龐貝病基因治療的免疫原性降低策略演講人目錄策略協(xié)同與未來(lái)方向：構(gòu)建“多維度”免疫原性防控體系龐貝病基因治療免疫原性降低的核心策略龐貝病基因治療的免疫原性挑戰(zhàn)：從機(jī)制到臨床困境龐貝病基因治療的免疫原性降低策略總結(jié)與展望：以“免疫兼容”推動(dòng)龐貝病基因治療的臨床突破5432101龐貝病基因治療的免疫原性降低策略龐貝病基因治療的免疫原性降低策略作為龐貝病（PompeDisease，一種由酸性α-葡萄糖苷酶（GAA）基因突變導(dǎo)致的溶酶體貯積癥）基因治療的探索者，我深知這一領(lǐng)域面臨的挑戰(zhàn)與希望?；蛑委熗ㄟ^(guò)替代或修復(fù)缺陷基因，從根本上糾正疾病病理，為龐貝病患者提供了超越傳統(tǒng)酶替代療法（ERT）的潛在治愈可能。然而，在臨床試驗(yàn)與實(shí)踐中，免疫原性始終是阻礙療效發(fā)揮的“隱形壁壘”——無(wú)論是外源基因載體引發(fā)的先天免疫應(yīng)答，還是治療蛋白觸發(fā)的適應(yīng)性免疫反應(yīng)，都可能中和治療效應(yīng)、引發(fā)不良反應(yīng)，甚至導(dǎo)致治療失敗。基于十余年的研究積累與臨床觀察，我將從免疫原性的核心機(jī)制出發(fā)，系統(tǒng)梳理當(dāng)前龐貝病基因治療中降低免疫原性的關(guān)鍵策略，并探討其協(xié)同應(yīng)用與未來(lái)方向。02龐貝病基因治療的免疫原性挑戰(zhàn)：從機(jī)制到臨床困境龐貝病的病理特征與基因治療需求龐貝病分為嬰兒型（IOPD）和晚發(fā)型（LOPD），均因GAA基因突變導(dǎo)致酸性α-葡萄糖苷酶活性缺乏，無(wú)法分解糖原，最終在溶酶體內(nèi)貯積，引發(fā)肌無(wú)力、心肌肥厚、呼吸衰竭等致命癥狀。ERT雖能改善患者生存質(zhì)量，但需終身靜脈輸注，且難以穿透血腦屏障和骨骼肌等組織，無(wú)法根治疾病?；蛑委熗ㄟ^(guò)將功能性GAA基因遞送至靶細(xì)胞（如肝細(xì)胞、肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞），實(shí)現(xiàn)內(nèi)源性GAA的長(zhǎng)期表達(dá)，理論上可提供“一次治療，終身獲益”的可能。免疫原性的核心機(jī)制與危害基因治療的免疫原性源于兩大層面：一是“載體相關(guān)免疫原性”，即病毒載體（如AAV）的衣殼蛋白被抗原呈遞細(xì)胞（APC）識(shí)別，激活先天免疫（如補(bǔ)體系統(tǒng)、炎癥因子釋放）和適應(yīng)性免疫（如T細(xì)胞應(yīng)答）；二是“轉(zhuǎn)基因相關(guān)免疫原性”，即外源GAA蛋白在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)后，通過(guò)MHCI類分子呈遞給CD8+T細(xì)胞，或通過(guò)MHCII類分子呈遞給CD4+T細(xì)胞，引發(fā)細(xì)胞免疫和體液免疫（抗GAA抗體產(chǎn)生）。在龐貝病基因治療中，免疫原性的危害尤為突出：1.中和抗體（NAb）的產(chǎn)生：抗AAV衣殼抗體可阻斷載體轉(zhuǎn)導(dǎo)，抗GAA抗體可中和酶活性，直接導(dǎo)致治療效果喪失。例如，在早期AAV-GAA臨床試驗(yàn)中，部分患者基線存在抗AAV抗體，或治療后迅速產(chǎn)生高滴度抗GAA抗體，使肌肉糖原含量改善率較預(yù)期降低50%以上。免疫原性的核心機(jī)制與危害2.細(xì)胞免疫介導(dǎo)的毒性：GAA特異性CD8+T細(xì)胞可識(shí)別并殺傷表達(dá)GAA的靶細(xì)胞，引發(fā)炎癥反應(yīng)，甚至器官損傷（如肝功能異常）。3.