類器官與類器官：腫瘤干細(xì)胞靶向治療策略演講人01類器官模型：腫瘤研究的“活體芯片”02腫瘤干細(xì)胞：腫瘤的“種子細(xì)胞”與治療“靶標(biāo)”03基于類器官的腫瘤干細(xì)胞靶向治療策略：從“實(shí)驗(yàn)室到病床”目錄類器官與類器官：腫瘤干細(xì)胞靶向治療策略引言：從臨床困境到技術(shù)突破的思考在腫瘤治療的臨床實(shí)踐中，我始終面臨一個(gè)核心挑戰(zhàn)：為何標(biāo)準(zhǔn)化療、靶向治療甚至免疫治療，在部分患者中僅能實(shí)現(xiàn)短期緩解卻難以根治？隨著對(duì)腫瘤生物學(xué)認(rèn)識(shí)的深入，答案逐漸指向腫瘤干細(xì)胞（CancerStemCells,CSCs）——這群具有自我更新、多向分化及耐藥潛能的“種子細(xì)胞”，被認(rèn)為是腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及治療抵抗的根源。然而，傳統(tǒng)二維細(xì)胞系、動(dòng)物模型難以準(zhǔn)確模擬腫瘤異質(zhì)性及微環(huán)境復(fù)雜性，導(dǎo)致CSCs研究及其靶向藥物研發(fā)陷入瓶頸。直到類器官（Organoid）技術(shù)的出現(xiàn)，這一局面被徹底改變。作為體外三維培養(yǎng)的“微型器官”，類器官不僅保留了來源組織的細(xì)胞組成、結(jié)構(gòu)特征及遺傳背景，還能重現(xiàn)腫瘤的生物學(xué)行為。在我的團(tuán)隊(duì)構(gòu)建第一例結(jié)直腸癌類器官時(shí)，當(dāng)顯微鏡下觀察到類似患者腫瘤腺體結(jié)構(gòu)的腔樣結(jié)構(gòu)，并證實(shí)其包含CD133+CSCs亞群時(shí)，我深刻意識(shí)到：類器官與腫瘤干細(xì)胞的結(jié)合，將為破解腫瘤治療難題提供前所未有的“雙劍合璧”。本文將從類器官模型的構(gòu)建、腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性、兩者互作機(jī)制，到基于此的靶向治療策略及臨床轉(zhuǎn)化挑戰(zhàn)，系統(tǒng)闡述這一前沿領(lǐng)域的進(jìn)展與展望。01類器官模型：腫瘤研究的“活體芯片”1類器官的定義與起源：從發(fā)育生物學(xué)到腫瘤研究類器官是指在體外三維培養(yǎng)條件下，由干細(xì)胞或祖細(xì)胞自組織形成的、具有與來源器官相似結(jié)構(gòu)和功能的微型三維結(jié)構(gòu)。其概念源于對(duì)干細(xì)胞命運(yùn)的探索：2009年，Clevers團(tuán)隊(duì)首次利用Lgr5+腸道干細(xì)胞成功構(gòu)建小腸類器官，證明了成體干細(xì)胞在特定微環(huán)境下可自發(fā)形成器官樣結(jié)構(gòu)。這一突破迅速擴(kuò)展至腫瘤領(lǐng)域，2011年首個(gè)結(jié)直腸癌類器官的建立，標(biāo)志著類器官成為連接基礎(chǔ)研究與臨床轉(zhuǎn)化的橋梁。與傳統(tǒng)的二維細(xì)胞系相比，類器官的核心優(yōu)勢(shì)在于其“真實(shí)性”——它不僅包含腫瘤細(xì)胞，還保留了腫瘤微環(huán)境的關(guān)鍵組分（如癌相關(guān)成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)），并能模擬腫瘤的異質(zhì)性、侵襲性及耐藥性。在我的臨床樣本庫中，我們?cè)鴮?duì)同一例胃癌患者的原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶及化療后復(fù)發(fā)病灶分別構(gòu)建類器官，發(fā)現(xiàn)不同病灶的類器官對(duì)奧沙利鉑的敏感性存在顯著差異，這一結(jié)果直接指導(dǎo)了后續(xù)治療方案調(diào)整，患者病情得到有效控制。