(71)申請人黑龍江省科學(xué)院高技術(shù)研究院地址150026黑龍江省哈爾濱市道外區(qū)南馬路135號(72)發(fā)明人任濱僑宋曉曉趙路陽金玉王艷麗楊娜侯婉瀅張浩(74)專利代理機(jī)構(gòu)北京大地智谷知識產(chǎn)權(quán)代理專利代理師周文謙(54)發(fā)明名稱法本發(fā)明公開了一種真菌固態(tài)發(fā)酵提取大麻工業(yè)大麻花葉進(jìn)行預(yù)處理；S2:微生物和孢子懸浮液的制備；S3:固體培養(yǎng)基的配置及滅菌；S4:微生物固態(tài)發(fā)酵大麻；S5:發(fā)酵產(chǎn)物的提取和純化，本發(fā)明首先通過蒸汽爆破方法對工業(yè)大麻進(jìn)行預(yù)處理，從而使大麻中纖維素、半纖維素大部分降解為可溶性小分子，增加大麻可觀表面積和孔隙，更有利于后續(xù)微生物發(fā)酵大麻基質(zhì)；然后采用真菌利用氣相雙動(dòng)態(tài)固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器對工業(yè)大麻進(jìn)一步固態(tài)發(fā)酵，微生物生長代謝過程中產(chǎn)生一系列酶進(jìn)一步促使大麻細(xì)胞壁糖類、蛋白21.一種真菌固態(tài)發(fā)酵提取大麻二酚的方法，其特征在于，包括S1:利用蒸汽爆破對工業(yè)大麻花葉進(jìn)行預(yù)處理；稱取一定重量的大麻花葉裝入汽爆罐中，關(guān)閉閥門后通入蒸汽；罐壓升至設(shè)定的壓力和溫度后，維持一定的時(shí)間，然后，瞬間釋放罐中的壓力，汽爆后的物料隨蒸汽流進(jìn)入汽爆在烤箱中烘干并儲(chǔ)存在干燥處；所述蒸汽爆破罐組件包括：一臺(tái)蒸汽發(fā)生器、一臺(tái)反應(yīng)罐和一部汽爆接收罐；S2:微生物和孢子懸浮液的制備準(zhǔn)備菌種，所述菌種包括長枝木霉、細(xì)黃鏈霉菌、鏈霉素鏈霉菌；將試管中的菌種涂布于土豆葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)，用含有吐溫-20的無菌水洗滌平板并適當(dāng)稀釋獲得孢子懸浮液備用；S3:固體培養(yǎng)基的配置及滅菌配置含80%的汽爆預(yù)處理后的大麻花葉，并額外添加硫酸銨、尿素、蛋白胨作為固態(tài)發(fā)酵氮源；用含0.3%硫酸鎂、0.03%硫酸鐵的營養(yǎng)液調(diào)整體系中含水量為60%;制備的培養(yǎng)基于需高壓蒸汽滅菌一定時(shí)間；S4:微生物固態(tài)發(fā)酵大麻待上述步驟S3中物料冷卻后接入3.3×10?/g干基的孢子，裝入氣相雙動(dòng)態(tài)固態(tài)發(fā)酵器進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，設(shè)置參數(shù)如下：周期脈動(dòng)的高壓為0.2Mpa,維持20s,常壓維持時(shí)間為20min,發(fā)酵溫度為28℃,發(fā)酵48～72h;S5:發(fā)酵產(chǎn)物的提取和純化將上述步驟S4中固態(tài)發(fā)酵后的物料，轉(zhuǎn)移至提取罐，加入乙醇多次提取，合并提取液，真空減壓濃縮回收溶劑，得到工業(yè)大麻提取浸膏；或C18硅膠層析柱，流動(dòng)相為乙腈和甲醇的混合溶液，乙腈和甲醇的體積比為40:60～20:80,進(jìn)行分離，收集大麻二酚餾分，減壓濃縮后得到大麻二酚純化液，減壓干燥的到大麻二酚成品。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種真菌固態(tài)發(fā)酵提取大麻二酚的方法，其特征在于，步驟S1中設(shè)定的壓力為1.1MPa～1.5MPa,溫度為181～201℃,維持一定的時(shí)間為3～5min,烤箱溫度設(shè)定為50℃,去離子水的質(zhì)量為3-4倍大麻花葉的初始質(zhì)量。3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的一種真菌固態(tài)發(fā)酵提取大麻二酚的方法，其特征在于，步驟S2中，將試管中的菌種涂布于土豆葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中于28℃培養(yǎng)7天，孢子懸浮液濃度為10?/mL。4.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的所述的一種真菌固態(tài)發(fā)酵提取大麻二酚的方法，其特征在于，步驟S3中，制備的培養(yǎng)基于121℃高壓蒸汽滅菌30min。5.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的所述的一種真菌固態(tài)發(fā)酵提取大麻二酚的方法，其特征在于，步驟S4中，以1～2倍的體積加入乙醇，提取3～4次，每次3～5h,提取溫度30～60℃,合并提取液，真空減壓濃縮回收溶劑，得到工業(yè)大麻提取浸膏，浸膏得率10～25%,HPLC檢測大麻二酚含量大于50mg/g。