PAGE開題報(bào)告論文題目文冠果根腐病病原鑒定及根腐病防控藥劑篩選研究1.立題依據(jù)（包括研究背景、理論依據(jù)及立題意義）2019年6月在文冠果根腐病在新疆阿克蘇地區(qū)的沙雅縣、昌吉州木壘縣和新疆林科院院內(nèi)的文冠果苗圃內(nèi)嚴(yán)重發(fā)生，造成近20%文冠果苗木枯萎，同時(shí)也造成在周邊少數(shù)的成齡樹枯死，嚴(yán)重威脅新疆文冠果產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。該根腐病害主要及次要致病病原菌是什么？該病原菌主要生物學(xué)特性是怎樣的？病原菌生長(zhǎng)條件與環(huán)境間關(guān)系如何？如何有效防控該根腐病害？這些學(xué)術(shù)研究對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實(shí)踐又有著及其重要的作用，也是促使我們對(duì)該根腐病著手相關(guān)研究。本研究主要針對(duì)文冠果根腐病相關(guān)病根、土壤進(jìn)行分離純化獲得疑似病原物，準(zhǔn)確鑒定文冠果根腐病的致病病原種類，并對(duì)其開展主要生物學(xué)特性研究，最后篩選出抑菌效果明顯的高效防控藥劑2-3種，為田間大面積防控提供備選藥劑。目前，國(guó)內(nèi)外尚未見有關(guān)文冠果根腐并病原菌鑒定、生物學(xué)特性和藥劑篩選等方面相關(guān)研究報(bào)道，本研究將從上述研究中依次展開，為進(jìn)一步了解文冠果根腐病侵染規(guī)律與快速蔓延關(guān)鍵因子以及開展綜合防控措施奠定基礎(chǔ)。因此，本研究通過(guò)明確文冠果根腐病致病病原菌，以及該病原菌主要生物學(xué)特性并篩選出有效的防控藥劑，在此基礎(chǔ)上建立并完善科學(xué)防病技術(shù)及封鎖防控關(guān)鍵技術(shù)體系，對(duì)確保新疆文冠果產(chǎn)業(yè)的安全具有重要意義。2.研究?jī)?nèi)容及方案（包括研究目標(biāo)、論文提綱、預(yù)期達(dá)到的研究結(jié)果和創(chuàng)新點(diǎn)、完成論文需具備的條件以及參考文獻(xiàn)等）.研究目標(biāo)：（1）采用感病組織常規(guī)分離技術(shù)、誘餌法（分離腐霉菌）、稀釋土壤平板法分離純化病原菌，并獲取疑似病原菌，并進(jìn)行致病性試驗(yàn)、形態(tài)學(xué)鑒定及分子生物學(xué)鑒定相結(jié)合的方法，準(zhǔn)確鑒定文冠果根腐病致病病原菌，明確病原種類和分類地位。（2）通過(guò)在不同類型培養(yǎng)基、不同溫度、不同pH條件下，對(duì)該病害致病病原菌進(jìn)行生物學(xué)特性研究，明確病原菌的主要生物學(xué)特性，為病害發(fā)生條件和規(guī)律，以及為病害制定有效防控策略奠定基礎(chǔ)。（3）通過(guò)室內(nèi)毒力測(cè)定實(shí)驗(yàn)，篩選出可有效防治文冠果根腐病藥劑，為田間有效防控提供預(yù)選藥劑。論文提綱：第1章前言第2章文冠果根腐病病原分離與鑒定2.1材料與方法2.1.1供試材料實(shí)驗(yàn)樣品采集學(xué)院種植園發(fā)生的文冠果根腐病根部病樣和病株周圍土壤樣本，采土深度為5-10厘米，用無(wú)菌自封袋中備用。所有采集樣品置于4℃冰箱保存2.1.2供試培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）:土豆200g、葡萄糖20g、瓊脂粉20g、蒸餾水1000ml、121℃高壓滅菌鍋20min、P5ARP[85]:匹馬霉素5ppm、利福平10ppm、氨芐青霉素250ppm、五氯硝基苯100ppm2.1.3儀器及試劑鑷子，滅菌濾紙，電磁爐，解剖刀，上皿電子天平，高壓蒸汽滅菌鍋，超凈工作臺(tái)，刀片，電磁爐，光學(xué)顯微鏡，冰箱，微波爐，溫度計(jì)，智能人工氣候箱，恒壓恒流電泳儀（keebio-600N），PCR擴(kuò)增儀（T100ThermalCycler），電泳圖像分析系統(tǒng)（FR-980B），高速冷凍離心機(jī)（TGL-16），馬克筆，接種針，火柴，一次性培養(yǎng)皿（Φ=90mm），試管，酒精燈，打孔器，移液槍，液氮，75%乙醇，1%-2%次氯酸鈉溶液，DNAsecure新型植物基因DNA提取試劑盒（TIANGEN）2.1.4病原菌的分離植物中的分離參考方中達(dá)《植病研究方法》植物組織分離法，土壤中的分離采用誘餌法和稀釋土壤平板法相結(jié)合分離土壤中腐霉菌和相關(guān)病原菌2.1.5病原菌的純化取多個(gè)菌落，在超凈工作臺(tái)中，采用尖端菌絲挑取法進(jìn)一步純化2.1.6病原菌致病性實(shí)驗(yàn)通過(guò)柯赫氏法則對(duì)病原菌進(jìn)行致病性檢測(cè)，采用健康大小均勻文冠果植株，進(jìn)行致病性驗(yàn)證2.1.7病原菌傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)觀察將所純化的4種菌株分別取3個(gè)代表菌株接種至PDA平板上，25℃培養(yǎng)1-5d后觀察分離菌株的形態(tài)特征。