2腫瘤類器官的構(gòu)建技術(shù)：從樣本獲取到體外培養(yǎng)腫瘤類器官的構(gòu)建是一個(gè)精細(xì)化的“系統(tǒng)工程”，其流程可分為樣本獲取、消化分離、基質(zhì)包埋、培養(yǎng)擴(kuò)增及傳代凍存五個(gè)關(guān)鍵步驟：2腫瘤類器官的構(gòu)建技術(shù)：從樣本獲取到體外培養(yǎng)2.1樣本獲取與處理腫瘤組織來源包括手術(shù)切除標(biāo)本、穿刺活檢、胸腹水及活檢組織，需在離體后30分鐘內(nèi)置于4℃保存液（如AdvancedDMEM/F12）中，以維持細(xì)胞活性。對(duì)于活檢組織（如內(nèi)鏡下獲取的胃腸黏膜病變），我們通常采用“組織塊法”直接嵌入基質(zhì)膠；而手術(shù)標(biāo)本則需進(jìn)一步去除壞死組織、脂肪及結(jié)締組織，剪成1-2mm3的小塊。2腫瘤類器官的構(gòu)建技術(shù)：從樣本獲取到體外培養(yǎng)2.2組織消化與細(xì)胞分離消化是影響類器官形成效率的核心環(huán)節(jié)。根據(jù)組織類型，我們選擇不同的消化酶：上皮來源腫瘤（如結(jié)直腸癌、乳腺癌）常用含EDTA的酶-freedissociationbuffer，避免損傷干細(xì)胞表面標(biāo)志物；間質(zhì)含量高的腫瘤（如胰腺癌、膠質(zhì)瘤）則需添加膠原酶Ⅳ（1-2mg/mL）和透明質(zhì)酸酶（100U/mL）消化30-60分鐘。消化后的組織通過70μm細(xì)胞篩網(wǎng)過濾，離心收集細(xì)胞沉淀。2腫瘤類器官的構(gòu)建技術(shù)：從樣本獲取到體外培養(yǎng)2.3基質(zhì)包埋與三維培養(yǎng)將細(xì)胞沉淀與基質(zhì)膠（Matrigel）按1:3比例混勻，接種于24孔板預(yù)培養(yǎng)，37℃固化30分鐘后加入類器官培養(yǎng)基?；A(chǔ)培養(yǎng)基通常包含AdvancedDMEM/F12、B27（1:50）、N2（1:100）、GlutaMAX（1:100），并添加生長(zhǎng)因子（如EGF50ng/mL、Noggin100ng/mL、R-spondin1500ng/mL）以模擬干細(xì)胞niche。值得注意的是，不同腫瘤類型需優(yōu)化生長(zhǎng)因子組合：例如，肝癌類器官需添加HGF（20ng/mL），而前列腺癌類器官則需補(bǔ)充雄激素（如R188110nM）。2腫瘤類器官的構(gòu)建技術(shù)：從樣本獲取到體外培養(yǎng)2.4培養(yǎng)與傳代類器官在37℃、5%CO?條件下培養(yǎng)3-7天可見典型的腔樣結(jié)構(gòu)，7-10天可傳代。傳代時(shí)，將類器官用Accutase消化成單細(xì)胞，按1:3-1:5比例重新包埋。在我的實(shí)驗(yàn)室中，我們建立了標(biāo)準(zhǔn)化的傳代體系：每代培養(yǎng)周期控制在7-10天，避免過度傳代導(dǎo)致干細(xì)胞特性丟失。2腫瘤類器官的構(gòu)建技術(shù)：從樣本獲取到體外培養(yǎng)2.5凍存與復(fù)蘇為長(zhǎng)期保存患者特異性類器官，我們采用90%FBS+10%DMSO的凍存液，將第3-5代的類器官以1×10?cells/mL密度凍存于液氮。復(fù)蘇時(shí)，37℃水浴快速融化，離心后重新包埋，復(fù)蘇成功率可達(dá)80%以上。3腫瘤類器官的驗(yàn)證：確保模型的“臨床相關(guān)性”構(gòu)建完成的類器官需通過多維度驗(yàn)證，確保其能真實(shí)反映原發(fā)腫瘤的生物學(xué)特征：3腫瘤類器官的驗(yàn)證：確保模型的“臨床相關(guān)性”3.1形態(tài)學(xué)與組織學(xué)驗(yàn)證通過HE染色觀察類器官結(jié)構(gòu)：結(jié)直腸癌類器官呈現(xiàn)典型的腺管樣結(jié)構(gòu)，胰腺導(dǎo)管腺癌類器官則表現(xiàn)為不規(guī)則腺腔，與原發(fā)腫瘤組織學(xué)類型高度一致。