第1頁(yè)共11頁(yè)醫(yī)療器械微生物標(biāo)準(zhǔn)樣品驗(yàn)證方案項(xiàng)目?jī)?nèi)容方案編號(hào)版本號(hào)V1.0(草案→審批后生效)適用范圍公司用于醫(yī)療器械微生物檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)樣品，含：1.標(biāo)準(zhǔn)菌株(ATCC/CMCC菌株，如大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌等)2.質(zhì)控菌片(NIM溯源，如枯草芽孢桿菌黑色變種)3.微生物計(jì)數(shù)質(zhì)控品(含定量微生物的凍干樣品)驗(yàn)證類型首次驗(yàn)證/批次驗(yàn)證/變更驗(yàn)證(按需選擇)驗(yàn)證目的1.確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)樣品溯源性、純度、濃度準(zhǔn)確性，符合檢測(cè)要求；2.驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)樣品穩(wěn)定性(儲(chǔ)存/運(yùn)輸/使用周期);3.確認(rèn)其在醫(yī)療器械無(wú)菌檢查、微生物限度檢查、消毒效果驗(yàn)證中的適用性；4.保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可重復(fù)性與合規(guī)性關(guān)聯(lián)法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)1.2025版《醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》2.ISO11133:2021《微生物學(xué)用于微生物檢測(cè)的培養(yǎng)基和試劑的第2頁(yè)共11頁(yè)質(zhì)量控制》3.YY/T0962-2014《醫(yī)療器械全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定》6.公司編制部門質(zhì)量部(微生物檢測(cè)組)+技術(shù)部編制日期審批流程編制人→質(zhì)量負(fù)責(zé)人→技術(shù)總監(jiān)→總經(jīng)理預(yù)計(jì)驗(yàn)證周期首次驗(yàn)證：3個(gè)月(含穩(wěn)定性監(jiān)測(cè));批次驗(yàn)證：15個(gè)工作日參與人員及職責(zé)1.微生物檢驗(yàn)工程師(3人):方案執(zhí)行、樣品測(cè)試、數(shù)據(jù)記錄；2.質(zhì)量負(fù)責(zé)人(1人):監(jiān)督驗(yàn)證合規(guī)性、審核數(shù)據(jù)；3.外部專家(1人，CNAS資質(zhì)):非標(biāo)準(zhǔn)方法評(píng)審、結(jié)果復(fù)核；4.設(shè)備部(1人):保障儀器設(shè)備正常運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)樣品類型標(biāo)準(zhǔn)菌株1.大腸埃希菌(ATCC25922/CMCC6538/CMCC26003)3.白色念珠菌溯源完整、純度≥99.9%、濃度在證書(shū)范圍內(nèi)第3頁(yè)共11頁(yè)草芽孢桿菌黑色變種(ATCC質(zhì)控菌片溯源，批號(hào)：QC20250401,1.0×10?復(fù)蘇率≥90%、濃度偏差≤±5%、儲(chǔ)存12個(gè)月衰減率≤10%計(jì)數(shù)質(zhì)控品大腸埃希菌計(jì)數(shù)質(zhì)控品(標(biāo)示濃度：1.0×103~1.0×10?CFU/支)計(jì)數(shù)結(jié)果在標(biāo)示值±10%范圍內(nèi)、重復(fù)性RSD≤5%2.2核心驗(yàn)證項(xiàng)目覆蓋項(xiàng)目基礎(chǔ)特性驗(yàn)證溯源性確認(rèn)、外觀完整性、純度驗(yàn)證所有類型濃度準(zhǔn)確性驗(yàn)證平板計(jì)數(shù)法/比濁法濃度測(cè)定、與標(biāo)示值偏差計(jì)算所有類型穩(wěn)定性驗(yàn)證長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性(2-8℃/-80℃)、短期運(yùn)輸穩(wěn)定性(室溫48h)、開(kāi)封后使用穩(wěn)定性所有類型適用性驗(yàn)證無(wú)菌檢查陽(yáng)性對(duì)照適用性、微生物限度回收率