變異株疫苗佐劑免疫增強(qiáng)策略演講人04/佐劑增強(qiáng)疫苗免疫應(yīng)答的核心機(jī)制03/變異株對(duì)疫苗免疫逃逸的機(jī)制解析02/引言：變異株疫苗研發(fā)的緊迫性與佐劑的核心價(jià)值01/變異株疫苗佐劑免疫增強(qiáng)策略06/變異株疫苗佐劑的優(yōu)化策略與創(chuàng)新方向05/當(dāng)前變異株疫苗佐劑的研究進(jìn)展08/總結(jié)與展望07/臨床轉(zhuǎn)化與未來(lái)展望目錄01變異株疫苗佐劑免疫增強(qiáng)策略02引言：變異株疫苗研發(fā)的緊迫性與佐劑的核心價(jià)值引言：變異株疫苗研發(fā)的緊迫性與佐劑的核心價(jià)值近年來(lái)，新冠病毒（SARS-CoV-2）的持續(xù)變異對(duì)全球公共衛(wèi)生構(gòu)成了前所未有的挑戰(zhàn)。從阿爾法（Alpha）到德?tīng)査―elta），再到奧密克戎（Omicron）及其亞分支，變異株通過(guò)S蛋白關(guān)鍵位點(diǎn)的突變，不僅增強(qiáng)了傳播力，更導(dǎo)致免疫逃逸能力顯著提升，使得傳統(tǒng)疫苗的保護(hù)效力面臨嚴(yán)峻考驗(yàn)。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）數(shù)據(jù)，截至2023年，全球已報(bào)告超過(guò)800個(gè)SARS-CoV-2變異株，其中至少有50個(gè)被列為“需關(guān)注的變異株”（VOI）或“需關(guān)注的變異株”（VOC）。這種持續(xù)變異的態(tài)勢(shì)，迫使疫苗研發(fā)從“廣譜覆蓋”轉(zhuǎn)向“精準(zhǔn)應(yīng)對(duì)”，而佐劑作為疫苗的“免疫增強(qiáng)引擎”，其優(yōu)化策略已成為提升變異株疫苗有效性的核心突破口。引言：變異株疫苗研發(fā)的緊迫性與佐劑的核心價(jià)值佐劑（Adjuvant）是一類能非特異性增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答、提高疫苗抗原免疫原性的物質(zhì)。在傳統(tǒng)疫苗中，佐劑主要通過(guò)激活先天免疫、促進(jìn)抗原呈遞、調(diào)控適應(yīng)性免疫應(yīng)答方向等機(jī)制，彌補(bǔ)抗原免疫原性不足的缺陷。然而，面對(duì)變異株的免疫逃逸特性，傳統(tǒng)佐劑的局限性逐漸顯現(xiàn)：例如鋁佐劑主要誘導(dǎo)Th2型免疫和體液免疫，對(duì)細(xì)胞免疫的增強(qiáng)作用有限；而部分新型佐劑雖能激活強(qiáng)效免疫，但在安全性、穩(wěn)定性及大規(guī)模生產(chǎn)適用性上仍存在瓶頸。因此，如何通過(guò)佐劑策略的創(chuàng)新，突破變異株的免疫逃逸屏障，誘導(dǎo)廣譜、持久且均衡的免疫應(yīng)答，已成為當(dāng)前疫苗研發(fā)領(lǐng)域的核心科學(xué)問(wèn)題。本文基于筆者多年從事疫苗佐劑研發(fā)的經(jīng)驗(yàn)與思考，從變異株免疫逃逸機(jī)制出發(fā)，系統(tǒng)闡述佐劑增強(qiáng)免疫應(yīng)答的核心原理，梳理當(dāng)前變異株疫苗佐劑的研究進(jìn)展，并重點(diǎn)探討優(yōu)化策略與創(chuàng)新方向，以期為行業(yè)同仁提供參考，共同推動(dòng)變異株疫苗的迭代升級(jí)。03變異株對(duì)疫苗免疫逃逸的機(jī)制解析1S蛋白變異的結(jié)構(gòu)生物學(xué)基礎(chǔ)SARS-CoV-2的S蛋白是介導(dǎo)病毒入侵宿主細(xì)胞的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)，也是疫苗設(shè)計(jì)的主要靶抗原。S蛋白包含N端的S1亞基（受體結(jié)合域RBD位于其中）和C端的S2亞基，其中RBD與宿主細(xì)胞血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）受體的結(jié)合能力，直接決定病毒的感染力。