臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)人員PCR上崗證培訓(xùn)考試試題及答案一、單選題（每題1分，共30分。每題只有一個(gè)最佳答案，請(qǐng)將正確選項(xiàng)字母填入括號(hào)內(nèi)）1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，用于消除引物二聚體干擾的最常用熒光探針類型是（）A.SYBRGreenIB.TaqManC.FRETD.MolecularBeacon答案：B2.根據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》，PCR實(shí)驗(yàn)室空氣流向應(yīng)遵循（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)，壓力遞減B.試劑準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)，壓力遞增C.擴(kuò)增區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→試劑準(zhǔn)備區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)，壓力遞減D.產(chǎn)物分析區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→試劑準(zhǔn)備區(qū)，壓力遞增答案：A3.下列哪項(xiàng)不是UNG酶防污染體系必需組分（）A.dUTPB.UNG酶C.50℃預(yù)孵育步驟D.石蠟油答案：D4.在TaqMan探針5′端標(biāo)記FAM、3′端標(biāo)記BHQ1時(shí)，熒光信號(hào)產(chǎn)生的機(jī)制是（）A.FRET效率降低B.探針降解后FAM遠(yuǎn)離BHQ1C.探針退火導(dǎo)致熒光淬滅D.引物延伸導(dǎo)致FAM熒光增強(qiáng)答案：B5.關(guān)于內(nèi)標(biāo)（IC）敘述正確的是（）A.內(nèi)標(biāo)必須與被測(cè)靶基因使用相同引物B.內(nèi)標(biāo)可用于監(jiān)控提取效率及擴(kuò)增抑制C.內(nèi)標(biāo)Ct值越高說(shuō)明抑制越輕D.內(nèi)標(biāo)只能采用人工合成RNA答案：B6.下列哪項(xiàng)操作可降低氣溶膠污染風(fēng)險(xiǎn)（）A.擴(kuò)增產(chǎn)物在產(chǎn)物分析區(qū)開蓋稀釋B.標(biāo)本制備區(qū)使用正壓通風(fēng)C.試劑準(zhǔn)備區(qū)與標(biāo)本制備區(qū)共用移液器D.擴(kuò)增結(jié)束后立即離心產(chǎn)物管答案：D7.實(shí)時(shí)熒光PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率為3.32，則擴(kuò)增效率為（）A.90%B.95%C.100%D.105%答案：C8.關(guān)于質(zhì)控品濃度設(shè)置，以下最合理的是（）A.高、中、低三個(gè)濃度，低值接近檢測(cè)限2倍B.僅需設(shè)置一個(gè)陰性對(duì)照即可C.高值應(yīng)高于線性范圍上限10倍D.低值應(yīng)低于檢測(cè)限50%答案：A9.下列哪種標(biāo)本類型需采用4℃以下冷鏈運(yùn)輸（）A.石蠟包埋組織B.EDTA抗凝全血C.干燥血斑D.唾液樣本答案：B10.關(guān)于PCR試劑性能驗(yàn)證，錯(cuò)誤的是（）A.精密度驗(yàn)證需連續(xù)檢測(cè)20天B.檢測(cè)限驗(yàn)證采用95%檢出概率C.線性范圍驗(yàn)證需覆蓋宣稱范圍D.特異性驗(yàn)證需包含同源序列答案：A11.下列哪項(xiàng)不是臨床PCR實(shí)驗(yàn)室生物安全二級(jí)要求（）A.生物安全柜B.高壓滅菌器C.洗眼器D.正壓防護(hù)服答案：D12.關(guān)于Taq酶熱啟動(dòng)技術(shù)，正確的是（）A.采用抗體封閉酶活性B.需額外添加Mg2+C.延伸溫度需提高至75℃D.引物二聚體必然消失答案：A13.下列哪項(xiàng)可導(dǎo)致假陰性結(jié)果（）A.引物與同源序列結(jié)合B.標(biāo)本中血紅蛋白濃度過高C.探針濃度過高D.陰性對(duì)照污染答案：B14.關(guān)于數(shù)字PCR描述正確的是（）A.依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線定量B.