(12)發(fā)明專利(10)授權公告號CN1117688(65)同一申請的已公布的文獻號審查員趙子赫(73)專利權人中國水產(chǎn)科學研究院黑龍江水產(chǎn)研究所地址150070黑龍江省哈爾濱市道里區(qū)河松街232號(72)發(fā)明人王繼隆魯萬橋劉偉李培倫唐富江(74)專利代理機構北京東方盛凡知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙)11562代理人謝秀娟一種大麻哈魚人工放流群體與自然野生群體的鑒別方法本發(fā)明公開一種大麻哈魚人工放流群體與自然野生群體的鑒別方法，包括以下步驟：樣本本發(fā)明采集大麻哈魚回歸群體樣本，挑取矢耳石開展耳石微化學分析，采用電子微探針技術對矢耳石進行定量線分析，計算大麻哈魚耳石的R?此方法對大麻哈魚回歸群體檢驗，判別成功率達100%,且本發(fā)明基于目前大麻哈魚放流苗種培育過程與自然群體大麻哈魚野外孵化條件的不同，不需對大麻哈魚放流苗種進行額外的標記，即可對人工增殖群體與自然群體進行有效鑒別，21.一種大麻哈魚人工放流群體與自然野生群體的鑒別方法，其特征在于，包括以下步采集大麻哈魚回歸群體樣本，取出矢耳石進行打磨，打磨至核心，然后對矢耳石進行拋光處理，處理后利用電子微探針分析儀對矢耳石樣本進行檢測分析；利用電子微探針沿著垂直于矢耳石頭部、尾部連線且過矢耳石核心的直線，從矢耳石核心至矢耳石背部邊緣進行Sr/Ca值的線性定量分析；根據(jù)步驟二中矢耳石的定量線性分析，繪制矢耳石自核心至邊緣的Sr/Ca值的分布曲線，劃分大麻哈魚在淡水、海水中的生活階段及其他關鍵特征階段，然后分別測量大麻哈魚矢耳石核心至邊緣的徑長R、早期淡水生活階段矢耳石徑長R?、溯河回歸期淡水生活階段矢耳石徑長R?、大麻哈魚卵黃囊吸收完至幼魚降海洄游期的矢耳石徑長R,再按照矢耳石徑長與體長、叉長等正比例關系的經(jīng)驗公式，分別計算各階段大麻哈魚的叉長：式中，R為耳石核心至邊緣的徑長；L為魚體叉長；R、L分別為i階段時的耳石徑長和魚體叉長；式中，R為自矢耳石核心沿線性定量分析線方向至對應淡水生境區(qū)域結束時的徑長，R為定量線分析時從矢耳石核心至邊緣的耳石徑長，R表示淡水系數(shù)；根據(jù)步驟三計算的各參數(shù)，對兩群體進行區(qū)分，其中自然野生大麻哈魚早期淡水生活2.根據(jù)權利要求1所述的一種大麻哈魚人工放流群體與自然野生群體的鑒別方法，其3.根據(jù)權利要求1所述的一種大麻哈魚人工放流群體與自然野生群體的鑒別方法，其特征在于：所述步驟二中，標準樣品使用碳酸鈣CaCO?和鈦酸鍶SrTiO?,電子微探針的機器條件為加速電壓15kV,電子束電流2.0×10?A,每點駐留時間為15S,分析束斑直徑和間距分別4.根據(jù)權利要求1所述的一種大麻哈魚人工放流群體與自然野生群體的鑒別方法，其特征在于：所述步驟三中，根據(jù)大麻哈魚生活史特征及耳石微化學分析結果，劃分大麻哈魚在淡水、海水中的生活階段及其他關鍵特征階段。5.根據(jù)權利要求1所述的一種大麻哈魚人工放流群體與自然野生群體的鑒別方法，其2/2頁2/2頁3特征在于：所述步驟三中，淡水系數(shù)反映洄游性魚類早期生活在淡水環(huán)境中的時間占整個生活史時間的比例，也體現(xiàn)洄游性魚類對淡水生境的依存程度。6.