12026屆新高考生物沖刺復(fù)習(xí)動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞核移植動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。動物細(xì)胞工程1.概念：2.原理：3.地位：動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)從動物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細(xì)胞生長和增殖的技術(shù)。細(xì)胞增殖（有絲分裂）【思考】：動物組織的選擇：

幼齡動物or老齡動物幼齡個體的細(xì)胞分化程度低、分裂能力強，易培養(yǎng)。4.目的：獲得細(xì)胞或者細(xì)胞產(chǎn)物動物體組織單個細(xì)胞細(xì)胞生長和增殖取出分散適宜條件動物細(xì)胞培養(yǎng)4糖類、氨基酸、無機鹽、維生素…無菌、無毒的環(huán)境適宜的溫度、pH和滲透壓適宜的氣體環(huán)境充足的營養(yǎng)、穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境將細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)按種類和所需量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基含人類未知、細(xì)胞生長增殖所必需的物質(zhì)，滿足細(xì)胞對未知營養(yǎng)成分的需求。培養(yǎng)基的構(gòu)成：合成培養(yǎng)基

+血清等天然成分一般用液體培養(yǎng)基，也稱為培養(yǎng)液1動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件5糖類、氨基酸、無機鹽、維生素…無菌、無毒的環(huán)境適宜的溫度、pH和滲透壓適宜的氣體環(huán)境①培養(yǎng)液、培養(yǎng)用具：滅菌處理；②無菌操作；③適量添加抗生素定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝物。①適宜的溫度：哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)的溫度多以___________為宜；②適宜的pH：多數(shù)動物細(xì)胞生存的適宜pH為________；③適宜的滲透壓：維持細(xì)胞正常的形態(tài)和功能。36.5±0.5℃7.2-7.41動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件糖類、氨基酸、無機鹽、維生素…無菌、無毒的環(huán)境適宜的溫度、pH和滲透壓適宜的氣體環(huán)境維持培養(yǎng)液的pH95%空氣

