犬細(xì)小病毒抗原快速檢測及治療觀察研究目錄14999引言 759311流行特點及危害性 8128221.1犬細(xì)小病毒病原 810431.2犬細(xì)小病毒流行病學(xué) 8183832癥狀及病理變化 9106802.1臨診癥狀 9117952.2病理變化 9200773犬細(xì)小檢測案例分析 1187213.1臨床檢查 1146753.2實驗室檢查 1194093.2.1檢測板檢測 1158143.2.2血常規(guī)檢查 1131883.3抗原檢測 13124373.3.1抗原檢測-膠體金試紙條 13152493.3.2抗原檢測-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 13241144討論 15282904.1犬細(xì)小病毒治療原則 15194954.1.1中和干擾病毒繁殖 15250674.1.2止吐止瀉止血 15177144.2防治措施 15234474.2.1治療方案 1535684.2.2預(yù)防措施 1513243結(jié)論 1729575參考文獻(xiàn) 18引言犬細(xì)小病毒是犬科動物中最常見的一種疾病。病毒微粒的大小為20-22nm。氯化銫具有1.43克/立方厘米的懸浮濃度。能在犬腎和貓胚的主要傳代或傳代細(xì)胞中進(jìn)行增殖。對豬及恒河猴的紅血球進(jìn)行了4~25℃的凝集，但對其它動物無凝集作用。貓細(xì)小病毒與貓的胰腺抗原確定因素有很大關(guān)系，而貓的泛白細(xì)胞減少癥疫苗能夠有效地抵御犬細(xì)小病毒的侵襲。犬細(xì)小病毒能在4℃-10℃(32℃-95℃)下可存活6個月，在37℃(32℃-56℃)下可存活2周，在80℃下可存活15分鐘，在室溫下可存活3個月。這樣的話，傳染的幾率就會小一些。犬細(xì)小病毒可在糞便中存活數(shù)月甚至數(shù)年。細(xì)小病毒的死亡率為60%-70%。因為大多數(shù)犬飼養(yǎng)者對這種傳染病不太了解，或者根本沒聽說過這種傳染病，它經(jīng)常會造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。隨著診斷技術(shù)越來越多，正確使用CPV檢測板也是避免不必要的操作失誤和正確診斷的重要組成部分。1流行特點及危害性1.1犬細(xì)小病毒病原犬細(xì)小病毒病毒體是對稱的多面體，沒有包膜，直徑為21-24nm，其DNA的每一端都有夾子狀紋體。結(jié)構(gòu)多肽共有三種（VP1、VP2、VP3），其中VP2是病毒的重要結(jié)構(gòu)元件。犬細(xì)小病毒對大自然的抵抗力很強(qiáng)，因此即使在高溫和低溫等惡劣環(huán)境下也不會很快失去活性。狗是該病的最初宿主，任何年齡段的狗都會受到該病的影響，尤其是幼犬。病犬的排泄物、體液和排泄物中都含有很多的病毒。甚至健康的犬只會在排泄物中向周圍釋放病毒。該病的可怕之處還在于，它對許多物理和化學(xué)因子都有很高的免疫力。1.2犬細(xì)小病毒流行病學(xué)病毒進(jìn)入動物體內(nèi)后，首先在動物的口腔和鼻腔中復(fù)制，這個過程大約需要兩天時間才能完成，并通過血液傳播到其他器官。第三，出現(xiàn)輕度腸炎癥狀。外觀是犬細(xì)小病毒感染的主要特點，其表現(xiàn)為血流，而非由腸粘膜向腸腔的轉(zhuǎn)移。犬細(xì)小病毒感染后4-5天會有明顯的腸道炎癥表現(xiàn)。一般的潛伏期是38天，首次排毒是在第三天。