xxxxxxxx

粉針車間

凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)

驗(yàn)證方案

粉針車間凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)是對粉針車間使用F2000/12/600型灌裝

機(jī)在局部百級工作環(huán)境中進(jìn)行凍干粉針劑灌裝過程中所采用的各種方法和各種規(guī)程防止微

生物污染的水平可以達(dá)到可接受的合格標(biāo)準(zhǔn)的能力。通過檢查確認(rèn)找出粉針車間進(jìn)行凍干粉

針劑灌裝作業(yè)過程中的控制要求，為今后對粉針車間進(jìn)行凍干粉針劑灌裝作業(yè)管理確定依

據(jù)。

一、該方案的實(shí)施由下述單位負(fù)責(zé)進(jìn)行:

實(shí)施部門職責(zé)

制訂粉針車間凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證方案，組織方案

生產(chǎn)技術(shù)部

的實(shí)施。負(fù)責(zé)各類相關(guān)文件的檢查及準(zhǔn)備。負(fù)責(zé)出具驗(yàn)證報告。

參與方案的制訂過程，參與方案的實(shí)施，負(fù)責(zé)方案中各設(shè)施、設(shè)備的檢

設(shè)備部

查確認(rèn)，負(fù)責(zé)出具驗(yàn)證報告。

質(zhì)量保證部參與方案的制訂過程，參與方案實(shí)施。負(fù)責(zé)關(guān)于各檢查項(xiàng)的落實(shí)。

參與方案的制訂過程，參與方案實(shí)施。負(fù)責(zé)各檢查項(xiàng)的檢查，并出具檢

QC化驗(yàn)室

測報告。

粉針車間參與方案的實(shí)施。配合方案的落實(shí)。

二、方案實(shí)施單位責(zé)任人:

實(shí)施部門責(zé)任人簽名

設(shè)備部

生產(chǎn)技術(shù)部

質(zhì)量保證部

QC化驗(yàn)室

粉針車間

三、驗(yàn)證小組成員:

部門姓名部門姓名

設(shè)備部質(zhì)量保證部

設(shè)備部質(zhì)量保證部

設(shè)備部質(zhì)量保證部

生產(chǎn)技術(shù)部生產(chǎn)技術(shù)部

QC化驗(yàn)室QC化驗(yàn)室

QC化驗(yàn)室粉針車間

粉針車間粉針車間

粉針車間粉針車間

粉針車間粉針車間

粉針車間粉針車間

凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證方案

方案制訂:制訂日期:

方案批準(zhǔn):批準(zhǔn)口期:

目錄

1.概括..........................................................................1

1.1目的........................................................................1

1.2范圍........................................................................1

1.3責(zé)任........................................................................1

2.確定可接受的合格標(biāo)...........................................................2

3.培養(yǎng)基性能測試...............................................................2

3.1微生物生長性能試驗(yàn).........................................................2

3.2培養(yǎng)基無菌性試驗(yàn)...........................................................2

4模擬分裝用無菌粉末............................................................2

4.1模擬分裝用無菌粉末應(yīng)具有的特性.............................................2

4.2無菌性試驗(yàn)..................................................................3

4.3抑菌性試驗(yàn)..................................................................3

4.4溶解性試驗(yàn)..................................................................3

5模擬分裝過程操作規(guī)程及操作人員控制...........................................3

6操作過程及無菌環(huán)境控制與監(jiān)測.................................................4

6.1模擬分裝使用西林瓶及膠塞無菌性檢測.........................................4

6.2微生物控制與監(jiān)測............................................................4

6.3塵埃粒子監(jiān)測................................................................5

7取樣計(jì)劃及取樣點(diǎn)..............................................................5

7.1取樣計(jì)劃....................................................................5

7.2取樣點(diǎn)......................................................................6

8模擬分裝......................................................................6

8.1無菌粉針劑模擬分裝方法......................................................6

8.2液體培養(yǎng)基制備及進(jìn)入無菌分裝區(qū)方法.........................................6

8.3液體培養(yǎng)基分裝工具的選用及處理使用方法.....................................6

8.4無菌粉針劑模擬分裝試驗(yàn).....................................................7

8.5液體培養(yǎng)基分裝..............................................................7

9微生物培養(yǎng)....................................................................7

9.1陰性對照....................................................................7

9.2陽性對照....................................................................7

9.3試驗(yàn)樣品培養(yǎng)................................................................7

10試驗(yàn)結(jié)果評價................................................................8