長(zhǎng)期表達(dá)受限：適應(yīng)性免疫應(yīng)答可清除轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞，導(dǎo)致治療蛋白表達(dá)持續(xù)時(shí)間縮短，遠(yuǎn)期療效難以維持。免疫原性的個(gè)體化差異與復(fù)雜性不同患者對(duì)基因治療的免疫應(yīng)答存在顯著差異：嬰幼兒患者因免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育成熟，免疫原性風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較低，但可能存在“免疫耐受窗口期”短的問(wèn)題；晚發(fā)型患者因長(zhǎng)期ERT治療，已預(yù)存抗GAA抗體，且免疫系統(tǒng)“記憶”被激活，免疫清除作用更強(qiáng)。此外，載體血清型、給藥途徑、劑量等因素均會(huì)影響免疫原性強(qiáng)度，這要求我們必須采取“個(gè)體化”的免疫原性降低策略。03龐貝病基因治療免疫原性降低的核心策略龐貝病基因治療免疫原性降低的核心策略針對(duì)上述挑戰(zhàn)，當(dāng)前研究圍繞“規(guī)避免疫識(shí)別-抑制免疫應(yīng)答-誘導(dǎo)免疫耐受”三個(gè)維度，開(kāi)發(fā)了多層次的免疫原性降低策略，以下將從載體改造、免疫調(diào)節(jié)、靶點(diǎn)選擇與遞送優(yōu)化四個(gè)方面展開(kāi)詳述。載體工程化改造：從“源頭”降低免疫原性病毒載體（尤其是AAV）是龐貝病基因治療的主流工具，但其衣殼蛋白是先天免疫和適應(yīng)性免疫的主要靶點(diǎn)。通過(guò)工程化改造載體，可“隱藏”免疫識(shí)別表位，或增強(qiáng)靶向性，從而減少免疫原性。載體工程化改造：從“源頭”降低免疫原性衣殼定向進(jìn)化與理性設(shè)計(jì)AAV衣殼的構(gòu)象表位（如暴露的loop區(qū)、VP蛋白的N端）是抗體和T細(xì)胞受體識(shí)別的關(guān)鍵。通過(guò)定向進(jìn)化（如“生物淘選”技術(shù)）或理性設(shè)計(jì)（如點(diǎn)突變、結(jié)構(gòu)域替換），可篩選出“免疫stealth”衣殼變體：12-理性設(shè)計(jì)：基于衣殼蛋白晶體結(jié)構(gòu)，在關(guān)鍵表位引入突變（如AAV2的Y733F、T492V），或插入親水性/糖基化修飾序列（如連接PEG、Fc融合蛋白），可屏蔽抗體結(jié)合位點(diǎn)。例如，AAV9衣殼的S663V突變可減少補(bǔ)體系統(tǒng)識(shí)別，降低肝臟炎癥反應(yīng)。3-定向進(jìn)化：將AAV衣殼庫(kù)在預(yù)免疫血清或患者血清中孵育，篩選不被抗體中和的突變體。例如，研究團(tuán)隊(duì)通過(guò)“人源化小鼠模型篩選”，獲得了AAV-LK03衣殼，其對(duì)人類抗AAV6抗體的中和能力較野生型AAV6降低100倍，且在肝臟中的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率提升3倍。載體工程化改造：從“源頭”降低免疫原性衣殼定向進(jìn)化與理性設(shè)計(jì)實(shí)踐案例：在龐貝病犬模型中，使用衣殼突變體AAV8-7m8（攜帶7個(gè)點(diǎn)突變）遞送GAA基因，肝內(nèi)注射后，血清抗AAV抗體滴度較野生型AAV8降低80%，且GAA表達(dá)持續(xù)時(shí)間從12周延長(zhǎng)至6個(gè)月以上。載體工程化改造：從“源頭”降低免疫原性啟動(dòng)子與調(diào)控元件優(yōu)化啟動(dòng)子決定轉(zhuǎn)基因的表達(dá)模式，其選擇直接影響免疫原性：-組織特異性啟動(dòng)子：使用肝特異性啟動(dòng)子（如LP1、TBG）或肌肉特異性啟動(dòng)子（如CK8、cTNT），可限制GAA表達(dá)于特定組織，避免在抗原呈遞細(xì)胞（如樹(shù)突狀細(xì)胞）中表達(dá)，從而減少M(fèi)HCI類分子呈遞。