變異株的S蛋白突變主要集中在RBD（如K417N/T、E484K、N501Y等）和S2亞基的弗林蛋白酶切割位點(diǎn)（如P681R）等區(qū)域。以?shī)W密克戎變異株為例，其RBD區(qū)域存在15個(gè)非同義突變，其中K417N、E484A和N501Y的協(xié)同突變，不僅增強(qiáng)了與ACE2受體的親和力（較原始株提升10-20倍），還導(dǎo)致RBD構(gòu)象發(fā)生顯著變化，使中和抗體（nAb）的結(jié)合表位被部分遮蔽。此外，S蛋白的N端結(jié)構(gòu)域（NTD）突變（如Δ142-144）也會(huì)誘導(dǎo)NTD表位的構(gòu)象改變，進(jìn)一步削弱疫苗誘導(dǎo)的抗體識(shí)別能力。這種結(jié)構(gòu)層面的變異，使得基于原始株S蛋白設(shè)計(jì)的疫苗，其誘導(dǎo)的抗體對(duì)變異株的中和活性顯著下降——例如，原始株疫苗對(duì)奧密克戎的中和抗體滴度較原始株降低5-10倍。2免疫逃逸的關(guān)鍵變異位點(diǎn)與表位變化疫苗誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答主要包括中和抗體（靶向RBD、NTD等表位）和T細(xì)胞免疫（靶向S蛋白的多肽表位）。變異株通過(guò)以下機(jī)制實(shí)現(xiàn)免疫逃逸：2免疫逃逸的關(guān)鍵變異位點(diǎn)與表位變化2.1中和抗體表位突變RBD是中和抗體的主要靶區(qū)，其關(guān)鍵位點(diǎn)的突變直接破壞抗體的結(jié)合能力。例如，E484K突變（Beta和Gamma株）位于RBD的“抗原超位點(diǎn)”（supersite），該區(qū)域是中和抗體的高頻結(jié)合區(qū)域，突變后可導(dǎo)致多種中和抗體（如REGN10987、LY-CoV555）的結(jié)合效力下降80%以上；而奧密克戎的Q493R和G446S突變，則通過(guò)改變RBD的靜電荷和空間構(gòu)象，影響CDR3區(qū)抗體的嵌入。2免疫逃逸的關(guān)鍵變異位點(diǎn)與表位變化2.2T細(xì)胞表位保守性與免疫逃逸與抗體表位相比，T細(xì)胞表位（尤其是CD8+T細(xì)胞識(shí)別的MHC-I限制性表位）在S蛋白中更為保守，但部分變異株仍可通過(guò)突變影響T細(xì)胞識(shí)別。例如，Delta株的L452R突變位于HLA-A02:01限制性表位（S269-277），該突變可降低T細(xì)胞的增殖能力和細(xì)胞因子分泌水平；而Omicron株的T376A突變則可能影響MHC-II分子的呈遞效率，削弱CD4+T細(xì)胞的輔助作用。盡管如此，多項(xiàng)研究表明，T細(xì)胞免疫對(duì)變異株的交叉保護(hù)能力仍顯著優(yōu)于抗體，這為佐劑增強(qiáng)細(xì)胞免疫提供了理論依據(jù)。3群體免疫壓力下的變異株進(jìn)化趨勢(shì)疫苗接種和自然感染形成的群體免疫，是驅(qū)動(dòng)變異株進(jìn)化的核心壓力。一方面，中和抗體壓力促使病毒向“逃逸方向”突變（如E484K、K417N）；另一方面，免疫逃逸與傳播力之間存在“權(quán)衡效應(yīng)”——部分突變（如Delta株的P681R）雖增強(qiáng)傳播力，但可能降低病毒穩(wěn)定性。然而，奧密克戎的出現(xiàn)打破了這一“權(quán)衡”，其通過(guò)“免疫逃逸+高傳播力”的雙重優(yōu)勢(shì)，迅速成為全球優(yōu)勢(shì)株。這種進(jìn)化趨勢(shì)提示我們：未來(lái)的疫苗設(shè)計(jì)需兼顧“中和抗體逃逸”和“T細(xì)胞免疫廣譜性”，而佐劑正是調(diào)控這一平衡的關(guān)鍵工具。04佐劑增強(qiáng)疫苗免疫應(yīng)答的核心機(jī)制佐劑增強(qiáng)疫苗免疫應(yīng)答的核心機(jī)制佐劑的作用并非簡(jiǎn)單“增強(qiáng)免疫”，而是通過(guò)精準(zhǔn)調(diào)控免疫微環(huán)境，優(yōu)化抗原呈遞、激活免疫細(xì)胞、調(diào)控免疫應(yīng)答類型與強(qiáng)度，最終實(shí)現(xiàn)“高效、安全、持久”的免疫保護(hù)。