11驗(yàn)證制度及再驗(yàn)證時間安排....................................................8

12確認(rèn)方案執(zhí)行日期............................................................9

1、概括

凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)是在其他各個系統(tǒng)（諸如滅菌系統(tǒng)、公用系統(tǒng)、無

菌環(huán)境保持系統(tǒng)、設(shè)備驗(yàn)證、設(shè)備清洗過程驗(yàn)證等）驗(yàn)證工作完成的基礎(chǔ)上進(jìn)行的。采用培

養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)方法進(jìn)行。

1.1、目的

用和實(shí)際生產(chǎn)工藝相同的條件與操作方法（包括生產(chǎn)環(huán)境），向凍干制品容器（西林瓶）

內(nèi)灌裝經(jīng)除菌過濾器過濾的培養(yǎng)基，然后將此模擬制品在適當(dāng)條件下培養(yǎng)，以確認(rèn)工藝過程

的可靠性。證明在凍干粉針劑灌裝過程中所采用的各種方法和各種規(guī)程以防止微生物污染的

水平達(dá)到可接受的合格標(biāo)準(zhǔn)的能力，或提供保證所生產(chǎn)產(chǎn)品的無菌性的可信限度達(dá)到可接受

的合格標(biāo)準(zhǔn)的證據(jù)。

1.2、范圍

此驗(yàn)證方案適用于粉針車間凍干粉針劑灌裝過程驗(yàn)證。

1.3.責(zé)任

生產(chǎn)技術(shù)部、質(zhì)量保證部、QC化驗(yàn)室、粉針車間、設(shè)備部負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的執(zhí)行，主要

工作內(nèi)容如下：

①、編訂及實(shí)施驗(yàn)證方案；

②、實(shí)施確認(rèn)并提供確認(rèn)資料；

③、匯編測試資料于最終報告內(nèi)；

④、協(xié)調(diào)參與驗(yàn)證過程的人員和部門，確保驗(yàn)證的各項(xiàng)要求；

⑤、將成功的結(jié)果及分裝過程的需求規(guī)范化，并制定相關(guān)文件待核準(zhǔn)下發(fā)。

2、確定可接受的合格標(biāo)準(zhǔn)

警戒限：可信限為95%時污染概率大于0.05%；

合格限：可信限為9涌時污染概率小于0.1機(jī)

分裝量與污染控制數(shù)關(guān)系表

模擬分裝數(shù)量/瓶污染控制數(shù)量/瓶模擬分裝數(shù)量/瓶污染控制數(shù)量/瓶

3000?474204743?6294小于1

6295?7751小于27752?9151小于3

3、培養(yǎng)基性能測試

模擬分裝試驗(yàn)采用胰豚大豆肉湯培養(yǎng)基，通過下述試驗(yàn)對培養(yǎng)基微生物生長性能進(jìn)行確

認(rèn)。首先根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程制備培養(yǎng)基并滅菌后備用。

3.1微生物生長性能試驗(yàn)

將上述滅菌后的培養(yǎng)基分裝于100支試管中，在一半數(shù)量的試管中接種枯草桿菌，接種

量為〈100CFU；在另一半數(shù)量的試管中接種白色念珠菌，接種量為〈100CFU。接種后蓋塞、封

口，將接種有枯草桿菌的試管放于30?35℃下培養(yǎng)7天，將接種有白色念珠菌的試管放于

20?25℃下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)至少有50與以上接種的各試管的培養(yǎng)基中應(yīng)出現(xiàn)明顯的所接種

的微生物的生長。

3.2培養(yǎng)基無菌性試瞼

將上述滅菌后的培養(yǎng)基分裝于100支無菌試管中，蓋塞、封口。其中50支試管放于30?

35℃下培養(yǎng)7天，同時將另外50支試管放于20?25℃下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)各試管培養(yǎng)基中

應(yīng)無任何微生物生長。

4、模擬分裝過程操作規(guī)程及操作人員控制

4.1、模擬分裝試驗(yàn)中使用的西林瓶和膠塞的清洗、滅菌，分裝設(shè)備的清洗、消毒，與產(chǎn)品

接觸的分裝設(shè)備部件的清洗、滅菌、安裝過程必須遵循與實(shí)際生產(chǎn)操作相同的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

