ICS11.220

CCSB41

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/WFSXXXX一XXXX

動(dòng)物法醫(yī)學(xué)司法鑒定

涉案動(dòng)物病理學(xué)檢材的提取、固定、取材及保存規(guī)范鑒定標(biāo)準(zhǔn)

Standardforextraction,fixation,samplingandpreservationofzoological

andpathologicalmaterials

(征求意見稿)

XXXX-XX-X發(fā)布XXXX-X-X實(shí)施

濰坊市獸醫(yī)協(xié)會(huì)發(fā)

I

T/WFSXXXX一XXXX

涉案動(dòng)物病理學(xué)檢材的提取、固定、取材及保存規(guī)范鑒定標(biāo)準(zhǔn)

一、范圍

本規(guī)范規(guī)定了動(dòng)物學(xué)病理檢材提取、固定、取材及保存的操作流程和技術(shù)要求，適用于動(dòng)物學(xué)研究、教學(xué)、

臨床診斷、疫病監(jiān)測及司法鑒定等活動(dòng)中涉及的病理檢材處理。

二、術(shù)語和定義

病理檢材

從動(dòng)物機(jī)體獲取的，用于病理學(xué)檢查、分析和診斷的組織、器官、細(xì)胞、體液等材料。

提取

運(yùn)用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)和方法，從動(dòng)物體采集病理檢材的操作過程。

固定

采用化學(xué)試劑或物理方法使病理檢材中的生物大分子保持原有狀態(tài)和結(jié)構(gòu)的處理過程。

取材

從已固定的病理檢材中選取適宜部分用于后續(xù)制片、檢驗(yàn)或研究的操作。

保存

運(yùn)用適當(dāng)?shù)臈l件和方法對病理檢材進(jìn)行儲(chǔ)存，以維持其質(zhì)量和特性的過程。

三、病理檢材的提取

1、提取準(zhǔn)備

1.1器械與工具準(zhǔn)備

準(zhǔn)備解剖刀、手術(shù)剪、鑷子、止血鉗、注射器、采樣管、無菌棉簽、載玻片、離心管等器械和工具。所有

器械和工具使用前應(yīng)進(jìn)行清潔、消毒和滅菌處理，確保無菌狀態(tài)。

1.2防護(hù)裝備準(zhǔn)備

操作人員應(yīng)穿戴一次性無菌手術(shù)衣、手套、口罩、護(hù)目鏡、帽子等防護(hù)裝備，防止自身感染和檢材污染。

1.3記錄用品準(zhǔn)備

準(zhǔn)備好記錄表格、標(biāo)簽、記號筆等，用于記錄檢材的來源、種類、采集時(shí)間、采集部位、采集方法等信

息。

2、提取時(shí)機(jī)

2.1自然死亡的動(dòng)物

1

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對于自然死亡的動(dòng)物，應(yīng)在死亡后盡快（一般不超過6-24小時(shí)，具體時(shí)間根據(jù)動(dòng)物種類、環(huán)境溫度和病

變類型等因素確定）進(jìn)行檢材提取。在高溫、潮濕等環(huán)境條件下，應(yīng)盡快縮短提取時(shí)間間隔，以減少死后

自溶、腐敗和微生物污染對檢材質(zhì)量的影響。

2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

對于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和研究目的，在預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢材提取。如果實(shí)驗(yàn)動(dòng)物因疾病需要安

樂死，應(yīng)在實(shí)施安樂死后立即進(jìn)行檢材提取，確保檢材的新鮮度和完整性。

2.3臨床病例

對于臨床病例，應(yīng)在動(dòng)物接受治療前或治療過程中，根據(jù)疾病的發(fā)展和診斷需要，適時(shí)進(jìn)行檢材提取。對

于需要手術(shù)治療的病例，可在手術(shù)過程中采集病變組織和器官等檢材。

3、提取方法

3.1組織檢材提取

根據(jù)動(dòng)物的種類、體型、病變部位和研究目的，選擇合適的解剖部位和切口位置。在進(jìn)行解剖操作前，應(yīng)

