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文檔簡(jiǎn)介
ICS65.020.30
CCSB40
15
內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)
DB15/T4168—2025
奶綿羊超數(shù)排卵-胚胎移植技術(shù)規(guī)程
Codeofpracticeforsuperovulationandembryotransferofdairy
sheep
2025-08-15發(fā)布2025-09-15實(shí)施
內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布
DB15/T4168—2025
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定
起草。
請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。
本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAM/TC19)歸口。
本文件起草單位:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)、內(nèi)蒙古大學(xué)、內(nèi)蒙古烏蘭察布市畜牧工作站、河套學(xué)院、蒙天
然牧業(yè)科技發(fā)展有限公司、內(nèi)蒙古豐東知盈牧業(yè)科技有限公司。
本文件主要起草人:王申元、張立、張立果、蘇小虎、董志岷、鄭重、張滕、張功、劉永斌、劉光
男、薩仁格勒、蘇廣華、朱怡靜、寇慧娟、劉信、劉建寧、劉權(quán)、周揚(yáng)。
I
DB15/T4168—2025
奶綿羊超數(shù)排卵-胚胎移植技術(shù)規(guī)程
1范圍
本文件規(guī)定了奶綿羊超數(shù)排卵-胚胎移植技術(shù)實(shí)施過程中供體羊的選擇與飼養(yǎng)管理、種公羊的選擇
與飼養(yǎng)管理、供體羊的同期發(fā)情、超數(shù)排卵及人工授精、奶綿羊胚胎收集與質(zhì)量鑒定、胚胎移植等技術(shù)
要求。
本文件適用于奶綿羊胚胎生產(chǎn)時(shí)的超數(shù)排卵及胚胎移植。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,
僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本
文件。
NY/T1571羊胚胎移植技術(shù)規(guī)程
DB15/T2042肉羊同期發(fā)情與人工授精技術(shù)規(guī)程
DB15/T3401奶綿羊胚胎冷凍解凍技術(shù)規(guī)程
3術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本文件。
奶綿羊dairysheep
以產(chǎn)奶為主要生產(chǎn)方向的綿羊品種。
超數(shù)排卵superovulation
利用外源性促性腺激素誘發(fā)動(dòng)物卵巢的多個(gè)卵泡同時(shí)發(fā)育,并排出超出自然幾倍到幾十倍具有受
精能力的卵子的過程,簡(jiǎn)稱超排。
胚胎移植embryotransfer
將胚胎生產(chǎn)中獲得的早期胚胎,移植到同種的、生理狀態(tài)相同或相近的其他雌性動(dòng)物體內(nèi),使之繼
續(xù)發(fā)育成新個(gè)體的技術(shù)。
4供體羊的選擇與飼養(yǎng)管理
1
DB15/T4168—2025
供體羊的選擇
應(yīng)符合以下全部條件:
a)符合品種標(biāo)準(zhǔn);
b)產(chǎn)奶性能優(yōu)良、繁殖性能好、遺傳性能穩(wěn)定、譜系清楚;
c)體質(zhì)健壯、無流產(chǎn)史、無傳染性和生殖系統(tǒng)疾??;
d)年齡在1周歲到5周歲之間為宜,繁殖母羊產(chǎn)羔后有兩次以上正常發(fā)情記錄。
供體羊的飼養(yǎng)管理
按照如下要求執(zhí)行:
a)飼養(yǎng)環(huán)境良好,避免應(yīng)激反應(yīng)發(fā)生;
b)合理的日糧配方、充足的清潔飲水、足夠的運(yùn)動(dòng)空間;
c)超排前1個(gè)月開始提高供體羊能量和蛋白供給,適當(dāng)補(bǔ)充青綠飼料、維生素和微量元素等;
d)超排前1個(gè)月完成相關(guān)傳染病的檢疫、防疫及體內(nèi)外驅(qū)蟲等工作。
5種公羊的選擇與飼養(yǎng)管理
種公羊的選擇
應(yīng)符合以下全部條件:
a)符合該品種種公羊的體型外貌,具有明顯的品種特征,系譜完整清楚;
b)體質(zhì)健壯、生殖器官正常、精子活力正常,無傳染和生殖系統(tǒng)疾??;
c)年齡在1.5周歲到6周歲之間為宜。
種公羊飼養(yǎng)管理
按照如下要求執(zhí)行:
a)增加優(yōu)質(zhì)蛋白飼料補(bǔ)充,適當(dāng)提高種公羊?qū)S镁先占Z,添加胡蘿卜、生雞蛋及足量的優(yōu)質(zhì)青