犬細(xì)小病毒病的發(fā)病機(jī)制與細(xì)胞分裂時的環(huán)境條件有關(guān)。MPV病毒的復(fù)制以骨髓、淋巴組織和胃為主要器官。當(dāng)犬患上冠狀病毒與細(xì)小的時候，冠狀病毒會破壞人體的絨毛上皮細(xì)胞并刺激分化，在此過程中，犬細(xì)小病毒也會加速復(fù)制，導(dǎo)致更嚴(yán)重的疾病過程。少量病毒也存在于動物的許多器官和心肌中。犬細(xì)小病毒病可以通過動物的身體存在和特征性血清學(xué)檢查在早期診斷。目前，有可以檢測該疾病的實驗室診斷方法。病毒分離鑒定：病毒分離鑒定方法是將細(xì)胞接種在無菌糞便中，用接種的細(xì)胞分離細(xì)小病毒，根據(jù)培養(yǎng)基的血液聚集程度觀察感染程度。也可以使用定制的熒光抗體檢測受感染的細(xì)胞。顯微鏡觀察：有典型癥狀的排泄物可快速診斷。糞便上清液可通過電子顯微鏡直接染色檢測。血清學(xué)診斷：血凝和血凝抑制(HA-HI)試驗：一種用于診斷糞便和組織樣本中病毒的方法。一些動物的紅細(xì)胞可用于HA-HI分析。ELISA（酶聯(lián)免疫吸附）試驗：是一種基于抗原抗體反應(yīng)的試驗方法。它反應(yīng)靈敏，價格相對低廉，適用于寵物醫(yī)院的臨床診斷和治療。2癥狀及病理變化2.1臨診癥狀（1）腸炎型犬早期常出現(xiàn)抑郁、食欲不振、間歇性發(fā)熱、輕微或輕微的嘔吐，伴隨著頻繁的嘔吐和嚴(yán)重的痢疾。糞便最初是灰色的，黃色的或乳白色的，呈果凍狀或者粘液狀，并伴有惡臭。發(fā)病期間病犬快速脫水、體重減輕、眼睛凹陷、毛發(fā)凌亂、皮膚彈性、耳鼻、四肢冰冷、抑郁癥、休克、死亡。初期癥狀通常在2天內(nèi)由輕至重，整個病程通常不超過1周。（2）心肌炎型是八周齡的幼犬容易患上的疾病，犬經(jīng)常突然死亡和死后數(shù)小時內(nèi)。犬受精神、食欲、嘔吐、輕度腹瀉和體溫升高的影響。患病的犬時常伴有呼吸困難，持續(xù)20-30分鐘，脈搏快而弱，可視粘膜蒼白，心律失常，常因心力衰竭死亡，病死率60%-100%。2.2病理變化（1）腸炎型患有細(xì)小死亡的狗，其特征為：體重顯著下降、腹部彎曲、眼窩縮小、粘膜慘白、有灰色粘液、肛門出血、皮下組織脫水而呈現(xiàn)暗紅色。干燥及血液粘稠度。胃部及十二指腸呈空洞或水狀，粘膜有微紅、粘液。其中以空腸、回腸最為典型，表現(xiàn)為結(jié)締組織的結(jié)締組織增厚、血管壁增粗、血管內(nèi)充盈著大量的血管內(nèi)壁，或夾雜著紫色或黑色的凝塊，粘膜上出現(xiàn)潮紅和淤斑。或者是彌漫性出血、粘膜皺褶增厚、淋巴結(jié)增大等。由于闌尾炎、結(jié)腸、直腸變得柔軟、肝色、粘膜腫大、少量出血。肝腫，紫或紅，軟組織較弱，并有大量凝固的血塊。膽囊擴(kuò)大，里面有許多的綠色的膽汁。粘膜平滑，呈黃綠色。脾微增，常伴有出血性梗死。擴(kuò)張的心臟，擴(kuò)張的右室，紅色的，柔軟的心肌。（2）心肌炎性肺部呈灰紅色或雜色，肺部胸膜散布出血，細(xì)支氣管充滿泡沫狀液體，部分肺部受壓。大量的血液從體液中流出。左心室擴(kuò)大，心外膜上有白條狀的條紋，心房內(nèi)有白條狀的斑紋，而左室壁則呈稀疏狀。心肌細(xì)胞的核內(nèi)包涵體是一種重要的診斷病變。3犬細(xì)小檢測案例分析3.1臨床檢查患者是一只2個月大的雄性拉布拉多犬，體重5公斤。狗從出生到發(fā)病時都沒有接種過疫苗。現(xiàn)病史：發(fā)病時體溫40，呼吸急促，抑郁，厭食，咳嗽，嘔吐，水樣瀉，鼻干，結(jié)膜有膿性分泌物，聽診時肺部有喘息音，同時還會伴有腸鳴音。