根據(jù)《真菌鑒定手冊(cè)》、趙思峰和從麗麗等的描述進(jìn)行檢索、觀察菌落形態(tài)及孢子等形態(tài)，進(jìn)行初步形態(tài)學(xué)鑒2.1.8病原菌分子生物學(xué)鑒定病原菌DNA提取將分離純化后的菌株接種在PDA平板上25℃條件下培養(yǎng)5-7天，刮取菌絲；病原菌PCR擴(kuò)增和序列分析采用常規(guī)PCR，對(duì)所提取的腐霉DNA進(jìn)行rDNA-ITS、β-tubulin、coxⅡ序列的擴(kuò)增，2.2結(jié)果與分析2.2.1田間病害癥狀描述與觀察2.2.2病原菌的分離和純化2.2.3病原菌致病性檢測(cè)2.2.4病原菌形態(tài)學(xué)鑒定2.2.5病原菌分子生物學(xué)鑒定第3章文冠果根腐病防控藥劑篩選3.1材料與方法3.1.1供試菌株供試菌株：XJ-PA、XJ-FP、XJ-FR、XF-FS，實(shí)驗(yàn)樣品采集于學(xué)院種植園發(fā)生的文冠果根腐病根部病樣和病株周圍土壤樣品中分離純化獲得。3.1.2培養(yǎng)基含藥PDA培養(yǎng)基：將不同濃度藥劑與熔化并冷卻至40℃的PDA培養(yǎng)基按1∶9比例(總體積10mL)配制成含藥培養(yǎng)基。3.1.3供試藥劑結(jié)合當(dāng)前農(nóng)林生產(chǎn)種防治作物根腐類的常用藥劑，篩選出12種供試藥劑3.1.412種殺菌劑對(duì)病原菌的抑菌效果將菌株XJ-PA、XJ-FP、XJ-FR、XF-FS在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h、5d后用直徑為5mm的無(wú)菌打孔器打取菌落。將各供試藥劑分別以推薦使用濃度為參考，通過(guò)稀釋分別從高到低設(shè)置8個(gè)藥劑濃度梯度。3.2結(jié)果與分析3.2.112種殺菌劑對(duì)4種病原菌的抑菌效果3.3小結(jié)與討論第4章結(jié)論預(yù)期達(dá)到的研究結(jié)果：篩選出相關(guān)常用藥劑，并通過(guò)室內(nèi)毒力測(cè)定實(shí)驗(yàn)，篩選出可有效防控文冠果根腐病的藥劑。為今后進(jìn)一步開展文冠果根腐病的研究工作和建立病害防控防治體系提供相應(yīng)的理論依據(jù)論文需具備的條件：實(shí)驗(yàn)樣品采集于阿克蘇地區(qū)沙雅縣、昌吉州木壘縣和新疆林業(yè)科學(xué)院種植園發(fā)生的文冠果根腐病根部病樣和病株周圍土壤樣本，采土深度為5-10厘米，用無(wú)菌自封袋中備用。所有采集樣品置于4℃冰箱保存。參考文獻(xiàn)[1]高俊臣,張帥,王艷兵.文冠果“根腐”難題研究進(jìn)展[J].山西林業(yè),2019(02):32-33.[2]閆強(qiáng),丁佩,張勤雪,等.綠豆根腐病病原菌分離和致病力鑒定[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2021,49(06):86-92.[3]沈?qū)氂?孫文松,張?zhí)祆o,等.白鮮根腐病病原菌分離與鑒定[J].分子植物育種,2021,1-14.[4]駱丹,田慧,張彩霞,方香玲.植物立枯絲核菌根腐病研究進(jìn)展[J].中國(guó)植保導(dǎo)刊,2020,40(03):23-31.[5]張丙紅.文冠果頸腐病病原菌的分離鑒定[D].山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2021.[6]李瑞,張瑞,梁雞保,等.不同來(lái)源文冠果成品苗造林表現(xiàn)[J].北方果樹,2020(03):19-20.[7]柳曉東.遼西地區(qū)文冠果造林關(guān)鍵技術(shù)[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2020(09):153+157.[8]李永德,羅廣軍.淺析文冠果的經(jīng)濟(jì)價(jià)值及效益[J].現(xiàn)代園藝,2022,45(01):48-49.[9]宋美華,梁寶銀,王茹,等.不同處理方法對(duì)文冠果大田播種出苗率和苗期生長(zhǎng)的影響[J].西部林業(yè)科學(xué),2021,50(04):41-45+59.[10]趙曉姝.文冠果栽培技術(shù)及其價(jià)值分析[J].種子科技,2018,36(12):59+61.[11]劉玉蘭,郭瑩瑩.不同產(chǎn)地原料和不同工藝制取文冠果油的綜合品質(zhì)研究[J].糧食與油脂,2020,33(06):1-6.[12]盧凱,齊軍山,祁凱,等.大豆根腐病腐霉病原鑒定[J].中國(guó)油料作物學(xué)報(bào),2021:1-7.[13]謝安娜,徐浩飛,張志林,等.致病鐮刀菌的研究進(jìn)展[J].湖北工程學(xué)院學(xué)報(bào),2020,40(06):37-41.[14]伍曉麗,