4.2、灌裝機(jī)灌裝速度保持與正常凍干粉針劑灌裝及半壓膠塞生產(chǎn)時的速度相同。

4.3、所有參加模擬試驗(yàn)的操作人員均應(yīng)經(jīng)過GMP,無菌操作、無菌更衣程序技術(shù)等相關(guān)知

識的培訓(xùn)并經(jīng)考核合格。

4.4、參加模擬試驗(yàn)的操作人員數(shù)及人員構(gòu)成應(yīng)嚴(yán)格控制，非規(guī)定的驗(yàn)證小組成員嚴(yán)禁在模

擬試驗(yàn)過程中進(jìn)入模擬試驗(yàn)現(xiàn)場，模擬試驗(yàn)現(xiàn)場人員數(shù)不得超過5人，人員的進(jìn)入及退出應(yīng)

嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作程序，減少不必要的人員進(jìn)入及退出次數(shù)?？蛇M(jìn)入模擬試驗(yàn)現(xiàn)場的人員名

單如下:

部門姓名部門姓名

設(shè)備部質(zhì)量保證部

生產(chǎn)技術(shù)部QC化驗(yàn)室

QC化驗(yàn)室粉針車間

QC化驗(yàn)室粉針車間

粉針車間粉針車間

粉針車間粉針車間

5、操作過程及無菌環(huán)境控制與監(jiān)測

進(jìn)行模擬試驗(yàn)過程中，對以下各項(xiàng)進(jìn)行監(jiān)測。

5.1、模擬試驗(yàn)使用西林瓶及膠塞無菌性檢測：

按第6條取樣計(jì)劃的規(guī)定要求，對模擬試驗(yàn)使用的西林瓶及膠塞進(jìn)行取樣，檢測其無菌

性，合格標(biāo)準(zhǔn)為各樣品不得存在無菌性不合格情況。

5.2、微生物控制與監(jiān)測：

①、在模擬試驗(yàn)過程中，對操作人員的無菌服、手套、眼鏡、胸前、前臂等部位的微生

物數(shù)量進(jìn)行監(jiān)測。其取樣方法、取樣頻率、取樣要求、取樣點(diǎn)分布見第6條取樣計(jì)劃。

合格標(biāo)準(zhǔn)：手套全部檢出菌數(shù)＜2個、霉菌＜1個；

一個操作人員雙臂、前胸的3個取樣點(diǎn)檢出菌數(shù)之和＜10個。

②、對無菌區(qū)墻壁、門、設(shè)備以及操作人員可能接觸的各種表面進(jìn)行無菌程度檢驗(yàn)。其

取樣方法、取樣點(diǎn)、取樣頻率見第6條取樣計(jì)劃。在進(jìn)行取樣時其取樣面積應(yīng)保持在25cn?。

合格標(biāo)準(zhǔn)：局部百級區(qū)全部檢出菌數(shù)＜3個、霉菌。個；

萬級區(qū)全部檢出菌數(shù)＜10個、霉菌＜2個，地面檢出菌數(shù)＜25個、霉菌＜3個。

③、對空氣中微生物數(shù)量進(jìn)行監(jiān)測，具取樣方法、取樣點(diǎn)、取樣頻率見第6條取樣計(jì)劃。

合格標(biāo)準(zhǔn)：局部百級區(qū)全部檢出菌數(shù)〈1個；

萬級區(qū)全部檢出菌數(shù)＜10個、霉菌＜3個；

④、微生物數(shù)量監(jiān)測試驗(yàn)所采用的培養(yǎng)基應(yīng)為經(jīng)過無菌及微生物生長性能檢驗(yàn)合格的培

養(yǎng)基。

⑤、污染調(diào)查、微生物鑒別方法、污染發(fā)生時應(yīng)采取的措施執(zhí)行相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作程序。

5.3塵埃粒子監(jiān)測

按第6條取樣計(jì)劃的規(guī)定要求，對灌裝室進(jìn)行空氣質(zhì)量監(jiān)測，其監(jiān)測結(jié)果應(yīng)能證明關(guān)鍵

區(qū)域空氣質(zhì)量達(dá)到百級潔凈區(qū)的空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

6、取樣計(jì)劃及取樣點(diǎn)

6.1取樣計(jì)劃:

監(jiān)測項(xiàng)目取樣方法取樣頻率取樣要求

模擬試驗(yàn)西林

隨機(jī)取樣每灌裝500瓶取樣一次每次取樣10支

瓶無菌檢查

模擬試驗(yàn)使用

隨機(jī)取樣每灌裝500瓶取樣一次每次取樣10枚

膠塞無菌檢杳

取樣時，被取樣的操作人員應(yīng)離開

模擬試驗(yàn)開始前，試驗(yàn)分裝機(jī)，在灌裝室的一角將雙臂平

操作人員無菌進(jìn)行一半時間，試驗(yàn)結(jié)伸，靜止不動，取樣人員按棉簽擦

棉簽擦拭法

性檢查束后，分別對操作人員拭取樣法在最短時間內(nèi)取樣。每次

進(jìn)行取樣監(jiān)測對同一操作人員進(jìn)行取樣監(jiān)測時.，

其取樣點(diǎn)應(yīng)不相同

模擬試驗(yàn)開始前，試驗(yàn)