免疫組化檢測(cè)標(biāo)志性蛋白（如CK19胰腺導(dǎo)管標(biāo)志物、CDX2結(jié)直腸標(biāo)志物）可進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞來源。3腫瘤類器官的驗(yàn)證：確保模型的“臨床相關(guān)性”3.2遺傳學(xué)特征驗(yàn)證采用全外顯子測(cè)序（WES）或靶向測(cè)序，對(duì)比類器官與原發(fā)腫瘤的突變譜。我們發(fā)現(xiàn)，95%以上的驅(qū)動(dòng)基因突變（如KRAS、TP53、APC）在類器官中穩(wěn)定保留，且拷貝數(shù)變異（CNV）模式與原發(fā)腫瘤一致。這一特性使類器官成為研究腫瘤進(jìn)化的理想模型。3腫瘤類器官的驗(yàn)證：確保模型的“臨床相關(guān)性”3.3功能學(xué)驗(yàn)證關(guān)鍵在于確認(rèn)類器官中CSCs的存在與功能。通過流式分選CSCs表面標(biāo)志物（如CD133、CD44），將其移植至免疫缺陷小鼠皮下，可形成與原發(fā)腫瘤相似的移植瘤；而去除CSCs后，類器官的增殖能力顯著下降。這一“金標(biāo)準(zhǔn)”驗(yàn)證了類器官中腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)活性。02腫瘤干細(xì)胞：腫瘤的“種子細(xì)胞”與治療“靶標(biāo)”腫瘤干細(xì)胞：腫瘤的“種子細(xì)胞”與治療“靶標(biāo)”2.1腫瘤干細(xì)胞的定義與發(fā)現(xiàn)：從“干細(xì)胞假說”到“實(shí)驗(yàn)證實(shí)”腫瘤干細(xì)胞假說的提出可追溯至20世紀(jì)60年代，當(dāng)時(shí)Bruce等發(fā)現(xiàn)僅少量白血病細(xì)胞可在小鼠體內(nèi)形成克隆，暗示腫瘤中存在具有干細(xì)胞特性的細(xì)胞群體。1997年，Bonnet等首次分離鑒定出CD34+CD38-白血病干細(xì)胞，證實(shí)了CSCs的存在。實(shí)體瘤領(lǐng)域，2003年Al-Hajj等從乳腺癌中分離出CD44+CD24-/lowESA+細(xì)胞亞群，該亞群在NOD/SCID小鼠中致瘤性較其他細(xì)胞高100倍以上，奠定了實(shí)體瘤CSCs研究的基礎(chǔ)。在我的臨床觀察中，晚期肝癌患者常表現(xiàn)為“反復(fù)發(fā)作-治療-再復(fù)發(fā)”的惡性循環(huán)，而通過單細(xì)胞測(cè)序分析肝癌類器官發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)灶中EpCAM+CD90+CSCs比例較原發(fā)灶升高2-3倍，直接提示CSCs是腫瘤復(fù)發(fā)的“罪魁禍?zhǔn)住薄?腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性：自我更新、多向分化與耐藥性CSCs的核心生物學(xué)特性可概括為“三高一強(qiáng)”：2腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性：自我更新、多向分化與耐藥性2.1高自我更新能力CSCs通過對(duì)稱分裂（產(chǎn)生兩個(gè)identicalCSCs）和不對(duì)稱分裂（一個(gè)CSCs+一個(gè)分化細(xì)胞）維持群體數(shù)量，關(guān)鍵信號(hào)通路包括Wnt/β-catenin、Hedgehog（Hh）和Notch。