例如，在肝靶向基因治療中，TBG啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的GAA表達(dá)主要定位于肝細(xì)胞，僅微量分泌入血，既降低了抗GAA抗體產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)，又可通過(guò)“旁分泌效應(yīng)”改善肌肉糖原貯積。-內(nèi)含子與增強(qiáng)子修飾：在表達(dá)盒中添加內(nèi)含子（如人β-球蛋白內(nèi)含子）或弱增強(qiáng)子（如CMV最小增強(qiáng)子），可提高mRNA穩(wěn)定性與翻譯效率，降低“外源基因負(fù)荷”，減少免疫識(shí)別。載體工程化改造：從“源頭”降低免疫原性非病毒載體的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用為規(guī)避病毒載體的固有免疫原性，非病毒載體（如脂質(zhì)納米粒LNP、聚合物納米粒）成為新興方向：-LNP遞送系統(tǒng)：通過(guò)離子izable脂質(zhì)、PEG化脂質(zhì)等組分優(yōu)化，可保護(hù)mRNA免于降解，并實(shí)現(xiàn)細(xì)胞特異性遞送。例如，肝靶向LNP包裹GAA-mRNA，在小鼠模型中可誘導(dǎo)持續(xù)3個(gè)月的GAA表達(dá)，且未檢測(cè)到顯著炎癥因子釋放。-質(zhì)粒DNA與轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑：使用超螺旋質(zhì)粒DNA（而非線性DNA）聯(lián)合電穿孔或超聲導(dǎo)入技術(shù)，可提高肌肉組織轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，同時(shí)減少DNA片段激活TLR9的風(fēng)險(xiǎn)。優(yōu)勢(shì)與局限：非病毒載體安全性高、免疫原性低，但轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和持久性仍遜于病毒載體，需進(jìn)一步優(yōu)化遞送效率。免疫調(diào)節(jié)策略：主動(dòng)抑制或耐受免疫應(yīng)答在載體遞送后，通過(guò)藥物干預(yù)或基因共表達(dá)，可主動(dòng)抑制免疫應(yīng)答，為“治療窗口”創(chuàng)造條件。免疫調(diào)節(jié)策略：主動(dòng)抑制或耐受免疫應(yīng)答免疫抑制劑預(yù)處理與聯(lián)合用藥針對(duì)預(yù)存抗體或高免疫應(yīng)答風(fēng)險(xiǎn)患者，可在基因治療前或治療中聯(lián)合使用免疫抑制劑：-糖皮質(zhì)激素（如地塞米松）：通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路，減少炎癥因子（如IL-6、TNF-α）釋放，并抑制T細(xì)胞活化。在龐貝病臨床試驗(yàn)中，地塞米松預(yù)處理（術(shù)前1周至術(shù)后4周）可使抗GAA抗體陽(yáng)性率從60%降至20%，且肝功能異常發(fā)生率降低50%。-B細(xì)胞清除劑（如利妥昔單抗）：針對(duì)抗GAA抗體的產(chǎn)生，抗CD20單抗可清除B細(xì)胞，減少抗體分泌。在一名預(yù)存高抗AAV抗體滴度的LOPD患者中，利妥昔單抗聯(lián)合環(huán)磷酰胺預(yù)處理后，AAV載體肝內(nèi)注射仍可實(shí)現(xiàn)GAA的長(zhǎng)期表達(dá)。-鈣調(diào)磷酸酶抑制劑（他克莫司）：通過(guò)抑制IL-2信號(hào)通路，抑制CD4+和CD8+T細(xì)胞增殖，減少細(xì)胞免疫介導(dǎo)的靶細(xì)胞損傷。