+5%CO2的CO2培養(yǎng)箱O2：細(xì)胞代謝所必需CO2培養(yǎng)箱松蓋培養(yǎng)瓶培養(yǎng)皿1動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件取動物組織制成細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液進行原代培養(yǎng)分瓶進行傳代培養(yǎng)2025/12/24取動物組織制成細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液進行原代培養(yǎng)放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)傳代培養(yǎng)放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞貼壁接觸抑制2動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程取動物組織分散成單個細(xì)胞解決懸浮生長貼壁生長(大多數(shù)）細(xì)胞密度過大、有害代謝物積累、營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等接觸抑制傳代培養(yǎng)用機械法或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理細(xì)胞懸液原代培養(yǎng)分瓶培養(yǎng)①原代培養(yǎng)：指動物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)。②細(xì)胞貼壁：某些細(xì)胞需要貼附于某些基質(zhì)表面才能增殖，這類細(xì)胞往往貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上③接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞停止分裂增殖的現(xiàn)象。④傳代培養(yǎng)：分瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)。加培養(yǎng)液在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶內(nèi)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞:直接用離心法收集貼壁細(xì)胞:用胰蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞，用離心法收集細(xì)胞分裂受阻②制成細(xì)胞懸液，分瓶培養(yǎng)①收集細(xì)胞2動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程思考：“細(xì)胞增殖到互相接觸的時候，糖蛋白識別了這種信息，就會使細(xì)胞停止繼續(xù)繁殖，出現(xiàn)接觸抑制的現(xiàn)象”試結(jié)合上述解釋，舉例說明哪種細(xì)胞無接觸抑制現(xiàn)象，并闡述原因。癌細(xì)胞；癌細(xì)胞的細(xì)胞膜上糖蛋白等物質(zhì)減少腫瘤細(xì)胞失去接觸抑制，條件適宜在培養(yǎng)液可以無限增殖下去。2動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程思考：進行動物細(xì)胞培養(yǎng)時常用胰蛋白酶分散細(xì)胞，這說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么成分？用胃蛋白酶行嗎？用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當(dāng)pH大于6時，胃蛋白酶就會失去活性。多數(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4，胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性，所以用胃蛋白酶不行。2動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程取動物組織制成細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液進行原代培養(yǎng)分瓶進行傳代培養(yǎng)動物胚胎、幼齡動物機械法或胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理將組織分散成單個細(xì)胞用培養(yǎng)液將細(xì)胞制成細(xì)胞懸液一類細(xì)胞能夠懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖大多數(shù)需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長增殖直接用離心法收集重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個細(xì)胞，然后再用離心法收集2動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程比較項目植物組織培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)原理培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)目的相同點植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物常用固體培養(yǎng)基植物體葡萄糖、動物血清常用液體培養(yǎng)基細(xì)胞增殖細(xì)胞的全能性許多細(xì)胞快速繁殖等蔗糖、植物激素1.培養(yǎng)過程中細(xì)胞都進行有絲分裂，不涉及減數(shù)分裂；2.均需無菌操作，需要適宜的溫度、pH等條件2動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程(3)分布：(1)概念：(4)按來源分類：存在于早期胚胎、骨髓和臍帶血等多種組織和器官中。包括胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞等。動物和人體內(nèi)仍保留的少數(shù)具有分裂和分化能力的細(xì)胞。在一定條件下，干細(xì)胞可以分化成其他類型的細(xì)胞。(2)特點：體積較小，細(xì)胞核大，核仁明顯。1.干細(xì)胞3干細(xì)胞培養(yǎng)及應(yīng)用早期胚胎中具有分化為成年動物體內(nèi)的任何一種類型的細(xì)胞，并進一步形成機體的所有組織和器官甚至個體的潛能。在體外分化成心肌細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞和造血干細(xì)胞等必須從胚胎中獲取，涉及倫理問題；因而限制了在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用。3干細(xì)胞培養(yǎng)及應(yīng)用(3)應(yīng)用實例：(1)分布：(4)局限性：(2)特點：胚胎干細(xì)胞ES細(xì)胞成體組織或器官內(nèi)具有組織特異性，只能分化成特定的細(xì)胞或組織，不具有發(fā)育成完整個體的能力3干細(xì)胞培養(yǎng)及應(yīng)用(4)應(yīng)用實例：(1)分布：(3)特點：成體干細(xì)胞治療神經(jīng)組織損傷和神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾?。ㄈ缗两鹕?、阿爾茨海默病等）治療白血病及一些惡性腫瘤放療或化療后引起的造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)功能障礙等疾病造血干細(xì)胞→神經(jīng)干細(xì)胞→治療細(xì)胞損傷造成的疾病(2)種類：造血干細(xì)胞（骨髓、外周血和臍帶血中）神經(jīng)干細(xì)胞（神經(jīng)系統(tǒng)中）精原干細(xì)胞（睪丸中）通過體外誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞得到的類似胚胎干細(xì)胞的一種細(xì)胞3干細(xì)胞培養(yǎng)及應(yīng)用(4)應(yīng)用：(1)概念：(3)優(yōu)點：誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(2)制備方法：①將特定基因或特定蛋白導(dǎo)入細(xì)胞（成纖維細(xì)胞、已分化的T細(xì)胞、B細(xì)胞）iPS細(xì)胞②用小分子化合物誘導(dǎo)形成。①誘導(dǎo)過程無須破壞胚胎；②iPS細(xì)胞可以來源于病人自身的體細(xì)胞，將它移植回病人體內(nèi)后，理論上可以避免免疫排斥反應(yīng)。可治療鐮狀細(xì)胞貧血癥；在治療阿爾茲海默病、心血管疾病等領(lǐng)域的研究也取得了新進展誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）多種體細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化體外誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞移植取成纖維細(xì)胞等iPS細(xì)胞轉(zhuǎn)入相關(guān)因子細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化分化胰島細(xì)胞神經(jīng)元血細(xì)胞腸上皮細(xì)胞心肌細(xì)胞肝細(xì)胞病人iPS細(xì)胞用于治療人類疾病示意圖iPS細(xì)胞的應(yīng)用前景：臨床治療人類疾病如：白血病、帕金森病、阿而茨海默病等3干細(xì)胞培養(yǎng)及應(yīng)用

