1T/FSBMEAX—2026山茶油中兒茶素、表兒茶素的測(cè)定高效液相色譜法本文件規(guī)定了山茶油中兒茶素、表兒茶素的測(cè)定方法。本文件適用于不同生產(chǎn)工藝山茶油中兒茶素、表兒茶素的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理樣品經(jīng)正己烷提取，提取液經(jīng)固相萃取凈化后，采用液相色譜檢測(cè)，外標(biāo)法定量。5試劑和材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。5.1試劑5.1.1甲醇（CH3OH）：高效液相色譜級(jí)。5.1.2乙酸（CH3COOH）：高效液相色譜級(jí)。5.1.3正己烷（C6H14）。5.1.4乙酸乙酯（CH3COOCH2CH3）。5.2溶液配制5.2.1乙酸溶液（0.2%）：取乙酸（5.1.2）2mL用水稀釋至1000mL，混勻。2T/FSBMEAX—20265.2.2乙酸乙酯—正己烷（1:9）溶液：取乙酸乙酯(5.1.4)10mL，用正己烷（5.1.3）稀釋至100mL，混勻。5.2.350%甲醇溶液：取甲醇(5.1.1)70mL，用水稀釋至100mL，混勻。5.3標(biāo)準(zhǔn)品5.3.1表兒茶素（C15H14O6，CAS號(hào)：490-46-0）5.3.2兒茶素（C15H14O6，CAS號(hào)：154-23-4）5.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取表兒茶素、兒茶素適量（精確至0.0001g），用甲醇溶解，配制成濃度為200μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，4℃保存，有效期3個(gè)月。5.5材料5.5.1固相萃取柱：填料為二醇基化合物，500mg/6mL，或性能相當(dāng)者。5.5.2微孔濾膜：孔徑0.45μm，有機(jī)系。6儀器和設(shè)備6.1高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。6.2分析天平：感量0.0001g和0.00001g。6.3固相萃取裝置。6.4渦旋混合器。6.5水浴鍋。6.6玻璃試管：10mL；25mL。6.7蒸發(fā)皿：30mL。7樣品冷榨、熱榨等不同加工工藝生產(chǎn)的山茶油。8試驗(yàn)步驟8.1樣品提取精密稱(chēng)取2.5g山茶油（精確至0.001g）于25mL玻璃試管中，加入8mL正己烷，在渦旋混合器上振蕩2min，待凈化。8.2樣品凈化T/FSBMEAX—20263固相萃取柱依次用甲醇5mL、正己烷5mL活化，將8.1凈化液全部過(guò)柱，再依次用正己烷5mL和乙酸乙酯—正己烷（1:9）溶液5mL洗滌，抽干后用洗脫液甲醇8mL洗脫，收集洗脫液于10mL玻璃試管，將洗脫液轉(zhuǎn)入蒸發(fā)皿，置于80℃水浴中蒸干有機(jī)溶劑，殘?jiān)尤?mL50%甲醇溶液，攪拌溶解，用0.45μm濾膜過(guò)濾，濾液供高效液相色譜儀測(cè)定。8.3混合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備分別準(zhǔn)確移取表兒茶素、兒茶素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液適量，用初始流動(dòng)相稀釋并制成濃度為0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的混合系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，供高效液相色譜儀測(cè)定。以測(cè)得的峰面積為縱坐標(biāo)、對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。8.4測(cè)定8.4.1色譜條件a）色譜柱：C18色譜柱（250mm×4.6mm，粒徑5μm），或相當(dāng)者；b）流動(dòng)相：A為甲醇（5.1.1)，B為0.2%乙酸溶液（5.2.1)，梯度洗脫條件見(jiàn)表1；c）流速：1.0mL/min；d）檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm；e）柱溫：30℃;f）進(jìn)樣量：10μL。表1流動(dòng)相梯度洗脫條件058.4.2測(cè)定法取試樣溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，按外標(biāo)法以色譜峰面積定量。標(biāo)準(zhǔn)工作液及試樣溶液中表兒茶素、兒茶素峰面積應(yīng)在儀器檢測(cè)的線(xiàn)性范圍之內(nèi)，在上述色譜條件下，混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見(jiàn)附錄A。8.5空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按上述測(cè)定步驟進(jìn)行。9結(jié)果計(jì)算和表述試樣中表兒茶素或兒茶素含量按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)或公式(1)計(jì)算。T/FSBMEAX—20264式中：X—樣中表兒茶素/兒茶素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，單位為毫克每千克（mg/kg）；A—試樣中表兒茶素/兒茶素色譜峰面積；CS—標(biāo)準(zhǔn)工作液中表兒茶素/兒茶素的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL）；AS—標(biāo)準(zhǔn)工作液中表兒茶素/兒茶素色譜峰面積；V—試樣定容體積，單位為毫升（mL）；m—試樣取樣量，單位為克（g）；1000—換算系數(shù)。計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。10方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度10.1靈敏度本方法表兒茶素、兒茶素檢測(cè)限為0.10mg/kg；定量限為0.20mg/kg。10.2準(zhǔn)確度表兒茶素、兒茶素在0.2mg/kg～2.0mg/kg添加濃度的回收率為70%～120%。10.3精密度本方