在結(jié)直腸癌類器官中，我們通過CRISPR/Cas9敲低β-catenin，發(fā)現(xiàn)類器官的增殖能力下降60%，且無法形成新的腔樣結(jié)構(gòu)，證實(shí)了Wnt通路對(duì)CSCs自我更新的調(diào)控作用。2腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性：自我更新、多向分化與耐藥性2.2高多向分化潛能CSCs可分化為腫瘤中不同表型的細(xì)胞，形成腫瘤異質(zhì)性。例如，在肺癌類器官中，CD133+CSCs可分化為腺癌、鱗癌及小細(xì)胞肺癌等多種亞型，這與臨床肺癌患者的病理多樣性高度吻合。這種分化能力不僅導(dǎo)致腫瘤對(duì)治療的抵抗（如分化細(xì)胞對(duì)化療敏感，而CSCs耐藥），還促進(jìn)了轉(zhuǎn)移前微環(huán)境的形成。2腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性：自我更新、多向分化與耐藥性2.3高侵襲轉(zhuǎn)移能力CSCs通過上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）獲得遷移和侵襲能力。在胰腺癌類器官中，我們誘導(dǎo)CSCs表達(dá)EMT關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Snail、Twist后，類器官的穿透Matrigel能力增強(qiáng)3倍，且在肝臟轉(zhuǎn)移模型中轉(zhuǎn)移灶數(shù)量顯著增加。這一過程與臨床胰腺癌“早期轉(zhuǎn)移、晚期診斷”的特點(diǎn)一致。2腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性：自我更新、多向分化與耐藥性2.4強(qiáng)耐藥性CSCs對(duì)化療、放療及靶向治療具有天然耐藥性，機(jī)制包括：①高表達(dá)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體（如ABCG2、ABCB1），將藥物泵出細(xì)胞；②激活DNA修復(fù)通路（如ATM/ATR）；③處于靜息期（G0期），減少藥物靶點(diǎn)暴露；④依賴微環(huán)境中的旁分泌信號(hào)（如IL-6、TGF-β）維持耐藥表型。在我團(tuán)隊(duì)的研究中，吉非替尼處理肺癌類器官后，CD133+CSCs比例從15%升至45%，且其EGFRT790M突變頻率增加，解釋了靶向治療后的耐藥機(jī)制。3腫瘤干細(xì)胞的表面標(biāo)志物與分選策略表面標(biāo)志物是鑒定和分選CSCs的基礎(chǔ)，但不同腫瘤類型甚至同一腫瘤的不同亞型，CSCs標(biāo)志物存在顯著差異（表1）。表1常見腫瘤中腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物|腫瘤類型|核心標(biāo)志物|驗(yàn)證功能（致瘤性）||----------------|-----------------------------------|--------------------------------||結(jié)直腸癌|CD133、CD44、Lgr5|100個(gè)細(xì)胞即可形成移植瘤|3腫瘤干細(xì)胞的表面標(biāo)志物與分選策略|乳腺癌|CD44+CD24-/lowESA+|200個(gè)細(xì)胞形成移植瘤||胰腺癌|CD133、CD44、CXCR4|500個(gè)細(xì)胞形成移植瘤||肝癌|EpCAM+CD90+|1000個(gè)細(xì)胞形成移植瘤||膠質(zhì)瘤|CD133、CD15|10個(gè)細(xì)胞形成移植瘤|除表面標(biāo)志物外，功能學(xué)分選（如ALDH活性檢測(cè)）也是CSCs分選的重要手段。ALDH1是ALDH家族成員，可催化視黃醛氧化，其活性與CSCs的自我更新能力正相關(guān)。