電泳儀操作指南一、電泳儀基本組成與工作原理電泳儀是實(shí)驗(yàn)室常用的分離分析儀器，主要由電源、電泳槽、檢測單元三部分組成。其核心原理是利用不同物質(zhì)所帶電荷和分子量的差異，在電場作用下實(shí)現(xiàn)分離。當(dāng)樣品處于直流電場中時(shí)，帶正電荷的物質(zhì)向陰極移動(dòng)，帶負(fù)電荷的物質(zhì)向陽極移動(dòng)，移動(dòng)速度取決于電荷密度、分子量及緩沖液黏度等因素。電源提供穩(wěn)定的電壓、電流或功率輸出，電泳槽為樣品分離提供密閉環(huán)境，檢測單元?jiǎng)t用于觀察或記錄分離結(jié)果。不同類型的電泳儀（如瓊脂糖凝膠電泳儀、聚丙烯酰胺凝膠電泳儀等）雖結(jié)構(gòu)略有差異，但均遵循這一基本工作邏輯。二、操作前準(zhǔn)備工作（一）儀器檢查與環(huán)境要求電源檢查確認(rèn)電源開關(guān)處于關(guān)閉狀態(tài)，電壓旋鈕調(diào)至最小位置，避免開機(jī)時(shí)瞬間電流過大。檢查電源線是否破損，插頭接地端是否完好，確保儀器接地正常。對(duì)于多槽聯(lián)用的電泳儀，需核實(shí)各槽額定電流總和不超過儀器最大負(fù)載（通常標(biāo)注于機(jī)身銘牌）。電泳槽檢查清理電泳槽內(nèi)殘留緩沖液或雜質(zhì)，檢查電極是否氧化生銹，必要時(shí)用砂紙輕輕打磨。確認(rèn)槽體密封良好，無漏液現(xiàn)象。對(duì)于垂直電泳槽，需檢查玻璃板是否潔凈、無裂痕，膠條是否老化，防止漏膠；水平電泳槽則需檢查托盤平整度，避免凝膠放置時(shí)傾斜。環(huán)境條件儀器應(yīng)放置在干燥通風(fēng)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，遠(yuǎn)離水源、火源及腐蝕性氣體。環(huán)境溫度建議控制在15-30℃，相對(duì)濕度不超過70%，避免潮濕導(dǎo)致儀器短路或部件銹蝕。（二）試劑與樣品準(zhǔn)備緩沖液配制根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的緩沖液體系（如Tris-硼酸-EDTA（TBE）、Tris-乙酸-EDTA（TAE）等），使用分析純試劑和去離子水配制，確保濃度準(zhǔn)確。緩沖液需現(xiàn)配現(xiàn)用，長期存放需密封冷藏，并在使用前恢復(fù)至室溫，避免溫度變化影響離子強(qiáng)度。樣品預(yù)處理樣品需經(jīng)適當(dāng)稀釋或濃縮，濃度過高可能導(dǎo)致條帶拖尾，過低則難以檢測。蛋白質(zhì)樣品通常需與上樣緩沖液（含SDS、β-巰基乙醇等）混合，沸水浴加熱5-10分鐘使蛋白變性；核酸樣品則需加入LoadingBuffer，其中的溴酚藍(lán)可作為電泳前沿指示劑。凝膠制備以瓊脂糖凝膠為例，按濃度要求稱取瓊脂糖粉末，加入緩沖液后加熱至完全溶解，冷卻至50-60℃時(shí)加入核酸染料（如EB或SYBRGreen），輕輕混勻后倒入制膠槽，插入梳子，避免產(chǎn)生氣泡。凝膠凝固后（約30分鐘），小心拔出梳子，將凝膠連同托盤放入電泳槽，倒入足量緩沖液，確保液面高出凝膠表面1-2mm。三、儀器操作流程（一）電極連接與參數(shù)設(shè)置電極連接用導(dǎo)線連接電泳儀輸出端與電泳槽電極，紅色導(dǎo)線接陽極（+），黑色導(dǎo)線接陰極（-），確保極性正確。