細(xì)胞培養(yǎng)工藝工程師崗位招聘考試試卷及答案一、填空題（每題1分，共10分）1.哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)常用基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括DMEM、______、RPMI1640等。2.細(xì)胞凍存最常用保護(hù)劑是______（二甲基亞砜）。3.生物反應(yīng)器通氣方式含表面通氣、______通氣。4.細(xì)胞培養(yǎng)無菌操作核心是避免______污染。5.哺乳動物細(xì)胞最適生長溫度為______℃（±0.5℃）。6.支原體檢測常用分子方法是______。7.培養(yǎng)基滅菌過濾孔徑為______μm。8.細(xì)胞生長曲線含延遲期、對數(shù)期、______期、衰亡期。9.懸浮培養(yǎng)攪拌方式有槳式、______攪拌。10.細(xì)胞培養(yǎng)常用pH緩沖體系是______-HCO??體系。二、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)基pH范圍通常為（）A.6.0-6.5B.6.8-7.2C.7.2-7.4D.7.5-8.02.血清滅活溫度時(shí)間為（）A.37℃30minB.56℃30minC.60℃15minD.4℃過夜3.大規(guī)模懸浮細(xì)胞培養(yǎng)適合的反應(yīng)器是（）A.攪拌式B.中空纖維C.平板D.轉(zhuǎn)瓶4.貼壁細(xì)胞消化常用酶是（）A.胃蛋白酶B.胰蛋白酶C.膠原酶D.木瓜蛋白酶5.支原體污染細(xì)胞最明顯變化是（）A.細(xì)胞裂解B.培養(yǎng)液渾濁C.細(xì)胞形態(tài)異常D.出現(xiàn)菌絲6.灌流培養(yǎng)主要優(yōu)勢是（）A.操作簡單B.周期短C.產(chǎn)物濃度高D.成本低7.細(xì)胞凍存正確降溫速率是（）A.快速B.1℃/minC.-1℃/minD.室溫放置后凍存8.無菌操作臺紫外滅菌時(shí)間為（）A.10minB.20-30minC.1hD.2h9.懸浮細(xì)胞計(jì)數(shù)常用方法是（）A.臺盼藍(lán)染色B.結(jié)晶紫C.免疫熒光D.流式細(xì)胞術(shù)10.導(dǎo)致細(xì)胞污染的情況是（）A.培養(yǎng)基過濾B.關(guān)閉操作臺風(fēng)機(jī)C.血清滅活D.細(xì)胞凍存三、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.細(xì)胞培養(yǎng)基主要成分含（）A.氨基酸B.維生素C.血清D.抗生素2.細(xì)胞培養(yǎng)常見污染類型（）A.細(xì)菌B.真菌C.支原體D.病毒3.生物反應(yīng)器類型含（）A.攪拌式B.氣升式C.中空纖維D.轉(zhuǎn)瓶4.無菌操作注意事項(xiàng)（）A.洗手消毒B.物品近火焰C.避免說話咳嗽D.定期滅菌操作臺5.影響細(xì)胞生長因素（）A.溫度B.pHC.溶氧（DO）D.滲透壓6.灌流培養(yǎng)關(guān)鍵步驟（）A.連續(xù)灌注培養(yǎng)基B.細(xì)胞截留C.連續(xù)收集產(chǎn)物D.定期換液7.細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)（）A.凍存液比例7:2:1B.慢降溫C.凍存管密封D.快速復(fù)蘇8.支原體檢測方法（）A.PCRB.培養(yǎng)法C.Hoechst染色D.電鏡9.培養(yǎng)基滅菌方法（）A.0.22μm過濾B.濕熱滅菌C.輻照D.干熱10.懸浮細(xì)胞分離方法（）A.離心B.過濾C.自然沉降D.胰酶消化四、判斷題（每題2分，共20分）1.哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)不需要CO?環(huán)境。（）2.