再生豆科、禾本科植物再生困難三、體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交又稱原生質(zhì)體融合，是以體細(xì)胞為材料，通過(guò)化學(xué)或物理因素的誘導(dǎo)使原生質(zhì)體進(jìn)行融合，從而達(dá)到無(wú)性雜交的目的。完整的體細(xì)胞雜交程序：原生質(zhì)體的分離→原生質(zhì)體的純化→原生質(zhì)體融合→細(xì)胞雜種的選擇→愈傷組織的形成→器官分化及植株再生→雜種植株的鑒定三、體細(xì)胞雜交（一）原生質(zhì)體融合的方法（二）雜種細(xì)胞的選擇與鑒定（一）原生質(zhì)體融合的方法1．無(wú)機(jī)鹽誘導(dǎo)融合無(wú)機(jī)鹽融合法是應(yīng)用最早的誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法鹽類融合劑有：硝酸鹽類：NaNO3、KNO3、Ca（NO3）2氯化物類：NaCl、CaCl2、MgCl2、BaCl2葡聚糖硫酸鹽類：葡聚糖硫酸鉀、葡聚糖硫酸鈉優(yōu)點(diǎn)：是