若連接錯(cuò)誤，樣品將反向遷移，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。連接時(shí)需注意插頭與接口匹配，避免強(qiáng)行插拔損壞接口。開機(jī)與模式選擇按下電源開關(guān)，儀器進(jìn)行系統(tǒng)初始化，顯示屏出現(xiàn)歡迎界面（如“歡迎使用DYY-12型電腦三恒多用電泳儀”），初始化完成后進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)置狀態(tài)。通過“模式”鍵選擇工作模式，常見模式包括：標(biāo)準(zhǔn)模式（STD）：按設(shè)定參數(shù)持續(xù)輸出，需手動(dòng)終止；定時(shí)模式（TIME）：達(dá)到設(shè)定時(shí)間后自動(dòng)關(guān)閉輸出；伏時(shí)模式（VH）：電壓與時(shí)間乘積達(dá)到設(shè)定值時(shí)關(guān)閉輸出；分步模式（STEP）：可設(shè)置多段不同參數(shù)的連續(xù)運(yùn)行程序。參數(shù)設(shè)定根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求設(shè)置電壓（U）、電流（I）、功率（P）及時(shí)間（T）參數(shù)，三者需滿足“功率=電壓×電流”的關(guān)系，通常優(yōu)先固定電壓或電流。例如：瓊脂糖凝膠電泳常用穩(wěn)壓模式，電壓設(shè)置為80-150V，時(shí)間30-60分鐘；聚丙烯酰胺凝膠電泳常用穩(wěn)流模式，電流設(shè)置為10-30mA，時(shí)間1-2小時(shí)。參數(shù)設(shè)置后需檢查限制值是否合理，如設(shè)置電壓1000V時(shí)，需將電流限制在儀器允許范圍內(nèi)（如200mA），防止過載。（二）樣品上樣與運(yùn)行上樣操作使用微量移液器吸取樣品，垂直對(duì)準(zhǔn)凝膠加樣孔上方1-2mm處緩慢釋放，避免針尖刺破凝膠或帶入氣泡。上樣量需根據(jù)加樣孔容量調(diào)整（通常10-20μL），相鄰樣品間需更換槍頭，防止交叉污染。啟動(dòng)電泳參數(shù)確認(rèn)無誤后，按下“啟動(dòng)”鍵，儀器開始輸出，顯示屏實(shí)時(shí)顯示當(dāng)前電壓、電流、功率及剩余時(shí)間。電泳過程中需觀察樣品遷移方向是否正確（如溴酚藍(lán)指示劑向陽極移動(dòng)），并檢查電泳槽是否漏液、儀器是否有異常噪音或氣味。運(yùn)行中監(jiān)控定時(shí)觀察凝膠遷移情況，避免樣品跑出凝膠。對(duì)于需要精確控制的實(shí)驗(yàn)（如DNA測序），可通過“暫?！辨I臨時(shí)中斷運(yùn)行，檢查后重新啟動(dòng)。若發(fā)現(xiàn)電流異常升高（可能因緩沖液離子強(qiáng)度過高）或電壓驟降（可能因電極接觸不良），需立即停機(jī)排查。（三）實(shí)驗(yàn)終止與儀器關(guān)閉終止電泳當(dāng)指示劑遷移至凝膠合適位置（如距邊緣1-2cm）或達(dá)到設(shè)定時(shí)間后，按下“停止”鍵，關(guān)閉電源開關(guān)。若為定時(shí)模式，儀器將自動(dòng)終止輸出并發(fā)出提示音。樣品回收與清理小心取出凝膠，根據(jù)檢測需求進(jìn)行染色（如考馬斯亮藍(lán)染色蛋白質(zhì)凝膠）或直接置于凝膠成像系統(tǒng)中觀察。