血清滅活目的是去除補(bǔ)體成分。（）3.細(xì)胞培養(yǎng)DO控制100%空氣飽和度最佳。（）4.支原體污染不影響細(xì)胞生長功能。（）5.懸浮細(xì)胞不需要貼附載體。（）6.胰酶消化時(shí)間越長，細(xì)胞分散越好。（）7.灌流培養(yǎng)比批式培養(yǎng)產(chǎn)量高。（）8.無菌操作臺使用后立即關(guān)風(fēng)機(jī)。（）9.凍存液DMSO濃度一般10%。（）10.抗生素可完全避免細(xì)菌污染。（）五、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述細(xì)胞培養(yǎng)無菌操作核心要點(diǎn)。2.簡述哺乳動物細(xì)胞凍存關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)。3.簡述批式與灌流培養(yǎng)主要區(qū)別。4.簡述細(xì)胞培養(yǎng)常見污染及快速檢測方法。六、討論題（每題5分，共10分）1.細(xì)胞生長緩慢的可能原因及解決措施。2.如何優(yōu)化生物反應(yīng)器細(xì)胞培養(yǎng)的DO控制策略？---答案部分一、填空題答案1.MEM2.DMSO3.深層4.微生物5.376.PCR7.0.228.平臺9.磁力10.HCO??（或HEPES）二、單項(xiàng)選擇題答案1.C2.B3.A4.B5.C6.C7.B8.B9.A10.B三、多項(xiàng)選擇題答案1.ABCD2.ABCD3.ABC4.ABCD5.ABCD6.ABC7.ABCD8.ABCD9.ABC10.ABC四、判斷題答案1.×2.√3.×4.×5.√6.×7.√8.×9.√10.×五、簡答題答案1.無菌操作核心要點(diǎn)：①操作前洗手消毒，穿無菌服、戴口罩手套；②操作臺紫外滅菌20-30min，開啟風(fēng)機(jī)；③物品靠近酒精燈火焰操作，避免交叉污染；④不說話咳嗽，防飛沫污染；⑤培養(yǎng)基/試劑提前滅菌，使用前檢查無菌；⑥操作后清理操作臺，定期消毒。2.凍存關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)：①凍存液配制（培養(yǎng)基:血清:DMSO=7:2:1）；②收集對數(shù)期細(xì)胞，離心重懸（密度1×10?-1×10?/mL）；③分裝凍存管，密封；④慢降溫（1℃/min）：-80℃過夜→液氮。注意：DMSO新鮮配制，避免反復(fù)凍融；細(xì)胞狀態(tài)良好，凍存管密封防液氮滲入。3.批式與灌流培養(yǎng)區(qū)別：①批式：一次性加培養(yǎng)基，培養(yǎng)結(jié)束收獲，周期3-7天，操作簡單但產(chǎn)物濃度低；②灌流：連續(xù)灌注新鮮培養(yǎng)基，截留細(xì)胞，連續(xù)收產(chǎn)物，周期2-4周，產(chǎn)物濃度高、產(chǎn)量大，但需細(xì)胞截留裝置；③批式成本低，灌流適合高價(jià)值產(chǎn)物（如單抗）大規(guī)模生產(chǎn)。4.常見污染及檢測：①細(xì)菌：培養(yǎng)液渾濁、pH驟變，鏡檢見桿菌/球菌→革蘭染色；②真菌：培養(yǎng)液有菌絲/孢子，鏡檢見絲狀菌→直接鏡檢；③支原體：細(xì)胞形態(tài)異常，無渾濁→PCR（1-2h出結(jié)果）或Hoechst染色（見熒光小點(diǎn)）。六、討論題答案1.細(xì)胞生長緩慢原因及措施：①培養(yǎng)基問題：過期/成分不足→換新鮮培養(yǎng)基；②細(xì)胞狀態(tài)：延遲期/衰老→換對數(shù)期細(xì)胞；③隱性污染（支原體）→檢測支原體，陽性則棄細(xì)胞；④環(huán)境參數(shù)異常：溫度/pH/DO不對→校準(zhǔn)培養(yǎng)箱，反應(yīng)器調(diào)DO30-50%、pH7.2-7.4；⑤消化過度→縮短胰酶時(shí)間，加血清終止。2.DO控制優(yōu)化策略：①按細(xì)胞類型調(diào)DO：CH