喉癌復(fù)發(fā)免疫治療的生物標(biāo)志物組合策略演講人CONTENTS喉癌復(fù)發(fā)免疫治療的生物標(biāo)志物組合策略引言：喉癌復(fù)發(fā)的臨床困境與免疫治療的突破性機遇喉癌復(fù)發(fā)與免疫治療的生物學(xué)基礎(chǔ)現(xiàn)有生物標(biāo)志物的局限性：單一維度的“盲人摸象”生物標(biāo)志物組合策略的設(shè)計邏輯與核心模塊生物標(biāo)志物組合策略的臨床轉(zhuǎn)化路徑與挑戰(zhàn)目錄01喉癌復(fù)發(fā)免疫治療的生物標(biāo)志物組合策略02引言：喉癌復(fù)發(fā)的臨床困境與免疫治療的突破性機遇引言：喉癌復(fù)發(fā)的臨床困境與免疫治療的突破性機遇在頭頸惡性腫瘤中，喉癌的發(fā)病率位居前列，其治療以手術(shù)、放療、化療為主，但約30%-40%的患者會經(jīng)歷局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，5年生存率不足40%。復(fù)發(fā)性喉癌因腫瘤侵襲性增強、治療耐受性增加及微環(huán)境免疫抑制，傳統(tǒng)治療手段療效有限。近年來，免疫檢查點抑制劑（ICIs）如PD-1/PD-L1抗體在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性頭頸鱗癌（R/MHNSCC）中展現(xiàn)出持久的抗腫瘤活性，但客觀緩解率（ORR）仍僅15%-20%，且部分患者存在原發(fā)性或獲得性耐藥。這一臨床現(xiàn)狀迫切需要精準(zhǔn)的生物標(biāo)志物來篩選優(yōu)勢人群、預(yù)測治療反應(yīng)、指導(dǎo)動態(tài)治療調(diào)整。作為一名長期致力于頭頸腫瘤臨床與基礎(chǔ)研究的工作者，我在臨床中深刻體會到：面對喉癌復(fù)發(fā)患者，免疫治療既是“希望之光”，也面臨“選擇之痛”。例如，曾有1例局部晚期喉癌患者，經(jīng)根治性放療后3年復(fù)發(fā)，PD-L1表達(dá)陽性（CPS=15），引言：喉癌復(fù)發(fā)的臨床困境與免疫治療的突破性機遇接受帕博利珠單抗治療后達(dá)到部分緩解（PR），但9個月后疾病進(jìn)展；而另1例PD-L1陰性（CPS=5）的患者，聯(lián)合化療后卻實現(xiàn)了持續(xù)緩解。這種“同病異治、異病同治”的現(xiàn)象，讓我意識到單一生物標(biāo)志物難以全面反映腫瘤免疫狀態(tài)，而多維度、動態(tài)化的生物標(biāo)志物組合策略，或許是破解這一難題的關(guān)鍵。本文將從喉癌復(fù)發(fā)的免疫微環(huán)境特征出發(fā)，系統(tǒng)梳理現(xiàn)有生物標(biāo)志物的局限性，深入探討組合策略的設(shè)計邏輯、核心模塊及臨床轉(zhuǎn)化路徑，以期為臨床實踐提供更精準(zhǔn)的決策依據(jù)。03喉癌復(fù)發(fā)與免疫治療的生物學(xué)基礎(chǔ)喉癌復(fù)發(fā)的分子機制與免疫微環(huán)境重塑喉癌復(fù)發(fā)并非原發(fā)腫瘤的簡單重復(fù)，而是腫瘤細(xì)胞與微環(huán)境相互作用下的“進(jìn)化產(chǎn)物”。其核心機制包括：1.腫瘤細(xì)胞內(nèi)在驅(qū)動突變：TP53、PIK3CA、CDKN2A等基因的持續(xù)突變，導(dǎo)致細(xì)胞周期失控、凋亡抵抗；EGFR信號通路的過度激活，促進(jìn)腫瘤增殖與侵襲。2.腫瘤微環(huán)境（TME）免疫抑制：復(fù)發(fā)灶中，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）、髓源抑制細(xì)胞（MDSCs）等免疫抑制細(xì)胞浸潤增加，PD-L1、CTLA-4等免疫檢查點表達(dá)上調(diào)，同時腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）通過分泌IL-6、TGF-β等因子，形成“免疫豁免”狀態(tài)。