根據(jù)取樣點(diǎn)要求取樣，取樣面積固

進(jìn)行一半時間，試驗(yàn)結(jié)

無菌灌裝區(qū)無定，每次取樣面積為25cn?。每次應(yīng)

棉簽擦拭法束后，分別根據(jù)取樣點(diǎn)

菌性檢查選擇不同位置取樣，其重點(diǎn)為操作

要求對無菌區(qū)進(jìn)行取樣

者可能接觸的各種表面。

監(jiān)測

根據(jù)取樣點(diǎn)分布圖布置培養(yǎng)皿，各

取樣點(diǎn)每小時更換取樣皿進(jìn)行檢

測。灌裝機(jī)附近設(shè)置四個以上的取

空氣微生物數(shù)沉降平皿法每小時取樣一次

樣平皿連續(xù)暴露取樣。另有一個平

量監(jiān)測

皿應(yīng)放置于微生物監(jiān)測室情況最差

的部位。

浮游菌采樣每30分鐘監(jiān)測一次取樣操作時應(yīng)由專人進(jìn)行

塵埃粒子監(jiān)測粒子計(jì)數(shù)器每30分鐘監(jiān)測一次監(jiān)測應(yīng)由專人按標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行

6.2取樣點(diǎn)：

①、操作人員無菌性檢查取樣點(diǎn)：操作人員的無菌服、手套、眼鏡、胸前、前臂等部位。

②、無菌灌裝區(qū)無菌性檢查取樣點(diǎn)：其取樣重點(diǎn)為無菌灌裝區(qū)內(nèi)墻壁、門、設(shè)備表面以

及操作人員可能接觸的各種表面。每次取樣應(yīng)包括：一側(cè)內(nèi)墻壁，無菌灌裝區(qū)內(nèi)門把手，膠

塞清洗機(jī)開門螺旋，灌裝機(jī)上塞料斗，西林瓶滅菌烘干隧道出口處理瓶轉(zhuǎn)盤，灌裝機(jī)控制面

板，物料周轉(zhuǎn)桶、周轉(zhuǎn)托盤等處。

③、空氣微生物數(shù)量監(jiān)測沉降平皿法取樣點(diǎn)：取樣點(diǎn)見附件《凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌

裝模擬試驗(yàn)空氣微生物監(jiān)測沉降平皿取樣點(diǎn)分布圖》。

④、空氣微生物數(shù)量監(jiān)測浮游菌測試取樣點(diǎn)：按無菌灌裝區(qū)面積等分進(jìn)行取樣，每個測

試點(diǎn)距離1米，測試點(diǎn)距內(nèi)墻面0.5米，另外在分裝面、膠塞清洗機(jī)膠塞出口處、西林瓶滅

菌烘干隧道出口處分別增加一個測試點(diǎn)。

⑤、塵埃粒子監(jiān)測取樣點(diǎn)：按無菌灌裝區(qū)面積等分進(jìn)行取樣，每個測試點(diǎn)距離1米，測

試點(diǎn)距內(nèi)墻面0.5米，另外在分裝面、膠塞清洗機(jī)膠塞出口處、西林瓶滅菌烘干隧道出口處

分別增加一個測試點(diǎn)。

7、模擬灌裝

7.1凍干粉針劑模擬灌裝方法：

凍干粉針劑模擬灌裝方法采用將一定量的無菌液體培養(yǎng)基通過灌裝機(jī)灌裝于西林瓶中

并進(jìn)行半壓膠塞，然后在凍干機(jī)內(nèi)進(jìn)行凍干試驗(yàn)并進(jìn)行全壓膠塞，壓鋁蓋密封。模擬試驗(yàn)量

為5000瓶。

7.2液體無菌培養(yǎng)基制備方法：

將經(jīng)過第3項(xiàng)檢測合格的培養(yǎng)基在配制室內(nèi)按每30g加1L注射用水的比例配制50L液

體培養(yǎng)基備用。

7.3無菌粉針劑模擬灌裝試驗(yàn)：

7.3.1模擬灌裝試驗(yàn)用西林瓶數(shù)量：按生產(chǎn)工藝要求準(zhǔn)備7000支無菌西林瓶。

7.3.2模擬灌裝試驗(yàn)用膠塞數(shù)量：按生產(chǎn)工藝要求準(zhǔn)備7000枚無菌膠塞。

7.3.3模擬灌裝試驗(yàn)用鋁蓋數(shù)量：按生產(chǎn)工藝要求準(zhǔn)備7000枚鋁蓋。

7.3.4模擬灌裝試驗(yàn)用周轉(zhuǎn)盤數(shù)量：按生產(chǎn)工藝對周轉(zhuǎn)盤進(jìn)行清潔消毒，以每只周轉(zhuǎn)盤裝量

290支計(jì)算，準(zhǔn)備25只潔凈周轉(zhuǎn)盤備用。

7.3.5模擬灌裝試驗(yàn)灌裝量：每支西林瓶灌裝7ml液體培養(yǎng)基。

7.3.6液體培養(yǎng)基的除菌過濾：對在配制間配制好的液體培養(yǎng)基按正常生產(chǎn)工藝要求進(jìn)行除

菌過濾并存放于無菌儲罐內(nèi)。

7.3.7灌裝機(jī)灌裝速度：灌裝機(jī)灌裝及半壓膠塞速度為260瓶/分。

7.3.8模擬灌裝試驗(yàn)操作流程：按凍干粉針劑生產(chǎn)工藝流程進(jìn)行。

7.3.9模擬灌裝試驗(yàn)灌裝過程要求：在進(jìn)行模擬灌裝試驗(yàn)時，當(dāng)灌裝進(jìn)行至一半時，使設(shè)備

空轉(zhuǎn)一小時以上再繼續(xù)進(jìn)行模擬灌裝試驗(yàn)，完成剩余的試驗(yàn)制品的灌裝。

7.3.10根據(jù)5.1項(xiàng)及6預(yù)要求，在每臺灌裝機(jī)分裝完成500瓶時，隨機(jī)抽取未分裝的西林

瓶及膠塞10枚供檢測使用。

7.3.11凍干模擬試驗(yàn)：培養(yǎng)基灌裝半壓膠塞以后，將半壓膠塞的樣品瓶轉(zhuǎn)移到凍干機(jī)內(nèi)，

進(jìn)行凍干的模擬試驗(yàn)。試驗(yàn)中，冷凍溫度不得低于3℃。凍干時間設(shè)定為24小時，抽真空、

全壓塞后按生產(chǎn)工藝要求進(jìn)行鋁蓋密封作業(yè)。至此供試品已全部制備完成。

7.3.12取樣原則：由于培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)分為兩個階段進(jìn)行，因此將全部樣品分為四個不同

時間段進(jìn)行樣品標(biāo)示，即第一階段灌裝試驗(yàn)開始時、第一階段灌裝試驗(yàn)結(jié)束時、第二階段灌

裝試驗(yàn)開始時、第二階段灌裝試驗(yàn)結(jié)束時四個時間。其標(biāo)記法為“17”、“27”、

“2-2”。標(biāo)記點(diǎn)為周轉(zhuǎn)盤。

8、微生物培養(yǎng)

8.1陰性對照：

在模擬灌裝過程中，使用20支潔凈試管灌裝7ml培養(yǎng)基，密封后進(jìn)行現(xiàn)場用培養(yǎng)基無

菌性試驗(yàn)。其20瓶陰性對照品應(yīng)均不得長菌。

8.2陽性對照：

為確認(rèn)無菌灌裝容器中培養(yǎng)基的促菌生產(chǎn)能力，取低濃度菌接種于進(jìn)行挑戰(zhàn)性陽性試驗(yàn)

用的4支對照試管中，2瓶接種濃度＜100個微生物/0.1ml的枯草桿菌芽抱；另2瓶接種濃

度＜100個微生物/0.1川1的白色念珠菌。接種后將接種枯草桿菌芽泡的西林瓶放于30?35℃

下培養(yǎng)7天，將接種有白色念珠菌的西林瓶放于20?25℃下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)至少需有1支

容器被證實(shí)有菌生產(chǎn)。如2個容淵內(nèi)均沒有菌增殖，則應(yīng)在確認(rèn)試驗(yàn)操作有誤后，重復(fù)試驗(yàn)

1次，此次試驗(yàn)應(yīng)在2個容器內(nèi)均有菌生產(chǎn)的情況。

8.3試