來源或存在功能、特點局限性胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)成體干細(xì)胞誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)干細(xì)胞應(yīng)用面臨的問題：3干細(xì)胞培養(yǎng)及應(yīng)用早期胚胎具有分化為成年動物體內(nèi)的任何一種類型的細(xì)胞，并進一步形成機體的所有組織和器官甚至個體的潛能。倫理問題成體組織或器官內(nèi)具有組織特異性，只能分化成特定的細(xì)胞或組織，不具有發(fā)育成完整個體的能力造血干細(xì)胞-骨髓、外周血和臍帶血神經(jīng)干細(xì)胞-神經(jīng)系統(tǒng)精原干細(xì)胞-睪丸誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞、已分化的T細(xì)胞、B細(xì)胞無須破壞胚胎；理論上可以避免免疫排斥反應(yīng)。只能分化成特定的細(xì)胞或組織存在導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的風(fēng)險練習(xí)[2022.江蘇]航天員葉光富和王亞平在天宮課堂上展示了培養(yǎng)的心肌細(xì)胞跳動的視頻。下列相關(guān)敘述正確的是（）A．培養(yǎng)心肌細(xì)胞的器具和試劑都要先進行高壓蒸汽滅菌B．培養(yǎng)心肌細(xì)胞的時候既需要氧氣也需要二氧化碳C．心肌細(xì)胞在培養(yǎng)容器中通過有絲分裂不斷增殖D．心肌細(xì)胞在神經(jīng)細(xì)胞發(fā)出的神經(jīng)沖動的支配下跳動B練習(xí)[2022.湖北]某興趣小組開展小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)的原代神經(jīng)元生長緩慢，其原因不可能的是（）A．實驗材料取自小鼠胚胎的腦組織 B．為了防止污染將培養(yǎng)瓶瓶口密封C．血清經(jīng)過高溫處理后加入培養(yǎng)基 D．所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性A練習(xí)[2022.海南]某團隊通過多代細(xì)胞培養(yǎng)，將小鼠胚胎干細(xì)胞的Y染色體去除，獲得XO胚胎干細(xì)胞，再經(jīng)過一系列處理，使之轉(zhuǎn)變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣?xì)胞。下列有關(guān)敘述錯誤的是（）A．營養(yǎng)供應(yīng)充足時，傳代培養(yǎng)的胚胎干細(xì)胞不會發(fā)生接觸抑制B．獲得XO胚胎干細(xì)胞的過程發(fā)生了染色體數(shù)目變異C．XO胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣?xì)胞的過程發(fā)生了細(xì)胞分化D．若某瀕危哺乳動物僅存雄性個體，可用該法獲得有功能的卵母細(xì)胞用于繁育A222.2細(xì)胞工程（二）

——動物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體動物細(xì)胞融合技術(shù)使兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的技術(shù)。形成具有原來兩個或多個細(xì)胞的遺傳信息的雜交細(xì)胞

細(xì)胞膜具有一定的流動性1、概念：4、結(jié)果：2、原理：3、誘導(dǎo)方式物理法：電融合法化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活病毒誘導(dǎo)法與植物原生質(zhì)體融合的方法相同——動物細(xì)胞融合特有動物細(xì)胞融合技術(shù)滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理滅活：指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力（不感染細(xì)胞），但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）。病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合?！就卣埂縿游锛?xì)胞融合技術(shù)5、過程:動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞增殖動物細(xì)胞融合技術(shù)正在融合的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞7、應(yīng)用：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。6、意義：①至今，種間、屬間、科間，甚至動物和植物之間的細(xì)胞融合都已獲得成功。②研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。③為制造單克隆抗體開辟了新途徑。動物細(xì)胞融合技術(shù)比較項目植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合基本原理融合前處理誘導(dǎo)方法用途意義細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散培育新品種制備單克隆抗體物理法：電融合法、離心法化學(xué)法：PEG，高Ca2+—高PH融合法電融合法，PEG融合法，滅活的病毒植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合比較打破生殖隔離，實現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種突破有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能單克隆抗體及其應(yīng)用抗體⑤⑥④③①②抗體：機體受抗原刺激后產(chǎn)生的，能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的蛋白質(zhì)。1.每個抗原可能包含多個不同的抗原決定簇；2.每個漿細(xì)胞只分泌一種靶向特定抗原決定簇的特異性抗體。單克隆抗體及其應(yīng)用1.傳統(tǒng)抗體制備方法及缺陷缺陷：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。Q：如何解決這個問題呢？143抗原傳統(tǒng)抗血清（所有抗體混合）免疫2動物體內(nèi)抗原