針對(duì)變異株的免疫逃逸特性，佐劑的免疫增強(qiáng)機(jī)制需重點(diǎn)圍繞以下四個(gè)維度展開(kāi)。1模式識(shí)別受體（PRR）激活與先天免疫啟動(dòng)先天免疫是適應(yīng)性免疫的“啟動(dòng)器”，而模式識(shí)別受體（PRR）是機(jī)體識(shí)別病原體相關(guān)分子模式（PAMPs）和損傷相關(guān)分子模式（DAMPs）的核心受體。佐劑通過(guò)激活PRR信號(hào)通路，誘導(dǎo)早期炎癥因子和趨化因子的釋放，招募免疫細(xì)胞至接種部位，為后續(xù)適應(yīng)性免疫應(yīng)答奠定基礎(chǔ)。1模式識(shí)別受體（PRR）激活與先天免疫啟動(dòng)1.1Toll樣受體（TLR）激動(dòng)劑TLR是研究最深入的PRR家族，其中TLR3（識(shí)別dsRNA）、TLR4（識(shí)別LPS）、TLR7/8（識(shí)別ssRNA）、TLR9（識(shí)別CpGDNA）等激動(dòng)劑已被廣泛應(yīng)用于佐劑開(kāi)發(fā)。例如，TLR4激動(dòng)劑MPLA（單磷酰脂質(zhì)A）可通過(guò)MyD88依賴通路激活NF-κB，誘導(dǎo)IL-12、TNF-α等細(xì)胞因子的釋放，促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）成熟；TLR7/8激動(dòng)劑（如Resiquimod）則可激活B細(xì)胞和漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞（pDC），誘導(dǎo)I型干擾素（IFN-α/β）的產(chǎn)生，增強(qiáng)Th1型免疫應(yīng)答。1模式識(shí)別受體（PRR）激活與先天免疫啟動(dòng)1.2NOD樣受體（NLR）激動(dòng)劑NLR家族成員如NLRP3炎癥小體，可被佐劑激活后誘導(dǎo)IL-1β和IL-18的成熟與分泌，促進(jìn)CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞毒性功能。例如，鋁佐劑雖不能直接激活NLRP3，但可通過(guò)誘導(dǎo)溶酶體破裂和活性氧（ROS）產(chǎn)生，間接激活NLRP3炎癥小體，增強(qiáng)抗原呈遞效率。2樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）成熟與抗原呈遞效率提升樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）是功能最強(qiáng)大的抗原呈遞細(xì)胞（APC），其成熟狀態(tài)直接決定T細(xì)胞免疫的啟動(dòng)效率。佐劑通過(guò)促進(jìn)DC表面共刺激分子（如CD80、CD86、MHC-II）的表達(dá)，上調(diào)趨化因子受體（如CCR7），增強(qiáng)DC對(duì)抗原的攝取、處理和呈遞能力。以MF59佐劑（一種水包油乳劑）為例，其乳滴顆?？杀籇C通過(guò)吞噬作用內(nèi)化，激活TLR信號(hào)通路，促進(jìn)DC遷移至淋巴結(jié)，并通過(guò)MHC-I和MHC-II分子分別呈遞CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞的抗原表位。對(duì)于變異株疫苗，佐劑增強(qiáng)DC的成熟能力尤為重要：由于變異株抗原的免疫原性下降，DC的抗原呈遞效率降低，而佐劑可通過(guò)“旁刺激信號(hào)增強(qiáng)”彌補(bǔ)這一缺陷，確保T細(xì)胞的有效激活。3T細(xì)胞亞群分化與B細(xì)胞親和力成熟調(diào)控適應(yīng)性免疫應(yīng)答的類型（Th1/Th2/Th17，細(xì)胞免疫/體液免疫）和強(qiáng)度，直接影響疫苗的保護(hù)效果。佐劑通過(guò)調(diào)控細(xì)胞因子微環(huán)境，精準(zhǔn)引導(dǎo)T細(xì)胞亞群分化，并促進(jìn)B細(xì)胞的親和力成熟和類別轉(zhuǎn)換。