我們?cè)诼殉舶╊惼鞴僦邪l(fā)現(xiàn)，ALDHhigh細(xì)胞僅占10%，卻能在體外形成80%的類器官colonies，且對(duì)紫杉醇的耐藥性是ALDHlow細(xì)胞的5倍。3類器官-腫瘤干細(xì)胞互作機(jī)制：微環(huán)境如何調(diào)控“種子細(xì)胞”1腫瘤微環(huán)境（TME）的“支持角色”傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，腫瘤由腫瘤細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞構(gòu)成，而類器官技術(shù)的突破揭示了TME對(duì)CSCs的“雙向調(diào)控”：一方面，間質(zhì)細(xì)胞通過分泌因子維持CSCs干性；另一方面，CSCs可重塑微環(huán)境，促進(jìn)免疫抑制和血管生成。1腫瘤微環(huán)境（TME）的“支持角色”1.1癌相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）的調(diào)控作用CAFs是TME中最豐富的間質(zhì)細(xì)胞類型，通過分泌IL-6、HGF等因子激活CSCs的STAT3和MET通路。在肝癌類器官中，我們將CAFs與類器官共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)CSCs標(biāo)志物EpCAM+比例從20%升至45%，且類器官的侵襲能力增強(qiáng)；而使用STAT3抑制劑（Stattic）處理后，這一效應(yīng)被逆轉(zhuǎn)。這一發(fā)現(xiàn)為“CAF靶向+CSCs清除”的聯(lián)合治療提供了理論依據(jù)。1腫瘤微環(huán)境（TME）的“支持角色”1.2免疫細(xì)胞的“雙重身份”TME中的免疫細(xì)胞對(duì)CSCs的作用具有雙重性：一方面，M1型巨噬細(xì)胞可通過分泌TNF-α抑制CSCs干性；另一方面，M2型巨噬細(xì)胞通過分泌IL-10、TGF-β促進(jìn)CSCs自我更新。在黑色素瘤類器官中，我們觀察到PD-1+T細(xì)胞與CSCs的直接接觸，但CSCs高表達(dá)PD-L1，通過PD-1/PD-L1通路抑制T細(xì)胞活性，形成“免疫逃逸”。1腫瘤微環(huán)境（TME）的“支持角色”1.3細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的物理調(diào)控ECM的成分（如膠原蛋白、纖連蛋白）和硬度可通過整合素信號(hào)影響CSCs。我們通過調(diào)整基質(zhì)膠濃度（模擬不同硬度微環(huán)境），發(fā)現(xiàn)胰腺癌類器官在硬基質(zhì)（10mg/mLMatrigel）中CSCs比例（35%）顯著高于軟基質(zhì)（5mg/mLMatrigel）（12%），且YAP/TAZ通路被激活，提示基質(zhì)硬度通過機(jī)械轉(zhuǎn)導(dǎo)維持CSCs干性。2類器官模擬腫瘤干細(xì)胞niche的“優(yōu)勢(shì)與局限”傳統(tǒng)二維培養(yǎng)無法模擬CSCs的niche（即維持其干性的微環(huán)境生態(tài)位），而類器官通過三維結(jié)構(gòu)和多種細(xì)胞共培養(yǎng)，部分重現(xiàn)了這一過程。例如，我們構(gòu)建的“腸癌類器官-免疫細(xì)胞共培養(yǎng)體系”，可模擬CSCs與T細(xì)胞的相互作用，用于免疫檢查點(diǎn)抑制劑的篩選。然而，當(dāng)前類器官仍缺乏完整的血管系統(tǒng)和神經(jīng)支配，難以模擬腫瘤的“遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移”過程。