(19)中華人民共和國國家知識產(chǎn)權(quán)局(21)申請?zhí)?02010722697.9(22)申請日2020.07.24(71)申請人中國人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院地址100850北京市海淀區(qū)太平路27號(72)發(fā)明人鐘武秦勇王曼麗曹瑞源樊士勇胡志紅李松(74)專利代理機構(gòu)中國貿(mào)促會專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司11038代理人杜仙蘇紅梅A61K31/05(2006.01)A61P31/14(2006.01)(54)發(fā)明名稱大麻二酚在制備治療冠狀病毒感染的藥物中的用途毒性(%)毒性(%)2上述任意一種或多種成分的藥物組合物在制備用于預(yù)防和/或治療冠狀病毒引起的疾病或感染的藥物中的用途，2.權(quán)利要求1的用途，其中所述疾病或感染為呼吸系統(tǒng)疾病或感染；優(yōu)選地，所述疾病或感染為單純性感染、肺炎、急性或嚴(yán)重急性呼吸道感染、低氧性呼吸衰竭、急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、膿毒性休克或重癥急性呼吸綜合征(SARS);優(yōu)選地，所述單純性感染為發(fā)熱、咳嗽或咽痛。3.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述疾病或感染為COVID-19。4.式I所示化合物、或其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，或含有上述任意一種或多種成分的藥物組合物在制備冠狀病毒抑制劑中的用途，5.式I所示化合物、或其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，或含有上述任意一種或多種成分的藥物組合物在制備用于抑制冠狀病毒在細胞中復(fù)制和/或繁殖的藥物中的用途，6.權(quán)利要求5的用途，其中所述細胞為哺乳動物細胞；優(yōu)選地，所述哺乳動物選自?？?動物、馬科動物、羊科動物、豬科動物、犬科動物、貓科動物、嚙齒類動物和靈長類動物；優(yōu)選7.權(quán)利要求1-6任一項的用途，其中所述藥物組合物進一步含有藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑；優(yōu)選地，所述藥物組合物為固體制劑或液體制劑；進一步優(yōu)選地，所述藥物組合物為片劑、注射劑或噴劑。8.權(quán)利要求1-7任一項的用途，其中所述藥物組合物中式I化合物、或其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物作為唯一藥物活性成分；優(yōu)選地，所述藥物組合物中進一步含有其它抗病毒活性成分；優(yōu)選地，所述式I化合物、或其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物、或藥物組合物與其它抗病毒活性成分聯(lián)合用藥(例如同時、分別或相繼用藥);優(yōu)選地，所述其它抗病毒活性成分選自金剛烷胺、金剛乙胺、恩夫韋地、馬拉韋羅、阿昔阿德福韋酯、依法韋侖、奈韋拉平、沙奎那韋、奧司他韋、扎那米韋、利巴韋林和干擾素中的一種或多種。9.權(quán)利要求1-8任一項的用途，其中所述冠狀病毒選自HCoV-229E、HCoV-0C43、HCoV-10.權(quán)利要求1-9任一項的用途，其中所述冠狀病毒為SARS-CoV-2。4技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明屬于化學(xué)藥物領(lǐng)域，具體涉及大麻二酚(結(jié)構(gòu)如式I所示)、其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物、或其藥物組合物在制備用于治療冠狀病毒，特別是SARS-CoV-2引起的疾病或感染的藥物中的用途。工背景技術(shù)[0003]冠狀病毒(Coronavirus)是有包膜的不分節(jié)段的單股正鏈RNA病毒，具有廣泛的動11日，國際病毒分類委員會(ICTV)命名了一種新型冠狀病毒-嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病冠狀病毒感染，臨床上以支持治療為主，尚無特異抗病毒藥物可用。