生物制品穩(wěn)定性試驗(yàn)電泳圖譜分析演講人01生物制品穩(wěn)定性試驗(yàn)電泳圖譜分析02引言：電泳圖譜分析在生物制品穩(wěn)定性評(píng)價(jià)中的核心地位引言：電泳圖譜分析在生物制品穩(wěn)定性評(píng)價(jià)中的核心地位生物制品（如單克隆抗體、疫苗、重組蛋白、血液制品等）因其結(jié)構(gòu)復(fù)雜、易受環(huán)境因素影響，其穩(wěn)定性評(píng)價(jià)是貫穿研發(fā)、生產(chǎn)、儲(chǔ)存全生命周期的核心環(huán)節(jié)。在《中國(guó)藥典》《美國(guó)藥典》《歐洲藥典》及ICH系列指導(dǎo)原則中，穩(wěn)定性試驗(yàn)被強(qiáng)制要求作為產(chǎn)品放行和貨架期確定的依據(jù)。而電泳技術(shù)，憑借其高分辨率、高靈敏度及對(duì)蛋白質(zhì)分子大小、電荷、構(gòu)象差異的分離能力，已成為穩(wěn)定性試驗(yàn)中不可或缺的“分子偵探”。在十余年的生物制品質(zhì)量研究工作中，我深刻體會(huì)到：電泳圖譜不僅是檢測(cè)產(chǎn)品降解情況的“數(shù)據(jù)報(bào)表”，更是剖析質(zhì)量屬性的“分子指紋”。無(wú)論是加速試驗(yàn)中主條帶的弱化、降解產(chǎn)物的出現(xiàn)，還是長(zhǎng)期儲(chǔ)存下電荷異質(zhì)性的累積，電泳圖譜都能以直觀的形式呈現(xiàn)這些變化。本文將結(jié)合行業(yè)實(shí)踐，從技術(shù)原理、方法學(xué)驗(yàn)證、圖譜解讀、典型案例及合規(guī)要求五個(gè)維度，系統(tǒng)闡述電泳圖譜分析在生物制品穩(wěn)定性試驗(yàn)中的應(yīng)用邏輯與實(shí)踐要點(diǎn)。03電泳技術(shù)的基礎(chǔ)原理與分類：穩(wěn)定性試驗(yàn)的“工具箱”電泳技術(shù)的基礎(chǔ)原理與分類：穩(wěn)定性試驗(yàn)的“工具箱”電泳技術(shù)的核心原理是帶電粒子在電場(chǎng)中的遷移行為，其遷移速率取決于分子電荷、大小、構(gòu)象及電場(chǎng)強(qiáng)度。根據(jù)分離機(jī)制的不同，電泳技術(shù)可分為多種類型，在生物制品穩(wěn)定性試驗(yàn)中，以下四類技術(shù)最為常用，其選擇需基于產(chǎn)品屬性、降解路徑及檢測(cè)目的綜合確定。（一）聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS）：分子量的“標(biāo)尺”基本原理SDS是基于蛋白質(zhì)分子量差異進(jìn)行分離的技術(shù)。十二烷基硫酸鈉（SDS）作為陰離子表面活性劑，能與蛋白質(zhì)結(jié)合（按質(zhì)量比1.4:1），使其帶負(fù)電荷且消除電荷異質(zhì)性；在聚丙烯酰胺凝膠濃度梯度形成的分子篩效應(yīng)下，蛋白質(zhì)按分子量大小分離，小分子遷移快，大分子遷移慢。通過(guò)考馬斯亮藍(lán)、銀染或熒光染色顯色后，可直觀比較主條帶純度、降解產(chǎn)物及聚集物情況。穩(wěn)定性試驗(yàn)中的應(yīng)用場(chǎng)景-還原型SDS：檢測(cè)重鏈（約50kDa）、輕鏈（約25kDa）的完整性，如抗體藥物在凍融或長(zhǎng)期儲(chǔ)存中是否發(fā)生鏈斷裂、酶解降解（如蛋白酶切割位點(diǎn)的水解）。-非還原型SDS：觀察分子間二硫鍵形成的聚集物（如二聚體、多聚體），判斷氧化或機(jī)械應(yīng)力導(dǎo)致的聚集程度。行業(yè)實(shí)踐中的注意事項(xiàng)-凝膠濃度選擇：低濃度膠（如5%）分離大分子（>100kDa），高濃度膠（如15%）分離小分子（<10kDa）；抗體檢測(cè)常用10%膠兼顧重鏈與輕鏈分離。