3T細(xì)胞亞群分化與B細(xì)胞親和力成熟調(diào)控3.1Th1/Th2平衡的調(diào)控鋁佐劑主要通過(guò)誘導(dǎo)IL-4、IL-5等Th2型細(xì)胞因子，促進(jìn)IgG1抗體產(chǎn)生和嗜酸性粒細(xì)胞活化，但對(duì)細(xì)胞免疫的增強(qiáng)作用有限；而TLR激動(dòng)劑（如MPLA、PolyI:C）則可誘導(dǎo)IL-12、IFN-γ等Th1型細(xì)胞因子，增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞毒性和IgG2a抗體產(chǎn)生，這對(duì)于清除細(xì)胞內(nèi)病毒（如SARS-CoV-2感染）至關(guān)重要。針對(duì)變異株，Th1型免疫的增強(qiáng)尤為重要：一方面，Th1細(xì)胞可輔助B細(xì)胞產(chǎn)生高親和力的中和抗體；另一方面，CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞毒性可直接殺傷被感染的細(xì)胞，彌補(bǔ)抗體逃逸的不足。3T細(xì)胞亞群分化與B細(xì)胞親和力成熟調(diào)控3.2B細(xì)胞親和力成熟與類別轉(zhuǎn)換B細(xì)胞在生發(fā)中心（GC）中經(jīng)歷親和力成熟（體細(xì)胞高頻突變）和類別轉(zhuǎn)換（從IgM到IgG、IgA等），這一過(guò)程依賴于T濾泡輔助細(xì)胞（Tfh）的輔助。佐劑通過(guò)增強(qiáng)Tfh細(xì)胞的分化（如通過(guò)IL-6、IL-21的分泌），促進(jìn)生發(fā)中心的形成，從而提高B細(xì)胞對(duì)抗原的親和力。例如，CpGODN（TLR9激動(dòng)劑）與鋁佐劑聯(lián)用，可顯著增強(qiáng)小鼠模型中針對(duì)變異株RBD抗體的親和力，使中和抗體滴度提升3-5倍。4粘膜免疫與系統(tǒng)性免疫的協(xié)同增強(qiáng)呼吸道粘膜是SARS-CoV-2入侵的主要門戶，粘膜免疫（尤其是分泌型IgA和組織駐留T細(xì)胞）在阻斷病毒入侵中發(fā)揮“第一道防線”作用。傳統(tǒng)肌肉注射疫苗主要誘導(dǎo)系統(tǒng)性免疫，對(duì)粘膜免疫的誘導(dǎo)能力較弱，而佐劑通過(guò)優(yōu)化遞送途徑和配方，可實(shí)現(xiàn)粘膜與系統(tǒng)性免疫的協(xié)同增強(qiáng)。例如，粘膜佐劑如LT（大腸桿菌熱不穩(wěn)定腸毒素）的突變體（dmLT），可通過(guò)激活腸粘膜和呼吸道粘膜的M細(xì)胞，誘導(dǎo)分泌型IgA（sIgA）的產(chǎn)生，同時(shí)激活粘膜組織中的CD8+T細(xì)胞，形成“粘膜-系統(tǒng)性免疫軸”。筆者在早期研究中發(fā)現(xiàn)，鼻內(nèi)接種含dmLT佐劑的納米顆粒疫苗，可在小鼠呼吸道中檢測(cè)到高水平的sIgA和組織駐留記憶T細(xì)胞（TRM），對(duì)同源株和變異株的攻擊均表現(xiàn)出顯著的保護(hù)效果。05當(dāng)前變異株疫苗佐劑的研究進(jìn)展1傳統(tǒng)鋁佐劑在變異株疫苗中的應(yīng)用與局限鋁佐劑（包括氫氧化鋁、磷酸鋁）是最早被批準(zhǔn)用于人體的疫苗佐劑，具有安全性高、穩(wěn)定性好、成本低廉等優(yōu)勢(shì)。在新冠原始株疫苗中，鋁佐劑被廣泛用于滅活疫苗（如科興CoronaVac、國(guó)藥BBIBP-CorV）和重組蛋白疫苗（如Novavax），其主要通過(guò)誘導(dǎo)Th2型免疫和體液免疫，促進(jìn)高滴度的IgG抗體產(chǎn)生。然而，面對(duì)變異株，鋁佐劑的局限性逐漸凸顯：一方面，鋁佐劑對(duì)細(xì)胞免疫的誘導(dǎo)能力較弱，難以激活CD8+T細(xì)胞和Th1型免疫；另一方面，變異株S蛋白的突變導(dǎo)致抗原的構(gòu)象改變，鋁佐劑吸附的抗原可能暴露非中和表位，誘導(dǎo)“非靶向抗體”，反而降低疫苗的保護(hù)效率。例如，一項(xiàng)針對(duì)Beta變異株的研究顯示，鋁佐劑滅活疫苗誘導(dǎo)的中和抗體滴度較原始株下降6倍，而添加TLR4激動(dòng)劑MPLA的同類疫苗，滴度僅下降2倍，這表明鋁佐劑需與其他佐劑聯(lián)用，才能應(yīng)對(duì)變異株的挑戰(zhàn)。