[0004]大麻二酚(式I化合物),化學(xué)名為(-)-2-[(3R,4R)-p-薄荷-1,8-二烯-3β-基]-5-戊基間苯二酚，是一種具有多種生物學(xué)活性的大麻素類化合物。該藥物對于癲癇病癥有顯著治療效果，以大麻二酚為有效成分的抗癲癇藥物(Epidiolex)已在美國上市。[0005]大麻二酚最早于1940年從大麻中分離，是一種非精神類成分，無致幻作用，且不會導(dǎo)致生理依賴。近年來，由于其廣泛的生物效應(yīng)，大麻二酚越來越受到國際社會的關(guān)注與重糖尿病以及肝臟保護等藥理學(xué)活性。以大麻二酚作為主要活性成分的藥品、化妝品、保健品等產(chǎn)品已在國外上市，應(yīng)用前景廣闊。[0006]目前，大麻二酚的抗病毒活性及對病毒性疾病的治療相關(guān)研究尚未得到充分開發(fā)明內(nèi)容[0007]本發(fā)明的一個目的是發(fā)現(xiàn)對冠狀病毒特別是SARS-CoV-2有抑制活性的藥物，用于治療由其引起的相關(guān)疾病或感染，例如單純性感染(如發(fā)熱、咳嗽和咽痛等)、肺炎、急性或嚴(yán)重急性呼吸道感染、低氧性呼吸衰竭、急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥或膿毒性休克等。研52復(fù)制的功能。在一些試驗中，大麻二酚對VeroE6細胞中SA為4.10μM,SI為6.61,顯示其對于治療SARS-CoV-2引起的疾病或感染是非常有利的。[0008]因此，在第一個方面，受的鹽、溶劑化物或水合物，或含有上述任意一種或多種成分的藥物組合物在制備用于預(yù)防和/或治療冠狀病毒引起的疾病或感染的藥物中的用途，[0010]在第二個方面，本發(fā)明提供式I所示的化合物、或其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，或含有上述任意一種或多種成分的藥物組合物，其用于預(yù)防和/或治療冠狀病毒引起的疾病或感染，[0012]在第三個方面，本發(fā)明提供一種預(yù)防和/或治療冠狀病毒引起的疾病或感染的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的式I所示的化合物、或其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，或含有上述任意一種或多種成分的藥物組合物的步驟，[0014]在第四個方面，本發(fā)明提供式I所示的化合物、或其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，或含有上述任意一種或多種成分的藥物組合物在制備用于預(yù)防和/或治療呼吸系統(tǒng)疾病的藥物中的用途，6溶劑化物或水合物，或含有上述任意一種或多種成分的藥物組合物在制備冠狀病毒抑制劑中的用途，[0018]在第六個方面，本發(fā)明提供式I所示化合物溶劑化物或水合物，或含有上述任意一種或多種成分的藥物組合物，其用于抑制冠狀病毒，[0020]在第七個方面，本發(fā)明提供一種抑制冠狀病毒的方法，其包括向細胞或有此需要的受試者施用有效量的式I所示化合物、或其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，或含有上述任意一種或多種成分的藥物組合物的步驟，7[0022]在第八個方面，本發(fā)明提供式I所示化合物溶劑化物或水合物，或含有上述任意一種或多種成分的藥物組合物在制備用于抑制冠狀病毒在細胞中復(fù)制和/或繁殖的藥物中的用途，[0024]在第九個方面，本發(fā)明提供式I所示化合物溶劑化物或水合物，或含有上述任意一種或多種成分的藥物組合物，其用于抑制冠狀病毒在細胞中復(fù)制和/或繁殖，[0026]在第十個方面，本發(fā)明提供一種抑制冠狀病毒在細胞中復(fù)制和/或繁殖的方法，其包括將所述細胞與有效量的式I所示化合物、或其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，或含有上述任意一種或多種成分的藥物組合物接觸的步驟，8[0028]臨床研究發(fā)現(xiàn)，SARS-CoV-2感染的癥狀主要以肺炎為主，依據(jù)病情的輕重程度可適，老年人和免疫抑制者可能會出現(xiàn)非典型癥狀。輕癥肺炎的患者主要以咳嗽、呼吸困難和呼吸急促為主。重癥肺炎可見于青少年、成人或兒童，主要癥狀為呼吸頻率增加，嚴(yán)重的呼部影像為雙側(cè)磨玻璃影，但不能完全由積液、大葉滲出或者肺不張或者肺部塊影解釋，以肺水腫為主要癥狀。