急性腎炎實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)指南演講人：日期:目錄CATALOGUE02尿液檢驗(yàn)技術(shù)03血液檢驗(yàn)技術(shù)04免疫學(xué)檢驗(yàn)方法05病理學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)06檢驗(yàn)結(jié)果管理01急性腎炎概述01急性腎炎概述PART急性腎炎是由鏈球菌等感染后免疫復(fù)合物沉積于腎小球基底膜，激活補(bǔ)體系統(tǒng)引發(fā)的非化膿性炎癥反應(yīng)，病理表現(xiàn)為毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生、中性粒細(xì)胞浸潤及基底膜斷裂。疾病定義與病理特征免疫介導(dǎo)的腎小球炎癥光鏡下可見腎小球體積增大、細(xì)胞增多（增生性腎炎），電鏡下可見上皮下“駝峰樣”電子致密物沉積，免疫熒光顯示IgG和C3顆粒狀沉積。光鏡與電鏡特征中醫(yī)認(rèn)為本病屬“陽水”范疇，因風(fēng)邪外襲、肺失通調(diào)，或濕毒內(nèi)蘊(yùn)、脾失運(yùn)化，導(dǎo)致水液潴留泛溢肌膚，與西醫(yī)病理的體液潴留機(jī)制相呼應(yīng)。中醫(yī)“水腫”病機(jī)病因與風(fēng)險(xiǎn)因素分析感染誘因A組β-溶血性鏈球菌感染（如咽炎、皮膚膿皰瘡）是最常見病因，占兒童病例的80%以上；其他病原體包括病毒（如乙肝病毒）、寄生蟲等。遺傳易感性HLA-DR、補(bǔ)體基因（如CFH、CFHR5）突變可增加發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，部分家族性病例與遺傳性補(bǔ)體缺陷相關(guān)。環(huán)境與行為因素居住擁擠、衛(wèi)生條件差促進(jìn)鏈球菌傳播；吸煙、肥胖及高血壓可能加重腎小球損傷進(jìn)程。典型三聯(lián)征尿常規(guī)顯示蛋白尿（+~）及鏡下血尿；血補(bǔ)體C3一過性降低（8周內(nèi)恢復(fù)）；ASO滴度升高提示鏈球菌感染史。實(shí)驗(yàn)室確診依據(jù)鑒別診斷要點(diǎn)需排除IgA腎病（以發(fā)作性肉眼血尿?yàn)橹鳎?、急進(jìn)性腎炎（腎功能急劇惡化）及系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎炎（多系統(tǒng)受累+抗核抗體陽性）。突發(fā)的眼瞼及下肢凹陷性水腫（晨起加重）、濃茶色或洗肉水樣血尿（尿紅細(xì)胞畸形率>80%）、少尿（<400ml/24h）伴一過性高血壓（舒張壓≥90mmHg）。臨床表現(xiàn)與診斷標(biāo)準(zhǔn)02尿液檢驗(yàn)技術(shù)PART尿常規(guī)操作流程樣本采集與保存要求患者清潔外陰后留取中段尿，避免污染；尿液樣本需在2小時(shí)內(nèi)送檢，否則需冷藏或添加防腐劑（如甲苯）以維持成分穩(wěn)定性。檢測指標(biāo)分析結(jié)果判讀與記錄使用自動(dòng)化尿液分析儀檢測pH值、尿比重（SG）、尿蛋白（PRO）、隱血（BLD）、白細(xì)胞（WBC）等指標(biāo)，重點(diǎn)關(guān)注尿蛋白定性結(jié)果（±至+）及紅細(xì)胞/白細(xì)胞計(jì)數(shù)異常。結(jié)合患者臨床癥狀（如水腫、高血壓）綜合評估，若尿蛋白定性陽性或隱血陽性，需進(jìn)一步進(jìn)行定量檢測或鏡檢確認(rèn)。123尿沉渣顯微鏡檢查方法樣本離心處理取10ml新鮮尿液以1500r/min離心5分鐘，棄去上清液，保留0.2ml沉渣混勻后滴于載玻片，加蓋玻片鏡檢。質(zhì)量控制要求需嚴(yán)格區(qū)分病理性與非病理性成分（如尿酸鹽結(jié)晶與細(xì)菌），記錄每高倍視野（HPF）或低倍視野（LPF）的具體數(shù)量，避免主觀誤差。鏡檢觀察要點(diǎn)在高倍鏡（400×）下計(jì)數(shù)紅細(xì)胞（RBC）、白細(xì)胞（WBC）、管型（如顆粒管型、透明管型）及結(jié)晶；低倍鏡（100×）下觀察整體沉渣分布，異常管型（如紅細(xì)胞管型）提示腎小球病變。尿液蛋白定量技術(shù)要點(diǎn)24小時(shí)尿標(biāo)本收集指導(dǎo)患者從清晨排尿后開始計(jì)時(shí)，收集24小時(shí)內(nèi)全部尿液于專用容器，添加防腐劑（如硼酸）防止蛋白質(zhì)降解，記錄總尿量并混勻后取5ml送檢。檢測方法選擇常用比色法（如磺基水楊酸法）或免疫比濁法，前者適用于篩查，后者特異性高且可區(qū)分微量白蛋白與球蛋白，需校準(zhǔn)儀器并設(shè)置空白對照。