漿細(xì)胞抗體B淋巴細(xì)胞增殖分化抗原不純抗體不純，特異性差多克隆抗體：由多個漿細(xì)胞克隆產(chǎn)生，是多種抗體的混合物。反復(fù)注射單克隆抗體及其應(yīng)用一個極富創(chuàng)造力的方案：動物細(xì)胞融合雜交細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無限增殖一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一抗體單克隆抗體一個B淋巴細(xì)胞細(xì)胞群抗體克隆單克隆抗體：由單個B淋巴細(xì)胞經(jīng)過克隆（無限增殖），形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體。用特定的抗原免疫，從小鼠的脾中分離B淋巴細(xì)胞，其中包含能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞。培養(yǎng)小鼠骨髓瘤細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)融合Q：滅活病毒誘導(dǎo)的融合細(xì)胞一定都是B-瘤雜交細(xì)胞嗎？單克隆抗體及其應(yīng)用培養(yǎng)小鼠骨髓瘤細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)融合B、BB、瘤、瘤瘤、瘤B單克隆抗體及其應(yīng)用用特定的抗原免疫，從小鼠的脾中分離B淋巴細(xì)胞，其中包含能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞。拓展資料細(xì)胞合成核苷酸有D（denovosynthesispathway）和S（salvagepathway）兩條途徑，其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷。B淋巴細(xì)胞D途徑S途徑核苷酸核苷酸Q：如何篩選出雜交瘤細(xì)胞（瘤B）呢？B淋巴細(xì)胞中有這兩種核苷酸合成途徑，但在體外培養(yǎng)條件下不能無限增殖（約存活5-7天）選用的小鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑，但能在體外不斷分裂增殖。骨髓瘤細(xì)胞D途徑S途徑核苷酸核苷酸單克隆抗體及其應(yīng)用B淋巴細(xì)胞D途徑S途徑核苷酸核苷酸骨髓瘤細(xì)胞D途徑S途徑核苷酸核苷酸HAT選擇培養(yǎng)基(A：氨基蝶呤)氨基蝶呤B淋巴細(xì)胞及同型融合細(xì)胞——不能無限增殖，死亡骨髓瘤細(xì)胞及同型融合細(xì)胞——無法合成核苷酸，死亡雜交瘤細(xì)胞存活且能無限增殖第一次篩選的目的：獲得雜交瘤細(xì)胞Q：如何篩選出雜交瘤細(xì)胞（瘤B）呢？氨基蝶呤D途徑S途徑核苷酸核苷酸氨基蝶呤單克隆抗體及其應(yīng)用BBB雜交瘤細(xì)胞

（多種）瘤瘤瘤第一次篩選：獲得雜交瘤細(xì)胞Q：如何篩選能分泌特定抗體的雜交瘤細(xì)胞呢？抗體檢測板（綠色為陽性）克隆化培養(yǎng)第二次篩選抗體檢測(抗原-抗體雜交技術(shù))陽性細(xì)胞單克隆抗體及其應(yīng)用單克隆抗體體外培養(yǎng)體內(nèi)或體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔第二次篩選：獲得單一克隆的目的雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體及其應(yīng)用單克隆抗體及其應(yīng)用【培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的方法比較】項目腹腔培養(yǎng)體外培養(yǎng)優(yōu)點缺點易于控制培養(yǎng)條件（如無需提供無菌環(huán)境等），操作簡單，成本較低規(guī)模小，產(chǎn)量少可大規(guī)模培養(yǎng)，大量生產(chǎn)需要人為控制培養(yǎng)條件，成本相對較高單克隆抗體及其應(yīng)用誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？注射抗原的目的是什么？大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單抗的方法兩次篩選的目的獲得能產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞物理:電融合法化學(xué):聚乙二醇