可絕對(duì)定量靶分子拷貝數(shù)C.需使用TaqMan探針D.不能檢測(cè)單拷貝差異答案：B15.下列哪項(xiàng)屬于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制的“實(shí)時(shí)質(zhì)控”（）A.室間質(zhì)評(píng)B.平行雙樣檢測(cè)C.標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率監(jiān)控D.第三方能力驗(yàn)證答案：C16.關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)標(biāo)識(shí)，錯(cuò)誤的是（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)為藍(lán)色標(biāo)識(shí)B.標(biāo)本制備區(qū)為黃色標(biāo)識(shí)C.擴(kuò)增區(qū)為紅色標(biāo)識(shí)D.產(chǎn)物分析區(qū)為綠色標(biāo)識(shí)答案：D17.下列哪項(xiàng)可導(dǎo)致熔解曲線出現(xiàn)雜峰（）A.探針濃度過低B.引物二聚體形成C.模板濃度過高D.退火溫度過高答案：B18.關(guān)于臨床PCR報(bào)告，正確的是（）A.Ct值無(wú)需報(bào)告B.結(jié)果解釋可引用文獻(xiàn)C.檢測(cè)限需在報(bào)告中注明D.內(nèi)標(biāo)Ct值無(wú)需審核答案：C19.下列哪項(xiàng)屬于實(shí)驗(yàn)室“人、機(jī)、料、法、環(huán)”中的“機(jī)”（）A.生物安全柜B.標(biāo)準(zhǔn)操作程序C.質(zhì)控品D.技術(shù)人員答案：A20.關(guān)于TaqMan探針設(shè)計(jì)，錯(cuò)誤的是（）A.Tm值應(yīng)比引物高510℃B.GC含量3080%C.避免連續(xù)GD.5′端C堿基數(shù)量無(wú)限制答案：D21.下列哪項(xiàng)屬于實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)（LIS）功能（）A.自動(dòng)判定結(jié)果B.生成標(biāo)準(zhǔn)曲線C.記錄溫濕度D.設(shè)計(jì)引物探針答案：C22.關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室清潔消毒，正確的是（）A.75%乙醇可滅活DNAB.含氯消毒劑需現(xiàn)配現(xiàn)用C.紫外照射30分鐘即可完全降解RNAD.擴(kuò)增產(chǎn)物可用酒精擦拭清除答案：B23.下列哪項(xiàng)屬于實(shí)驗(yàn)室“不符合項(xiàng)”處理流程（）A.立即銷毀記錄B.填寫糾正措施表C.通知供應(yīng)商D.重新校準(zhǔn)設(shè)備答案：B24.關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室人員培訓(xùn)，錯(cuò)誤的是（）A.新員工需經(jīng)能力確認(rèn)B.每?jī)赡晷柚匦驴己薈.考核通過后方可獨(dú)立上崗D.培訓(xùn)記錄保存至少3年答案：B25.下列哪項(xiàng)可導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值降低（）A.模板稀釋梯度不足B.探針濃度過高C.退火溫度優(yōu)化D.內(nèi)標(biāo)加入答案：A26.關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室文件控制，正確的是（）A.文件可隨意手寫修改B.作廢文件立即銷毀C.文件需定期審核D.外來(lái)文件無(wú)需控制答案：C27.下列哪項(xiàng)屬于實(shí)驗(yàn)室“風(fēng)險(xiǎn)管理”內(nèi)容（）A.設(shè)備校準(zhǔn)B.風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估C.室內(nèi)質(zhì)控D.室間質(zhì)評(píng)答案：B28.關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室溫濕度要求，正確的是（）A.溫度1826℃，濕度3070%B.溫度1530℃，濕度2080%C.溫度2025℃，濕度4060%D.溫度1628℃，濕度2575%答案：A29.下列哪項(xiàng)屬于實(shí)驗(yàn)室“持續(xù)改進(jìn)”工具（）A.