-樣品前處理：需加入β-巰基乙醇或DTT還原二硫鍵（還原型），或避免還原劑（非還原型），否則可能導(dǎo)致條帶假象。-染色方法：銀染靈敏度可達(dá)ng級(jí)，適合痕量降解產(chǎn)物檢測(cè)；考馬斯亮藍(lán)操作簡(jiǎn)便，但靈敏度低（μg級(jí)），需根據(jù)樣品濃度選擇。（二）毛細(xì)管電泳-十二烷基硫酸鈉（CE-SDS）：高分辨率的“自動(dòng)化利器”基本原理CE-SDS是毛細(xì)管電泳與SDS的結(jié)合，在毛細(xì)管內(nèi)實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)分離。樣品與SDS及還原劑（如三羥甲基氨基甲烷，Tris）混合后，在電場(chǎng)驅(qū)動(dòng)下沿毛細(xì)管遷移，通過(guò)紫外檢測(cè)器（214nm，檢測(cè)肽鍵）或二極管陣列檢測(cè)器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。其分辨率可達(dá)0.5%，遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)SDS，且自動(dòng)化程度高、重現(xiàn)性好。穩(wěn)定性試驗(yàn)中的優(yōu)勢(shì)-定量精準(zhǔn)：通過(guò)積分面積可精確計(jì)算主成分純度（如抗體重鏈、輕鏈純度≥98%）、降解產(chǎn)物含量（如碎片<1.0%）。01-高通量：?jiǎn)未畏治鰞H需10-20分鐘，可同時(shí)處理數(shù)十個(gè)樣品（如加速試驗(yàn)0/1/3/6月樣品），適合穩(wěn)定性試驗(yàn)的批次檢測(cè)。02-低樣本消耗：進(jìn)樣量?jī)H需1-5μL，對(duì)珍貴樣品（如臨床階段生物藥）友好。03方法學(xué)驗(yàn)證關(guān)鍵點(diǎn)根據(jù)ICHQ2(R1)，需驗(yàn)證專屬性（能區(qū)分主成分與降解產(chǎn)物）、線性（r2>0.99）、精密度（RSD<5%）、準(zhǔn)確度（回收率80%-120%）及耐用性（pH、電壓、溫度等參數(shù)微小變化的耐受性）。例如，某單抗藥物的CE-SDS方法驗(yàn)證中，通過(guò)優(yōu)化毛細(xì)管涂層（減少蛋白質(zhì)吸附），使日內(nèi)精密度RSD從3.2%降至1.8%。基本原理IEF基于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)（pI）差異分離。在含有兩性電解質(zhì)和pH梯度的凝膠或毛細(xì)管中，蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中遷移至其pI位置（凈電荷為零）時(shí)停止，形成穩(wěn)定區(qū)帶。通過(guò)考馬斯亮藍(lán)染色或毛細(xì)管等電聚焦（cIEF）-紫外檢測(cè)，可檢測(cè)酸性/堿性變異體，如脫酰胺化（酸性峰pI降低）、唾液酸化（酸性峰pI升高）、氧化（堿性峰pI升高）等。穩(wěn)定性試驗(yàn)中的核心價(jià)值生物制品的電荷異質(zhì)性直接影響其活性、安全性和藥代動(dòng)力學(xué)。例如：-脫酰胺化：天冬酰胺（Asn）在堿性或高溫條件下易脫酰胺為天冬氨酸（Asp），導(dǎo)致pI降低0.1-0.3個(gè)單位，可能降低與靶點(diǎn)結(jié)合能力。-C端賴氨酸切除：抗體輕鏈C端賴氨酸缺失，使pI升高，可能增加免疫原性風(fēng)險(xiǎn)。-糖基化修飾：N-糖鏈末端的唾液酸化程度變化，會(huì)導(dǎo)致酸性峰比例波動(dòng)，影響血清半衰期。操作難點(diǎn)與解決方案-膠內(nèi)IEF：手工操作復(fù)雜，膠條易變形，重現(xiàn)性差，適合小規(guī)模研究。