2025年核酸監(jiān)測相關(guān)試題及答案一、單項選擇題（每題2分，共30分）1.核酸檢測中，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)（RT-PCR）的關(guān)鍵步驟不包括以下哪項？A.病毒RNA提取B.逆轉(zhuǎn)錄生成cDNAC.引物與模板退火D.抗原抗體結(jié)合反應(yīng)答案：D解析：RT-PCR的核心是通過逆轉(zhuǎn)錄將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA，再通過PCR擴增?？乖贵w結(jié)合是免疫檢測（如抗原檢測）的原理，與核酸檢測無關(guān)。2.核酸檢測樣本采集時，口咽拭子的正確采樣部位是？A.舌尖B.上顎C.雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁D.牙齦答案：C解析：口咽拭子需擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，這些部位是病毒富集的主要區(qū)域，采樣不準確會導致假陰性。3.用于核酸檢測的病毒保存液中，胍鹽的主要作用是？A.維持pH穩(wěn)定B.滅活病毒，保護核酸C.促進細胞裂解D.防止細菌污染答案：B解析：胍鹽（如異硫氰酸胍）是強變性劑，可破壞病毒結(jié)構(gòu)使其滅活，同時抑制RNA酶活性，防止核酸降解。4.某實驗室使用熒光定量PCR儀檢測樣本，Ct值為38，對照品Ct值為25（陽性閾值為35），該樣本應(yīng)判定為？A.陽性B.陰性C.灰區(qū)需復(fù)檢D.無效答案：B解析：Ct值（循環(huán)閾值）與初始模板量成反比。通常陽性判定標準為Ct≤35，35<Ct≤40需結(jié)合其他指標復(fù)檢，Ct>40一般判定為陰性。本題中樣本Ct=38超過35，且無其他陽性證據(jù)，故判定為陰性。5.核酸檢測實驗室的“三區(qū)兩通道”中，“三區(qū)”指的是？A.試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增分析區(qū)B.清潔區(qū)、半污染區(qū)、污染區(qū)C.辦公區(qū)、實驗區(qū)、緩沖區(qū)D.采樣區(qū)、檢測區(qū)、報告區(qū)答案：A解析：根據(jù)《醫(yī)療機構(gòu)新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊（試行第二版）》，核酸檢測實驗室應(yīng)嚴格分區(qū)為試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)（含核酸提?。?、擴增分析區(qū)，各區(qū)獨立避免交叉污染。6.下列哪種情況會導致核酸檢測假陽性？A.樣本采集后未及時冷藏B.擴增產(chǎn)物污染C.采樣拭子未接觸到感染部位D.試劑過期導致靈敏度下降答案：B解析：擴增產(chǎn)物（如PCR產(chǎn)物）是高濃度核酸片段，若污染實驗室環(huán)境或樣本，會導致非目標樣本被誤判為陽性（假陽性）。其他選項（A、C、D）主要導致假陰性。7.核酸檢測中，內(nèi)參基因（如人RPLP0基因）的作用是？A.驗證樣本中是否存在抑制劑B.提高檢測靈敏度C.區(qū)分不同病毒亞型D.減少實驗誤差答案：A解析：內(nèi)參基因檢測人源管家基因（如RPLP0），若內(nèi)參Ct值異常（如無擴增或Ct值過高），提示樣本采集質(zhì)量差（如采樣量不足）或存在PCR抑制劑（如血紅蛋白、黏液），需重新采樣檢測。8.新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）的核酸類型是？A.雙鏈DNAB.單鏈正鏈RNA（+ssRNA）C.