根據(jù)權利要求1所述的一種大麻哈魚人工放流群體與自然野生群體的鑒別方法，其特征在于：所述步驟四中，由于人工培育大麻哈魚和自然野外群體的生活史差異主要在于早期的淡水生活階段，根據(jù)其中的差異性對兩群體進行區(qū)分。4一種大麻哈魚人工放流群體與自然野生群體的鑒別方法技術領域[0001]本發(fā)明涉及魚類鑒別技術領域，尤其涉及一種大麻哈魚人工放流群體與自然野生群體的鑒別方法。背景技術[0002]大麻哈魚是典型的溯河洄游性魚類，廣泛分布于北太平洋及沿岸國家的淡水河流恢復大麻哈魚資源，大麻哈魚人工增殖起到了一定的效果，為了科學評估大麻哈魚資源現(xiàn)狀以及大麻哈魚人工放流效果，首先需要在大麻哈魚回歸群體監(jiān)測評估工作中對人工增殖群體和自然野生群體進行有效的鑒別，進而對大麻哈魚增殖放流回捕率、增殖群體比例以及兩群體的生物學、遺傳多樣性等方面開展深入分析，可見對人工放流群體和自然野生群體的鑒別工作非常重要，是開展后續(xù)研究分析工作的前提；[0003]目前對大麻哈魚增殖放流工作中采用標記方法對放流群體進行標記，以便在后續(xù)回歸群體的監(jiān)測工作中進行有效辨別，但是，大麻哈魚標記方法各有優(yōu)缺點，且對標記工作有一定的條件限制，很難找到一種非常高效方便的方法，且有些放流站工作條件限制，一些標記方法不能采用，因而影響后續(xù)的評估工作；[0004]人工增殖群體和自然群體的差異性主要在受精卵孵化以及降海期之前幼魚生活階段，在大麻哈魚幼魚降海之后至成熟返回過程中的生境履歷相同，其中，在人工增殖群體中，大麻哈魚增殖放流工作在大麻哈魚洄游期采用大麻哈魚回歸群體作為親本，人工繁殖大麻哈魚受精卵，然后采用地下水作為大麻哈魚受精卵及幼苗培育水體，地下水水溫較為恒定一般為7-10℃,大麻哈魚孵出后采用人工飼料進行飼養(yǎng)，待4月下旬至5月下旬在特定水域進行放流，放流期的大麻哈魚叉長一般為7-9cm;在自然群體中，大麻哈魚溯河回歸群體返回出生河流進行自然繁殖，受精卵孵化以及幼魚降海洄游之前一直在淡水河流生活，河流水溫較地下水水溫低，大麻哈魚自然野生群體生長發(fā)育較人工養(yǎng)殖大麻哈魚慢，自然群體降海時間一般集中在4、5月，此時大麻哈魚幼魚叉長為3cm,而同期的人工增殖放流幼魚的叉長為7-9cm,顯著高于大麻哈魚自然群體；由此，大麻哈魚的生境履歷可以采用耳石中Sr/Ca值進行反演，一般來說海洋中的Sr/Ca值高于淡水，根據(jù)耳石Sr/Ca值可以區(qū)分大麻哈魚的洄游期，在大麻哈魚受精卵發(fā)育后便形成了耳石，由于卵黃囊來自于母體，在卵黃囊吸收前大麻哈魚耳石中的Sr元素含量較高，卵黃囊吸收完成后大麻哈魚自身營養(yǎng)物質(zhì)完全依賴于淡水環(huán)境，其耳石中的Sr元素含量較低，隨后大麻哈魚幼魚降海進入海洋，由于海水中的Sr元素含量顯著高于淡水中，故其耳石中Sr元素濃度及Sr/Ca值逐漸升高，海洋生活階段其Sr元素濃度及Sr/Ca值會有所波動但其數(shù)值都較高，大麻哈魚成熟后溯河返回淡水河流繁殖，繁殖后不久便死去，進入淡水后大麻哈魚不再攝食，其后的淡水生活階段較短，因為此階段耳石的生長受到體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的影響及Sr、Ca元素沉積的滯后效應，Sr/Ca值較前一階段有所下降，但是仍高于早期淡水生活階段，因此，本發(fā)明提出一種大麻哈魚人工放流群體與自然野生群體的鑒別方法以解決現(xiàn)有技術中存在的問題。