生物：滅活的病毒第1次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。第2次篩選得到能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞注射抗原骨髓瘤細(xì)胞融合B-B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基篩選1多種雜交瘤細(xì)胞符合要求的雜交瘤細(xì)胞抗原-抗體雜交法篩選2克隆化體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體思考：單克隆抗體及其應(yīng)用單克隆抗體制備中包括幾個階段？雜交瘤細(xì)胞特點單克隆抗體的優(yōu)點：原理既可以產(chǎn)生特異性抗體，又可以大量增殖動物細(xì)胞融合、動物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞增殖1)

能準(zhǔn)確地識別抗原的細(xì)微差異；2)

與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合；3)

可以大量制備。B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞注射抗原骨髓瘤細(xì)胞融合B-B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基篩選1多種雜交瘤細(xì)胞符合要求的雜交瘤細(xì)胞抗原-抗體雜交法篩選2克隆化體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體思考：單克隆抗體及其應(yīng)用3.單克隆抗體的應(yīng)用①作為診斷試劑②運載藥物③作為藥物治療疾病抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”練習(xí)[2023.北京]甲狀旁腺激素（PTH）水平是人類多種疾病的重要診斷指標(biāo)。研究者制備單克隆抗體用于快速檢測PTH，有關(guān)制備過程的敘述不正確的是（）A．需要使用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)B．需要制備用PTH免疫的小鼠C．利用抗原-抗體結(jié)合的原理篩選雜交瘤細(xì)胞D．篩選能分泌多種抗體的單個雜交瘤細(xì)胞D練習(xí)[2022.山東]如圖所示，將由2種不同的抗原分別制備的單克隆抗體分子，在體外解偶聯(lián)后重新偶聯(lián)可制備雙特異性抗體，簡稱雙抗。下列說法錯誤的是（）A．雙抗可同時與2種抗原結(jié)合B．利用雙抗可以將蛋白類藥物運送至靶細(xì)胞C．篩選雙抗時需使用制備單克隆抗體時所使用的2種抗原D．同時注射2種抗原可刺激B細(xì)胞分化為產(chǎn)雙抗的漿細(xì)胞D練習(xí)[2022.福建節(jié)選]抗CD14單克隆抗體的制備流程如圖2所示：

(3)步驟①和步驟⑤分別向小鼠注射___________________和_________________。(4)步驟②所用的SP2/0細(xì)胞的生長特點是_______________________。(5)吸取③中的上清液到④的培養(yǎng)孔中，根據(jù)抗原—抗體雜交原理，需加入_①___________進行專一抗體檢測，檢測過程發(fā)現(xiàn)有些雜交瘤細(xì)胞不能分泌抗CD14抗體，原因是_②_________________________________。(6)步驟⑥從________中提取到大量的抗CD14抗體，用于檢測巨噬細(xì)胞。CD14抗原/CD14蛋白分泌CD14抗體的雜交瘤細(xì)胞能在體外無限增殖CD14蛋白參與形成雜交瘤細(xì)胞的B淋巴細(xì)胞種類多，有的不能分泌抗CD14抗體小鼠腹水442.2動物細(xì)胞工程（三）