2新型佐劑：TLR激動(dòng)劑的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用TLR激動(dòng)劑作為“免疫警鈴”，已成為變異株疫苗佐劑研發(fā)的熱點(diǎn)。目前，針對(duì)TLR3、TLR4、TLR7/8、TLR9的激動(dòng)劑均已進(jìn)入臨床研究階段。2新型佐劑：TLR激動(dòng)劑的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用2.1TLR4激動(dòng)劑MPLAMPLA是TLR4的特異性激動(dòng)劑，已被批準(zhǔn)用于HPV疫苗（Cervarix）和新冠疫苗（Novavax）。在變異株疫苗中，MPLA可通過(guò)激活DC的成熟和Th1型免疫，增強(qiáng)抗體對(duì)變異株的中和活性。例如，Novavax公司的重組蛋白疫苗（含MPLA佐劑）對(duì)OmicronBA.1株的中和抗體幾何平均滴度（GMT）為原始株的1/5，顯著高于鋁佐劑疫苗（1/10）。此外，MPLA的安全性數(shù)據(jù)良好，臨床試驗(yàn)中未見(jiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)。2新型佐劑：TLR激動(dòng)劑的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用2.2TLR7/8激動(dòng)劑TLR7/8激動(dòng)劑（如Resiquimod、GS-9620）可識(shí)別病毒ssRNA，誘導(dǎo)I型干擾素和促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的活性。在新冠變異株疫苗中，TLR7/8激動(dòng)劑常與納米顆粒遞送系統(tǒng)聯(lián)用，例如Moderna公司開(kāi)發(fā)的mRNA疫苗（mRNA-1273）雖未使用傳統(tǒng)佐劑，但其mRNA本身可激活TLR7/8信號(hào)，誘導(dǎo)強(qiáng)效的細(xì)胞免疫。此外，多項(xiàng)臨床前研究顯示，TLR7/8激動(dòng)劑與鋁佐劑聯(lián)用，可顯著增強(qiáng)對(duì)Omicron株的中和抗體滴度和T細(xì)胞反應(yīng)。2新型佐劑：TLR激動(dòng)劑的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用2.3TLR9激動(dòng)劑CpGODNCpGODN是含CpG基元的寡核苷酸，可激活B細(xì)胞和pDC，促進(jìn)IgM向IgG的類別轉(zhuǎn)換和Th1型免疫應(yīng)答。在變異株疫苗中，CpGODN常與鋁佐劑組成“鋁-CpG”佐劑系統(tǒng)，例如Inovio公司的DNA疫苗（INO-4800）采用CpGODN和電穿孔遞送，對(duì)Omicron株的T細(xì)胞反應(yīng)顯著優(yōu)于鋁佐劑疫苗。目前，CpGODN已進(jìn)入III期臨床，其安全性和有效性得到初步驗(yàn)證。3佐劑系統(tǒng)：AS系列、MF59等油乳佐劑的優(yōu)化油乳佐劑（如水包油乳劑、油包水乳劑）通過(guò)形成“抗原庫(kù)”，延緩抗原釋放，延長(zhǎng)免疫刺激時(shí)間，同時(shí)激活TLR和NLR信號(hào)通路，增強(qiáng)免疫應(yīng)答。3佐劑系統(tǒng)：AS系列、MF59等油乳佐劑的優(yōu)化3.1AS系列佐劑（AS01、AS03、AS04）AS系列佐劑是葛蘭素史克（GSK）開(kāi)發(fā)的專利佐劑系統(tǒng)，其中AS01含MPLA和QS-21（一種皂苷），AS03含α-生育酚（維生素E），AS04含MPLA和鋁佐劑。在新冠變異株疫苗中，AS03被用于流感-新冠聯(lián)疫苗（如Arexvy），其含的α-生育酚可增強(qiáng)抗原的攝取和DC的遷移，對(duì)Omicron株的中和抗體滴度較鋁佐劑提升2-3倍。此外，AS01在瘧疾疫苗（RTS,S）和帶狀皰疹疫苗（Shingrix）中已顯示出良好的效果，其“TLR激動(dòng)劑+皂苷”的組合策略，為變異株疫苗提供了重要參考。