臨床意義解讀成人尿蛋白定量＞150mg/24h為異常，腎炎患者常達(dá)1-3g/24h；大量蛋白尿（＞3.5g/24h）提示腎病綜合征，需結(jié)合腎活檢進(jìn)一步明確病理類型。03血液檢驗(yàn)技術(shù)PART腎功能指標(biāo)測定程序血清肌酐檢測采用酶法或苦味酸法測定血清肌酐濃度，評估腎小球?yàn)V過功能，需注意樣本避免溶血和脂血干擾。通過脲酶-谷氨酸脫氫酶法或二乙酰一肟法分析血液中尿素氮水平，反映腎臟排泄功能及蛋白質(zhì)代謝狀態(tài)。利用免疫比濁法測定血清胱抑素C，其敏感性優(yōu)于肌酐，可早期發(fā)現(xiàn)腎小球?yàn)V過率下降。采用放射免疫或酶聯(lián)免疫法檢測，用于評估腎小管重吸收功能及炎癥活動(dòng)程度。尿素氮測定胱抑素C檢測β2-微球蛋白分析電解質(zhì)平衡檢測方法血鉀測定使用離子選擇性電極法或火焰光度法，精準(zhǔn)檢測血鉀濃度，輔助判斷是否存在高鉀血癥或低鉀血癥。02040301血鈣與血磷動(dòng)態(tài)監(jiān)測結(jié)合偶氮胂Ⅲ比色法和鉬藍(lán)法，評估鈣磷代謝異常風(fēng)險(xiǎn)，預(yù)防腎性骨病發(fā)生。血鈉與血氯聯(lián)合檢測通過間接電位法同步測定，分析鈉氯比例失衡情況，指導(dǎo)補(bǔ)液方案制定。血?dú)夥治霾捎脛?dòng)脈血樣本檢測pH值、碳酸氫根等參數(shù)，綜合判斷酸堿平衡狀態(tài)及電解質(zhì)紊亂程度。C反應(yīng)蛋白（CRP）定量通過免疫散射比濁法測定，CRP升高提示急性炎癥反應(yīng)，需結(jié)合臨床排除感染因素。降鈣素原（PCT）檢測采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法，PCT水平可區(qū)分細(xì)菌感染與非感染性炎癥，指導(dǎo)抗生素使用。白細(xì)胞介素-6（IL-6）分析利用ELISA技術(shù)檢測血清IL-6濃度，其動(dòng)態(tài)變化可反映炎癥活動(dòng)強(qiáng)度及預(yù)后評估。補(bǔ)體C3/C4測定通過速率散射比濁法評估補(bǔ)體消耗情況，輔助診斷免疫復(fù)合物介導(dǎo)的腎小球損傷。炎癥標(biāo)志物檢測標(biāo)準(zhǔn)04免疫學(xué)檢驗(yàn)方法PARTASO滴度測定操作采用靜脈采血3-5mL，分離血清后需避免溶血和脂血干擾，樣本在2-8℃保存不超過48小時(shí)，長期保存需-20℃凍存。檢測前需恢復(fù)至室溫并充分混勻。樣本采集與處理使用標(biāo)準(zhǔn)化ASO檢測試劑盒，嚴(yán)格按照說明書配制緩沖液和稀釋液，同時(shí)需進(jìn)行質(zhì)控品（高、中、低濃度）校準(zhǔn)，確保儀器光密度值在有效范圍內(nèi)。試劑準(zhǔn)備與校準(zhǔn)采用膠乳增強(qiáng)免疫比濁法，將樣本與試劑按比例混合后37℃孵育10分鐘，測定吸光度值。結(jié)果以IU/mL表示，成人正常參考值＜200IU/mL，兒童＜150IU/mL，滴度升高提示鏈球菌感染史。檢測流程與結(jié)果判讀通過綿羊紅細(xì)胞致敏后與待測血清反應(yīng)，補(bǔ)體系統(tǒng)激活導(dǎo)致紅細(xì)胞裂解，分光光度計(jì)測定540nm處血紅蛋白釋放量，計(jì)算補(bǔ)體總活性（CH50）。需嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度（37±0.5℃）和時(shí)間（30分鐘）。補(bǔ)體活性檢測步驟CH50溶血法原理血清樣本需新鮮采集，避免反復(fù)凍融；脂血、黃疸或類風(fēng)濕因子可能干擾結(jié)果，需通過高速離心或稀釋預(yù)處理。正常參考范圍為23-46U/mL，低于20U/mL提示補(bǔ)體消耗或遺傳性缺陷。樣本要求與干擾因素針對補(bǔ)體旁路激活途徑，采用兔紅細(xì)胞或脂多糖作為激活物，適用于診斷補(bǔ)體旁路異常相關(guān)疾病，如C3腎炎因子陽性膜增生性腎炎。替代途徑檢測（AP50）間接免疫熒光法（IIF）以HEp-2細(xì)胞或猴肝組織為底物，待測血清稀釋后孵育，熒光標(biāo)記二抗顯色。需觀察核型（均質(zhì)型、斑點(diǎn)型等），抗核抗體（ANA）滴度≥1:80有臨床意義，常見于狼瘡性腎炎。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）定量檢測抗dsDNA抗體、抗GBM抗體等特異性自身抗體?？筪sDNA抗體＞100IU/mL高度提示SLE，抗GBM抗體陽性需結(jié)合臨床排除Goodpasture綜合征。線性免疫印跡技術(shù)同時(shí)檢測15-20種靶抗原（如Sm、RNP、SSA等），適用于多抗體篩查。