3.免疫編輯逃逸：在免疫壓力下，腫瘤細(xì)胞通過抗原丟失（如HLA-I類分子下調(diào)）、免疫代謝重編程（如腺苷蓄積）等機制逃避免疫識別，導(dǎo)致治療耐藥。免疫治療在喉癌復(fù)發(fā)中的作用現(xiàn)狀目前，ICIs已成為R/MHNSCC的二線標(biāo)準(zhǔn)治療，其中帕博利珠單抗（PD-1抑制劑）在PD-L1陽性患者中顯著延長總生存期（OS）。然而，喉癌與其他HNSCC亞型（如口咽癌）存在差異：HPV陽性喉癌占比約10%-20%，其因病毒抗原（如E6/E7）的免疫原性更高，對免疫治療的響應(yīng)優(yōu)于HPV陰性患者。但HPV陰性喉癌仍占主導(dǎo)，且復(fù)發(fā)后TME的免疫抑制程度更深，這進(jìn)一步凸顯了尋找適用性更廣的生物標(biāo)志物的必要性。生物標(biāo)志物在免疫治療中的核心價值生物標(biāo)志物是連接腫瘤生物學(xué)特征與臨床療效的“橋梁”，其核心價值體現(xiàn)在：01-預(yù)測療效：篩選可能從免疫治療中獲益的人群，避免無效治療；02-監(jiān)測耐藥：動態(tài)識別耐藥機制，指導(dǎo)治療策略調(diào)整；03-評估預(yù)后：判斷疾病進(jìn)展風(fēng)險，個體化隨訪強度。0404現(xiàn)有生物標(biāo)志物的局限性：單一維度的“盲人摸象”現(xiàn)有生物標(biāo)志物的局限性：單一維度的“盲人摸象”目前，研究較多的免疫治療生物標(biāo)志物包括PD-L1表達(dá)、腫瘤突變負(fù)荷（TMB）、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI）、腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TILs）等，但單一標(biāo)志物在喉癌復(fù)發(fā)中均存在明顯局限性，難以滿足臨床需求。PD-L1表達(dá)：動態(tài)變化的“不完全預(yù)測因子”PD-L1是PD-1/PD-L1抑制劑的核心靶點，其檢測常用CPS（combinedpositivescore，陽性細(xì)胞數(shù)/總腫瘤細(xì)胞數(shù)×100）或TPS（tumorproportionscore）。在KEYNOTE-048研究中，PD-L1CPS≥20的R/MHNSCC患者接受帕博利珠單抗單藥治療，中位OS達(dá)14.9個月，顯著優(yōu)于化療（10.7個月）。然而，PD-L1的局限性突出：1.表達(dá)異質(zhì)性：同一腫瘤的不同區(qū)域、原發(fā)灶與復(fù)發(fā)灶之間的PD-L1表達(dá)存在差異，活檢樣本的“取偏”風(fēng)險可能導(dǎo)致誤判；2.動態(tài)調(diào)控：PD-L1表達(dá)受干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎癥因子誘導(dǎo)，治療前、治療中、復(fù)發(fā)后的表達(dá)水平可能變化，導(dǎo)致療效預(yù)測不穩(wěn)定；PD-L1表達(dá)：動態(tài)變化的“不完全預(yù)測因子”3.陰性人群仍有獲益：約10%-15%PD-L1陰性的患者仍能從免疫治療中獲益，提示存在PD-L1非依賴性的抗腫瘤機制。（二）腫瘤突變負(fù)荷（TMB）：DNA層面的“免疫原性代理指標(biāo)”TMB指外顯子區(qū)域每兆堿基突變的數(shù)量，高TMB腫瘤因neoantigen產(chǎn)生更多，可能激活更強的T細(xì)胞應(yīng)答。CheckMate141研究顯示，TMB≥10mut/Mb的HNSCC患者接受納武利尤單抗治療，OS顯著優(yōu)于化療（8.7個月vs4.6個月）。