膿毒癥患者往往有致命的器官功能障礙，膿毒性休克是最為危重的患者，死亡可能性較高。[0029]在一些實施方案中，本發(fā)明任一方面所述疾病或感染為呼吸系統(tǒng)疾病或感染。[0030]在一些實施方案中，本發(fā)明任一方面所述疾病或感染為單純性感染、肺炎、急性或嚴(yán)重急性呼吸道感染、低氧性呼吸衰竭、急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、膿毒性休克或重癥[0031]在一些實施方案中，本發(fā)明任一方面所述呼吸系統(tǒng)疾病或感染選自單純性感染、休克和重癥急性呼吸綜合征。在一些實施方案中，所述單純性感染為發(fā)熱、咳嗽或咽痛等。[0032]在一些實施方案中，本發(fā)明任一方面所述疾病或感染為COVID-19。[0033]在一些實施方案中，本發(fā)明任一方面所述細胞為哺乳動物細胞。在一些實施方案[0034]在一些實施方案中，本發(fā)明任一方面所述冠狀病毒選自HCoV-229E、HCoV-0C43、[0035]在一些實施方案中，本發(fā)明任一方面所述冠狀病毒為SARS-CoV-2。[0036]本發(fā)明中所述的藥物組合物中的式I化合物、或其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物為唯一藥物活性成分。[0037]本發(fā)明中所述的藥物組合物中進一步含有其它抗病毒活性成分。物或水合物、或藥物組合物與其它抗病毒活性成分聯(lián)合用藥。在一些實施方案中，所述式I化合物、或其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物與其它抗病毒活性成分在同一制劑單元中。9物或水合物與其它抗病毒藥物活性成分在不同的制劑單元中。物或水合物與其它抗病毒活性成分同時、分別或相繼給藥。[0041]在一些實施方案中，所述其它抗病毒活性成分選自金剛烷胺、金剛乙胺、恩夫韋韋林和干擾素中的一種或多種。[0042]本發(fā)明中所述的藥物組合物可進一步含有藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。所述載體是指用于提高藥物在遞送過程中的選擇性、有效性和/或安全性的物質(zhì)。主要用于控制藥物釋放，也可用于提高藥物的藥代動力學(xué)特性，特別是生物利用度。所述賦形劑是指在藥物制劑中除活性成分外的其它物質(zhì)，主要用于長期穩(wěn)定性，填充固體制劑(因此，也常被用于特指“填充劑”)或增強產(chǎn)品療效(例如促進吸收、降低粘度或提高溶解或給藥形式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在已知理論及經(jīng)驗基礎(chǔ)上選擇合適的載體和賦形劑。[0043]本發(fā)明所述藥物組合物可以根據(jù)不同給藥途徑而制備成各種形式。[0044]根據(jù)本發(fā)明，所述的藥物組合物可以以下面的任意方式施用：口服、噴霧吸入、直或靜脈內(nèi)用藥方式。物或水合物可制成任意口服可接受的制劑形式，包括但不限于片劑、膠囊、水溶液或水懸浮液。其中，片劑一般使用的載體包括乳糖和玉米淀粉，另外也可加入潤滑劑如硬質(zhì)酸鎂。膠囊制劑一般使用的稀釋劑包括乳糖和干燥玉米淀粉。水懸浮液制劑則通常是將活性成分與適宜的乳化劑和懸浮劑混合使用。如果需要，以上口服制劑形式中還可加入一些甜味劑、芳香劑或著色劑。[0046]當(dāng)直腸用藥時，所述式I物或水合物一般可制成栓劑的形式，其通過將藥物與一種適宜的非刺激性賦形劑混合而制得。該賦形劑在室溫下呈現(xiàn)固體狀態(tài)，而在直腸溫度下熔化釋出藥物。該類賦形劑包括可可[0047]當(dāng)局部用藥時，特別是治療局部外敷容易達到的患面或器官，如眼睛、皮膚或下腸道神經(jīng)性疾病時，所述式I所示化合物、或其幾何異構(gòu)體合物可根據(jù)不同的患面或器官制成不同的局部用藥制劑形式，具體說明如下：劑化物或水合物可配制成一種微粉化懸浮液或溶液的制劑形式，所使用載體為等滲的一定pH的無菌鹽水，其中可加入也可不加防腐劑如氯化芐基烷醇鹽。此外對于眼用，也可將化合物制成膏劑形式如凡士林膏。[0049]當(dāng)皮膚局部施用時，所述式I所示化合物、或其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上劑化物或水合物可制成適當(dāng)?shù)能浉唷⑾磩┗蛩獎┲苿┬问?