B50

DB130

唐山市地方標(biāo)2準(zhǔn)

DB1302/T341—2012

水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物的快速測(cè)定

膠體金免疫層析法

2012-11-20發(fā)布2012-12-10實(shí)施

唐山市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB1302/T341—2012

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由唐山市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：唐山市畜牧水產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)中心。

本標(biāo)準(zhǔn)起草人：蒙君麗、李愛(ài)軍、葛懷禮、董李學(xué)、苗建民、鄭百芹、劉洋、張潔、劉志強(qiáng)、

衛(wèi)大群。

DB1302/T341—2012

水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物的快速測(cè)定膠體金免疫層析法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的樣品制備和膠體金免疫層析法測(cè)定。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物（呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林）的快速篩

選測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682–2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)則和試驗(yàn)方法

3制樣

3.1樣品的制備

取新鮮或解凍的供試水產(chǎn)品肌肉組織，剪碎，置于組織勻漿機(jī)中充分勻漿。

3.2樣品的保存

-20℃冰箱中貯存?zhèn)溆谩?/p>

4測(cè)定方法

4.1方法原理

硝基呋喃類代謝物膠體金免疫層析法應(yīng)用了競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析的原理，樣品中的呋喃類代謝物在流

動(dòng)過(guò)程中與膠體金標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合，抑制了抗體和NC膜檢測(cè)線(T)上硝基呋喃類代謝物－

蛋白偶聯(lián)物的結(jié)合。如樣品制備液中呋喃類代謝物含量大于檢測(cè)線(T)時(shí)，檢測(cè)線(T)不顯顏色，結(jié)果為

陽(yáng)性。反之，檢測(cè)線(T)顯紅色，結(jié)果為陰性。

4.2試劑和材料

以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純?cè)噭疄榉螱B/T6682規(guī)定的三級(jí)水。

4.2.1硝基呋喃類檢測(cè)卡(試劑盒自帶)：4℃～30℃陰涼避光干燥處儲(chǔ)存。

4.2.2乙酸乙酯。

4.2.3衍生化試劑(試劑盒自帶)。

4.2.4吸管(試劑盒自帶)。

4.2.5試劑A試劑B試劑C試劑D(試劑盒自帶)。

4.3儀器和設(shè)備

4.3.1組織勻漿機(jī)。

4.3.2天平：感量0.01g。

4.3.3振蕩器或混旋器。

4.3.4離心機(jī)。

4.3.5氮?dú)獯蹈裳b置。

4.3.6微量移液器：?jiǎn)蔚?0μL～200μL、200μL～1000μL、多道300μL。

4.3.7計(jì)時(shí)器。

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4.4試樣制備

稱取3（g±0.05g）已均質(zhì)樣品于15ml離心管中，加入4ml蒸餾水或去離子水，0.5ml試劑A和600μl

衍生化試劑，充分振蕩，在65℃水浴中孵育30min。分別加入1ml試劑B，0.4ml試劑C和4ml乙酸

乙酯，劇烈振蕩5min；在溫度15℃～30℃4000r/min離心5min；取出上層2ml的乙酸乙酯到另一個(gè)15ml

離心管中，（注意：請(qǐng)勿吸取脂肪層和下層液體），于50℃水浴中用氮?dú)獯蹈?若無(wú)氮?dú)饪蓪⒁宜嵋阴?/p>

放入50ml的錐底離心管中，用吹風(fēng)筒吹干)；用1ml正己烷溶解干燥物，充分振蕩混合2min，加入0.5ml

試劑D充分振蕩混合2min，在溫度15℃～30℃4000r/min離心5min。

5檢測(cè)和結(jié)果判定

5.1檢測(cè)

取出待測(cè)檢測(cè)卡（見(jiàn)圖1），平放，用塑料吸管或移液槍取4.4中液體80μl(2～3滴)于加樣孔，目

測(cè)檢測(cè)線,5min～10min內(nèi)觀察結(jié)果。

5.2結(jié)果判定

5.2.1檢測(cè)線(T)和質(zhì)控線(C)均呈現(xiàn)肉眼可見(jiàn)紅色線的為陰性。（見(jiàn)圖2）

5.2.2檢測(cè)線(T)無(wú)顯色，質(zhì)控線(C)呈現(xiàn)肉眼可見(jiàn)紅色線的為陽(yáng)性。（見(jiàn)圖3）

5.2.3檢測(cè)線(T)和質(zhì)控線(C)均無(wú)顯色，或只出現(xiàn)檢測(cè)線(T)而質(zhì)控線(C)無(wú)顯色的為無(wú)效。（見(jiàn)圖4）

注：檢測(cè)卡在打開(kāi)包裝1h內(nèi)使用。

6檢測(cè)限和結(jié)果確認(rèn)

6.1檢測(cè)限

呋喃唑酮代謝物:1μg/kg；呋喃它酮代謝物:2μg/kg；呋喃妥因代謝物：2μg/kg；呋喃西林代謝物：

2μg/kg。

6.2結(jié)果確認(rèn)

陽(yáng)性樣品應(yīng)用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜方法進(jìn)行確認(rèn)。

待測(cè)檢測(cè)卡陰性卡陽(yáng)性卡無(wú)效卡