——動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物1動物細(xì)胞核移植細(xì)胞核卵母細(xì)胞新胚胎動物體細(xì)胞核具有全能性胚胎動物胚胎細(xì)胞分化程度低，表現(xiàn)全能性相對容易；而動物體細(xì)胞分化程度高，表現(xiàn)全能性十分困難。因此動物體細(xì)胞核移植的難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植。從屠宰場收集牛卵巢，采集卵母細(xì)胞(研究人員正在使用設(shè)備從牛的卵巢采集卵母細(xì)胞)，在體外培養(yǎng)到MⅡ期高產(chǎn)奶牛(供體)從供體高產(chǎn)奶牛身體的某一部位(如耳)上取體細(xì)胞，進行細(xì)胞培養(yǎng)通過顯微操作去核將供體細(xì)胞注射入去核的卵母細(xì)胞通過電融合法使兩細(xì)胞融合，供體核進入卵母細(xì)胞，形成重構(gòu)胚將胚胎移入受體(代孕)母牛體內(nèi)出生與供體奶牛遺傳物質(zhì)基本相同的犢牛1動物細(xì)胞核移植(6)過程：用物理或化學(xué)方法激活重構(gòu)胚，使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育過程47【思考·討論】體積大、易操作；營養(yǎng)物質(zhì)豐富，為發(fā)育提供充足營養(yǎng)含有促使細(xì)胞核表達(dá)全能性的物質(zhì)Q1：為何選用MⅡ卵母細(xì)胞?采集卵母細(xì)胞，體外培養(yǎng)至MⅡ期1動物細(xì)胞核移植正常排出的卵子即處于MⅡ期1動物細(xì)胞核移植卵原細(xì)胞初級卵母細(xì)胞次級卵母細(xì)胞卵細(xì)胞第一極體第二極體減數(shù)分裂Ⅰ減數(shù)分裂Ⅱ高產(chǎn)奶牛(供體)49因為10代以內(nèi)的細(xì)胞保證了供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)。Q2：一般選用10代以內(nèi)的細(xì)胞，為什么？1動物細(xì)胞核移植從供體高產(chǎn)奶牛身體的某一部位(如耳)上取體細(xì)胞，進行細(xì)胞培養(yǎng)。50通過顯微操作去核梯度離心、紫外光短時間照射、化學(xué)物質(zhì)處理紡錘體——染色體復(fù)合物Q3：卵母細(xì)胞去核的原因是什么？方法是什么？為使核移植動物的核遺傳物質(zhì)全部來自供體的細(xì)胞；并防止細(xì)胞染色體的數(shù)量發(fā)生變化方法：顯微操作法1動物細(xì)胞核移植51將供體細(xì)胞注射入去核的卵母細(xì)胞Q4：將供體細(xì)胞整個注入去核卵母細(xì)胞中的原因？對卵母細(xì)胞損傷較??；保證供體細(xì)胞的細(xì)胞核不被破壞，

操作方便。1動物細(xì)胞核移植52通過電融合法使兩細(xì)胞融合，供體核進入卵母細(xì)胞，形成重構(gòu)胚。重構(gòu)胚是指人工重新構(gòu)建的胚胎，具有發(fā)育成完成個體的能力。Q5：什么是重構(gòu)胚？處理重構(gòu)胚的目的是什么？用物理或化學(xué)方法（電刺激、Ca2+載體、乙醇和蛋白酶合成抑制劑等）激活重構(gòu)胚，使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進程將胚胎移入受體(代孕)母牛體內(nèi)克隆犢牛1動物細(xì)胞核移植531動物細(xì)胞核移植重構(gòu)胚Q6：克隆動物是對體細(xì)胞供體動物進行了100%的復(fù)制嗎？為什么？克隆動物遺傳物質(zhì)細(xì)胞核的DNA來自于供體動物的細(xì)胞核線粒體中的DNA供體細(xì)胞和卵母細(xì)胞生活環(huán)境性狀可能發(fā)生基因突變、染色體變異等可遺傳變異出生與供體奶牛遺傳物質(zhì)基本相同的犢牛541動物細(xì)胞核移植利用體細(xì)胞核移植技術(shù)和誘導(dǎo)iPS細(xì)胞都能獲得干細(xì)胞。但它們的過程是完全不同的。通過體細(xì)胞核移植技術(shù)可以生成帶有核供體細(xì)胞遺傳物質(zhì)的胚胎干細(xì)胞；誘導(dǎo)iPS細(xì)胞需要在細(xì)胞中表達(dá)幾個關(guān)鍵基因，將細(xì)胞逆轉(zhuǎn)到類似胚胎干細(xì)胞的狀態(tài)。體細(xì)胞核移植技術(shù)對核供體細(xì)胞有較高要求，一般體細(xì)胞的分化程度越高，重編程轉(zhuǎn)化為干細(xì)胞的成功率就越低；可誘導(dǎo)成為iPS細(xì)胞的細(xì)胞來源相對廣一些，如成纖維細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞等。體細(xì)胞核移植技術(shù)涉及采集卵母細(xì)胞、去核、融合等復(fù)雜操作；誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)流程相對簡單，更適合用于生產(chǎn)實踐。Q7：體細(xì)胞核移植技術(shù)與誘導(dǎo)iPS細(xì)胞相比，有什么相似或不