，其中活性成分懸浮或溶解于一丙二醇、聚氧化乙烯、聚氧化丙烯、乳化蠟和水；洗劑或霜劑可使用的載體包括但不限于：礦物油、脫水山梨糖醇單硬脂酸酯、吐溫60、十六烷酯蠟、十六碳烯芳醇、2-辛基十二烷醇、芐醇和水。[0050]當(dāng)下腸道局部施用時，所述式I所示化合物、或其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物可制成如上所述的直腸栓劑制劑或適宜的灌腸制劑形式，另外也可使用局部透皮貼劑。[0051]所述式I所示化合物、或其幾何異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或水合物還可以無菌注射制劑形式用藥，包括無菌注射水或油懸浮液，或無菌注射溶液。其中，可使用的載體和溶劑包括水，林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，滅菌的非揮發(fā)油也可用作溶劑或懸浮介質(zhì)，如單甘油酯或二甘油酯。[0052]上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。[0053]在一些實施方案中，所述藥物組合物為固體制劑或液體制劑。在一些實施方案中，所述藥物組合物為片劑、注射劑或噴劑。在一些實施方案中，所述藥物組合物為注射劑。[0054]在本申請中，除非另有說明，否則本文中使用的科學(xué)和技術(shù)名詞具有本領(lǐng)域技術(shù)人員所通常理解的含義。并且，本文中所用的細胞培養(yǎng)、分子遺傳學(xué)、核酸化學(xué)、免疫學(xué)實驗室操作步驟均為相應(yīng)領(lǐng)域內(nèi)廣泛使用的常規(guī)步驟。同時，為了更好地理解本公開，下面提供相關(guān)術(shù)語的定義和解釋。[0055]在本文中，所用術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”包括式I化合物的無機或有機酸鹽，以及天冬氨酸鹽，葡糖酸鹽，苯甲酸鹽，甲磺酸鹽，乙磺酸鹽，苯磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽或雙羥萘酸鹽等。[0056]在本文中，術(shù)語“幾何異構(gòu)體”是指在有雙鍵或環(huán)狀結(jié)構(gòu)的分子中，由于分子中與雙鍵或環(huán)相連接的原子或原子團的自由旋轉(zhuǎn)受阻礙，存在不同的空間排列而產(chǎn)生的立體異構(gòu)體，例如順式/反式異構(gòu)體。[0057]本文中所述式I化合物可以溶劑合物(優(yōu)選水合物)的形式存在，其包含作為所述化合物晶格的結(jié)構(gòu)要素的極性溶劑，特別是水、甲醇或乙醇。極性溶劑特別是水的量可以化學(xué)計量比或非化學(xué)計量比存在。應(yīng)理解的是，在治療本申請所述的疾病或感染中使用的式I化合物的任何溶劑合物盡管可能提供不同的性質(zhì)(包括藥代動力學(xué)性質(zhì)),但是一旦吸收至受試者中，會得到式I化合物，使得式I化合物的使用分別涵蓋式I化合物的任何溶劑合物的使用。[0058]在本文中，所用術(shù)語“2019新型冠狀病毒(2019-nCoV)”的正式分類名為嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2(severeacuterespiratorysyndromecoronavirus2,SARS-CoV-[0059]在本文中，所用術(shù)語“2019新型冠狀病毒(2019-nCoV)引起的疾病”的正式名稱為[0060]在本文中，術(shù)語“治療有效量”或“預(yù)防有效量”是指在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，足以治療或預(yù)防患者疾病但足夠低地避免嚴(yán)重副作用(在合理的利益/風(fēng)險比)的量?；衔?1的治療有效量將根據(jù)所選擇的具體化合物(例如考慮化合物的效力、有效性和半衰期)、所和身體疾病、所治療的患者的醫(yī)療史、治療持續(xù)時間、并行療法的性質(zhì)、所需的治療效果等因素發(fā)生變化，但仍可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員常規(guī)確定。物或水合物針對不同患者的特定使用劑量和使用方法決定于諸多因素，包括患者的年齡，度以及診治醫(yī)師的主觀判斷。這里優(yōu)選使用劑量介于0.001-1000mg/kg體重/天。