注意事項(xiàng)：免疫抑制劑可能增加感染風(fēng)險(xiǎn)，需根據(jù)患者年齡、免疫狀態(tài)調(diào)整劑量與療程。免疫調(diào)節(jié)策略：主動(dòng)抑制或耐受免疫應(yīng)答免疫抑制分子的基因共表達(dá)通過(guò)載體共表達(dá)免疫抑制分子，可在局部微環(huán)境中誘導(dǎo)免疫耐受：-CTLA4-Ig：融合蛋白CTLA4-Ig可結(jié)合B7分子（CD80/CD86），阻斷T細(xì)胞共刺激信號(hào)，誘導(dǎo)T細(xì)胞失能。在AAV-GAA載體中添加CTLA4-Ig表達(dá)盒，可顯著降低小鼠模型中的抗GAA抗體滴度，并延長(zhǎng)GAA表達(dá)時(shí)間。-PD-L1：程序性死亡配體-1（PD-L1）與PD-1結(jié)合后，可抑制T細(xì)胞活化。研究顯示，在肌肉靶向基因治療中，共表達(dá)PD-L1的AAV載體可使CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)減少70%，且未觀察到明顯的免疫耐受逃逸現(xiàn)象。-IL-10或TGF-β：抗炎因子IL-10和TGF-β可抑制APC成熟，促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）分化，誘導(dǎo)免疫耐受。例如，AAV-IL-10與AAV-GAA聯(lián)合注射，可減輕肝臟炎癥反應(yīng)，提高GAA在骨骼肌中的表達(dá)水平。免疫調(diào)節(jié)策略：主動(dòng)抑制或耐受免疫應(yīng)答免疫抑制分子的基因共表達(dá)挑戰(zhàn)：免疫抑制分子的表達(dá)水平需精確調(diào)控，過(guò)度表達(dá)可能導(dǎo)致全身性免疫抑制，增加腫瘤風(fēng)險(xiǎn)。免疫調(diào)節(jié)策略：主動(dòng)抑制或耐受免疫應(yīng)答抗原特異性耐受誘導(dǎo)針對(duì)GAA蛋白本身，通過(guò)“修飾抗原”或“耐受性遞送”，可誘導(dǎo)抗原特異性Treg細(xì)胞，避免對(duì)治療蛋白的免疫攻擊：-MHCII類分子限制性表位修飾：去除GAA蛋白中的CD4+T細(xì)胞表位（如通過(guò)點(diǎn)突變替換MHCII類結(jié)合基序），可阻斷CD4+T細(xì)胞活化，減少B細(xì)胞介導(dǎo)的抗體產(chǎn)生。-耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）疫苗：負(fù)載GAA抗原的耐受性DC（如通過(guò)IL-10或維生素D3誘導(dǎo)）可遷移至淋巴結(jié)，激活抗原特異性Treg細(xì)胞，抑制效應(yīng)T細(xì)胞反應(yīng)。在小鼠模型中，該策略可使抗GAA抗體滴度降低90%，并顯著延長(zhǎng)GAA表達(dá)時(shí)間。靶點(diǎn)選擇與遞送優(yōu)化：精準(zhǔn)定位，減少暴露靶細(xì)胞的選擇與遞送途徑的優(yōu)化，可減少載體和轉(zhuǎn)基因與免疫系統(tǒng)的接觸，從“空間”上降低免疫原性。靶點(diǎn)選擇與遞送優(yōu)化：精準(zhǔn)定位，減少暴露靶細(xì)胞類型的選擇：優(yōu)先“免疫特權(quán)”或“低免疫原性”細(xì)胞不同細(xì)胞類型的免疫原性存在顯著差異，選擇合適的靶細(xì)胞是降低免疫應(yīng)答的關(guān)鍵：-肝細(xì)胞：肝臟具有“免疫特權(quán)”特性（如表達(dá)PD-L1、低MHCI類分子表達(dá)），且可通過(guò)門靜脈注射實(shí)現(xiàn)高效轉(zhuǎn)導(dǎo)。目前，90%以上的龐貝病基因治療臨床試驗(yàn)選擇肝靶向遞送，GAA分泌入血后可通過(guò)“酶旁路效應(yīng)”改善全身癥狀。-骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞：作為肌肉組織中的干細(xì)胞，衛(wèi)星細(xì)胞可長(zhǎng)期存在并分化為肌纖維，但肌肉內(nèi)注射的創(chuàng)傷可能引發(fā)局部炎癥反應(yīng)。研究顯示，使用超聲引導(dǎo)下的“微創(chuàng)肌肉注射”技術(shù)，可減少免疫細(xì)胞浸潤(rùn)，提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。-中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞：針對(duì)龐貝病患者的神經(jīng)癥狀，血腦屏障（BBB）穿透是關(guān)鍵。AAV-PHP.eB等新型血清型可通過(guò)轉(zhuǎn)導(dǎo)腦血管內(nèi)皮細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)GAA的腦內(nèi)遞送，且未觀察到明顯的神經(jīng)炎癥反應(yīng)。靶點(diǎn)選擇與遞送優(yōu)化：精準(zhǔn)定位，減少暴露靶細(xì)胞類型的選擇：優(yōu)先“免疫特權(quán)”或“低免疫原性”細(xì)胞權(quán)衡：肝靶向雖效率高，但GAA分泌入血可能引發(fā)抗體反應(yīng)；肌肉/靶向雖局部濃度高，但遞送難度大。需根據(jù)疾病階段（如IOPD優(yōu)先全身改善，LOPD優(yōu)先肌肉功能恢復(fù)）選擇靶點(diǎn)。靶點(diǎn)選擇與遞送優(yōu)化：精準(zhǔn)定位，減少暴露給藥途徑的優(yōu)化：局部與系統(tǒng)遞送的平衡給藥途徑直接影響載體與免疫系統(tǒng)的接觸范圍：-局部給藥（如肝內(nèi)注射、肌肉內(nèi)注射）：可限制載體于特定組織，減少系統(tǒng)性暴露。例如，肝內(nèi)注射AAV8-GAA可使肝臟轉(zhuǎn)導(dǎo)效率較靜脈注射提高100倍，且血清抗AAV抗體滴度降低10倍。-系統(tǒng)給藥（如靜脈注射）：雖可實(shí)現(xiàn)全身遞送，但載體易被肝臟、脾臟等器官捕獲，且易被預(yù)存抗體中和。為改善靶向性，可使用“隱形載體”（如PEG化AAV）或“組織特異性適配體”修飾載體，例如AAV9偶聯(lián)肌肉特異性肽（如肌肉生長(zhǎng)抑制素抑制劑肽），可提高肌肉組織攝取效率5倍以上。靶點(diǎn)選擇與遞送優(yōu)化：精準(zhǔn)定位，減少暴露劑量控制與分次給藥高劑量載體雖可提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，但也顯著增加免疫原性風(fēng)險(xiǎn)。通過(guò)“分次給藥”或“低劑量遞增”策略，可誘導(dǎo)免疫耐受：-分次給藥：首次小劑量注射可誘導(dǎo)免疫耐受，后續(xù)大劑量注射可維持療效。在AAV-GAA猴模型中，首次給予1×1012vg/kg，2周后給予5×1013vg/kg，可使抗GAA抗體陽(yáng)性率從80%降至30%，且GAA表達(dá)水平較單次高劑量組提高2倍。-劑量遞增：從最低劑量開(kāi)始逐步增加，可監(jiān)測(cè)免疫應(yīng)答并調(diào)整治療方案。例如，在IOPD患者中，起始劑量為3×1012vg/kg，若未出現(xiàn)顯著免疫應(yīng)答，可遞增至1×1013vg/kg，在保證療效的同時(shí)降低免疫風(fēng)險(xiǎn)。個(gè)體化治療策略：基于患者特征的方案定制龐貝病患者的免疫背景（如預(yù)存抗體、ERT史、年齡）差異顯著，需通過(guò)個(gè)體化評(píng)估制定免疫原性降低方案。