第二章藥品生物檢定技術(shù)基礎(chǔ)知識第一節(jié)生物檢定用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和供試品第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作第三節(jié)動物試驗技術(shù)目錄第二章藥品生物檢定技術(shù)基礎(chǔ)知識學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握

無菌操作技術(shù)及其相關(guān)概念，細菌接種技術(shù)。

熟悉

生物檢定中常用的儀器和基本實驗動物操作技術(shù)。了解

菌種保存方法。第二章藥品生物檢定技術(shù)基礎(chǔ)知識生物檢定用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和供試品第一節(jié)第二章藥品生物檢定技術(shù)基礎(chǔ)知識第一節(jié)生物檢定用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和供試品（一）藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的概念

（1）藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，是藥品檢驗中使用的實物對照物質(zhì)，具有確定特性量值，用于校準(zhǔn)設(shè)備、評價測量方法或者給供試藥品賦值的物質(zhì)，包括標(biāo)準(zhǔn)品、對照品、對照藥材、參考品等。在藥品檢驗中，它是確定藥品真?zhèn)蝺?yōu)劣的對照，是控制藥品質(zhì)量必不可少的工具。根據(jù)測定方法和使用對象不同，藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可分為生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)兩大類。由于使用要求不同，上述兩類又分為國際、國家、工作用三級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。一.

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)第一節(jié)生物檢定用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和供試品（一）藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的概念

（2）生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是用于那些不能用化學(xué)或物理量表示強度，而只能用生物方法測定效價的品種。它是在用生物方法進行檢驗時，使其表示的效價或活性在不同地點、不同條件、不同操作者得出相對一致性結(jié)果的一種工具。只有當(dāng)被測物質(zhì)純度高、結(jié)構(gòu)清楚、用理化方法控制質(zhì)量分析的條件成熟后，該品種的化學(xué)測定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)才應(yīng)建立，生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)才因完成其使命而被停用。一.

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)第一節(jié)生物檢定用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和供試品（二）生物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)效價單位的含義與效價的表示方法目前生物標(biāo)準(zhǔn)品的生物活性統(tǒng)一采用世界衛(wèi)生組織通用的國際單位（IU）或單位（U）表示方法。效價單位是生物檢定中表達藥物效力強弱或活性物質(zhì)含量的一種公認的計量單位，每種對比用的標(biāo)準(zhǔn)品都有法定的效價單位的含義，以資統(tǒng)一。一.

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)第一節(jié)生物檢定用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和供試品（三）標(biāo)準(zhǔn)品與對照品標(biāo)準(zhǔn)品是指用于生物檢定、抗生素或生化藥品中含量測定或效價測定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以效價單位（U）或μg表示，如硫酸鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)品、胰島素標(biāo)準(zhǔn)品等。對照品是指用于鑒別、檢查、含量測定和校正檢定儀器性能的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，包括雜質(zhì)對照品、鑒別對照品等，不包括色譜法中的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，如水楊酸對照品、地高辛對照品等。一.

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)第一節(jié)生物檢定用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和供試品供試品是供檢定用的樣品，可以是制劑，也可以是原料藥或半成品，它的活性組分應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品基本相同。按存在狀態(tài)不同，供試品可分為固體供試品、半固體供試品和液體供試品等，檢定時都需配制或稀釋成一定濃度的供試液。各供試品所含活性成分的性質(zhì)及制劑類別不同，供試液的制備方法亦各異，一般都需制備成與標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度相當(dāng)?shù)墓┰囈骸２煌幤?、不同檢定方法供試液的制備要求不盡相同，詳細內(nèi)容見本教材的相關(guān)章節(jié)。二.

供試品藥品生物檢定技術(shù)的基本操作第二節(jié)第二章藥品生物檢定技術(shù)基礎(chǔ)知識第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（一）采樣

藥品微生物檢定的采樣除了與理化分析法的抽樣一樣，遵循隨機、客觀、均勻、合理的抽樣原則外，還必須對抽樣過程實施有效防止微生物污染的措施，以保證微生物檢測結(jié)果的代表性、真實性和有效性。為此，采樣應(yīng)由專門的無菌采樣員或微生物檢驗員進行具體的采樣工作或?qū)嵤┎蓸拥谋O(jiān)管工作。一.