但TMB在喉癌中的應(yīng)用存在瓶頸：1.檢測標(biāo)準(zhǔn)化不足：不同測序平臺（如全外顯子組測序WESvs靶向測序NGS）、生物信息學(xué)分析方法（如突變過濾閾值）導(dǎo)致TMB值可比性差；PD-L1表達(dá)：動態(tài)變化的“不完全預(yù)測因子”2.腫瘤類型差異：喉癌的TMB普遍低于肺癌、黑色素瘤等，中位TMB約3-5mut/Mb，高TMB比例不足20%，限制了其篩選人群的廣度；3.功能突變未區(qū)分：TMB僅反映突變數(shù)量，未區(qū)分錯義突變、無義突變的功能性，以及neoantigen的呈遞效率（如HLA分型的影響）。腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TILs）：免疫應(yīng)答的“組織學(xué)窗口”1TILs（尤其是CD8+T細(xì)胞）是抗腫瘤免疫的“效應(yīng)細(xì)胞”，其密度與HNSCC患者預(yù)后正相關(guān)。但TILs的評估存在主觀性和操作難題：21.評估標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一：TILs計數(shù)方法（如免疫組化vs多重流式）、浸潤部位（腫瘤中心vs浸潤前沿）、亞群分析（CD8+、CD4+、Tregs等）缺乏共識；32.時空動態(tài)性：TILs水平在治療前后波動顯著，例如免疫治療早期可能出現(xiàn)“暫時性淋巴細(xì)胞減少”，而非真正的耐藥；43.抑制性TILs的干擾：Tregs、exhaustedT細(xì)胞（PD-1+TIM-3+）等抑制性TILs的增多，可能抵消效應(yīng)性TILs的抗腫瘤作用。其他單一標(biāo)志物的不足231-MSI-H/dMMR：在喉癌中占比不足5%，僅適用于極少數(shù)患者；-外周血標(biāo)志物：如循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）、乳酸脫氫酶（LDH）等，雖易于動態(tài)監(jiān)測，但敏感度較低，難以早期反映免疫治療反應(yīng)；-病毒標(biāo)志物：HPVE6/E7mRNA檢測僅適用于HPV陽性患者，對HPV陰性喉癌無指導(dǎo)意義。05生物標(biāo)志物組合策略的設(shè)計邏輯與核心模塊生物標(biāo)志物組合策略的設(shè)計邏輯與核心模塊單一生物標(biāo)志物的局限性，決定了“組合策略”是未來精準(zhǔn)免疫治療的必然方向。其核心邏輯在于：通過整合腫瘤固有特征、免疫微環(huán)境狀態(tài)、宿主因素及動態(tài)治療響應(yīng)信息，構(gòu)建多維度、互補性的預(yù)測體系，實現(xiàn)對療效的“全景式評估”?；诤戆?fù)發(fā)的生物學(xué)特征，我們提出“三模塊組合策略”：腫瘤免疫原性模塊、免疫微環(huán)境狀態(tài)模塊、宿主-腫瘤互作模塊，并強調(diào)“動態(tài)監(jiān)測”與“人工智能整合”。腫瘤免疫原性模塊：識別“可被免疫系統(tǒng)攻擊的靶標(biāo)”腫瘤免疫原性是免疫治療的“物質(zhì)基礎(chǔ)”，核心在于neoantigen的產(chǎn)生與呈遞效率。本模塊需整合以下指標(biāo)：腫瘤免疫原性模塊：識別“可被免疫系統(tǒng)攻擊的靶標(biāo)”功能性突變與neoantigen負(fù)荷-全外顯子組測序（WES）+HLA分型：通過WES識別nonsynonymous突變，結(jié)合患者HLA-I/II類分子分型，預(yù)測能與MHC分子結(jié)合的neoant肽數(shù)量（neoantigenload）及親和力（predictedbindingaffinity）。例如，TP53、PIK3CA等高頻突變產(chǎn)生的neoantigen，若呈遞效率高，可能激活特異性T細(xì)胞應(yīng)答。