3.2實驗室檢查3.2.1檢測板檢測CPV試劑盒檢測結(jié)果為陽性，說明患犬犬細(xì)小病毒感染。3.2.2血常規(guī)檢查血涂片：正常的色素貧血癥。核向右移動。圖1是在此狗治療過程中，白細(xì)胞數(shù)值的改變。治療前3天，白細(xì)胞數(shù)繼續(xù)減少，隨后總體上呈逐漸升高的趨勢。注：正常值(6～17)×103/μL圖1治療期間白細(xì)胞數(shù)值的變化曲線圖2是在此狗的治療過程中，淋巴細(xì)胞數(shù)目的改變。在治療前4天，淋巴細(xì)胞繼續(xù)減少，到了中期則逐漸升高。注：正常值(1~4.5)×103/μL圖2治療期間淋巴細(xì)胞數(shù)量的變化曲線圖3為在治療過程中，病狗嗜中性白細(xì)胞的改變。在療程的最后階段，將其控制在一個限度之內(nèi)。注：正常值(3～11.5)×103/μL圖3治療期間中性粒細(xì)胞的變化3.3抗原檢測3.3.1抗原檢測-膠體金試紙條根據(jù)臨床癥狀、病理變化和流行特征，可以做出初步的診斷，還可以通過其它的檢查手段進(jìn)行判斷，常見的CPV檢查有HA、HA、ELISA、ELISA、PCR、電鏡、免疫電鏡、病毒分離培養(yǎng)、膠體金試紙等[6]。膠體金試驗條是基于單克隆抗體技術(shù)的一種快速、簡便、特異、靈巧的方法。實踐操作簡便、快速、有效、易于判定。與國外同類產(chǎn)品比較，國產(chǎn)CPV免疫膠體金試驗紙在敏感性、穩(wěn)定性上都低于國外同類產(chǎn)品，且測試結(jié)果也不理想，因而應(yīng)用量小，市場占有率低。目前市面上所用的CPV免疫膠體金檢測紙，多為韓國等國進(jìn)口，其價格較高，為寵物醫(yī)院的經(jīng)營帶來了一定的困難[7]。本文對膠體金試條的測試方法進(jìn)行了探討。一種是方便的，一種是更多的，更廣泛的。其中，韓國安捷公司的銳必診斷公司的檢測板。這個分析應(yīng)該在10分鐘之內(nèi)完成。若能迅速檢出微小病毒抗原，應(yīng)先用試紙，試紙上用英文“T”、“C”作檢測線和控制線。在加入稀釋液和分泌物的混合液前，試驗的連接和控制線路不得出現(xiàn)在所有的試樣中。這表示測試條很干凈，沒有任何的紋路?？刂凭€是用來控制系統(tǒng)的，當(dāng)所有的東西都是正確的并且運(yùn)行的時候，控制線就會開始工作。當(dāng)樣品中含有足夠的犬細(xì)小病毒抗原時，將會在結(jié)果窗口中顯示出該信息。這意味著，這條紅色的橫線，將會出現(xiàn)。檢測條上的特異犬細(xì)小病毒抗體與檢測鏈路相關(guān)，可以檢測到攜帶微小病毒抗原的樣品。3.3.2抗原檢測-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)本文討論了膠體金試條的檢測方法。一種是便利，另一種則是更為寬泛。在這些測試板中，韓國安捷的銳必診斷。這一分析只需10分鐘。如果能快速地發(fā)現(xiàn)微小的病毒抗原，首先要用英文的“T”和“C”作為測試線條和控制線條。在添加稀釋劑和分泌劑之前，不能在全部樣品上顯示任何連接和控制線路。這代表著，這條測試條非常的干凈，沒有一絲的痕跡?？刂凭€用于對系統(tǒng)進(jìn)行控制，當(dāng)一切正常和正常運(yùn)轉(zhuǎn)時，控制線將啟動。如果樣本中包含了足夠的犬細(xì)小病毒抗原，那么這個信息就會出現(xiàn)在結(jié)果窗口。