魚骨圖B.標(biāo)準(zhǔn)曲線C.陰性對(duì)照D.陽(yáng)性對(duì)照答案：A30.關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理，錯(cuò)誤的是（）A.銳器盒需防刺穿B.醫(yī)療廢物專用袋為黃色C.擴(kuò)增產(chǎn)物可隨生活垃圾丟棄D.廢棄物需登記交接答案：C二、多選題（每題2分，共20分。每題有兩個(gè)或兩個(gè)以上正確答案，多選、少選、錯(cuò)選均不得分）31.下列哪些屬于PCR實(shí)驗(yàn)室“三區(qū)兩通道”要求（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.標(biāo)本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)E.污物通道答案：ABCE32.關(guān)于TaqMan探針設(shè)計(jì)原則，正確的是（）A.長(zhǎng)度1330bpB.Tm值6570℃C.避免5′端GD.GC含量2030%E.避免連續(xù)相同堿基＞4個(gè)答案：ABCE33.下列哪些屬于實(shí)驗(yàn)室“室內(nèi)質(zhì)控”內(nèi)容（）A.陰性對(duì)照B.陽(yáng)性對(duì)照C.標(biāo)準(zhǔn)曲線D.室間質(zhì)評(píng)E.內(nèi)標(biāo)監(jiān)控答案：ABCE34.關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室生物安全，正確的是（）A.標(biāo)本制備區(qū)使用B2型生物安全柜B.離心機(jī)需配氣密性吊籃C.實(shí)驗(yàn)人員需接種乙肝疫苗D.廢棄物需高壓滅菌E.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立即洗手答案：BCDE35.下列哪些可導(dǎo)致實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增效率降低（）A.引物二聚體B.模板降解C.抑制物存在D.探針濃度過高E.退火溫度過低答案：ABC36.關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)備校準(zhǔn)，正確的是（）A.移液器每年校準(zhǔn)一次B.溫度計(jì)需溯源C.離心機(jī)轉(zhuǎn)速需校準(zhǔn)D.生物安全柜氣流需檢測(cè)E.熒光定量PCR儀需校準(zhǔn)熒光通道答案：ABCDE37.下列哪些屬于實(shí)驗(yàn)室“記錄”要求（）A.實(shí)時(shí)填寫B(tài).簽名完整C.不得涂改D.保存期限≥3年E.可電子保存答案：ABDE38.關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室人員管理，正確的是（）A.需建立技術(shù)檔案B.需年度考核C.需授權(quán)上崗D.需健康監(jiān)測(cè)E.可交叉進(jìn)入各區(qū)域答案：ABCD39.下列哪些屬于實(shí)驗(yàn)室“外部質(zhì)控”內(nèi)容（）A.室間質(zhì)評(píng)B.能力驗(yàn)證C.第三方質(zhì)控品D.標(biāo)準(zhǔn)曲線E.平行雙樣答案：ABC40.關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室“風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估”內(nèi)容，正確的是（）A.標(biāo)本溢灑B.設(shè)備故障C.人員短缺D.電力中斷E.結(jié)果誤判答案：ABCDE三、判斷題（每題1分，共10分。正確打“√”，錯(cuò)誤打“×”）41.SYBRGreenI可區(qū)分單堿基突變。（）答案：×42.臨床PCR實(shí)驗(yàn)室可接受口頭申請(qǐng)修改報(bào)告。（）答案：×43.擴(kuò)增產(chǎn)物在產(chǎn)物分析區(qū)開蓋后需立即進(jìn)行紫外照射。（）答案：√44.數(shù)字PCR無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)曲線即可絕對(duì)定量。（）答案：√45.實(shí)驗(yàn)室文件可手寫修改，但需簽名注明日期。（）答案：√46.實(shí)驗(yàn)室“質(zhì)量控制”僅指室內(nèi)質(zhì)控。（）答案：×47.實(shí)驗(yàn)室“管理評(píng)審”每年至少一次。