5發(fā)明內(nèi)容[0005]針對上述問題，本發(fā)明的目的在于提出一種大麻哈魚人工放流群體與自然野生群體的鑒別方法，該方法基于目前大麻哈魚放流苗種培育過程與自然群體大麻哈魚野外孵化條件的不同，不需對大麻哈魚放流苗種進行額外的標記，即可對人工增殖群體與自然群體進行有效鑒別，能克服大麻哈魚標記工作的條件的限制以及避免標記工作對大麻哈魚魚體的傷害，分析人工培育放流苗種與自然群體生境履歷的差異，即可有效辨識兩種群體。[0006]為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明通過以下技術方案實現(xiàn)：一種大麻哈魚人工放流群體與自然野生群體的鑒別方法，包括以下步驟：[0008]采集大麻哈魚回歸群體樣本，取出矢耳石進行打磨，打磨至核心，然后對矢耳石進行拋光處理，處理后利用電子微探針分析儀對矢耳石樣本進行檢測分析；[0010]利用電子微探針沿著垂直于矢耳石頭部、尾部連線且過矢耳石核心的直線，從矢耳石核心至矢耳石背部邊緣進行Sr/Ca值的線性定量分析；[0012]根據(jù)步驟二中矢耳石的定量線分析，繪制矢耳石自核心至邊緣的Sr/Ca值的分布曲線，劃分大麻哈魚在淡水、海水中的生活階段及其他關鍵特征階段，然后分別測量大麻哈魚矢耳石核心至邊緣的徑長R、早期淡水生活階段矢耳石徑長R?、溯河回歸期淡水生活階段矢耳石徑長R?、大麻哈魚卵黃囊吸收完至幼魚降海洄游期的矢耳石徑長R,再按照矢耳石徑長與體長、叉長等正比例關系的經(jīng)驗公式，分別計算各階段大麻哈魚的叉長：[0014]式中，R為耳石核心至邊緣的徑長；L為魚體叉長；R、L分別為i階段時的耳石徑長和魚體叉長；[0017]式中，R為自矢耳石核心沿線性定量分析線方向至對應淡水生境區(qū)域結束時的徑[0019]根據(jù)步驟三計算的各參數(shù)，對兩群體進行區(qū)分，其中自然野生大麻哈魚早期淡水生活階段因水溫較地下水低，其生長發(fā)育較慢，因而R?、R以及R較人工養(yǎng)殖大麻哈魚小，分兩種群體的依據(jù)。微探針的機器條件為加速電壓15kV,電子束電流2.0×10??A,每點駐留時間為15S,分析束斑[0022]進一步改進在于：所述步驟三中，根據(jù)大麻哈魚生活史特征及耳石微化學分析結果，劃分大麻哈魚在淡水、海水中的生活階段及其他關鍵特征階段。6[0023]進一步改進在于：所述步驟三中，淡水系數(shù)反映洄游性魚類早期生活在淡水環(huán)境中的時間占整個生活史時間的比例，也體現(xiàn)洄游性魚類對淡水生境的依存程度。[0024]進一步改進在于：所述步驟四中，由于人工培育大麻哈魚和自然野外群體的生活史差異主要在于早期的淡水生活階段，根據(jù)其中的差異性對兩群體進行區(qū)分。[0026]本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明采集大麻哈魚回歸群體樣本，挑取矢耳石開展耳石微化學分析，采用電子微探針技術對矢耳石進行定量線分析，計算大麻哈魚耳石的R?