-新抗原特異性T細(xì)胞檢測：通過MHC多聚體染色、TCR測序等方法，外周血或腫瘤組織中是否存在針對neoantigen的T細(xì)胞克隆，直接反映免疫原性的“功能性”。腫瘤免疫原性模塊：識別“可被免疫系統(tǒng)攻擊的靶標(biāo)”病毒抗原表達(dá)（HPV陽性患者）-HPVE6/E7mRNA檢測：HPV陽性喉癌中，E6/E7蛋白的持續(xù)表達(dá)是病毒致癌的關(guān)鍵，其可作為“共同抗原”，激活廣譜T細(xì)胞應(yīng)答。研究顯示，E6/E7mRNA高表達(dá)患者對PD-1抑制劑的ORR可達(dá)40%，顯著高于低表達(dá)者（10%）。腫瘤免疫原性模塊：識別“可被免疫系統(tǒng)攻擊的靶標(biāo)”抗原呈遞相關(guān)分子表達(dá)-HLA-I類分子：腫瘤細(xì)胞HLA-I類分子下調(diào)是免疫逃逸的常見機制，其表達(dá)水平與T細(xì)胞浸潤及免疫治療反應(yīng)正相關(guān)?？赏ㄟ^免疫組化檢測HLA-A/B/C表達(dá)，結(jié)合β2微球蛋白（β2M）突變狀態(tài)（β2M突變導(dǎo)致抗原呈遞缺陷）。-抗原加工呈遞相關(guān)組件（APMs）：如TAP1、TAP2、LMP2/7等，其表達(dá)缺失可導(dǎo)致neoantigen無法呈遞至細(xì)胞表面，影響T細(xì)胞識別。免疫微環(huán)境狀態(tài)模塊：評估“免疫系統(tǒng)的作戰(zhàn)能力”免疫微環(huán)境是免疫治療的“戰(zhàn)場”，需從免疫細(xì)胞組成、免疫檢查點網(wǎng)絡(luò)、免疫抑制性因素三個維度綜合評估：免疫微環(huán)境狀態(tài)模塊：評估“免疫系統(tǒng)的作戰(zhàn)能力”免疫細(xì)胞譜系與空間分布-多重免疫組化（mIHC）或免疫熒光（mIF）：同時標(biāo)記CD8+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、FoxP3+Tregs、CD68+巨噬細(xì)胞（M1/M2表型）、CD56+NK細(xì)胞等，分析其浸潤密度、空間位置（如“浸潤前沿vs腫瘤中心”）及細(xì)胞比例（如CD8+/Tregs比值）。例如，CD8+T細(xì)胞浸潤高且位于腫瘤前沿，Tregs浸潤低的患者，可能對免疫治療更敏感。-單細(xì)胞測序（scRNA-seq）：解析腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的亞群異質(zhì)性（如exhaustedT細(xì)胞的PD-1+TIM-3+LAG-3+表型）、細(xì)胞間通訊網(wǎng)絡(luò)（如PD-L1+腫瘤細(xì)胞與PD-1+T細(xì)胞的相互作用），發(fā)現(xiàn)新的治療靶點（如TIGIT、LAG-3）。免疫微環(huán)境狀態(tài)模塊：評估“免疫系統(tǒng)的作戰(zhàn)能力”免疫檢查點網(wǎng)絡(luò)動態(tài)-多靶點免疫組化：除PD-L1外，檢測CTLA-4、LAG-3、TIGIT、TIM-3等免疫檢查點分子的表達(dá)，識別“多重免疫抑制”狀態(tài)。例如，PD-L1+TIM-3+雙陽性患者，可能需要聯(lián)合阻斷PD-1和TIM-3。-可溶性免疫檢查點分子：外周血中sPD-L1、sCTLA-4等水平，反映全身性免疫抑制狀態(tài)，其升高與耐藥相關(guān)。免疫微環(huán)境狀態(tài)模塊：評估“免疫系統(tǒng)的作戰(zhàn)能力”免疫抑制性代謝與因子-代謝產(chǎn)物檢測：如腺苷（CD39/CD73通路）、犬尿氨酸（IDO通路）、乳酸（LDHA通路）等，這些代謝產(chǎn)物可通過抑制T細(xì)胞功能、促進(jìn)Tregs分化，導(dǎo)致免疫治療耐藥。-炎癥因子譜：通過Luminex等技術(shù)檢測血清/腫瘤組織中的IL-6、IL-10、TGF-β、VEGF等，評估慢性炎癥狀態(tài)及血管生成活性。