（）答案：√48.實(shí)驗(yàn)室“不符合項(xiàng)”必須通知客戶。（）答案：×49.實(shí)驗(yàn)室“持續(xù)改進(jìn)”可通過PDCA循環(huán)實(shí)現(xiàn)。（）答案：√50.實(shí)驗(yàn)室“風(fēng)險(xiǎn)管理”只需在建立時(shí)進(jìn)行一次。（）答案：×四、填空題（每空1分，共20分）51.實(shí)時(shí)熒光PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線橫坐標(biāo)為________，縱坐標(biāo)為________。答案：log10（起始拷貝數(shù)），Ct值52.TaqMan探針5′端標(biāo)記________，3′端標(biāo)記________。答案：熒光報(bào)告基團(tuán)，淬滅基團(tuán)53.PCR實(shí)驗(yàn)室“三區(qū)”指________、________、________。答案：試劑準(zhǔn)備區(qū)，標(biāo)本制備區(qū)，擴(kuò)增區(qū)54.實(shí)驗(yàn)室“人、機(jī)、料、法、環(huán)”中“料”指________。答案：試劑、耗材、標(biāo)本55.實(shí)驗(yàn)室“文件控制”要求文件需定期________，作廢文件需________。答案：審核，標(biāo)識(shí)隔離56.實(shí)驗(yàn)室“記錄”保存期限不得少于________年。答案：357.實(shí)驗(yàn)室“設(shè)備校準(zhǔn)”需使用________標(biāo)準(zhǔn)。答案：可溯源58.實(shí)驗(yàn)室“室內(nèi)質(zhì)控”中，陰性對(duì)照Ct值應(yīng)________。答案：Undet或≥4059.實(shí)驗(yàn)室“檢測(cè)限”通常采用________概率確定。答案：95%60.實(shí)驗(yàn)室“風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估”結(jié)果需形成________。答案：風(fēng)險(xiǎn)清單及控制措施五、簡(jiǎn)答題（每題10分，共30分）61.簡(jiǎn)述實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線制備步驟及合格標(biāo)準(zhǔn)。答案：（1）選擇已知濃度質(zhì)?；蝮w外轉(zhuǎn)錄RNA，用TE緩沖液10倍梯度稀釋56個(gè)梯度，最低濃度應(yīng)接近檢測(cè)限；（2）每個(gè)梯度重復(fù)3孔，取均值；（3）以log10（拷貝數(shù)）為橫坐標(biāo)、Ct值為縱坐標(biāo)繪制散點(diǎn)圖，線性回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線；（4）合格標(biāo)準(zhǔn)：R2≥0.99，斜率3.10~3.60（效率90110%），截距35±3；（5）每批實(shí)驗(yàn)同步運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線，若失控需查找原因并重做。62.簡(jiǎn)述PCR實(shí)驗(yàn)室“防止污染”的綜合措施。答案：（1）嚴(yán)格分區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)單向流動(dòng)，壓力遞減，獨(dú)立人流物流通道；（2）物理隔離：各區(qū)獨(dú)立通風(fēng)、獨(dú)立潔具、獨(dú)立移液器、獨(dú)立工作服；（3）試劑控制：使用dUTPUNG體系，50℃預(yù)孵育消化潛在產(chǎn)物；（4）操作規(guī)范：開蓋動(dòng)作輕柔，使用帶濾芯吸頭，離心后靜置2分鐘再開蓋；（5）清潔消毒：每日工作前后用0.5%含氯消毒劑擦拭臺(tái)面，紫外照射30分鐘；（6）廢棄物管理：擴(kuò)增產(chǎn)物管高壓滅菌后丟棄，銳器入專用盒；（7）人員管理：限制交叉進(jìn)入，進(jìn)入擴(kuò)增區(qū)需更換手套、鞋套；（8）定期監(jiān)測(cè)：每周用空白拭子擦拭臺(tái)面、移液器手柄，提取后PCR檢測(cè)，Ct＜35視為污染，立即啟動(dòng)追溯與糾正。63.簡(jiǎn)述臨床PCR實(shí)驗(yàn)室“性能驗(yàn)證”方案及可接受標(biāo)準(zhǔn)。答案：（1）精密度：連續(xù)5天，每天3批，每批重復(fù)3孔，檢測(cè)高、中、低三個(gè)濃度，計(jì)