結(jié)果需結(jié)合免疫熒光和臨床癥狀綜合判斷，避免假陽性（如感染或藥物干擾）。自身抗體篩查技術(shù)05病理學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)PART需完善凝血功能、血常規(guī)、腎臟B超等檢查，排除禁忌癥；術(shù)前簽署知情同意書，定位選取右腎下極皮質(zhì)豐富區(qū)域，避免損傷大血管或集合系統(tǒng)。穿刺前評估與準(zhǔn)備采用自動(dòng)活檢槍或手動(dòng)穿刺針，在超聲引導(dǎo)下快速進(jìn)針，獲取1.5-2cm腎組織條，至少含10個(gè)以上腎小球；若取材不足需重復(fù)穿刺，但不超過3次以降低出血風(fēng)險(xiǎn)。穿刺操作標(biāo)準(zhǔn)化立即將組織分割為3份，分別置于甲醛固定液（光鏡）、戊二醛（電鏡）及冷凍保存液（免疫熒光），確保后續(xù)病理檢查完整性。標(biāo)本分裝與保存010203腎活檢取材規(guī)范組織處理與染色技術(shù)甲醛固定后石蠟包埋，連續(xù)切片厚度2-3μm，常規(guī)采用HE染色觀察組織結(jié)構(gòu)，PAS染色突出基底膜病變，Masson三色染色識別纖維化及免疫復(fù)合物沉積。光鏡標(biāo)本處理流程戊二醛固定后環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片50-70nm，醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙重染色，高倍鏡下觀察足細(xì)胞足突、基底膜電子致密物等超微結(jié)構(gòu)改變。電鏡標(biāo)本制備要點(diǎn)冷凍切片直接法檢測IgG、IgA、IgM、C3、C1q等沉積模式，熒光強(qiáng)度分級（0-3+）輔助鑒別原發(fā)性與繼發(fā)性腎小球疾病。免疫熒光技術(shù)應(yīng)用病理報(bào)告解讀要點(diǎn)臨床關(guān)聯(lián)性分析病理報(bào)告需與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)（如蛋白尿定量、血肌酐）及臨床表現(xiàn)關(guān)聯(lián)，提出治療建議（如激素敏感性評估）及預(yù)后判斷（如慢性化指標(biāo)）。病變定位與描述明確腎小球、腎小管、間質(zhì)及血管的病變范圍，如系膜增生、毛細(xì)血管袢壞死、新月體形成等，需量化腎小球硬化比例及間質(zhì)纖維化程度。病理分型與鑒別診斷結(jié)合光鏡、電鏡及免疫熒光結(jié)果，區(qū)分微小病變、膜性腎病、IgA腎病等類型；提示是否合并高血壓或糖尿病等繼發(fā)性損害。06檢驗(yàn)結(jié)果管理PART結(jié)果綜合分析方法參考區(qū)間分層解讀根據(jù)年齡、性別等生理因素調(diào)整參考范圍，避免單一標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)致的誤判，尤其注意兒童與成人檢驗(yàn)值的差異化管理。動(dòng)態(tài)趨勢監(jiān)測對患者連續(xù)檢測數(shù)據(jù)建立時(shí)間序列模型，觀察關(guān)鍵指標(biāo)（如尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、補(bǔ)體C3水平）的變化趨勢，為臨床干預(yù)提供依據(jù)。多指標(biāo)關(guān)聯(lián)性分析結(jié)合尿常規(guī)、血生化、免疫學(xué)檢測等多項(xiàng)指標(biāo)，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法評估各參數(shù)間的相關(guān)性，識別潛在病理模式。例如，尿蛋白與血清肌酐的比值可輔助判斷腎功能損傷程度。報(bào)告撰寫與審核流程標(biāo)準(zhǔn)化報(bào)告模板采用結(jié)構(gòu)化格式，包含患者基本信息、檢測項(xiàng)目、結(jié)果數(shù)值、參考范圍、異常值標(biāo)注及臨床建議，確保信息完整且易于解讀。三級審核制度初級檢驗(yàn)人員完成報(bào)告后，需經(jīng)中級技師復(fù)核數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性，最終由高級職稱專家對疑難病例或臨界值結(jié)果進(jìn)行臨床相關(guān)性評估并簽字確認(rèn)。危急值通報(bào)機(jī)制對血鉀>6.0mmol/L或eGFR<15mL/min等危及生命的指標(biāo)，要求檢驗(yàn)科在15分鐘內(nèi)通過電話或電子