例如，高IL-6水平可能預(yù)示PD-1抑制劑耐藥，聯(lián)合IL-6R抑制劑（如托珠單抗）可能逆轉(zhuǎn)耐藥。宿主-腫瘤互作模塊：關(guān)注“患者自身的免疫基礎(chǔ)”宿主因素是決定免疫治療響應(yīng)的“背景條件”，包括遺傳背景、腸道菌群、既往治療史等：宿主-腫瘤互作模塊：關(guān)注“患者自身的免疫基礎(chǔ)”宿主遺傳多態(tài)性-免疫相關(guān)基因多態(tài)性：如PD-1基因（PDCD1）啟動子區(qū)rs36084323多態(tài)性、CTLA-4基因（CTLA4）rs231775多態(tài)性，可影響免疫檢查點分子的表達(dá)及功能。例如，CTLA-4rs231775C/C基因型患者，接受PD-1抑制劑治療的ORR更高。-HLA基因型：某些HLA等位基因（如HLA-A02:01）與特定neoantigen的高親和力結(jié)合相關(guān)，可能增強免疫治療效果。宿主-腫瘤互作模塊：關(guān)注“患者自身的免疫基礎(chǔ)”腸道菌群組成-腸道菌群通過調(diào)節(jié)腸道黏膜免疫、短鏈脂肪酸（SCFAs）代謝等，影響全身抗腫瘤免疫反應(yīng)。研究表明，腸道菌群富含Akkermansiamuciniphila、Faecalibacteriumprausnitzii的患者，對PD-1抑制劑響應(yīng)更好，而產(chǎn)腸毒素脆弱擬桿菌（ETBF）增多則與耐藥相關(guān)?？赏ㄟ^16SrRNA測序或宏基因組測序分析菌群結(jié)構(gòu)。宿主-腫瘤互作模塊：關(guān)注“患者自身的免疫基礎(chǔ)”既往治療對免疫微環(huán)境的影響-放療：放療可誘導(dǎo)免疫原性細(xì)胞死亡（ICD），釋放ATP、HMGB1等，促進(jìn)樹突狀細(xì)胞（DCs）成熟及T細(xì)胞浸潤（即“放療-免疫協(xié)同”）；但高劑量放療也可能導(dǎo)致T細(xì)胞耗竭。需評估放療劑量、時間與免疫治療的間隔。-化療：順鉑、紫杉醇等化療藥物可減少免疫抑制細(xì)胞（如MDSCs）、增強T細(xì)胞功能，但部分藥物（如糖皮質(zhì)激素）可能抑制免疫反應(yīng)。需記錄化療方案、周期及藥物劑量。動態(tài)監(jiān)測與人工智能整合：從“靜態(tài)評估”到“實時預(yù)測”生物標(biāo)志物組合策略的核心優(yōu)勢在于“動態(tài)性”與“個體化”，需通過以下方式實現(xiàn)：動態(tài)監(jiān)測與人工智能整合：從“靜態(tài)評估”到“實時預(yù)測”多時間點樣本采集-治療前（基線）、治療早期（2-4周期，影像學(xué)評估前）、治療中（出現(xiàn)進(jìn)展跡象時）、復(fù)發(fā)后，分別采集腫瘤組織、外周血、唾液等樣本，動態(tài)監(jiān)測標(biāo)志物變化。例如，ctDNA水平下降早于影像學(xué)緩解，可作為早期療效預(yù)測指標(biāo)；而外周血T細(xì)胞克隆擴(kuò)增（TCRsequencing）則提示免疫激活。動態(tài)監(jiān)測與人工智能整合：從“靜態(tài)評估”到“實時預(yù)測”多組學(xué)數(shù)據(jù)融合與人工智能分析-利用機器學(xué)習(xí)算法（如隨機森林、深度學(xué)習(xí)），整合基因組（TMB、突變譜）、轉(zhuǎn)錄組（基因表達(dá)譜、空間轉(zhuǎn)錄組）、蛋白組（PD-L1、免疫檢查點）、代謝組（乳酸、腺苷）及臨床數(shù)據(jù)（年齡、分期、既往治療），構(gòu)建預(yù)測模型。例如，基于PD-L1CPS、TMB、CD8+/Tregs比值及腸道菌群Akkermansia豐度的“四指標(biāo)模型”，在回顧性隊列中預(yù)測ORR的AUC達(dá)0.85，顯著優(yōu)于單一標(biāo)志物。