單鏈負鏈RNA（-ssRNA）D.雙鏈RNA答案：B解析：冠狀病毒屬于套式病毒目，基因組為單鏈正鏈RNA（+ssRNA），可直接作為mRNA指導蛋白質(zhì)合成。9.核酸檢測試劑的分析靈敏度（LOD）通常指？A.試劑能檢測到的最低病毒載量B.試劑在不同樣本類型中的檢測能力C.試劑對目標序列的特異性識別能力D.試劑在多次檢測中的重復(fù)性答案：A解析：分析靈敏度（LimitofDetection,LOD）是指試劑能可靠檢測到的最低目標核酸濃度，通常以拷貝數(shù)/毫升（copies/mL）表示。10.大規(guī)模核酸篩查中，混采檢測（10:1混樣）的適用條件不包括？A.低流行地區(qū)B.疑似病例篩查C.常態(tài)化監(jiān)測D.無癥狀感染者篩查答案：B解析：混采檢測適用于低風險、大規(guī)模篩查場景（如常態(tài)化監(jiān)測、無癥狀人群），但疑似病例、密接等高風險人群需單采單檢，避免混樣導致的假陰性風險。11.核酸檢測實驗室生物安全等級要求為？A.BSL-1（一級生物安全實驗室）B.BSL-2（二級生物安全實驗室）C.BSL-3（三級生物安全實驗室）D.BSL-4（四級生物安全實驗室）答案：B解析：新型冠狀病毒屬于第二類病原微生物，根據(jù)《病原微生物實驗室生物安全管理條例》，其檢測應(yīng)在BSL-2實驗室進行，涉及病毒培養(yǎng)時需在BSL-3實驗室。12.核酸提取過程中，磁珠法與柱提法的主要區(qū)別是？A.磁珠法無需離心，自動化程度更高B.柱提法更適合處理大量樣本C.磁珠法對核酸損傷更大D.柱提法提取的核酸純度更低答案：A解析：磁珠法利用磁珠與核酸的特異性結(jié)合，通過磁分離替代離心步驟，更易實現(xiàn)自動化；柱提法需離心過柱，操作步驟多，適合小批量樣本。13.某樣本核酸檢測結(jié)果為N基因陽性、ORF1ab基因陰性，最可能的原因是？A.樣本中存在其他冠狀病毒干擾B.檢測試劑N基因引物失效C.樣本病毒載量極低，僅部分基因擴增D.實驗操作錯誤導致污染答案：C解析：SARS-CoV-2檢測通常需檢測兩個靶基因（如N、ORF1ab）。若僅一個基因陽性，可能因病毒載量低（低于另一個基因的檢測閾值），需結(jié)合Ct值、臨床癥狀及復(fù)檢結(jié)果綜合判斷。14.核酸檢測報告的“檢測時間”應(yīng)填寫？A.樣本接收時間B.PCR擴增結(jié)束時間C.報告審核時間D.實驗室收到樣本后開始檢測的時間答案：B解析：根據(jù)《新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測技術(shù)指南（第四版）》，檢測時間應(yīng)為PCR擴增結(jié)束時間，以確保結(jié)果的時效性和可追溯性。15.下列哪項不符合核酸檢測質(zhì)量控制要求？A.每批次檢測使用弱陽性對照B.樣本提取和擴增區(qū)使用紫外燈消毒C.檢測人員未進行生物安全培訓直接上崗D.定期校準PCR儀溫度傳感器答案：C解析：檢測人員必須經(jīng)過生物安全培訓并考核合格后方可上崗，其他選項（A、B、D）均為質(zhì)量控制的常規(guī)措施。二、多項選擇題（每題3分，共30分，少選、錯選均不得分）1.核酸檢測前處理步驟包括？A.樣本編號登記B.樣本離心（去除雜質(zhì)）C.病毒滅活（如56℃30分鐘）D.加樣至提取儀答案：ABCD解析：前處理包括樣本接收登記、離心（去除黏液等雜質(zhì)）、滅活（生物安全要求）、上樣至提取儀等步驟。2.影響核酸檢測準確性的因素有？A.采樣時機（如發(fā)病早期vs恢復(fù)期）B.采樣人員操作規(guī)范C.樣本運輸溫度（如未4℃保存）D.試劑批間差異答案：ABCD解析：采樣時機（病毒載量峰值期更易檢出）、操作規(guī)范（采樣深度不足）、運輸條件（溫度過高導致核酸降解）、試劑質(zhì)量（批間差異）均會影響結(jié)果準確性。