這就是，這條紅線，要來了。檢測條帶上的特異性犬細(xì)小病毒抗體與檢測鏈有關(guān)聯(lián)，能夠檢測到帶有微小病毒抗原的樣本，從而在DNA層面上檢測到細(xì)菌。PCR技術(shù)還能從糞便、嘔吐物等樣本中檢出微小的犬細(xì)小病毒，這對提高診斷犬細(xì)小病毒的診斷和早期診斷具有重要的實際意義。納米PCR技術(shù)是當(dāng)今世界上最重要的技術(shù)，它是CPV、VP2基因的保守序列設(shè)計，它可以改進(jìn)和增加574bp的引物，提高對反射系統(tǒng)的控制和反應(yīng)能力，同時也為狗細(xì)小病毒提供了一種新的PCR抗體。利用奈米技術(shù)進(jìn)行PCR靈敏度試驗，結(jié)果顯示，奈米PCR比基礎(chǔ)PCR快1000倍，且所測得的多肽至少每微升10個拷貝。非特異性的試驗結(jié)果顯示，不存在與其它病毒的交叉反應(yīng)。PCR技術(shù)是目前比較常用的一種方法，但其局限性在于所需的時間和靈敏度不高，難以對其進(jìn)行定量分析。熒光PCR技術(shù)比常規(guī)PCR具有更高的敏感性和精確度。如果在動物診所或?qū)嶒炇抑惺褂冒嘿F的實時熒光PCR技術(shù)，那么就不能進(jìn)行推廣和推廣。以上缺陷制約了以上方法用于疾病的診斷。在臨床上，犬細(xì)小病毒在感染初期的時候，只有少量的腸道病毒，常規(guī)的測試手段，比如試紙板，很難檢出，但是現(xiàn)在，通過納米PCR技術(shù)，我們的檢測速度會更快，也更方便。因此，我們大部分的臨床工作都會送去納米PCR，也就是上面提到的膠體金測試紙。4討論4.1犬細(xì)小病毒治療原則4.1.1中和干擾病毒繁殖若確診為微小病毒感染，則可使用微小病毒單克隆抗體或超級免疫血清進(jìn)行中和處理。干擾素是一種用來抑制病毒復(fù)制、控制病毒擴(kuò)散速率和數(shù)量的方法。4.1.2止吐止瀉止血微小病毒病的主要表現(xiàn)為嘔吐、出血性腸炎。根據(jù)臨床實踐，如果對微小病毒病進(jìn)行診斷和治療，及時有效地控制嘔吐、痢疾，一般預(yù)后較好，對細(xì)小病毒病的治療具有重要意義?？刂茋I吐，腹瀉，出血。犬細(xì)小病毒感染的治療應(yīng)注意飲食的控制，所以腸胃空虛。654-2、維生素B1是適合胃腸休息下的止吐藥。腹瀉2天仍未得到有效控制，口服蒙脫石粉?？梢钥诜S他命B1來止血，可以交替應(yīng)用止血敏，如果需要，可以口服云南白藥或灌腸劑。4.2防治措施4.2.1治療方案患有心肌炎的狗經(jīng)常突然死亡，沒有時間治愈?？梢钥诜咕?、心臟補(bǔ)液、抗菌消炎等措施。1)在發(fā)病初期可以肌肉注射犬細(xì)小病毒單克隆抗體、犬細(xì)小病毒免疫球蛋白、犬用多價免疫蛋白、大青葉等。治療嘔吐可選用氯丙嗪、胃復(fù)安；可以選擇犬利康和復(fù)方黃連素作為止瀉藥；可以肌注維生素C、安絡(luò)血等止血藥物。2)在嚴(yán)重脫水的情況下，應(yīng)給予適當(dāng)?shù)妮斠骸Ｊ褂?-40毫升25%葡萄糖液，5-20ml能量合劑，2-10ml維生素C2-10ml，每日1-2次；在使用補(bǔ)液治療時，要根據(jù)病犬的具體情況，靈活掌握藥物和用量，避免肺水腫、心臟停搏等。如果狗有喝的欲望，可以通過口服補(bǔ)充液來治療，比如1升水，添加20克葡萄糖，1.5克氯化鉀，2.5克碳酸氫鈉，3.5克氯化鈉。