對動(dòng)物體表進(jìn)行消毒處理，防止體表微生物污染檢材。

使用無菌解剖器械，小心地切取病變組織及其周圍一定范圍（一般為0.5-1.0cm）的正常組織。組織塊大

小一般為1.0cm×1.0cm×0.3cm-1.5cm×1.5cm×0.5cm，對于微小病變或特殊病變，可適當(dāng)調(diào)整組織塊大小。

在切取組織檢材時(shí)，應(yīng)避免過度牽拉、擠壓和損傷組織，保持組織的原有形態(tài)和結(jié)構(gòu)。對于多個(gè)病變部位

或不同類型的病變，應(yīng)分別提取檢材，并做好標(biāo)記和記錄，注明檢材的來源、病變類型、采集時(shí)間和采集

部位等信息。

3.2器官檢材提取

完整地摘取病變器官或目標(biāo)器官，在摘取過程中應(yīng)注意保護(hù)器官的血管、神經(jīng)和結(jié)締組織，避免損傷和撕

裂。

去除器官表面的結(jié)締組織、脂肪、筋膜和其他附著物，用生理鹽水輕輕沖洗干凈，去除表面的血液、膿液

和污染物。

將摘取的器官檢材放入無菌容器或保鮮袋中，做好標(biāo)記和記錄，盡快進(jìn)行固定處理。

3.3細(xì)胞檢材提取

體腔積液采集

對于體腔積液（如胸腔積液、腹腔積液、心包積液等），使用無菌注射器連接適當(dāng)規(guī)格的針頭（如18-

22G針頭），在無菌操作條件下進(jìn)行穿刺采集。穿刺部位應(yīng)選擇在積液較多且安全的部位，如胸腔穿刺可

選擇在肋間隙、腹腔穿刺可選擇在臍與恥骨聯(lián)合連線中點(diǎn)等部位。

在穿刺過程中，應(yīng)緩慢進(jìn)針，避免損傷內(nèi)臟器官和血管。當(dāng)針頭進(jìn)入體腔后，緩慢抽取適量積液（一般為

2-10ml，具體抽取量根據(jù)積液量和研究需要確定），注入無菌離心管中。

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采集完成后，立即將離心管密封，做好標(biāo)記和記錄，盡快進(jìn)行離心處理，收集細(xì)胞沉淀。

3.4細(xì)胞涂片采集

使用無菌刮片、毛刷或吸管等工具，采集病變部位的細(xì)胞，將細(xì)胞均勻涂抹在載玻片上，制作涂片。涂片

的厚度應(yīng)適中，避免過厚或過薄。

對于液體樣本（如血液、腦脊液、尿液等），可采用離心涂片法。將樣本加入離心管中，進(jìn)行離心處理

（離心速度和時(shí)間根據(jù)樣本類型和研究需要確定），收集細(xì)胞沉淀，用吸管將細(xì)胞沉淀滴加在載玻片上，

制作涂片。

3.5體液檢材提取

血液采集

采集血液時(shí)，可通過靜脈穿刺、心臟穿刺、動(dòng)脈穿刺等方法進(jìn)行。對于小型動(dòng)物（如小鼠、大鼠、豚鼠

等），可采用尾靜脈穿刺或眼眶靜脈叢穿刺的方法采集血液；對于中型動(dòng)物（如兔、貓、狗等），可采用

前肢靜脈、后肢靜脈或頸靜脈穿刺的方法采集血液；對于大型動(dòng)物（如牛、馬、豬等），可采用頸靜脈、

前腔靜脈或尾靜脈穿刺的方法采集血液；對于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的心臟穿刺采血，應(yīng)在麻醉狀態(tài)下進(jìn)行，將針頭插

入心臟腔室，抽取適量血液。

血液采集完成后，根據(jù)檢測目的和后續(xù)處理方法，將血液收集到抗凝管（如肝素鈉抗凝管、乙二胺四乙酸

二鉀抗凝管等）或促凝管中。抗凝管中的血液應(yīng)輕輕顛倒混勻，防止血液凝固；促凝管中的血液應(yīng)靜置一

段時(shí)間，待血液凝固后進(jìn)行離心處理，分離血清或血漿。

尿液采集

對于清醒狀態(tài)的動(dòng)物，可采用自然排尿法、導(dǎo)尿法或膀胱穿刺法采集尿液。自然排尿法是將動(dòng)物置于清潔

的代謝籠中，收集其自然排出的尿液；導(dǎo)尿法是使用無菌導(dǎo)尿管插入動(dòng)物的尿道，將尿液引入無菌容器

中；膀胱穿刺法是在無菌操作條件下，使用注射器通過腹壁穿刺進(jìn)入膀胱，抽取尿液。

對于麻醉狀態(tài)下的動(dòng)物，可采用輸尿管插管法或膀胱造瘺法采集尿液。輸尿管插管法是將無菌導(dǎo)管插入輸

尿管，將尿液引流到收集容器中；膀胱造瘺法是在動(dòng)物的膀胱上進(jìn)行手術(shù)造瘺，將尿液通過造瘺口引出。

唾液采集

對于小型動(dòng)物，可使用唾液收集管或吸附棉棒等工具，刺激動(dòng)物口腔分泌唾液，收集唾液樣本。對于大型

動(dòng)物，可使用口腔引流裝置或唾液收集器等工具，收集唾液樣本。

四、病理檢材的固定

1、固定劑選擇

1.110%中性福爾馬林溶液

10%中性福爾馬林溶液是一種常用的固定劑，由甲醛、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉和蒸餾水組成，pH值為