-cIEF：自動(dòng)化程度高，通過(guò)壓力進(jìn)樣和聚焦優(yōu)化，可提高重現(xiàn)性（RSD<2%）；需添加兩性電解質(zhì)（如pH3-10）和EOF（電滲流）抑制劑（如羥丙基甲基纖維素），確保峰形尖銳。（四）凝膠電泳blotting（WesternBlot）：特定組分的“靶向檢測(cè)”基本原理將SDS分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜或PVDF膜，通過(guò)特異性抗體結(jié)合（一抗+二抗-酶標(biāo)/化學(xué)發(fā)光），檢測(cè)目標(biāo)蛋白或降解片段。其靈敏度可達(dá)pg級(jí)，且能明確降解產(chǎn)物的免疫活性。穩(wěn)定性試驗(yàn)中的應(yīng)用場(chǎng)景A-抗體藥物：檢測(cè)抗獨(dú)特型抗體（ADA）或抗藥物抗體（ADA）的存在，評(píng)估免疫原性風(fēng)險(xiǎn)。B-疫苗：驗(yàn)證抗原蛋白的完整性（如乙肝表面抗原HBsAg的226kDa條帶是否斷裂）。C-重組蛋白：鑒別降解產(chǎn)物是否為具有活性的片段（如胰島素受體激動(dòng)劑的降解片段是否保留結(jié)合能力）。局限性操作繁瑣（轉(zhuǎn)膜、封閉、孵育、洗膜）、耗時(shí)長(zhǎng)（1-2天）、半定量為主，僅適用于特定組分檢測(cè)，不作為常規(guī)穩(wěn)定性試驗(yàn)手段，但可作為疑難問(wèn)題的補(bǔ)充驗(yàn)證。04穩(wěn)定性試驗(yàn)設(shè)計(jì)中電泳圖譜的“角色定位”穩(wěn)定性試驗(yàn)設(shè)計(jì)中電泳圖譜的“角色定位”穩(wěn)定性試驗(yàn)分為長(zhǎng)期試驗(yàn)（25℃±2℃/60%RH±5%，持續(xù)至貨架期）、加速試驗(yàn)（40℃±2℃/75%RH±5%，持續(xù)6個(gè)月）、中間條件試驗(yàn)（30℃±2℃/65%RH±5%，適用于不支持加速試驗(yàn)的產(chǎn)品）及強(qiáng)制降解試驗(yàn)（光照、凍融、酸/堿/氧化處理）。電泳圖譜在不同試驗(yàn)中的作用各有側(cè)重，需與SEC-HPLC（sizeexclusionchromatography，分子排阻色譜）、CEX-HPLC（cationexchangechromatography，陽(yáng)離子交換色譜）等技術(shù)互補(bǔ)，構(gòu)建“全方位質(zhì)量評(píng)價(jià)體系”。強(qiáng)制降解試驗(yàn)：方法學(xué)開(kāi)發(fā)的“試金石”強(qiáng)制降解試驗(yàn)旨在驗(yàn)證分析方法對(duì)降解產(chǎn)物的分離能力（專屬性）及降解路徑的合理性。電泳圖譜在此階段的關(guān)鍵作用是：1.確定降解路徑：通過(guò)氧化（H?O?處理）、高溫（60℃孵育）、光照（UV4000lux）、酸/堿（pH2-12）等條件處理后，觀察SDS和IEF圖譜變化，明確主要降解方式（如斷裂、聚集、脫酰胺化）。例如，某重組人白蛋白在酸降解條件下，非還原SDS出現(xiàn)70kDa條帶（二聚體），還原SDS出現(xiàn)45kDa條帶（斷裂片段），提示酸誘導(dǎo)聚集與肽鏈斷裂。2.優(yōu)化分析方法：根據(jù)強(qiáng)制降解圖譜，調(diào)整電泳條件（如CE-SDS的緩沖液pH、IEF的pH范圍），確保主成分與降解產(chǎn)物完全分離。例如，某抗體氧化后出現(xiàn)重鏈+16Da（甲硫氨酸氧化）的變異體，需優(yōu)化CE-SDS的分離梯度（如梯度從5%-20%改為3-15%），使氧化峰與主峰基線分離。強(qiáng)制降解試驗(yàn)：方法學(xué)開(kāi)發(fā)的“試金石”3.