、R以殖群體，若數(shù)值有不完全滿足上述條件的情況下，以R值為主要判斷依據(jù)，經(jīng)驗證，按照此方法對大麻哈魚回歸群體檢驗，判別成功率達100%,本發(fā)明基于目前大麻哈魚放流苗種培育過程與自然群體大麻哈魚野外孵化條件的不同，不需對大麻哈魚放流苗種進行額外的標記，即可對人工增殖群體與自然群體進行有效鑒別，能克服大麻哈魚標記工作的條件的限制以及避免標記工作對大麻哈魚魚體的傷害，分析人工培育放流苗種與自然群體生境履歷的差異，即可有效辨識兩種群體。附圖說明[0027]圖1為本發(fā)明的矢耳石定量線分析測量線示意圖；[0028]圖2為本發(fā)明的大麻哈魚自然野生群體耳石Sr/Ca值核心區(qū)至邊緣的線性定量分[0029]圖3為本發(fā)明的大麻哈魚人工增殖群體耳石Sr/Ca值核心區(qū)至邊緣的線性定量分具體實施方式[0030]為了加深對本發(fā)明的理解，下面將結合實施例對本發(fā)明做進一步詳述，本實施例僅用于解釋本發(fā)明，并不構成對本發(fā)明保護范圍的限定。[0031]根據(jù)圖1、2、3所示，本實施例提供了一種大麻哈魚人工放流群體與自然野生群體[0033]采集大麻哈魚回歸群體樣本，取出矢耳石，對同一側的矢耳石進行打磨，打磨至核心，然后對矢耳石進行拋光處理，處理后利用電子微探針分析儀對矢耳石樣本進行檢測分[0035]利用電子微探針沿著垂直于矢耳石頭部、尾部連線且過矢耳石核心的直線，從矢耳石核心至矢耳石背部邊緣進行Sr/Ca值的線性定量分析，見圖1,標準樣品使用碳酸鈣CaCO?和鈦酸鍶SrTiO?,電子微探針的機器條件為加速電壓15kV,電子束電流2.0×10?A,每7[0037]根據(jù)步驟二中矢耳石的定量線分析，繪制矢耳石自核心至邊緣的Sr/Ca值的分布曲線，見圖2、圖3,根據(jù)大麻哈魚生活史特征及耳石微化學分析結果，劃分大麻哈魚在淡水、海水中的生活階段及其他關鍵特征階段，見圖2、圖3,然后分別測量大麻哈魚矢耳石核心至邊緣的徑長R、早期淡水生活階段矢耳石徑長R?、溯河回歸期淡水生活階段矢耳石徑長R2、大麻哈魚卵黃囊吸收完至幼魚降海洄游期的矢耳石徑長R,再按照矢耳石徑長與體長、叉長等正比例關系的經(jīng)驗公式，分別計算各階段大麻哈魚的叉長：和魚體叉長；[0042]式中，R為自矢耳石核心沿線性定量分析線方向至對應淡水生境區(qū)域結束時的徑長，R?為定量線分析時從矢耳石核心至邊緣的耳石徑長，R表示淡水系數(shù)，該系數(shù)反映洄游性魚類早期生活在淡水環(huán)境中的時間占整個生活史時間的比例，也體現(xiàn)洄游性魚類對淡水生境的依存程度；[0044]根據(jù)步驟三計算的各參數(shù)，由于人工培育大麻哈魚和自然野外群體的生活史差異主要在于早期的淡水生活階段，根據(jù)其中的差異性對兩群體進行區(qū)分，其中自然野生大麻哈魚早期淡水生活階段因水溫較地下水低，其生長發(fā)育較慢，因而R。、R以及R較人工養(yǎng)殖Rc≤0.30,大麻哈魚自然野生群體和人工增殖群體的R、R?和R。有顯著的區(qū)別，作為區(qū)分兩種群體的依據(jù)，當數(shù)值有不完全滿足上述條件的情況下，以R值為主要判斷依據(jù)。[0045]該方法采集大麻哈魚回歸群體樣本，挑取矢耳石開展耳石微化學分析，采用電子微探針技術對矢耳石進行定量線分析，計算大麻哈魚耳石的R、R以及R值，若該值在120μ完全滿足上述條件的情況下，以R值為主要判斷依據(jù)，經(jīng)驗證，按照此方法對大麻哈魚回歸群體檢驗，判別成功率達100%,本發(fā)明基于目前大麻哈魚放流苗種培育過程與自然群體