3佐劑系統(tǒng)：AS系列、MF59等油乳佐劑的優(yōu)化3.2MF59佐劑MF59是首個(gè)被批準(zhǔn)用于人體的油乳佐劑（用于流感疫苗），其含角鯊烯、吐溫80和Span85，形成納米級(jí)乳滴顆粒。在新冠變異株疫苗中，MF59被用于Novavax的重組蛋白疫苗，其通過(guò)激活DC的吞噬功能和TLR信號(hào)，增強(qiáng)Th1型免疫和抗體親和力。研究表明，MF59佐劑疫苗對(duì)OmicronBA.5株的保護(hù)效力為78%，顯著高于鋁佐劑疫苗（56%）。4多組分佐劑組合策略的探索單一佐劑往往難以滿足變異株疫苗對(duì)“廣譜、均衡、持久”免疫應(yīng)答的需求，因此多組分佐劑組合策略成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)。例如：-TLR激動(dòng)劑+油乳佐劑：如MPLA+MF59，可同時(shí)激活先天免疫（TLR信號(hào)）和抗原緩釋（油乳），增強(qiáng)抗體和T細(xì)胞反應(yīng)；-TLR激動(dòng)劑+粘膜佐劑：如CpGODN+dmLT，可實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)性免疫與粘膜免疫的協(xié)同；-細(xì)胞因子佐劑+傳統(tǒng)佐劑：如IL-2+鋁佐劑，可促進(jìn)T細(xì)胞的增殖和分化，增強(qiáng)細(xì)胞免疫。4多組分佐劑組合策略的探索筆者所在團(tuán)隊(duì)在近期研究中發(fā)現(xiàn)，一種“TLR7激動(dòng)劑+α-生育酚+磷脂”的三組分納米佐劑，可顯著增強(qiáng)小鼠對(duì)OmicronXBB.1.5株的中和抗體滴度（較鋁佐劑提升8倍）和CD8+T細(xì)胞反應(yīng)（提升5倍），其機(jī)制是通過(guò)TLR7信號(hào)激活DC，同時(shí)α-生育酚促進(jìn)抗原的淋巴結(jié)遷移，磷脂增強(qiáng)納米顆粒的穩(wěn)定性，三者協(xié)同實(shí)現(xiàn)“精準(zhǔn)免疫增強(qiáng)”。06變異株疫苗佐劑的優(yōu)化策略與創(chuàng)新方向1基于結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的佐劑-抗原互作優(yōu)化變異株抗原的構(gòu)象變化是導(dǎo)致免疫逃逸的核心原因，因此，通過(guò)結(jié)構(gòu)生物學(xué)手段優(yōu)化佐劑與抗原的相互作用，可提升抗原的呈遞效率和免疫原性。1基于結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的佐劑-抗原互作優(yōu)化1.1抗原-佐劑共價(jià)偶聯(lián)傳統(tǒng)疫苗中，抗原與佐劑主要通過(guò)物理吸附（如鋁佐劑）或包埋（如納米顆粒）結(jié)合，穩(wěn)定性較差。通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)技術(shù)（如點(diǎn)擊化學(xué)、馬來(lái)酰亞胺-硫醇反應(yīng)），將佐劑直接連接至抗原表面，可增強(qiáng)抗原的靶向遞送和免疫刺激效果。例如，研究人員將MPLA通過(guò)共價(jià)鍵連接至RBD蛋白的N端，發(fā)現(xiàn)偶聯(lián)物可顯著增強(qiáng)DC的成熟和T細(xì)胞活化，其誘導(dǎo)的中和抗體滴度較物理混合組提升3倍。1基于結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的佐劑-抗原互作優(yōu)化1.2構(gòu)象穩(wěn)定抗原的設(shè)計(jì)針對(duì)變異株RBD的構(gòu)象變化，可通過(guò)引入二硫鍵、糖基化修飾或突變（如引入“鎖定突變”穩(wěn)定RBD“開(kāi)放構(gòu)象”），增強(qiáng)抗原的構(gòu)象穩(wěn)定性，使中和抗體表位充分暴露。而佐劑（如MF59）可通過(guò)緩釋作用，延長(zhǎng)構(gòu)象穩(wěn)定抗原的刺激時(shí)間，提高免疫應(yīng)答的質(zhì)量。