倒出電泳槽內(nèi)緩沖液，用去離子水沖洗槽體及電極，垂直電泳槽需拆卸玻璃板，清理殘留凝膠碎片，避免堵塞排水孔。四、不同類型電泳儀的特殊操作（一）DYY-12型電腦三恒多用電泳儀程序調(diào)用與保存該型號(hào)支持10組程序存儲(chǔ)（M0-M9），按“讀取”鍵可調(diào)用上次程序，按“讀取+數(shù)字鍵+確認(rèn)”可調(diào)用指定組程序（如讀取M5程序需按“讀取→5→確認(rèn)”）。新程序設(shè)置完成后，按“保存+數(shù)字鍵+確認(rèn)”可將參數(shù)存入對(duì)應(yīng)組，方便后續(xù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。分步模式操作在分步模式下，可設(shè)置多段運(yùn)行參數(shù)。例如：第一步穩(wěn)壓80V運(yùn)行30分鐘（濃縮膠階段），第二步穩(wěn)壓120V運(yùn)行90分鐘（分離膠階段）。設(shè)置時(shí)需按“分步”鍵進(jìn)入分段界面，依次輸入各段電壓、時(shí)間，按“確認(rèn)”保存每段參數(shù)，全部設(shè)置完成后啟動(dòng)運(yùn)行。（二）自動(dòng)化電泳儀（連床式）樣品盤裝載將預(yù)處理后的樣品管按順序放入自動(dòng)進(jìn)樣盤，確保管底無氣泡，條形碼朝向識(shí)別區(qū)。儀器通過光學(xué)傳感器讀取樣品信息，若出現(xiàn)“樣品識(shí)別錯(cuò)誤”，需檢查樣品管是否潔凈、條形碼是否破損，或用酒精棉擦拭傳感器鏡頭。程序化管理通過觸摸屏選擇預(yù)設(shè)實(shí)驗(yàn)方案（如“蛋白質(zhì)SDS分離”“DNA片段分析”），系統(tǒng)自動(dòng)完成緩沖液添加、凝膠制備、上樣及電泳全過程。運(yùn)行中可通過“暫停”鍵干預(yù)，如需緊急終止，長按“急?！卑粹o3秒。五、維護(hù)與保養(yǎng)（一）日常清潔與部件維護(hù)電源維護(hù)定期用干布擦拭電源機(jī)身，去除灰塵和污漬，避免使用酒精等腐蝕性溶劑。接口處若有氧化，可用棉簽蘸少量無水乙醇清潔。長時(shí)間不用時(shí)，需每月開機(jī)通電30分鐘，防止電容老化。電泳槽維護(hù)每次使用后用去離子水沖洗槽體，頑固污漬可用軟毛刷輕刷，禁止使用硬物刮擦。電極片需定期檢查，若表面出現(xiàn)黑色氧化物，可用細(xì)砂紙打磨至光亮。膠條、密封圈等易損件需定期更換，避免老化導(dǎo)致漏液。檢測單元維護(hù)凝膠成像系統(tǒng)的紫外燈需避免頻繁開關(guān)，延長使用壽命；鏡頭需保持潔凈，使用專用鏡頭紙擦拭，防止指紋或污漬影響成像質(zhì)量。（二）常見故障處理故障現(xiàn)象可能原因處理方法開機(jī)無反應(yīng)電源線未接好、保險(xiǎn)絲熔斷檢查電源連接，更換同規(guī)格保險(xiǎn)絲（通常5A）電壓無法調(diào)節(jié)旋鈕卡住、內(nèi)部接觸不良關(guān)閉電源后反復(fù)旋轉(zhuǎn)旋鈕，若無效需拆機(jī)檢修電泳槽漏液膠條老化、玻璃板密封不嚴(yán)更換膠條，重新安裝玻璃板并均勻用力夾緊電流異常升高緩沖液濃度過高、電極短路更換低濃度緩沖液，檢查電極是否接觸槽壁樣品不遷移電極接反、緩沖液失效交換電極導(dǎo)線，更換新鮮緩沖液顯示屏閃爍電壓不穩(wěn)、內(nèi)部線路松動(dòng)使用穩(wěn)壓器，檢查儀器內(nèi)部連接線是否脫落六、安全注意事項(xiàng)防觸電保護(hù)電泳儀通電后，電極及電泳槽內(nèi)緩沖液均帶電，嚴(yán)禁用手接觸或在槽內(nèi)取放物品。