2025年大學(xué)生物技術(shù)（基因克?。┰囶}及答案

（考試時間：90分鐘滿分100分）班級______姓名______第I卷（選擇題，共40分）每題2分，每題只有一個選項符合題意，請將正確答案的序號填在括號內(nèi)。1.基因克隆的核心步驟是（）A.目的基因的獲取B.載體的選擇C.重組DNA的構(gòu)建D.重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞2.以下哪種方法常用于從基因組文庫中篩選目的基因（）A.核酸分子雜交B.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)C.蛋白質(zhì)免疫印跡D.雙向凝膠電泳3.限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后產(chǎn)生的末端類型不包括（）A.黏性末端B.平末端C.5'突出末端D.3'凹陷末端4.作為基因克隆載體的條件不包括（）A.具有多個限制酶切割位點(diǎn)B.具有篩選標(biāo)記基因C.能自我復(fù)制D.能整合到宿主染色體上5.以下關(guān)于PCR技術(shù)的敘述，錯誤的是（）A.需要模板DNAB.需要引物C.需要DNA聚合酶D.反應(yīng)體系中不需要dNTP6.基因克隆中常用的DNA連接酶是（）A.DNA聚合酶IB.DNA聚合酶IIIC.T4DNA連接酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶7.從cDNA文庫中獲取的基因是（）A.基因組DNAB.編碼蛋白質(zhì)的基因C.調(diào)控序列D.內(nèi)含子8.藍(lán)白斑篩選法中，白色菌落表示（）A.含有重組質(zhì)粒B.含有非重組質(zhì)粒C.含有目的基因D.不含任何質(zhì)粒9.以下哪種技術(shù)可用于鑒定重組DNA分子（）A.限制性內(nèi)切酶酶切分析B.核酸序列分析C.蛋白質(zhì)電泳D.細(xì)胞培養(yǎng)10.基因克隆中，感受態(tài)細(xì)胞的制備常用的方法是（）A.氯化鈣法B.電擊法C.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法D.顯微注射法11.以下關(guān)于載體的敘述，正確的是（）A.質(zhì)粒是最常用的載體B.病毒載體只能用于動物細(xì)胞C.人工染色體載體不能在宿主細(xì)胞中復(fù)制D.載體的大小對基因克隆沒有影響12.基因克隆中，引物設(shè)計的原則不包括（）A.長度一般為15-30bpB.堿基分布均勻C.引物自身不能形成互補(bǔ)配對D..引物之間可以大量互補(bǔ)配對13.以下哪種方法可用于擴(kuò)增特定長度的DNA片段（）A.基因組文庫篩選B.cDNA文庫篩選C.PCRD.核酸分子雜交14.基因克隆中，重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞后，篩選陽性克隆的方法不包括（）A.抗生素篩選B.藍(lán)白斑篩選C.核酸序列分析D.酶切鑒定15.以下關(guān)于基因克隆的應(yīng)用，錯誤的是（）A.生產(chǎn)基因工程藥物B.基因治療C.物種進(jìn)化研究D.改變生物的遺傳物質(zhì)第II卷（非選擇題，共60分）16.（10分）簡述基因克隆的基本流程。17.（10分）請闡述PCR技術(shù)的原理及主要步驟。18.（10分）在基因克隆中，如何選擇合適的載體和受體細(xì)胞？19.（15分）閱讀以下材料：在基因克隆實驗中，研究人員欲克隆某一特定基因。首先從生物樣本中提取總RNA，然后反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以cDNA為模板，設(shè)計特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到目的基因片段。將目的基因片段與載體連接構(gòu)建重組DNA，再導(dǎo)入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞。通過藍(lán)白斑篩選，挑取白色菌落進(jìn)行培養(yǎng)，提取質(zhì)粒后進(jìn)行酶切鑒定，確定陽性克隆。問題：（1）該實驗中反轉(zhuǎn)錄合成cDNA的目的是什么？（2）PCR擴(kuò)增目的基因時，設(shè)計特異性引物的依據(jù)是什么？（3）藍(lán)白斑篩選的原理是什么？20.（15分）閱讀以下材料：某研究團(tuán)隊致力于克隆一種植物的抗病基因。他們從感染病菌的植物組織中提取DNA，構(gòu)建基因組文庫。通過核酸分子雜交技術(shù)，利用已知的抗病基因探針篩選出含有目的基因的克隆。將目的基因與合適的載體連接，導(dǎo)入植物細(xì)胞，經(jīng)過篩選和鑒定，獲得了轉(zhuǎn)基因抗病植株。問題：（1）構(gòu)建基因組文庫的目的是什么？（2）核酸分子雜交篩選目的基因的原理是什么？（3）如何鑒定獲得的轉(zhuǎn)基因抗病植株是否成功克隆了抗病基因？答案：1.C2.A3.D4.D5.D6.C7.B8.A9.A10.A11.A12.D13.C14.C15.D16.基因克隆基本流程：首先獲取目的基因，可從生物基因組中直接分離、通過PCR擴(kuò)增或從cDNA文庫、基因組文庫中篩選。然后選擇合適載體，如質(zhì)粒、噬菌體等，使其與目的基因連接構(gòu)建重組DNA。接著將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞，如大腸桿菌等。再通過篩選標(biāo)記篩選出含有重組DNA的細(xì)胞，最后對篩選出的陽性克隆進(jìn)行鑒定和分析。17.PCR技術(shù)原理：以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板，以一對分別與模板5'末端和3'末端相互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶作用下，按照半保留復(fù)制的機(jī)制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成，重復(fù)這一過程，即可使目的DNA片段得到擴(kuò)增。主要步驟：變性，高溫使模板DNA雙鏈解開；退火，引物與模板單鏈互補(bǔ)結(jié)合；延伸，DNA聚合酶催化dNTP合成新的DNA鏈。18.選擇載體依據(jù)：有多個限制酶切割位點(diǎn)便于插入目的基因；有篩選標(biāo)記基因便于篩選陽性克??；能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定自我復(fù)制。選擇受體細(xì)胞依據(jù)：能高效攝取外源DNA；對載體的復(fù)制和擴(kuò)增無嚴(yán)格限制；便于重組DNA導(dǎo)入和篩選；遺傳穩(wěn)定性好，便于長期傳代保存。19.（1）反轉(zhuǎn)錄合成cDNA目的是將生物樣本中的mRNA轉(zhuǎn)化為DNA，去除內(nèi)含子等非編碼序列，獲得可用于PCR擴(kuò)增的目的基因編碼序列。（2）設(shè)計特異性引物依據(jù)是目的基因的已知序列，使引物能與目的基因兩端特異性結(jié)合。（3）藍(lán)白斑篩選原理：載體上有一段LacZ基因，當(dāng)插入目的基因后LacZ基因失活。含重組質(zhì)粒的菌在含X-gal的培養(yǎng)基上形成白色菌落，含非重組質(zhì)粒的菌形成藍(lán)色菌落。20.（1）構(gòu)建基因組文庫目的是將植物的整個基因組DNA切割成片段，與載體連接后導(dǎo)入受體菌，形成包含所有基因的文庫，便于從中篩選目的基因。（2）核酸分子雜交篩