3.熒光定量PCR的常用熒光標記方法包括？A.SYBRGreenⅠ（染料法）B.TaqMan探針法C.分子信標法D.膠體金標記法答案：ABC解析：膠體金標記法用于免疫層析檢測（如抗原檢測），不屬于PCR熒光標記方法。4.核酸檢測實驗室的污染防控措施包括？A.各區(qū)嚴格單向流動（試劑準備區(qū)→樣本處理區(qū)→擴增區(qū)）B.使用帶濾芯的移液器吸頭C.每日檢測后用75%酒精擦拭臺面D.擴增區(qū)與其他區(qū)共用離心機答案：ABC解析：擴增區(qū)需獨立使用設(shè)備（如離心機），避免擴增產(chǎn)物污染其他區(qū)域，故D錯誤。5.混采檢測（10:1）的注意事項包括？A.混采管需標注所有樣本編號B.單管陽性后需對該管10份樣本重新單檢C.混采樣本量需嚴格一致（如每管10份，每份100μL）D.高風險地區(qū)可擴大混采比例至20:1答案：ABC解析：高風險地區(qū)需降低混采比例（如5:1或單采），避免假陰性，故D錯誤。6.核酸檢測中，“假陰性”的常見原因有？A.樣本中病毒載量低于檢測限（如潛伏期早期）B.采樣部位錯誤（如口咽拭子僅擦拭舌頭）C.提取過程中核酸丟失（如磁珠未充分結(jié)合）D.擴增儀溫度校準偏差（如退火溫度過高）答案：ABCD解析：病毒載量低、采樣錯誤、提取效率低、儀器誤差均可能導致假陰性。7.下列屬于核酸檢測生物安全要求的是？A.樣本處理區(qū)佩戴N95口罩、護目鏡、雙層手套B.實驗結(jié)束后，廢棄樣本需高壓蒸汽滅菌（121℃，30分鐘）C.實驗室廢水經(jīng)含氯消毒劑（余氯≥5000mg/L）處理后排放D.檢測人員可在樣本處理區(qū)飲食答案：ABC解析：實驗室任何區(qū)域禁止飲食，故D錯誤。8.新型冠狀病毒變異株（如XBB）的核酸檢測需注意？A.選擇覆蓋保守區(qū)域（如N基因）的檢測試劑B.定期評估試劑對變異株的交叉反應(yīng)性C.變異株出現(xiàn)后需立即更換所有檢測試劑D.若檢測靶基因（如S基因）在變異株中缺失，可能導致“靶標失敗”（TargetFailure）答案：ABD解析：變異株出現(xiàn)后需評估現(xiàn)有試劑的適用性，而非立即更換所有試劑，故C錯誤。9.核酸檢測質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)包括？A.樣本采集與運輸?shù)囊?guī)范性B.試劑的存儲條件（如-20℃保存的引物避免反復(fù)凍融）C.儀器的定期校準（如PCR儀溫度均勻性）D.檢測結(jié)果的雙人審核答案：ABCD解析：質(zhì)量控制需覆蓋全流程，包括樣本、試劑、儀器、人員操作及結(jié)果審核。10.大規(guī)模核酸篩查的組織要點包括？A.合理設(shè)置采樣點（每1000人設(shè)置1個采樣臺）B.采樣人員培訓（如穿脫防護服、樣本保存）C.建立樣本轉(zhuǎn)運“綠色通道”（4小時內(nèi)送達實驗室）D.結(jié)果反饋時間不超過24小時（急診樣本6小時）答案：ABCD解析：大規(guī)模篩查需從采樣點設(shè)置、人員培訓、轉(zhuǎn)運時效到結(jié)果反饋全流程優(yōu)化，確保效率與準確性。三、判斷題（每題1分，共10分，正確填“√”，錯誤填“×”）1.核酸檢測中，咽拭子比鼻拭子采樣更痛苦，因此鼻拭子更常用。（）答案：×解析：鼻拭子因能采集到更深部的病毒（鼻腔后段），敏感性更高，是高風險人群的首選；口咽拭子痛苦較小，適用于大規(guī)模篩查。2.病毒保存液分為滅活型和非滅活型，滅活型保存液可直接用于病毒分離培養(yǎng)。（）答案：×解析：滅活型保存液含胍鹽等變性劑，會破壞病毒結(jié)構(gòu)，無法用于病毒分離；非滅活型保存液（如病毒運輸培養(yǎng)基）可保留病毒活性，用于培養(yǎng)。3.熒光定量PCR中，Ct值越小，說明樣本中初始病毒載量越高。