如需調(diào)整樣品或凝膠，必須先關(guān)閉電源。儀器必須連接有效接地，接地電阻不大于4Ω，雷雨天氣應(yīng)停止使用并拔下插頭。防止短路與超載禁止在未連接電泳槽時(shí)啟動(dòng)穩(wěn)流模式，以免空載電壓過高損壞電源。多槽聯(lián)用時(shí)，需確保各槽電流總和不超過儀器額定值（如單槽50mA，4槽聯(lián)用總電流不超過200mA）。更換電泳槽或調(diào)整導(dǎo)線時(shí)必須斷電，避免插頭接觸產(chǎn)生火花。試劑安全緩沖液配制需佩戴手套、護(hù)目鏡，避免接觸皮膚或?yàn)R入眼中。EB（溴化乙錠）等染色劑具有毒性和致癌性，需在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，沾染試劑的廢液需分類收集處理，不可隨意傾倒。七、實(shí)驗(yàn)優(yōu)化與常見問題解決（一）分離效果不佳的原因與對(duì)策條帶模糊或拖尾樣品濃度過高：適當(dāng)稀釋樣品，減少上樣量；緩沖液離子強(qiáng)度不當(dāng)：重新配制緩沖液，確保pH值準(zhǔn)確（如Tris緩沖液需用HCl調(diào)節(jié)pH）；電壓過高：降低電壓或延長電泳時(shí)間，減少產(chǎn)熱導(dǎo)致的對(duì)流現(xiàn)象。條帶彎曲（微笑或皺眉現(xiàn)象）凝膠濃度不均：加熱瓊脂糖時(shí)充分?jǐn)嚢瑁苊饩植繚舛冗^高；電泳槽溫度梯度：使用循環(huán)冷卻系統(tǒng)（尤其高電壓電泳時(shí)），或降低電流減少產(chǎn)熱。無條帶檢出染色失?。簷z查染色劑濃度及染色時(shí)間，蛋白質(zhì)凝膠需徹底脫色背景；上樣錯(cuò)誤：確認(rèn)加樣孔位置，避免樣品溢出或未加入凝膠；電源故障：用萬用表檢測輸出電壓，確認(rèn)儀器正常工作。（二）實(shí)驗(yàn)重復(fù)性保證措施標(biāo)準(zhǔn)化操作固定緩沖液批次、凝膠濃度及電泳參數(shù)，使用同一品牌移液器及吸頭，減少人為誤差。樣品分裝保存，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致降解。儀器校準(zhǔn)定期用標(biāo)準(zhǔn)電阻箱校準(zhǔn)電源輸出，確保電壓、電流顯示值與實(shí)際值誤差在±5%以內(nèi)。電泳槽需標(biāo)記方向，避免多次使用后電極極性混淆。對(duì)照實(shí)驗(yàn)設(shè)置每次實(shí)驗(yàn)加入標(biāo)準(zhǔn)品（如DNAMarker、已知分子量的蛋白質(zhì)Marker），用于分子量估算及分離效果驗(yàn)證。同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照（僅加緩沖液）和陰性對(duì)照，排除非特異性條帶干擾。八、長期存放與報(bào)廢處理（一）長期存放儀器停用超過1個(gè)月時(shí)，需徹底清潔各部件，電源、電泳槽分開存放，電泳槽內(nèi)放置干燥劑防止生銹。電源線纏繞整齊，避免折疊過度導(dǎo)致內(nèi)部斷線。說明書、保修卡等資料需統(tǒng)一歸檔，便于后續(xù)查閱。（二）報(bào)廢處理當(dāng)儀器核心部件（如電源模塊