附圖說明[0062]圖1顯示了大麻二酚對SARS-CoV-2感染的veroE6細胞上病毒核酸載量的影響；大麻二酚在細胞感染SARS-CoV-248h后能夠抑制細胞上的病毒RNA載量，且抑制活性呈劑量依賴性。其中，左側(cè)縱坐標(biāo)為依據(jù)樣品中病毒RNA的拷貝數(shù)計算出的百分比抑制率(對應(yīng)圖中的圓點及其擬合線),右側(cè)縱坐標(biāo)為依據(jù)細胞活力計算出的百分比毒性(對應(yīng)圖中的方塊及其擬合線),橫坐標(biāo)為藥物濃度。具體實施方式[0063]下面將結(jié)合具體實施例來進一步說明本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)理解，以下實施例僅用于說明本發(fā)明，但并不以此來限定本發(fā)明的保護范圍。下面實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或參考制造商建議進行。所用藥品或試劑未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。[0064]實施例1:大麻二酚降低SARS-CoV-2感染的細胞病毒核酸載量實驗[0065](1)藥物處理感染病毒的細胞[0066]將VeroE6細胞(購自ATCC,貨號1586)接種至24孔板，培養(yǎng)24h,然后進行病毒感染。具體的，用2%細胞維持液(配方為：將FBS(購自Gibco公司，貨號16000044)按照2%的體積比加入MEM(購自Gibco公司，貨號10370021),即為2%細胞維持液)將SARS-CoV-2(2019-nCoV)病毒(nCoV-2019BetaCoV/Wuhan/WIVO4/2019株，由中國科學(xué)院武漢病毒研究所保存)稀釋成相應(yīng)濃度，然后加入24孔板中使每孔含有病毒量為100TCID?0。接下來再用2%細胞維持液將大麻二酚(購自SelleckChemicals,貨號S7975)分別稀釋成相應(yīng)濃度，加入到對應(yīng)37℃、5%CO?孵箱繼續(xù)培養(yǎng)48h,細胞對照組只加不含有任何受試藥物的2%細胞維持液。[0068]RNA提取試劑盒購自Qiagen公司，貨號74106。下述RNA提取步驟中所涉及的耗材部分。下述提取步驟均為試劑盒說明書所推薦的步驟。[0069]1)取受試培養(yǎng)板的上清液100μL,加入無核酸酶EP管中，然后每孔加入350μLBufferRLT,用移液槍吹吸混勻使其充分裂解后，離心取上清；[0070]2)向1)中所得上清液加入等體積的70%乙醇，混勻；[0071]3)將上述2)中所得混合液轉(zhuǎn)入無RNA酶的離心柱中，12000rpm離心15s,棄廢液；CN111686095A說明書9/11頁[0075]7)換新的無RNA酶的2ml收集管，12000rpm離心1min,干燥離心柱，然后離心柱整體轉(zhuǎn)移至步驟8)的1.5ml收集管中；[0076]8)換上新的1.5ml收集管，放入步驟7)中干燥后的離心柱，并向離心柱中加入30μl公司，貨號M0314L),用NanoDrop(購自Thermoscientific,型號NanoDropOne)檢[0078]實驗采用TaKaRa公司生產(chǎn)的反轉(zhuǎn)錄試劑盒(PrimeScriptTMRTreagentKitwith℃水浴2min去除樣品中可能存在的gDNA;[0080]②逆轉(zhuǎn)錄：向①所得樣品中加入適量的酶和引物Mix及反應(yīng)緩沖液，用RNaseFree水補足體積至20μ1,37℃水浴反應(yīng)15min,之后投入85℃水中5秒，即可轉(zhuǎn)錄得到cDNA。[0082]采用熒光定量PCR檢測原病毒液每毫升所含拷貝數(shù)。[0083]采用TBGreenPremix(Takara,Cat#RR820A)混好反應(yīng)體系，在Real-timePCR儀(品牌：ABI)進行擴增反應(yīng)和讀數(shù)。計算原病毒液每毫升所含拷貝數(shù)。步驟如下：[0084]①首先建立標(biāo)準(zhǔn)品：將質(zhì)粒pMT-RBD(質(zhì)粒由中國科學(xué)院武漢病毒研究所保存)稀釋成5×108拷貝/μL,5×10?拷貝/μL,5×10?拷貝/μL,5×10?拷貝/μL,5×10?拷貝/μL,5×[0085]②實驗過程中所用引物序列如下(均為5'-3'方向表示):[0089]預(yù)變性：95℃5分鐘；[0090]