驗(yàn)證、消毒效果挑戰(zhàn)試驗(yàn)適用性所有類型方法一致性驗(yàn)證與NIM標(biāo)準(zhǔn)方法/ATCC推薦方法的結(jié)果一致性對(duì)比質(zhì)控菌片、計(jì)數(shù)質(zhì)控品第5頁(yè)共11頁(yè)穩(wěn)定性監(jiān)測(cè)定期取樣→濃度測(cè)定→計(jì)算衰減率(衰減率=(初始濃度-實(shí)測(cè)濃度)/初始濃度×100%)適用性驗(yàn)證無(wú)菌檢查(YY/T0962-2014附錄A)、回收率試驗(yàn)(加標(biāo)回收法)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、外殼)4.1前置條件確認(rèn)(驗(yàn)證啟動(dòng)前1個(gè)工作日)確認(rèn)項(xiàng)目文件準(zhǔn)備1.標(biāo)準(zhǔn)樣品溯源證書(shū)、出廠檢驗(yàn)報(bào)告；2.測(cè)試方法SOP(如《平板計(jì)數(shù)法操作規(guī)程》);3.記錄表格模板微生物檢驗(yàn)工程師文件完整、有效、版本一致儀器設(shè)備1.生物安全柜 恒溫培養(yǎng)箱0.5℃);2.菌落計(jì)數(shù)器、電子天平(0.1mg精度);3.高壓滅菌鍋設(shè)備部+檢驗(yàn)工程師儀器在校準(zhǔn)有效期內(nèi)，功能正常試劑與培養(yǎng)基1.營(yíng)養(yǎng)瓊脂、沙氏葡萄糖瓊脂等培養(yǎng)基(經(jīng)適用檢驗(yàn)工程師培養(yǎng)基在有效期內(nèi)，促生長(zhǎng)第6頁(yè)共11頁(yè)性驗(yàn)證合格);2.無(wú)菌生理鹽水、稀釋液人員準(zhǔn)備1.參與人員已培訓(xùn)并考核合格(掌握菌株復(fù)蘇、計(jì)數(shù)操作);2.熟悉驗(yàn)證方案及判定標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量負(fù)責(zé)人考核成績(jī)≥90分，操作技能環(huán)境條件1.BSL-2實(shí)驗(yàn)室溫濕度(20~26℃2.潔凈度萬(wàn)級(jí)，皿(30min)檢驗(yàn)工程師環(huán)境參數(shù)符合要求，無(wú)交叉污染風(fēng)險(xiǎn)4.2分模塊驗(yàn)證實(shí)施步驟4.2.1基礎(chǔ)特性驗(yàn)證(第1-3天)溯源性確認(rèn)1.核查溯源證書(shū)編號(hào)、批號(hào)與實(shí)物標(biāo)簽一致性；2.確認(rèn)溯源鏈完整性(如NIM質(zhì)控菌片溯源至每批次1次號(hào)、批號(hào)、外觀與完整性檢查1.標(biāo)準(zhǔn)菌株：凍干管無(wú)破損、無(wú)漏液，標(biāo)簽清晰；2.質(zhì)控菌片：形態(tài)均一、無(wú)受潮，包裝密封完好片檢查記錄外觀描述、包裝完整性第7頁(yè)共11頁(yè)純度驗(yàn)證1.標(biāo)準(zhǔn)菌株復(fù)蘇：按證書(shū)要求復(fù)水，37℃培養(yǎng)24h;2.劃線分離：營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板劃線，培養(yǎng)后觀察菌落形態(tài)；3.生化鑒定：挑取3個(gè)菌落進(jìn)行VITEK2鑒定每批次3次平行記錄菌落形態(tài)、生化鑒定結(jié)果、是否有雜菌4.2.2濃度準(zhǔn)確性驗(yàn)證(第4-7天)適用樣品標(biāo)準(zhǔn)菌株濃度測(cè)定1.梯度稀釋：復(fù)蘇后菌液按10610-稀釋；2.平板接種：每個(gè)稀釋度3個(gè)平行平板，接種量0.1mL;3.培養(yǎng)計(jì)數(shù)：37℃培養(yǎng)24h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)，計(jì)算濃度每批次3次平行濃度在證書(shū)質(zhì)控菌片濃度測(cè)定1.菌片復(fù)蘇：無(wú)菌操作溶解菌片，制成菌懸液；2.梯度稀釋(103~10-5),平板接種培養(yǎng)；3.計(jì)算實(shí)測(cè)濃度與偏差每批次5片平行偏差≤±5%,回收率計(jì)數(shù)質(zhì)控品驗(yàn)證1.溶解質(zhì)控品，梯度稀釋后接均值與RSD次重復(fù)內(nèi)4.2.3穩(wěn)定性驗(yàn)證(第8-90天)類型監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性1.