（）答案：√解析：Ct值是PCR擴增達到熒光閾值的循環(huán)數(shù)，初始模板量越多，達到閾值所需循環(huán)數(shù)越少（Ct值越小）。4.核酸檢測實驗室的空氣流向應(yīng)為“污染區(qū)→半污染區(qū)→清潔區(qū)”。（）答案：×解析：為避免污染擴散，空氣應(yīng)從清潔區(qū)（試劑準備區(qū)）向污染區(qū)（擴增區(qū)）單向流動，即“清潔區(qū)→半污染區(qū)→污染區(qū)”。5.混采檢測中，若10:1混采管結(jié)果為陰性，可直接報告該管所有樣本陰性。（）答案：√解析：混采管陰性說明管內(nèi)所有樣本均未檢出目標核酸，可直接報告陰性；若陽性則需對該管樣本重新單檢。6.核酸提取完成后，可將提取產(chǎn)物長時間（>2小時）置于室溫，不影響后續(xù)擴增。（）答案：×解析：提取的核酸（尤其是RNA）易被環(huán)境中的RNA酶降解，需及時進行擴增（2小時內(nèi)）或-20℃保存。7.檢測試劑的“批內(nèi)差異”是指同一批次試劑在不同實驗室的檢測結(jié)果差異。（）答案：×解析：批內(nèi)差異指同一批次試劑在同一實驗室重復(fù)檢測的結(jié)果一致性；不同批次或?qū)嶒炇业牟町悓儆凇芭g差異”或“實驗室間差異”。8.核酸檢測報告中需注明檢測方法（如“熒光定量PCR”）和檢測試劑名稱及批號。（）答案：√解析：根據(jù)《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》，報告需包含檢測方法、試劑信息等，確保結(jié)果可追溯。9.新型冠狀病毒核酸檢測中，陰性結(jié)果可完全排除感染。（）答案：×解析：陰性結(jié)果可能因采樣時機（如潛伏期）、操作誤差等導致假陰性，需結(jié)合流行病學史、臨床癥狀及其他檢測（如抗原、抗體）綜合判斷。10.核酸檢測實驗室的醫(yī)療廢物（如防護服、拭子）需分類收集，使用雙層黃色醫(yī)療廢物袋，鵝頸結(jié)封裝。（）答案：√解析：生物安全實驗室的醫(yī)療廢物需雙層包裝，鵝頸結(jié)封裝，防止泄漏，符合《醫(yī)療廢物管理條例》要求。四、簡答題（每題6分，共30分）1.簡述RT-PCR檢測新型冠狀病毒的基本流程。答案：RT-PCR檢測流程包括以下步驟：（1）樣本采集與處理：使用咽拭子/鼻拭子采集樣本，放入病毒保存液中，4℃運輸至實驗室；（2）樣本滅活（可選）：若使用非滅活保存液，需56℃孵育30分鐘滅活病毒；（3）核酸提?。和ㄟ^磁珠法或柱提法從樣本中提取病毒RNA；（4）逆轉(zhuǎn)錄（RT）：以病毒RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄酶催化生成cDNA；（5）PCR擴增：加入特異性引物、探針及PCR反應(yīng)體系，進行變性（95℃）、退火（55-60℃）、延伸（72℃）循環(huán)，實時監(jiān)測熒光信號；（6）結(jié)果分析：根據(jù)Ct值判定陽性（Ct≤35）、陰性（Ct>40）或灰區(qū)（35<Ct≤40需復(fù)檢）；（7）報告審核：雙人核對結(jié)果，生成檢測報告。2.列舉3種核酸檢測質(zhì)量控制的關(guān)鍵措施，并說明其作用。答案：（1）設(shè)置陰/陽性對照：每批次檢測加入陰性對照（無核酸模板）和弱陽性對照（接近LOD的核酸），用于監(jiān)測實驗是否存在污染（陰性對照陽性提示污染）或試劑靈敏度（弱陽性對照未檢出提示試劑失效）。（2）內(nèi)參基因檢測：檢測人源管家基因（如RPLP0），若內(nèi)參無擴增或Ct值過高，提示樣本采集質(zhì)量差（如采樣量不足）或存在PCR抑制劑（如血紅蛋白），需重新采樣。（3）儀器校準：定期校準PCR儀的溫度傳感器（如使用溫度驗證模塊），確保變性、退火溫度準確，避免因溫度偏差導致擴增效率下降（假陰性）或非特異性擴增（假陽性）。