干草和苜蓿;
b)加強(qiáng)公羊運(yùn)動(dòng),每天早晚驅(qū)趕其運(yùn)動(dòng)不應(yīng)少于2h;
c)種公羊在供體羊放栓到超排起針期前完成1~2次的排精;
6供體羊的同期發(fā)情、超數(shù)排卵及人工授精
藥品
PG(氯前列烯醇)、CIDR(孕激素陰道緩釋裝置)、PMSG(孕馬血清促性腺激素)、FSH(促卵泡
生成素/卵泡刺激素)、LH(促黃體生成素)、GnRH(促性腺激素釋放激素)。
供體同期
6.2.1自然發(fā)情或PG同期
以自然發(fā)情或PG注射后的發(fā)情日為第0d。
6.2.2CIDR同期
任意一天放入CIDR,記為第0d。
2
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超數(shù)排卵
6.3.1超數(shù)排卵方法
6.3.1.1自然發(fā)情或PG同期法
供體母羊發(fā)情之日做為發(fā)情周期的第0d,在發(fā)情周期的第12d~13d開始,每天早晚各注射1次
FSH,間隔12h,連續(xù)3d,遞減注射,在注射第6針FSH時(shí)同時(shí)注射PG0.15mg(具體方案見附錄A中表
A.1)。
6.3.1.2孕激素CIDR法
供體母羊在放入CIDR之日計(jì)為第0d,在放入CIDR的第10d開始超排,每天早晚各注射1次FSH,間
隔12h,連續(xù)3d,遞減注射;注射第1針FSH時(shí)±PMSG200IU~300IU;注射第5針FSH同時(shí)肌注PG
0.15mg;在注射第6針FSH時(shí),取出CIDR(具體方案按照附錄A中的表A.1執(zhí)行)。
6.3.2供體羊發(fā)情鑒定
放栓時(shí)觀察供體羊發(fā)情情況,發(fā)情供體羊采用6.3.1.1超排方法,未發(fā)情供體羊采用6.3.1.2超排方
法,發(fā)情鑒定按照NY/T1571相關(guān)要求執(zhí)行。
人工授精
6.4.1采精及精液檢測(cè)
按照DB15/T2042相關(guān)要求執(zhí)行。
6.4.2輸精
6.4.2.1常規(guī)人工輸精
撤栓后24h和36h各輸精一次,操作方法按照NY/T1571相關(guān)要求執(zhí)行。
6.4.2.2腹腔內(nèi)窺鏡輸精
供體羊在撤栓后36h~38h定時(shí)輸精。輸精前24h禁食、禁水,腹腔內(nèi)窺鏡及輸精器械等提前用
0.1%新潔爾滅液浸泡消毒。將待輸精供體羊麻醉、仰臥倒立保定,角度為40°~60°,輸精部位剃毛、
消毒,輸精時(shí)呈;腹腔內(nèi)窺鏡的套管穿刺針在供體羊羊腹部乳房下腹中線兩側(cè)3cm~5cm處的位置分別
插入,然后通過套管分別放入腹腔鏡冷光源和輸精槍,在兩側(cè)子宮角前1/3處進(jìn)行輸精,每側(cè)子宮角輸
精劑量0.1mL~0.2mL、有效精子數(shù)≥3×107個(gè)的鮮精或≥1.5×107個(gè)的凍精。
7奶綿羊胚胎收集與質(zhì)量鑒定
手術(shù)沖胚
術(shù)前、手術(shù)準(zhǔn)備同6.4.2.2,手術(shù)部位同6.4.2.2或按照NY/T1571;沖胚時(shí)子宮角端用7號(hào)輸液針頭
連接軟管或20G靜脈留置針;胚胎收集用12mm表面皿或90mm平皿,其他物品及沖胚流程按照NY/T1571
相關(guān)要求執(zhí)行。
檢胚
3
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無菌10mL注射器吸取胚胎保存液,用0.22μm濾器過濾后注入35mm培養(yǎng)皿2mL,放恒溫臺(tái)上預(yù)
熱;胚胎收集液平皿在體視顯微鏡下檢出胚胎,用移液器或撿胚管將胚胎移入預(yù)熱的35mm培養(yǎng)皿中;
每個(gè)平皿在體視顯微鏡下重復(fù)檢查2~3次。
胚胎質(zhì)量鑒定及記錄
按照附錄B中的表B.1做好采胚記錄。胚胎質(zhì)量鑒定及胚胎冷凍按照DB15/T3401相關(guān)要求執(zhí)行。
8胚胎移植
受體羊的選擇及飼養(yǎng)管理
8.1.1受體羊的選擇
選擇健康、中等膘情以上、繁殖機(jī)能正常,且經(jīng)濟(jì)價(jià)值較低的母羊作為受體羊。
8.1.2受體羊的飼養(yǎng)管理
按照如下要求執(zhí)行:
a)單獨(dú)組群、編號(hào)、飼養(yǎng),保持環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定,避免應(yīng)激反應(yīng);
b)移植前1個(gè)月,注射VADE針劑,補(bǔ)充微量元素,如硒、鋅等;
c)移植前1個(gè)月開始補(bǔ)飼,使其保持中等體況,以滿足妊娠需要;
d)移植前1個(gè)月受體羊已完成檢疫、防疫和驅(qū)蟲等工作。
8.1.3受體同期發(fā)情及鑒定
受體羊放入孕酮海綿栓記為第0d,第10d~12d任意一天即供體羊第5針FSH時(shí)撤栓,并肌注