設(shè)定質(zhì)量屬性標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)強(qiáng)制降解程度，設(shè)定貨架期質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（如加速試驗(yàn)下主條帶純度不低于95%，降解產(chǎn)物不超過(guò)3.0%）。加速試驗(yàn)與長(zhǎng)期試驗(yàn)：貨架期預(yù)測(cè)的“晴雨表”加速試驗(yàn)通過(guò)“溫度加速”原理（Q??規(guī)則，每升高10℃反應(yīng)速率增加2-4倍），預(yù)測(cè)長(zhǎng)期穩(wěn)定性；長(zhǎng)期試驗(yàn)則直接反映實(shí)際儲(chǔ)存條件下的質(zhì)量變化。電泳圖譜在此階段的核心任務(wù)是：1.監(jiān)測(cè)降解趨勢(shì)：定期檢測(cè)（如0/1/3/6月加速試驗(yàn)，0/3/6/12/18/24月長(zhǎng)期試驗(yàn)）SDS（主帶純度、聚集物、降解產(chǎn)物）、IEF（電荷異質(zhì)性）的變化，繪制“降解曲線”，判斷是否符合線性或一級(jí)動(dòng)力學(xué)。例如，某單抗在加速試驗(yàn)中，非還原CE-SDS顯示二聚體從0.5%升至2.1%，長(zhǎng)期試驗(yàn)中5℃儲(chǔ)存24個(gè)月后二聚體仍<1.0%，提示5℃可有效抑制聚集。加速試驗(yàn)與長(zhǎng)期試驗(yàn)：貨架期預(yù)測(cè)的“晴雨表”2.關(guān)聯(lián)活性與安全性：結(jié)合生物學(xué)活性測(cè)定（如細(xì)胞效價(jià)）、理化分析（如SEC-HPLC聚集體），評(píng)估降解產(chǎn)物對(duì)功能的影響。例如，某疫苗在長(zhǎng)期試驗(yàn)中IEF顯示酸性峰增加10%，但ELISA檢測(cè)抗原結(jié)合力僅下降5%，提示電荷變異體未顯著影響免疫原性。3.支持貨架期確定：根據(jù)電泳圖譜數(shù)據(jù)與預(yù)設(shè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（如ICHQ1A(R2)“貨架期以降解不超過(guò)5%為限”），確定產(chǎn)品的有效期。例如，某重組蛋白在25℃長(zhǎng)期試驗(yàn)中，12個(gè)月時(shí)SDS主帶純度仍為98.5%，18個(gè)月降至96.2%，故確定貨架期為12個(gè)月。05電泳圖譜解讀的“核心邏輯”：從“看到”到“看懂”電泳圖譜解讀的“核心邏輯”：從“看到”到“看懂”電泳圖譜的解讀是穩(wěn)定性試驗(yàn)中最具挑戰(zhàn)性的環(huán)節(jié)，需結(jié)合產(chǎn)品屬性、降解機(jī)制及法規(guī)要求，避免“數(shù)據(jù)孤立”或“過(guò)度解讀”。以下是圖譜解讀的關(guān)鍵步驟與常見(jiàn)誤區(qū)。圖譜解讀的“四步法”基線校準(zhǔn)與峰識(shí)別-SDS/CE-SDS：以分子量標(biāo)準(zhǔn)品（如低分子量Marker、CE-SDS蛋白標(biāo)準(zhǔn)）為參照，識(shí)別主條帶/主峰（重鏈、輕鏈），標(biāo)注高分子量聚集體（如二聚體、多聚體）、低分子量降解片段（如碎片、游離輕鏈）。-IEF/cIEF：以pI標(biāo)準(zhǔn)品（如pI3-10蛋白混合物）為參照，識(shí)別主峰（理論pI），標(biāo)注酸性峰（pI<理論值）、堿性峰（pI>理論值）。圖譜解讀的“四步法”定量與半定量分析-CE-SDS/cIEF：通過(guò)色譜工作站積分，計(jì)算主峰面積百分比（純度）、降解峰/變異峰面積百分比（含量）。例如，某抗體還原型CE-SDS中，重鏈純度=重峰面積/(重峰+輕峰+降解峰面積)×100%。