標(biāo)準(zhǔn)菌株：-80℃甘油管儲(chǔ)存，分別在0天、1個(gè)月、3個(gè)月取樣測(cè)定濃度；2.質(zhì)控菌片：2-8℃儲(chǔ)存，0每個(gè)時(shí)間點(diǎn)312個(gè)月衰減率≤10%第8頁(yè)共11頁(yè)天、3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月取樣測(cè)定次平行運(yùn)輸穩(wěn)定性1.模擬室溫運(yùn)輸(20~25℃),放置48h;2.運(yùn)輸前后分別測(cè)定濃度，計(jì)算存活率每批次1次存活率≥90%,無(wú)明顯濃度下降開(kāi)封后穩(wěn)定性1.標(biāo)準(zhǔn)菌株復(fù)蘇后，4℃儲(chǔ)存，分別在0天、3天、7天取樣；2.質(zhì)控菌片開(kāi)封后密封儲(chǔ)存，7天內(nèi)測(cè)定每個(gè)時(shí)間點(diǎn)2次平行7天內(nèi)濃度4.2.4適用性驗(yàn)證(第91-100天)無(wú)菌檢查陽(yáng)性對(duì)照1.接種100CFU標(biāo)準(zhǔn)菌株至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基；2.37℃培養(yǎng)48h,觀察生長(zhǎng)情況微生物限度回收率1.樣品基質(zhì)(如無(wú)菌注射器)加標(biāo)100CFU標(biāo)準(zhǔn)菌株；2.按YY/T0962-2014方法檢測(cè)，計(jì)算回收率回收率70%~130%消毒效果挑戰(zhàn)試驗(yàn)1.質(zhì)控菌片接種至樣品表面，經(jīng)消毒處理后復(fù)蘇計(jì)數(shù)；2.計(jì)算殺滅率(殺滅率=(初始菌數(shù)-殘留菌數(shù))/初始菌數(shù)×100%).數(shù)據(jù)審核：質(zhì)量負(fù)責(zé)人審核原始數(shù)據(jù)，確保符合ALCOA+原則(可歸因、可追溯、清晰、同步記錄、完整);2.結(jié)果判定：對(duì)照本方案“關(guān)鍵判定標(biāo)準(zhǔn)”,逐項(xiàng)判定是否合第9頁(yè)共11頁(yè)格，不合格項(xiàng)需啟動(dòng)偏差處理；3.報(bào)告編制：匯總驗(yàn)證數(shù)據(jù)、偏差處理情況，編制《醫(yī)療器物標(biāo)準(zhǔn)樣品驗(yàn)證報(bào)告》,明確驗(yàn)證結(jié)論；4.報(bào)告審批：按“編制人→質(zhì)量負(fù)責(zé)人→技術(shù)總監(jiān)→總5.1風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估(采用風(fēng)險(xiǎn)矩陣法)×發(fā)生概率)菌株復(fù)蘇失敗中風(fēng)險(xiǎn)(3×2)雜菌污染高風(fēng)險(xiǎn)(4×2)1.生物安全柜操作前消毒；2.培養(yǎng)基、稀釋液無(wú)菌性驗(yàn)證；3.操作過(guò)程避免交叉污染濃度測(cè)定結(jié)果偏差過(guò)大中風(fēng)險(xiǎn)(3×2)2.平板計(jì)數(shù)時(shí)雙人復(fù)核穩(wěn)定性監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)異常低風(fēng)險(xiǎn)(2×1)1.儲(chǔ)存條件嚴(yán)格按要求控制(如2-8℃避光);2.定期核查冰箱溫度A[發(fā)現(xiàn)偏差]-->B{偏差分級(jí)}C-->D[提交《偏差報(bào)告》,分析根本原因]第10頁(yè)共11頁(yè)D-->E[制定糾正措施(如更換菌株、消毒環(huán)境)]E-->F[實(shí)施糾正措施并驗(yàn)證效果]F-->|效果合格|G[重啟驗(yàn)證]F-->|效果不合格|H[終止驗(yàn)證，重新評(píng)估]I-->J[采取糾正預(yù)防措施(如增加平行樣數(shù)量)]J-->K[繼續(xù)驗(yàn)證]G/K-->L[偏差閉環(huán)歸檔]批次再驗(yàn)證1.新批次標(biāo)準(zhǔn)樣品到貨；2.供應(yīng)商變更每批次1次溯源性、純度、濃度準(zhǔn)確性、適用性年度再驗(yàn)證每年1次穩(wěn)定性復(fù)核(6個(gè)月儲(chǔ)存衰減率)、適用性驗(yàn)證變更再驗(yàn)證1.標(biāo)準(zhǔn)樣品配方/生產(chǎn)工藝變更；2.儲(chǔ)存條件變更(如從2-8℃改為-變更后立即執(zhí)行全項(xiàng)目驗(yàn)證第11頁(yè)共11頁(yè)20℃);3.檢測(cè)方法變