PMSG250IU~330IU,不必觀察發(fā)情,移植時(shí)卵巢有黃體定性為發(fā)情羊并移植。
8.1.4胚胎發(fā)育期與受體移植時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系
胚胎發(fā)育期與受體移植時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系按照附錄C中的表C.1執(zhí)行。
8.1.5移植方法
8.1.5.1手術(shù)法移植
在受體羊卵巢有黃體側(cè)輸卵管或子宮角進(jìn)行胚胎移植,術(shù)前、手術(shù)準(zhǔn)備及手術(shù)部位同7.1,移植流
程按照NY/T1571相關(guān)要求執(zhí)行。移植記錄表按照附錄D中的表D.1執(zhí)行。
8.1.5.2腹腔內(nèi)窺鏡移植
在受體羊卵巢有黃體側(cè)子宮角進(jìn)行胚胎移植,術(shù)前、手術(shù)準(zhǔn)備及手術(shù)部位同6.4.2.2。一側(cè)通過套
管放入冷光源,另一側(cè)手術(shù)刀片刺入切開0.5cm~1cm小孔插入子宮鉗,牽出子宮角,子宮角前1/3處
移植胚胎。移植記錄表見附錄D中表D.1。
4
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A
A
附錄A
(規(guī)范性)
奶綿羊超數(shù)排卵方案
奶綿羊超數(shù)排卵方案見表A.1。
表A.1奶綿羊超數(shù)排卵方案
發(fā)情周期自然發(fā)情/PG1314151617
天數(shù)(d)CIDR1011121314
早FSH±PMSGFSHFSH±PG發(fā)情、LH/GnRH發(fā)情、AI
時(shí)間
晚FSHFSHFSH+撤栓±PG發(fā)情、AI
注1:AI表示人工授精;500IUFSH用10mL或20mL生理鹽水或?qū)S孟♂屢合♂專?00IULH用2mL生理鹽水稀釋,
100μgGnRH用5mL生理鹽水稀釋;
注2:1周歲中等膘情以上供體羊FSH總劑量270IU左右為宜,即:起針第1d65IU+65IU,第2d45IU+45IU,
第3d25IU+25IU;2周歲經(jīng)產(chǎn)供體羊FSH總劑量300IU~330IU為宜,每d注射劑量在上述劑量的基礎(chǔ)上增
加10IU~20IU;根據(jù)供體羊年齡和體重增加及經(jīng)產(chǎn)與否適度增加FSH劑量,總劑量不超過400IU為宜;
注3:孕激素CIDR同期在第5次注射FSH同時(shí)肌肉注射PG0.15mg;自然發(fā)情/PG同期在第6次注射FSH同時(shí)注射PG0.15
mg;
注4:撤栓12h注射GnRH25μg或撤栓24h注射LH100IU,自然發(fā)情/PG同期供體羊若FSH未注射完供體羊已發(fā)情,
應(yīng)停止注射FSH,并于12h后開始配種;
注5:常規(guī)輸精于撤栓后24h和36h各輸精一次,腹腔內(nèi)窺鏡輸精在撤栓后36h~38h輸精一次即可。
5
DB15/T4168—2025
B
B
附錄B
(規(guī)范性)
供體羊胚胎生產(chǎn)記錄
供體羊胚胎生產(chǎn)記錄見表B.1。
表B.1供體羊胚胎生產(chǎn)記錄表
日期生產(chǎn)地
供體羊號(hào)年齡與配公羊號(hào)年齡
同期方式FSH(產(chǎn)地)
沖胚部位沖胚總數(shù)可用胚數(shù)
胚胎數(shù)量階段級(jí)別移植/冷凍備注
沖胚人檢胚人驗(yàn)收人
注:2-8細(xì)胞(2C、4C、8C)桑椹A級(jí)(M1)、緊縮桑椹A級(jí)(CM1)、早囊A級(jí)(EB1)、囊胚(B)、擴(kuò)張囊胚(EXB)、
桑椹B級(jí)(M2)、緊縮桑椹B級(jí)(CM2)、早囊B級(jí)(EB2)。
6
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C
C
附錄C
(規(guī)范性)
胚胎發(fā)育期與受體移植時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系
胚胎發(fā)育期與受體移植時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系見表C.1。
表C.1胚胎發(fā)育期與受體移植時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系
胚胎發(fā)育期受體移植時(shí)間(發(fā)情之時(shí)為0d)
2~8細(xì)胞胚60h~72h
桑椹胚(M)5.5d±0.5d
早期囊胚(EB)6.0d±0.5d
囊胚(B)6.5d±0.5d
擴(kuò)張囊胚(EXB)7.0d±0.5d
7
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D
D
附錄D
(規(guī)范性)
移植記錄
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