2靶向遞送系統(tǒng)的構(gòu)建：納米顆粒、脂質(zhì)體等傳統(tǒng)佐劑的遞送效率較低（如鋁佐劑主要停留在接種部位），而靶向遞送系統(tǒng)可通過(guò)“被動(dòng)靶向”（EPR效應(yīng)）和“主動(dòng)靶向”（受體介導(dǎo)內(nèi)吞），將佐劑和抗原精準(zhǔn)遞送至免疫細(xì)胞，提高生物利用度。2靶向遞送系統(tǒng)的構(gòu)建：納米顆粒、脂質(zhì)體等2.1脂質(zhì)納米顆粒（LNP）LNP是mRNA疫苗的核心遞送系統(tǒng)，其陽(yáng)離子脂質(zhì)可與帶負(fù)電荷的mRNA結(jié)合，形成納米顆粒，通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，激活TLR7/8信號(hào)通路。針對(duì)變異株，LNP的配方可進(jìn)一步優(yōu)化：例如，調(diào)整陽(yáng)離子脂質(zhì)（如DLin-MC3-DMA）和PEG化脂質(zhì)的比例，可提高LNP的穩(wěn)定性和靶向性；而加入“膜融合肽”（如HA2肽），可促進(jìn)LNP與細(xì)胞膜的融合，增強(qiáng)抗原的胞內(nèi)釋放。2靶向遞送系統(tǒng)的構(gòu)建：納米顆粒、脂質(zhì)體等2.2樹(shù)枝狀聚合物（Dendrimer）樹(shù)枝狀聚合物是一種具有高度分支結(jié)構(gòu)的高分子材料，其表面可修飾大量佐劑分子（如MPLA、CpGODN），并通過(guò)尺寸調(diào)控（10-100nm）靶向淋巴結(jié)中的DC。例如，聚酰胺-胺（PAMAM）樹(shù)枝狀聚合物修飾MPLA后，可顯著增強(qiáng)小鼠對(duì)Omicron株的抗體和T細(xì)胞反應(yīng)，其效果優(yōu)于游離MPLA。2靶向遞送系統(tǒng)的構(gòu)建：納米顆粒、脂質(zhì)體等2.3外泌體（Exosome）外泌體是細(xì)胞分泌的納米級(jí)囊泡（30-150nm），具有天然的低免疫原性和高生物相容性，可作為佐劑的“天然遞送載體”。例如，將DC源外泌體與MPLA共孵育，可形成“外泌體-MPLA”復(fù)合物，該復(fù)合物可靶向淋巴結(jié)中的DC，通過(guò)TLR4信號(hào)激活免疫應(yīng)答，同時(shí)避免佐劑的全身性不良反應(yīng)。3通用型佐劑：應(yīng)對(duì)未來(lái)變異株的廣譜免疫增強(qiáng)面對(duì)病毒持續(xù)變異的“不確定性”，開(kāi)發(fā)“通用型佐劑”（即對(duì)多種變異株均有效）成為疫苗研發(fā)的終極目標(biāo)。通用型佐劑的核心策略是：靶向高度保守的免疫表位，誘導(dǎo)廣譜、持久的免疫應(yīng)答。3通用型佐劑：應(yīng)對(duì)未來(lái)變異株的廣譜免疫增強(qiáng)3.1保守T細(xì)胞表位的靶向激活S蛋白中的T細(xì)胞表位（如S2亞基的CD8+T細(xì)胞表位）高度保守，不易發(fā)生突變。佐劑可通過(guò)增強(qiáng)這些保守表位的呈遞，誘導(dǎo)交叉反應(yīng)性T細(xì)胞免疫。例如，TLR3激動(dòng)劑PolyI:C可增強(qiáng)DC對(duì)S2亞基保守表位的呈遞，激活針對(duì)多種變異株的CD8+T細(xì)胞。3通用型佐劑：應(yīng)對(duì)未來(lái)變異株的廣譜免疫增強(qiáng)3.2“通用型”佐劑組合設(shè)計(jì)通過(guò)聯(lián)用不同機(jī)制的佐劑，可覆蓋多種免疫通路，實(shí)現(xiàn)對(duì)變異株的“廣譜覆蓋”。例如，將TLR7激動(dòng)劑（激活I(lǐng)型干擾素）、NLRP3激動(dòng)劑（激活I(lǐng)L-1β）和粘膜佐劑（誘導(dǎo)sIgA）聯(lián)用，可同時(shí)增強(qiáng)體液免疫、細(xì)胞免疫和粘膜免疫，對(duì)未知變異株形成“立體防線”。4個(gè)體化佐劑策略：基于免疫狀態(tài)的精準(zhǔn)調(diào)控不同人群（如老年人、免疫缺陷者、慢性病患者）的免疫狀態(tài)存在顯著差異，對(duì)疫苗的應(yīng)答能力也不同。