藥品微生物檢定技術(shù)的基本程序第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（二）樣品檢驗前處理

抽檢的樣品要注意保持完整性和有效性。完整性是指檢測樣品的最小包裝應(yīng)完好無缺，沒有任何破損和污染，可以用消毒液對其外表進行消毒處理而不會影響其內(nèi)在微生物狀況。有效性是指檢測樣品編號的唯一性和可追溯性以及樣品內(nèi)在的微生物能保持其原始數(shù)量和原始狀態(tài)。樣品送入無菌室前，應(yīng)用適宜的消毒溶液對其外表進行消毒處理，在物流中（傳遞窗）經(jīng)紫外線照射30分鐘后進入無菌室，檢驗中注意及時將樣品的唯一性編號轉(zhuǎn)移到最小包裝及傳遞到每一步驟的容器上（可用適宜防水筆），保證實驗結(jié)果的唯一性和正確性。一.

藥品微生物檢定技術(shù)的基本程序第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（三）檢驗記錄和檢驗報告檢驗記錄是出具檢驗報告書的依據(jù)，是進行科學(xué)研究和技術(shù)總結(jié)的原始資料。檢驗記錄必須真實、完整、齊全，不得隨意涂改。若需要涂改，須用斜線將涂改部分劃掉，并簽上涂改者的名字或蓋印章，不得使用涂黑方式，以保證錯誤部分清晰可見。微生物檢驗的記錄中應(yīng)給出實驗環(huán)境檢測情況，包括無菌室的溫度、濕度；無菌室、工作臺面的浮游菌、沉降菌數(shù)；培養(yǎng)基、稀釋液、實驗用品的配制或滅菌批號；陽性對照菌的編號、名稱；所用耗材的批號等，以便必要時作為對實驗結(jié)果分析的依據(jù)。一.

藥品微生物檢定技術(shù)的基本程序第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（三）檢驗記錄和檢驗報告檢驗報告書是對藥品質(zhì)量作出的技術(shù)鑒定，藥檢人員應(yīng)本著嚴(yán)肅負責(zé)的態(tài)度，根據(jù)檢驗記錄，認真書寫。檢驗報告應(yīng)依據(jù)準(zhǔn)確，數(shù)據(jù)無誤，結(jié)論明確，文字簡潔，書寫清晰，格式規(guī)范。檢驗報告一般包括報告編號（是報告相對于樣品的唯一性標(biāo)識）、樣品名稱、批號、劑型、規(guī)格、包裝、數(shù)量、來源、取樣方法和取樣日期、檢驗方法與依據(jù)、檢驗結(jié)果和結(jié)論等。檢驗報告上還須有檢驗者、復(fù)核者和質(zhì)量部門負責(zé)人的簽字或蓋章。檢驗記錄和檢驗報告均須由專人、專柜進行保存，按GMP要求保存期限通常是該批藥品有效期過期后1年。一.

藥品微生物檢定技術(shù)的基本程序第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（一）玻璃類儀器不同的儀器和用具，洗滌和清潔的方法也不同，常用的玻璃儀器包括：試管、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、吸管、載玻片、蓋玻片、注射器、含油脂的器皿。二.

常用儀器第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（二）橡膠類物品（三）金屬器械（四）塑料及有機玻璃器皿

二.

常用儀器第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作無菌技術(shù)主要指在微生物檢定中，控制或防止各類微生物污染及其干擾的一系列操作方法、手段、規(guī)則、程序等，其中包括無菌環(huán)境設(shè)施、無菌實驗器材以及無菌操作等。（一）無菌環(huán)境與半無菌環(huán)境無菌環(huán)境是指人們用物理或化學(xué)的方法，在某一可控空間內(nèi)使懸浮粒子、浮游菌數(shù)量達到最低限度，接近于“無菌”的一種空間?？股匚⑸餀z定要求的環(huán)境是半無菌操作間。半無菌操作間要求設(shè)有紫外燈，在此基礎(chǔ)上還應(yīng)附設(shè)空氣凈化及空調(diào)設(shè)備，控制室溫為20～25℃，達到無菌或半無菌狀態(tài)。三.

無菌操作第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（二）無菌器材1．滅菌器材檢定中使用的器材，能滅菌處理的必須滅菌處理。2．消毒器材檢定中用的樣品、器材無法滅菌處理的，使用前必須經(jīng)消毒處理。三.

無菌操作第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（三）無菌操作1．進入無菌室前的準(zhǔn)備2．檢驗過程中的操作3．操作結(jié)束后的清場三.

無菌操作第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（一）消毒

消毒是指殺滅病原微生物的繁殖體但不能殺死全部微生物的過程。

（二）滅菌

滅菌是用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)方法將物品中的微生物殺滅或除去的方法。四.