3)為了預(yù)防細(xì)菌感染和增強(qiáng)病犬的免疫力，可以使用口服的抗生素，例如：0.5ml/千克·體重的地塞米松+10000IU/千克·體重的慶大霉素；為病狗供給足夠干凈的水和易于消化的新鮮食品。4.2.2預(yù)防措施1）注意日常的飼養(yǎng)管理，按照犬的營養(yǎng)需求，科學(xué)配置和普通飼料；嚴(yán)格消毒，犬的排泄物病，用3%的氫氧化鈉，分泌物，0.5%福爾馬林消毒，犬的死亡應(yīng)該被掩埋或焚燒，和周圍用5%~6%次氯酸鈉環(huán)境、白獨(dú)莎等消毒，徹底消滅傳染源。2）定期接種疫苗，犬細(xì)小病毒滅活疫苗免疫后6周，8周和14周齡，或犬五蓮使用弱毒疫苗在不同年齡的前8周，6周，第二次免疫，10周齡第三次免疫后一年無病，能有效防止犬細(xì)小病毒病的發(fā)生。3）合理健康的飲食。加強(qiáng)狗狗抵抗力，最基本的方法就是擁有良好的免疫系統(tǒng)和良好的身體健康，健康的飲食很重要。首先，要選擇不同的飼料，以健康的畜禽內(nèi)臟、骨粉、牛角粉、玉米粉、小麥、大米等為主要原料。另外，礦物質(zhì)和維生素的補(bǔ)充，如骨粉，石粉，貝殼粉，維生素C。增加日常的口糧，可以提高狗的生長和疾病的防治。喂食時應(yīng)保持飲水清潔，保持飲水清潔，調(diào)整飼喂時間和日糧，不能暴飲暴食。在冬天，食物和飼料必須在夏天加熱和冷卻。4）準(zhǔn)確及時消毒。有病原體的環(huán)境才是導(dǎo)致寵物感染傳染病的元兇。狗的糞便、尿液、唾液和嘔吐物含有病毒，可以傳播到外面。狗也長期受到糞便和尿液、受污染的食物、飲用水、食物碗及其周圍環(huán)境的污染。該病可直接或間接通過空氣和垂直傳播。該病毒對環(huán)境具有很強(qiáng)的抵抗力，可以在65C的溫度下保持30分鐘而不會失去傳染性，常溫下可在3個月內(nèi)保持感染性。細(xì)小病毒對甲醛和紫外線比較敏感，可以去活。因此，對于農(nóng)場或家庭飼料的日常消毒，有效的殺菌性能、見效快、選擇合適的濃度的消毒水對人畜消毒是無害的。有條件的個人可以安裝紫外線燈進(jìn)行消毒。定期對狗舍、場所、設(shè)備和水管理進(jìn)行消毒。

結(jié)論犬細(xì)小病毒是一種嚴(yán)重的傳染性疾病，死亡率極高。其主要癥狀是經(jīng)常嘔吐，呈西紅柿樣的味道。實驗室中白細(xì)胞的化驗結(jié)果一般比正常低，而CPV抗原檢測的結(jié)果則是陰性。免疫膠體金試驗是一種常用的檢測手段。以技術(shù)為基礎(chǔ)的抗體或抗原檢測技術(shù)。其特點是實際操作簡便、快速、易于判定。但其不足之處在于，免疫膠體金檢測儀的精確性很高，且需從國外引進(jìn)，且成本較高。利用PCR技術(shù)對DNA水平上的微生物進(jìn)行了檢測。該方法具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點，能夠在糞便或嘔吐物中檢出極少量的犬細(xì)小病毒。因此，對犬細(xì)小病毒腸炎的早期診斷和早期檢測具有重要的實際意義。但其缺點是，要有專門的化驗人員，還要有專門的檢測公司，時間相對較長。對于經(jīng)常腹瀉嘔吐的犬，需要及時的補(bǔ)充水分，及時治療，避免體內(nèi)的離子丟失，避免體內(nèi)的水分流失，避免酸堿平衡，對于細(xì)小病毒，沒有專門的藥物。在狗生病初期進(jìn)行營養(yǎng)治療，可以通過服用腸道處方食物來調(diào)理腸胃，通過益生菌來改善狗的腸道狀況。病人出院后，病犬的排毒期約為2個月。在遛狗的時候，要注意把被感染的狗的排泄物清理干凈，以防感染其它的狗。兩個