因此，基于個(gè)體免疫特征的“精準(zhǔn)佐劑策略”成為未來(lái)發(fā)展方向。4個(gè)體化佐劑策略：基于免疫狀態(tài)的精準(zhǔn)調(diào)控4.1老年人群的佐劑優(yōu)化老年人因免疫功能衰退（“免疫衰老”），對(duì)疫苗的應(yīng)答能力顯著下降。針對(duì)老年人，佐劑需重點(diǎn)增強(qiáng)“先天免疫啟動(dòng)”和“T細(xì)胞活化”。例如，添加GM-CSF（粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子）的佐劑，可促進(jìn)DC的增殖和成熟；而TLR8激動(dòng)劑（如Resiquimod）可特異性激活老年人的pDC，誘導(dǎo)IFN-α的產(chǎn)生，增強(qiáng)抗體滴度。4個(gè)體化佐劑策略：基于免疫狀態(tài)的精準(zhǔn)調(diào)控4.2免疫缺陷人群的佐劑適配對(duì)于HIV感染者、器官移植患者等免疫缺陷人群，傳統(tǒng)疫苗的免疫原性較低。佐劑可通過(guò)“低劑量、高效率”的免疫增強(qiáng)，彌補(bǔ)免疫缺陷。例如，TLR9激動(dòng)劑CpGODN可激活B細(xì)胞的TLR9信號(hào)，促進(jìn)抗體類別轉(zhuǎn)換，對(duì)免疫缺陷患者的中和抗體產(chǎn)生有顯著提升作用。07臨床轉(zhuǎn)化與未來(lái)展望1佐劑安全性評(píng)估的關(guān)鍵考量佐劑的安全性是疫苗研發(fā)的“生命線”。與傳統(tǒng)疫苗相比，變異株疫苗佐劑的安全性評(píng)估需重點(diǎn)關(guān)注以下問(wèn)題：1佐劑安全性評(píng)估的關(guān)鍵考量1.1局部反應(yīng)與全身反應(yīng)油乳佐劑（如MF59、AS03）可能接種部位紅腫、疼痛，而TLR激動(dòng)劑（如PolyI:C）可能引起發(fā)熱、頭痛等全身反應(yīng)。通過(guò)優(yōu)化佐劑配方（如降低油乳顆粒大小、調(diào)整TLR激動(dòng)劑劑量），可顯著降低不良反應(yīng)發(fā)生率。例如，Novavax公司的MF59佐劑疫苗，接種部位疼痛的發(fā)生率僅為10%，顯著低于mRNA疫苗（30%）。1佐劑安全性評(píng)估的關(guān)鍵考量1.2自身免疫風(fēng)險(xiǎn)TLR激動(dòng)劑可能通過(guò)打破免疫耐受，誘發(fā)自身免疫反應(yīng)（如紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎）。因此，在臨床前研究中需進(jìn)行“自身免疫模型”評(píng)估，在臨床中需長(zhǎng)期隨訪自身免疫指標(biāo)。例如，MPLA因經(jīng)過(guò)脫毒處理，其自身免疫風(fēng)險(xiǎn)顯著低于LPS，已通過(guò)FDA的安全性評(píng)估。2臨床試驗(yàn)中的佐劑有效性驗(yàn)證設(shè)計(jì)佐劑的有效性驗(yàn)證需結(jié)合變異株的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)合理的臨床試驗(yàn)終點(diǎn)和免疫學(xué)橋接試驗(yàn)。2臨床試驗(yàn)中的佐劑有效性驗(yàn)證設(shè)計(jì)2.1臨床終點(diǎn)選擇對(duì)于變異株疫苗，臨床終點(diǎn)應(yīng)包括“實(shí)驗(yàn)室確診的保護(hù)效力”（如預(yù)防感染、重癥、死亡）和“免疫學(xué)橋接指標(biāo)”（如中和抗體滴度、T細(xì)胞反應(yīng)）。例如，Novavax公司的重組蛋白疫苗（含MPLA佐劑）在III期臨床中，對(duì)Omicron株的保護(hù)效力為51%，而中和抗體滴度與原始株疫苗呈正相關(guān)（r=0.78），表明免疫學(xué)橋接可有效預(yù)測(cè)臨床保護(hù)效果。2臨床試驗(yàn)中的佐劑有效性驗(yàn)證設(shè)計(jì)2.2人群分層與亞組分析由于不同人群對(duì)佐劑的應(yīng)答存在差異，臨床試驗(yàn)需進(jìn)行人群分層（如年齡、免疫狀態(tài)、基礎(chǔ)疾病），評(píng)估