消毒與滅菌第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（一）培養(yǎng)基分類及用途

1．按物理性狀劃分為液體、流體、固體、半固體。

2．按用途劃分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、增菌培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基等。（二）培養(yǎng)基制備方法及注意事項

1．容器要求2．校正pH3．分裝

4．滅菌

5．儲存五.

培養(yǎng)基及制備方法第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（一）常用的接種工具

1．接種針

2．接種環(huán)3.接種鉤4.涂布器

六.

微生物接種技術(shù)常用的接種工具第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（二）常用的接種方法

1．斜面接種

2．穿刺接種3.平板接種4.液體接種

六.

微生物接種技術(shù)第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（二）常用的接種方法

穿刺接種（水平法）穿刺接種（垂直法）

六.

微生物接種技術(shù)第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（二）常用的接種方法

劃線接種涂布接種

六.

微生物接種技術(shù)第二節(jié)藥品生物檢定技術(shù)的基本操作（一）菌種的保存方法

1．培養(yǎng)基保存法

2．載體干燥保存法

3．真空冷凍干燥保存法

4．低溫及超低溫保存法（二）菌種的保存管理

七.

菌種的保存與管理動物實驗技術(shù)第三節(jié)第二章藥品生物檢定技術(shù)基礎(chǔ)知識常用實驗動物包括：小鼠、大鼠、豚鼠（又名荷蘭豬）、家兔、犬、貓、小型豬、獼猴等。（一）實驗動物的遺傳學(xué)分類1．近交系2．遠交系3．突變系4．雜交群

（二）實驗動物的微生物學(xué)分類1．普通動物2．清潔動物3．SPF動物4．無菌動物和悉生動物一.

常用實驗動物及分類第三節(jié)動物實驗技術(shù)（一）動物實驗前的準(zhǔn)備1．動物的購入2．動物飼養(yǎng)室及飼養(yǎng)器具準(zhǔn)備二.

基本操作技術(shù)第三節(jié)動物實驗技術(shù)（二）實驗動物隨機分組方法二.

基本操作技術(shù)動物編號123456789101112隨機數(shù)字78386957910374566826541組別乙乙甲甲甲乙甲甲乙乙甲甲隨機分為兩組，以隨機數(shù)字的奇數(shù)代表甲組，偶數(shù)代表乙組第三節(jié)動物實驗技術(shù)（二）實驗動物隨機分組方法二.

基本操作技術(shù)動物編號123456789101112隨機數(shù)字082701501529393943796910除3余數(shù)201202001101組別BCABCBCCAACA隨機分為三組，以3除各隨機數(shù)字，若余數(shù)為1，則歸入A組；余數(shù)為2，則歸入B組；余數(shù)為0，則歸入C組。第三節(jié)動物實驗技術(shù)第三節(jié)動物實驗技術(shù)（三）實驗動物編號的標(biāo)記方法應(yīng)遵循的基本原則：號碼清楚、持久、簡便、易認和適用。染色法、剪耳法、烙印法、斷趾法、剪毛法（四）實驗動物被毛的去除方法剪毛法、拔毛法、剃毛法、脫毛法二.

基本操作技術(shù)（五）實驗動物的抓取與固定

1．小白鼠的抓取與固定2．大白鼠的抓取與固定3．豚鼠的抓取與固定4．兔的抓取和固定5．犬的抓取與固定二.

基本操作技術(shù)第三節(jié)動物實驗技術(shù)（六）實驗動物的麻醉方法1．全身麻醉藥：乙醚、戊巴比妥鈉2．局部麻醉藥：普魯卡因、丁卡因

二.

基本操作技術(shù)第三節(jié)動物實驗技術(shù)（七）實驗動物的給藥方法1．?dāng)z入法給藥（1）自動口服給藥（2）強制灌胃給藥2．注射法給藥（1）皮內(nèi)注射（2）皮下注射（3）腹腔注射（4）肌內(nèi)注射（5）靜脈注射

二.

基本操作技術(shù)第三節(jié)動物實驗技術(shù)（八）實驗動物體液及內(nèi)臟器官的采集方法1．血液采集2．消化液采集3．尿液采集4．內(nèi)臟器官的采集

二.

基本操作技術(shù)第三節(jié)動物實驗技術(shù)（九）實驗動物的處死方法

1．脫頸椎法2．物理和化學(xué)藥物法

二.

基本操作技術(shù)第三節(jié)動物實驗技術(shù)小結(jié)標(biāo)準(zhǔn)品是指用于生物檢定、抗生素或生化藥品中含量測定或效價測定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以效價單位（U）或μg表示;對照品是指用于鑒別、檢查、含量測定和校正檢定儀器性能的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，包括雜質(zhì)對照品、鑒別對照品等