-SDS：采用凝膠成像系統(tǒng)（如ImageLab）分析條帶灰度，進(jìn)行半定量（如降解產(chǎn)物條帶灰度/主帶灰度×100%），需注意染色方法的線性范圍（銀染線性范圍窄，需謹(jǐn)慎使用）。圖譜解讀的“四步法”降解機(jī)制溯源根據(jù)峰位置變化，推斷降解類型：-分子量降低：SDS出現(xiàn)低分子量條帶（如輕鏈斷裂、重鏈片段），可能原因：蛋白酶切割、酸/堿水解、機(jī)械應(yīng)力導(dǎo)致肽鏈斷裂。-分子量升高：非還原SDS出現(xiàn)高分子量條帶，可能原因：二硫鍵錯(cuò)配（如抗體鉸鏈區(qū)二硫鍵交換）、非共價(jià)聚集（凍融、振蕩）。-pI偏移：IEF酸性峰增加，可能原因：脫酰胺化（Asn→Asp）、糖基化缺失（唾液酸丟失）；堿性峰增加，可能原因：C端賴氨酸切除、氧化（Met→Metsulfoxide）。圖譜解讀的“四步法”風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與決策結(jié)合質(zhì)量屬性與臨床意義，判斷降解是否可接受：-高風(fēng)險(xiǎn)降解：聚集物（>5%）可能引發(fā)免疫原性，片段（>3%）可能喪失活性或增加毒性，需立即啟動(dòng)調(diào)查（如處方優(yōu)化、工藝改進(jìn)）。-低風(fēng)險(xiǎn)降解：電荷異質(zhì)性（<10%）且活性無(wú)顯著下降，可設(shè)定放行標(biāo)準(zhǔn)并長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)。常見(jiàn)誤區(qū)與案例警示誤區(qū)1：僅關(guān)注主帶純度，忽視聚集物/片段-案例：某單抗藥物在加速試驗(yàn)中，還原SDS主帶純度仍為98.5%，但非還原SDS檢測(cè)到2.3%的高分子量聚集體，且細(xì)胞效價(jià)下降15%。若僅依賴還原型數(shù)據(jù)，可能漏檢聚集導(dǎo)致的活性損失。-教訓(xùn)：必須結(jié)合還原型與非還原型電泳，全面評(píng)估分子完整性。06誤區(qū)2：將電荷異質(zhì)性等同于降解誤區(qū)2：將電荷異質(zhì)性等同于降解-案例：某重組EPO的IEF圖譜顯示，酸性峰在長(zhǎng)期試驗(yàn)中逐漸增加，但活性測(cè)定無(wú)變化。后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，酸性峰為唾液酸化程度差異，屬于天然翻譯后修飾，非降解產(chǎn)物。-教訓(xùn)：需結(jié)合強(qiáng)制降解數(shù)據(jù)與產(chǎn)品工藝信息，區(qū)分“天然異質(zhì)性”與“降解相關(guān)變異”。誤區(qū)3：過(guò)度依賴單一方法，缺乏數(shù)據(jù)互補(bǔ)-案例：某抗體在CE-SDS中檢測(cè)到0.8%的降解峰，但SEC-HPLC未發(fā)現(xiàn)異常。通過(guò)WesternBlot證實(shí)，降解峰為無(wú)活性的重鏈片段（SEC-HPLC無(wú)法分離小分子片段）。-教訓(xùn)：電泳與HPLC等技術(shù)需協(xié)同使用，優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)（如SEC-HPLC檢測(cè)大分子聚集，CE-SDS檢測(cè)片段，IEF檢測(cè)電荷變異）。07電泳圖譜分析的“合規(guī)性”與“數(shù)據(jù)可靠性”電泳圖譜分析的“合規(guī)性”與“數(shù)據(jù)可靠性”生物制品穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)需滿足“完整、準(zhǔn)確、可追溯”的GMP要求，電泳圖譜作為關(guān)鍵數(shù)據(jù)，其分析過(guò)程需嚴(yán)格遵循法規(guī)指導(dǎo)原則。方法學(xué)驗(yàn)證：確?！