7.2-7.4。它對組織和細(xì)胞的結(jié)構(gòu)具有良好的固定作用，適用于大多數(shù)病理檢材的固定。

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1.24%多聚甲醛溶液

4%多聚甲醛溶液是由多聚甲醛溶解于磷酸鹽緩沖液中配制而成，pH值為7.2-7.4。它對組織和細(xì)胞的抗原

性保存較好，適用于免疫組織化學(xué)、原位雜交等需要檢測抗原和核酸的病理檢材固定。

1.3乙醇

乙醇是一種常用的有機(jī)溶劑，具有固定和脫水雙重作用。常用的乙醇濃度為70%-95%，適用于細(xì)胞涂

片、血液涂片等檢材的固定。

1.4其他固定劑

根據(jù)特殊的研究目的和檢測要求，還可選擇戊二醛、醋酸、苦味酸等固定劑。

2、固定方法

2.1組織和器官檢材固定

將提取的組織或器官檢材放入裝有固定劑的容器中，固定劑的體積應(yīng)至少為檢材體積的10-20倍，以確保

檢材完全浸沒在固定劑中。

固定時(shí)間根據(jù)檢材的大小和性質(zhì)而定。一般來說，對于小塊組織（<0.5cm3），固定時(shí)間為6-12小時(shí)；對

于中等大小組織（0.5-1.0cm3），固定時(shí)間為12-24小時(shí)；對于大塊組織（>1.0cm3）或器官，固定時(shí)間

為24-48小時(shí)。

在固定過程中，應(yīng)定期輕輕攪動(dòng)固定劑，使檢材與固定劑充分接觸，確保固定均勻。固定完成后，將檢材

從固定劑中取出，用流水沖洗30-60分鐘，以去除殘留的固定劑。

2.1細(xì)胞檢材固定

細(xì)胞涂片固定

對于細(xì)胞涂片，將涂片放入固定劑中固定15-30分鐘。常用的固定劑為95%乙醇、甲醇或丙酮等。固定完

成后，取出涂片，自然晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。

離心后的細(xì)胞沉淀固定

對于離心后的細(xì)胞沉淀，加入適量固定劑（固定劑的體積為細(xì)胞沉淀體積的5-10倍），輕輕攪拌均勻，

固定30-60分鐘。常用的固定劑為10%中性福爾馬林溶液、4%多聚甲醛溶液或乙醇等。固定完成后，離

心去除固定劑，用磷酸鹽緩沖液或生理鹽水洗滌細(xì)胞沉淀2-3次，以備后續(xù)處理。

五、病理檢材的取材

1、取材準(zhǔn)備

1.1固定后的檢材修整

固定后的檢材應(yīng)在取材前進(jìn)行修整，去除多余的固定劑、脂肪、結(jié)締組織和壞死組織等，使檢材表面平

整、清潔。

1.2取材工具準(zhǔn)備

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準(zhǔn)備好取材所需的工具，如鋒利的切片刀、剪刀、鑷子、直尺、載玻片、包埋盒等。取材工具應(yīng)保持清

潔、鋒利，避免對檢材造成損傷。

1.3取材環(huán)境準(zhǔn)備

取材應(yīng)在清潔、通風(fēng)良好的實(shí)驗(yàn)室或?qū)Ｓ萌〔氖疫M(jìn)行，避免環(huán)境污染和交叉污染。取材臺(tái)應(yīng)保持清潔、無

菌，定期進(jìn)行消毒處理。

2、取材要求

2.1取材部位準(zhǔn)確

取材部位應(yīng)根據(jù)病變的特點(diǎn)和研究目的進(jìn)行選擇，包括病變中心、病變與正常組織交界部位、遠(yuǎn)離病變的

正常組織等。對于多灶性病變或彌漫性病變，應(yīng)在多個(gè)部位取材，以全面反映病變的情況。

2.2取材組織塊大小適中

取材組織塊的大小應(yīng)根據(jù)后續(xù)制片和檢測方法確定。一般來說，用于常規(guī)石蠟切片的組織塊大小為

0.2cm×0.2cm×0.2cm-0.3cm×0.3cm×0.3cm；用于冰凍切片的組織塊大小為0.5cm×0.5cm×0.3cm-

1.0cm×1.0cm×0.5cm；用于電鏡檢查的組織塊大小為1mm3左右。

2.3取材數(shù)量足夠

根據(jù)研究需要和病變的復(fù)雜性，確定取材的數(shù)量。一般來說，對于單個(gè)病變部位，應(yīng)至少取材2-3塊組

織；對于多個(gè)病變部位或不同類型的病變，應(yīng)分別取材，確保取材的代表性和完整性。

3、取材方法

3.1組織取材

使用切片刀或剪刀，從固定后的組織或器官中切取所需的組織塊。取材時(shí)應(yīng)注意保持組織的原有結(jié)構(gòu)和方

向，避免過度牽拉和擠壓組織。對于質(zhì)地較硬的組織，可先將組織進(jìn)行軟化處理（如使用蛋白酶消化、酸

水解等方法），再進(jìn)行取材。

將切取的組織塊放入包埋盒中，做好標(biāo)記和記錄，注明組織的來源、病變類型、取材部位和取材時(shí)間等信

息。

3.2細(xì)胞取材

對于細(xì)胞涂片，使用鑷子或吸管將涂片從載玻片上取下，放入包埋盒中。對于離心后的細(xì)胞沉淀，使用吸

管或移液器將細(xì)胞沉淀轉(zhuǎn)移到包埋盒中。

六、病理檢材的保存

1、保存條件

1.1溫度

保存病理檢材的環(huán)境溫度一般控制在4-8℃，對于需要長期保存的檢材（如超過1年），可置于-20℃或-

80℃的低溫冰箱中。