為解決這一問題，我們嘗試將類器官與血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)CSCs的遷移能力增強(qiáng)，且血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的Angiopoietin-2可促進(jìn)CSCs的EMT過程。03基于類器官的腫瘤干細(xì)胞靶向治療策略：從“實(shí)驗(yàn)室到病床”1靶向腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物的“精準(zhǔn)打擊”表面標(biāo)志物是CSCs最直接的“靶標(biāo)”，通過抗體、CAR-T或抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）可實(shí)現(xiàn)特異性殺傷。1靶向腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物的“精準(zhǔn)打擊”1.1單克隆抗體與ADC靶向CD44的抗體（如RG7356）在臨床前研究中可顯著降低乳腺癌類器官中CD44+CSCs的比例，聯(lián)合紫杉醇可抑制腫瘤再生。ADC藥物通過抗體特異性結(jié)合CSCs表面標(biāo)志物，釋放細(xì)胞毒素，實(shí)現(xiàn)“精準(zhǔn)靶向”。例如，抗CD133-DM1ADC在肝癌類器官中可殺傷90%以上的CD133+CSCs，而對(duì)正常肝細(xì)胞無明顯毒性。1靶向腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物的“精準(zhǔn)打擊”1.2CAR-T細(xì)胞療法嵌合抗原受體T（CAR-T）細(xì)胞通過改造患者自身T細(xì)胞，使其識(shí)別CSCs表面抗原。在急性髓系白血病類器官中，CD123-CAR-T細(xì)胞可高效清除CD123+CSCs，且與化療聯(lián)用可防止復(fù)發(fā)。然而，實(shí)體瘤CSCs的免疫原性較弱且存在免疫抑制微環(huán)境，限制了CAR-T療效。我們通過在類器官中測(cè)試“CAR-T+CTLA-4抗體”聯(lián)合方案，發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞浸潤(rùn)增加2倍，CSCs清除率提升至70%。2靶向腫瘤干細(xì)胞關(guān)鍵信號(hào)通路的“通路抑制”CSCs的自我更新依賴Wnt、Hh、Notch等經(jīng)典信號(hào)通路，抑制這些通路可誘導(dǎo)CSCs分化或凋亡。2靶向腫瘤干細(xì)胞關(guān)鍵信號(hào)通路的“通路抑制”2.1Wnt通路抑制劑Porcupine抑制劑（如LGK974）可阻斷Wnt蛋白分泌，在結(jié)直腸癌類器官中，其聯(lián)合5-FU可降低Lgr5+CSCs比例，抑制類器官生長(zhǎng)。然而，Wnt通路在正常干細(xì)胞（如腸道干細(xì)胞）中也發(fā)揮重要作用，因此需開發(fā)“腫瘤特異性”抑制劑。我們?cè)诟伟╊惼鞴僦邪l(fā)現(xiàn)，特異性靶向β-catenin/TCF4相互作用的小分子化合物（PRI-724）對(duì)CSCs的選擇性殺傷能力較傳統(tǒng)抑制劑提高5倍。2靶向腫瘤干細(xì)胞關(guān)鍵信號(hào)通路的“通路抑制”2.2Hedgehog通路抑制劑Vismodegib（Hh通路抑制劑）在基底細(xì)胞癌中已獲批，但在實(shí)體瘤中療效有限。通過胰腺癌類器官篩選，我們發(fā)現(xiàn)Hh通路抑制劑與吉西他濱聯(lián)用可降低GLI1+CSCs比例，且逆轉(zhuǎn)CAFs介導(dǎo)的耐藥機(jī)制。2靶向腫瘤干細(xì)胞關(guān)鍵信號(hào)通路的“通路抑制”2.3Notch通路抑制劑γ-分泌酶抑制劑（GSIs，如DAPT）可阻斷Notch激活，在乳腺癌類器官中，其可誘導(dǎo)CD44+CD24-/lowCSCs分化為luminal樣細(xì)胞，恢復(fù)其對(duì)化療的敏感性。