3.說明大規(guī)模核酸篩查中“10:1混采檢測”的優(yōu)勢與潛在風險。答案：優(yōu)勢：（1）提高效率：10份樣本混合檢測，可將檢測通量提升10倍，適用于低風險地區(qū)大規(guī)模篩查；（2）降低成本：減少試劑、耗材及人力消耗，適合常態(tài)化監(jiān)測；（3）縮短報告時間：批量處理樣本，加快結(jié)果反饋。潛在風險：（1）假陰性風險：若混采管中某份樣本病毒載量極低（接近LOD），混合后濃度被稀釋，可能導致Ct值超過閾值（假陰性）；（2）復(fù)檢成本：混采管陽性需對10份樣本重新單檢，若陽性率較高（如>1%），復(fù)檢工作量可能抵消混采優(yōu)勢；（3）樣本混淆：混采管需嚴格標注所有樣本編號，操作失誤可能導致結(jié)果與樣本對應(yīng)錯誤。4.簡述核酸檢測實驗室生物安全防護的主要要求。答案：（1）實驗室等級：新型冠狀病毒檢測需在BSL-2實驗室進行，涉及病毒培養(yǎng)時需在BSL-3實驗室；（2）個人防護裝備（PPE）：樣本處理區(qū)需佩戴N95口罩、護目鏡/面屏、雙層手套、防護服（如一次性隔離衣）；（3）操作規(guī)范：樣本滅活（非滅活樣本需56℃30分鐘）、使用生物安全柜（BSC）進行開蓋、加樣等操作，避免氣溶膠擴散；（4）廢物處理：醫(yī)療廢物雙層黃色袋封裝，高壓蒸汽滅菌（121℃，30分鐘）后按醫(yī)療廢物處理；廢水經(jīng)含氯消毒劑（余氯≥5000mg/L）處理后排放；（5）環(huán)境消毒：每日檢測后用75%酒精或0.2%含氯消毒液擦拭臺面，紫外燈照射（30分鐘以上）消毒空氣；（6）人員培訓：檢測人員需經(jīng)過生物安全培訓，考核合格后方可上崗，定期進行應(yīng)急演練（如樣本泄漏處理）。5.分析核酸檢測結(jié)果“N基因陽性、ORF1ab基因陰性”的可能原因及處理建議。答案：可能原因：（1）病毒載量極低：樣本中病毒RNA含量僅夠N基因擴增（N基因拷貝數(shù)高于ORF1ab基因），ORF1ab基因因濃度低于檢測限未擴增；（2）檢測試劑特異性問題：試劑對ORF1ab基因的引物/探針與病毒變異株不匹配（如變異導致結(jié)合位點突變）；（3）實驗誤差：如加樣錯誤（僅N基因體系加樣成功）、擴增儀孔位故障（ORF1ab基因所在孔未加熱）。處理建議：（1）復(fù)檢：使用同一試劑重新檢測原樣本，若結(jié)果一致，需結(jié)合臨床信息（如癥狀、接觸史）判斷；（2）換用不同試劑檢測：若其他試劑檢測兩個基因均陽性，提示原試劑可能存在靶標不匹配；（3）采樣復(fù)查：若臨床高度懷疑感染，重新采集樣本（鼻拭子優(yōu)先）進行檢測；（4）變異株監(jiān)測：若多次出現(xiàn)單基因陽性，需將樣本送疾控中心進行全基因組測序，確認是否為變異株（如S基因缺失的奧密克戎亞型）。五、案例分析題（每題10分，共20分）案例1：某社區(qū)開展全員核酸篩查，采用10:1混采檢測。實驗室反饋某混采管結(jié)果為陽性（Ct=32），但復(fù)核時發(fā)現(xiàn)該管10份樣本中單檢結(jié)果均為陰性（Ct>40）。問題：（1）可能導致該現(xiàn)象的原因是什么？（2）實驗室應(yīng)如何處理此類情況？答案：（1）可能原因：①混采管污染：混采管在運輸或?qū)嶒炇姨幚磉^程中被擴增產(chǎn)物（如其他陽性樣本的PCR產(chǎn)物）污染，導致混采管假陽性；②樣本交叉污染：采樣時，某份樣本的拭子接觸到其他陽性樣本，或混采管加樣時移液器未更換吸頭，導致污染；③試劑誤差：混采檢測時試劑靈敏度較高（如LOD=100copies/mL），單檢時因試劑批次差異或操作誤差，未達到檢測限；④樣本保存不當：混采管保存時間過長（如超過24小時未檢測），病毒RNA降解，單檢時無法檢出。（2）處理措施：①追溯全流程：檢查混采管的采樣記錄、運輸時