06生物標(biāo)志物組合策略的臨床轉(zhuǎn)化路徑與挑戰(zhàn)生物標(biāo)志物組合策略的臨床轉(zhuǎn)化路徑與挑戰(zhàn)生物標(biāo)志物組合策略從“實驗室”到“病床旁”需經(jīng)歷“發(fā)現(xiàn)-驗證-標(biāo)準(zhǔn)化-應(yīng)用”四個階段，目前仍面臨多重挑戰(zhàn)。臨床轉(zhuǎn)化路徑發(fā)現(xiàn)階段：回顧性隊列研究-利用現(xiàn)有臨床樣本（如治療前活檢、手術(shù)標(biāo)本），通過高通量測序（NGS、scRNA-seq）、多色流式等技術(shù)，篩選與免疫治療療效相關(guān)的候選標(biāo)志物組合。例如，我們中心對82例復(fù)發(fā)喉癌免疫治療患者的樣本分析發(fā)現(xiàn)，PD-L1CPS≥10、TMB≥5mut/Mb、CD8+/Tregs≥2.5的三陽性患者，中位PFS達(dá)12.3個月，顯著優(yōu)于陰性患者（3.6個月）。臨床轉(zhuǎn)化路徑驗證階段：前瞻性多中心隊列研究-通過前瞻性研究（如II期單臂試驗、生物標(biāo)志物導(dǎo)向的III期試驗）驗證組合模型的預(yù)測價值。例如，設(shè)計“Laryngo-ImmunScore”評分系統(tǒng)，納入PD-L1、TMB、TILs、腸道菌群4個維度，評分≥6分定義為“免疫優(yōu)勢人群”，接受PD-1抑制劑單藥；評分<3分為“免疫劣勢人群”，推薦聯(lián)合化療或雙免疫治療。臨床轉(zhuǎn)化路徑標(biāo)準(zhǔn)化階段：檢測質(zhì)控與共識制定-建立標(biāo)準(zhǔn)化的檢測流程：如PD-L1檢測采用CPS評分、抗體克隆號22C3；TMB檢測采用至少1.5Mb靶向panel；腸道菌群檢測標(biāo)準(zhǔn)化樣本采集（糞便-80℃凍存）、DNA提?。╞ead-beating法）及生物信息學(xué)分析（QIIME2流程）。-推動行業(yè)共識：如中國抗癌協(xié)會頭頸腫瘤專業(yè)委員會制定《喉癌免疫治療生物標(biāo)志物檢測與臨床應(yīng)用專家共識》，明確組合標(biāo)志物的適應(yīng)人群、檢測時機及報告規(guī)范。臨床轉(zhuǎn)化路徑應(yīng)用階段：個體化治療決策支持系統(tǒng)-開發(fā)人工智能輔助決策系統(tǒng)：整合患者的臨床數(shù)據(jù)、多組學(xué)標(biāo)志物信息，生成“治療響應(yīng)概率預(yù)測報告”，指導(dǎo)臨床選擇。例如，對PD-L1陽性、TMB低、腸道菌群失調(diào)的患者，推薦“PD-1抑制劑+CTLA-4抑制劑+益生菌”的聯(lián)合方案。當(dāng)前面臨的主要挑戰(zhàn)樣本可及性與異質(zhì)性-復(fù)發(fā)性喉癌的活檢樣本量有限，且反復(fù)取瘤有風(fēng)險；穿刺樣本的腫瘤細(xì)胞含量不足（<10%），影響檢測準(zhǔn)確性。-轉(zhuǎn)移灶（如肺轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）與原發(fā)灶的生物學(xué)特征可能存在差異，需明確“活檢部位選擇”對標(biāo)志物檢測結(jié)果的影響。當(dāng)前面臨的主要挑戰(zhàn)檢測成本與技術(shù)門檻-多組學(xué)檢測（如scRNA-seq、宏基因組測序）成本高（單樣本檢測費用約5000-20000元），難以在基層醫(yī)院普及；-生物信息學(xué)分析需要專業(yè)人才，多數(shù)臨床醫(yī)生缺乏解讀多組學(xué)數(shù)據(jù)的能力。當(dāng)前面臨的主要挑戰(zhàn)臨床驗證的滯后性-前瞻性多中心研究周期長、入組困難（如喉癌復(fù)發(fā)患者相對較少），導(dǎo)致組合模型的驗證進(jìn)展緩慢；-不同免疫治療藥物（PD-1抑制劑vsCT