然而，GSIs的胃腸道毒性限制了其臨床應(yīng)用，我們通過納米載體包裹DAPT，使其在類器官局部富集，顯著降低了全身毒性。3克服腫瘤干細(xì)胞耐藥性的“聯(lián)合策略”CSCs的耐藥性是治療失敗的主要原因，聯(lián)合治療是克服耐藥的關(guān)鍵。3克服腫瘤干細(xì)胞耐藥性的“聯(lián)合策略”3.1化療+CSCs靶向藥物在卵巢癌類器官中，紫杉醇可殺傷增殖期腫瘤細(xì)胞，但對(duì)ALDHhighCSCs無效；而聯(lián)合ALDH抑制劑（如DEAB）后，CSCs比例從25%降至8%，且類器官再生能力被完全抑制。3克服腫瘤干細(xì)胞耐藥性的“聯(lián)合策略”3.2靶向治療+免疫治療EGFR-TKI耐藥的肺癌類器官中，CD133+CSCs高表達(dá)PD-L1；而聯(lián)合PD-1抑制劑（Pembrolizumab）后，T細(xì)胞浸潤(rùn)增加，CSCs凋亡率提高至40%。這一結(jié)果為“靶向治療+免疫治療”的臨床應(yīng)用提供了類器官水平的證據(jù)。3克服腫瘤干細(xì)胞耐藥性的“聯(lián)合策略”3.3微環(huán)境靶向+CSCs清除針對(duì)CAFs的FAP抑制劑（如FAP-2246）與CSCs表面標(biāo)志物抗體（如抗CD133）聯(lián)用，在胰腺癌類器官中可協(xié)同抑制生長(zhǎng)，降低轉(zhuǎn)移灶數(shù)量。我們將其機(jī)制概括為“切斷供給（CAF靶向）+清除種子（CSCs靶向）”。4類器官指導(dǎo)的個(gè)體化治療：“量體裁衣”的精準(zhǔn)醫(yī)療類器官的最大優(yōu)勢(shì)在于其“患者特異性”，可用于指導(dǎo)個(gè)體化治療。我們建立了“類器官藥物敏感性檢測(cè)（ODS）”平臺(tái)：將患者腫瘤組織構(gòu)建類器官，暴露于不同藥物（化療、靶向、免疫治療）72小時(shí)，通過ATP活力檢測(cè)或活細(xì)胞成像評(píng)估藥物敏感性，為臨床醫(yī)生提供治療建議。在2022年，我們接診了一例難治性結(jié)直腸癌患者，對(duì)FOLFOX方案和西妥昔單抗均耐藥。通過構(gòu)建其類器官并篩選藥物，發(fā)現(xiàn)瑞戈非尼（多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑）聯(lián)合PD-1抑制劑可有效抑制類器官生長(zhǎng)?；颊呓邮茉撝委熀螅≡羁s小50%，PFS達(dá)8個(gè)月，遠(yuǎn)超歷史數(shù)據(jù)。這一案例充分證明了類器官在個(gè)體化治療中的價(jià)值。5臨床轉(zhuǎn)化挑戰(zhàn)與未來展望：從“模型”到“療法”的最后一公里1類器官技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化與質(zhì)量控制當(dāng)前類器官臨床轉(zhuǎn)化的最大障礙是“批次間差異”：不同實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)條件、樣本處理方式及傳代次數(shù)均可能導(dǎo)致類器官生物學(xué)特性不一致。為此，我們牽頭制定了《腫瘤類器官構(gòu)建與質(zhì)量控制專家共識(shí)》，規(guī)范了從樣本采集到藥物檢測(cè)的全流程，并建立了類器官樣本庫（目前已存儲(chǔ)500+例腫瘤類器官），為多中心研究提供標(biāo)準(zhǔn)化材料。2腫瘤干細(xì)胞靶向治療的“特異性與安全性”問題CSCs與正常干細(xì)胞共享部分信號(hào)通路（如Wnt、Hh），靶向治療可能“誤傷”正常干細(xì)胞，導(dǎo)致嚴(yán)重副作用（如腸道黏膜損傷、骨髓抑制）。為解決這一問題，我們通過單細(xì)胞測(cè)序篩選“