皵?shù)據(jù)可信”的基礎(chǔ)0504020301根據(jù)ICHQ2(R1)、中國(guó)藥典2025年版三部“生物制品分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”，電泳方法需驗(yàn)證以下參數(shù)：-專屬性：能區(qū)分主成分與降解產(chǎn)物（如強(qiáng)制降解樣品中主峰與降解峰分離度>1.0）。-線性與范圍：在規(guī)定濃度范圍內(nèi)（如主帶純度80%-100%），r2>0.99，定量限（LOQ）需滿足質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求（如降解產(chǎn)物L(fēng)OQ<0.5%）。-精密度：重復(fù)性（同一人員、設(shè)備、日內(nèi)6次分析RSD<5%）、中間精密度（不同人員、日期、設(shè)備RSD<10%）。-耐用性：微小參數(shù)變化（如緩沖液pH±0.2、電壓±50V）對(duì)結(jié)果的影響應(yīng)在可接受范圍內(nèi)。數(shù)據(jù)管理與審計(jì)追蹤：確?！翱勺匪荨盢o.3-原始數(shù)據(jù)：電泳圖譜需包含完整信息（樣品名稱、批號(hào)、日期、操作人員、儀器型號(hào)、參數(shù)設(shè)置），圖譜修改需有審計(jì)追蹤（如CE儀器軟件自動(dòng)記錄峰處理參數(shù)調(diào)整）。-數(shù)據(jù)存儲(chǔ)：電子圖譜需備份至合規(guī)服務(wù)器（如21CFRPart11要求的電子實(shí)驗(yàn)記錄系統(tǒng)，ELN），保存期限不少于產(chǎn)品上市后6年。-報(bào)告規(guī)范：穩(wěn)定性報(bào)告中需附關(guān)鍵電泳圖譜（如0月、貨架期樣品的CE-SDS、IEF圖譜），并標(biāo)注定量結(jié)果與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較（如“主帶純度98.2%，標(biāo)準(zhǔn)≥95.0%”）。No.2No.1常見(jiàn)合規(guī)缺陷與規(guī)避策略01020304-缺陷1：未進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證即用于穩(wěn)定性試驗(yàn)。-缺陷2：電泳圖譜未標(biāo)注關(guān)鍵參數(shù)（如凝膠濃度、染色時(shí)間、毛細(xì)管批次）。-缺陷3：降解趨勢(shì)分析時(shí)，僅統(tǒng)計(jì)單次數(shù)據(jù)，未繪制趨勢(shì)圖。規(guī)避：在穩(wěn)定性試驗(yàn)啟動(dòng)前，完成分析方法驗(yàn)證并報(bào)告（含驗(yàn)證方案、報(bào)告、原始圖譜）。規(guī)避：制定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP），明確圖譜標(biāo)注內(nèi)容，并由QA人員定期檢查。規(guī)避：采用統(tǒng)計(jì)軟件（如JMP、Minitab）繪制降解曲線，計(jì)算95%置信區(qū)間，科學(xué)預(yù)測(cè)貨架期。050608未來(lái)展望：電泳技術(shù)與穩(wěn)定性評(píng)價(jià)的“融合創(chuàng)新”未來(lái)展望：電泳技術(shù)與穩(wěn)定性評(píng)價(jià)的“融合創(chuàng)新”隨著生物制品向“復(fù)雜化”（如雙特異性抗體、ADC、細(xì)胞治療產(chǎn)品）發(fā)展，電泳技術(shù)也在不斷迭代，以應(yīng)對(duì)新型質(zhì)量屬性的檢測(cè)需求。未來(lái)趨勢(shì)包括：1.多維聯(lián)用技術(shù)：如CE-S