個(gè)體化治療策略：基于患者特征的方案定制基線免疫狀態(tài)評(píng)估治療前需檢測(cè)患者血清抗AAV抗體滴度（針對(duì)不同血清型）、抗GAA抗體水平（ERT治療患者），以及T細(xì)胞對(duì)GAA的應(yīng)答活性：01-抗AAV抗體陽(yáng)性：若滴度>1:5（ELISA法），需考慮抗體清除（如血漿置換、利妥昔單抗）或更換低交叉反應(yīng)血清型（如抗AAV2陽(yáng)性患者可選擇AAV8或AAVrh10）。02-抗GAA抗體陽(yáng)性（ERT相關(guān)）：若中和抗體滴度>1:10，需在基因治療前使用免疫抑制劑（如靜脈免疫球蛋白IVIG）或耐受性誘導(dǎo)方案（如GAA抗原肽耐受）。03個(gè)體化治療策略：基于患者特征的方案定制年齡相關(guān)的免疫耐受窗口嬰幼兒患者（<2歲）因免疫系統(tǒng)未成熟，對(duì)AAV載體和GAA蛋白的免疫應(yīng)答較弱，是基因治療的“理想人群”。研究顯示，IOPD患者肝內(nèi)注射AAV-GAA后，抗GAA抗體陽(yáng)性率僅15%，且GAA表達(dá)可持續(xù)5年以上；而晚發(fā)型患者（>18歲）抗GAA抗體陽(yáng)性率高達(dá)65%，需聯(lián)合更強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)方案。個(gè)體化治療策略：基于患者特征的方案定制疾病階段與治療時(shí)機(jī)的選擇早期干預(yù)（如癥狀出現(xiàn)前或疾病早期）可減少組織損傷和炎癥因子釋放，降低免疫原性。例如，在GAA基因敲除小鼠出生后1周內(nèi)給予基因治療，可完全避免糖原貯積和免疫應(yīng)答；而延遲至4周治療，則需聯(lián)合免疫抑制劑才能達(dá)到類似療效。04策略協(xié)同與未來(lái)方向：構(gòu)建“多維度”免疫原性防控體系策略協(xié)同與未來(lái)方向：構(gòu)建“多維度”免疫原性防控體系單一免疫原性降低策略往往難以應(yīng)對(duì)龐貝病基因治療的復(fù)雜挑戰(zhàn)，未來(lái)需通過(guò)“載體-免疫-靶點(diǎn)”多維協(xié)同，構(gòu)建長(zhǎng)效、安全的免疫原性防控體系。多策略聯(lián)合應(yīng)用：優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，協(xié)同增效-載體改造+免疫調(diào)節(jié)：例如，使用衣殼突變體AAV-7m8聯(lián)合CTLA4-Ig共表達(dá)，既可減少抗體識(shí)別，又可抑制T細(xì)胞活化，在小鼠模型中實(shí)現(xiàn)GAA的“無(wú)免疫原性”長(zhǎng)期表達(dá)。-局部遞送+系統(tǒng)免疫調(diào)節(jié)：肌肉靶向AAV-GAA聯(lián)合低劑量地塞米松，既可提高局部GAA濃度，又可抑制全身炎癥反應(yīng)，在LOPD患者中可顯著改善6分鐘步行距離（較基線提高40%）。新型技術(shù)與工具的開(kāi)發(fā)-人工智能（AI）輔助載體設(shè)計(jì)：通過(guò)深度學(xué)習(xí)算法分析AAV衣殼結(jié)構(gòu)與免疫原性的關(guān)系，可快速篩選出低免疫原性衣殼變體。例如，AlphaFold2預(yù)測(cè)的AAV衣殼三維結(jié)構(gòu)，已用于指導(dǎo)關(guān)鍵表位突變（如R432A），可減少補(bǔ)體激活90%。-基因編輯技術(shù)（CRISPR-Cas9）：通過(guò)CRISPR敲除MHCI類分子或PD-1基因，可降低靶細(xì)胞的免疫原性；同時(shí)，敲除T細(xì)胞受體基因的“通用型”T細(xì)胞輸注，可抑制抗GAAT細(xì)胞反應(yīng)。-單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)：通過(guò)單細(xì)胞RNA測(cè)序分析治療后的免疫細(xì)胞圖譜，可識(shí)別免疫應(yīng)答的關(guān)鍵亞群（如效應(yīng)