3技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明屬于植物有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用真菌固態(tài)發(fā)酵提取工業(yè)大麻中大麻二酚的方法。背景技術(shù)[0002]大麻二酚(Cannabidiol,CBD)是一種從大麻中分離得到的具有生物活性的萜類酚護(hù)和抗驚厥等多種藥理活性，是一種多靶點(diǎn)化合物。[0003]目前，大麻二酚的主要提取方法包括固液萃取法(SLE)和超臨界流體CO?萃取法(SFE)。固液萃取法往往使用大量有機(jī)溶劑，提取的大麻產(chǎn)品存在溶劑殘留問題；而超臨界生產(chǎn)。相較于以上方法微生物發(fā)酵提取法，相較前兩種方法，可以大量減少有機(jī)溶劑的使[0004]微生物發(fā)酵方法主要為液態(tài)發(fā)酵法和固態(tài)發(fā)酵法。微生物液態(tài)發(fā)酵由于整個(gè)發(fā)酵過程中工藝參數(shù)比較容易控制，更易工業(yè)化。而固態(tài)發(fā)酵更像微生物的自然棲息地，真菌生長在干燥的基質(zhì)上發(fā)展菌絲形態(tài)，使基質(zhì)穿透和氣生菌絲。相較于液態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵培養(yǎng)基更[0005]固態(tài)發(fā)酵是以氣相為連續(xù)相，液相及其覆蓋的固相為固定相的三相生物反應(yīng)系問題具有較大潛力。固體基質(zhì)為微生物提供營養(yǎng)物質(zhì)的同時(shí)，還為微生物提供滿足其生長條件的空間，因此需要對固體基質(zhì)進(jìn)行預(yù)處理才能獲得更好的發(fā)酵效果。固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基預(yù)處理的方法包括球磨、超聲等物理方法；酸堿化學(xué)試劑降解等化學(xué)方法。另外還有物理化學(xué)組合方法——蒸汽爆破。蒸汽爆破處理因效率高，環(huán)境友好的特點(diǎn)被應(yīng)用于木質(zhì)素原料的預(yù)處理中。目前還未有研究報(bào)道將該方法用于工業(yè)大麻預(yù)處理中。[0006]目前已有專利申請關(guān)于提取大麻二酚的方法，主要包括：[0007](1)CN202010242812.2(公布日2020.07.17),云南西草資源開發(fā)有限公司利用紫色硫細(xì)菌液態(tài)發(fā)酵大麻得到純度大于80%的大麻二酚；[0008](2)CN201910200209.5(公布日2019.05.21),黑龍江陽光工業(yè)大麻研究院利用混合真菌液態(tài)發(fā)酵大麻得到富含CBD的浸膏[0009](3)CN201910484684.X(公布日2019.07.23),云南綠新生物藥業(yè)有限公司利用內(nèi)生真菌發(fā)酵床進(jìn)行固體發(fā)酵，提高大麻二酚的提取率[0010](4)CN201910773152.8(公布日2019.10.29),李衛(wèi)等利用超高壓預(yù)處理漢麻，真菌固體發(fā)酵得到純度為98%的大麻二酚固體[0011]上述專利申請采用物理粉碎方法對物料進(jìn)行預(yù)處理，粉碎效率低，不能使大麻細(xì)胞壁上的纖維素和半纖維素大分子降解為可溶性小分子，而且大麻表面積和孔隙度較小，不有利于真菌的生長。4[0012]上述文獻(xiàn)(3)使用的填充床式固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器，文獻(xiàn)(4)使用的轉(zhuǎn)鼓式固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器，無法避免反應(yīng)器中存在的微生物的剪切損傷，也無法有效保證微生物發(fā)酵效果。發(fā)明內(nèi)容[0013]鑒于此，為解決現(xiàn)有大麻二酚提取技術(shù)效率低、工藝復(fù)雜，運(yùn)行成本高，存在有機(jī)試劑殘留等問答題，本發(fā)明提供了一種利用真菌固態(tài)發(fā)酵提取工業(yè)大麻中大麻二酚的方[0014]本發(fā)明的提取方法首先通過蒸汽爆破方法對工業(yè)大麻進(jìn)行預(yù)處理，從而使大麻中纖維素、半纖維素大部分降解為可溶性小分子，增加大麻可觀表面積和孔隙，更有利于后續(xù)微生物發(fā)酵大麻基質(zhì)；然后采用真菌利用氣相雙動(dòng)態(tài)固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器對工業(yè)大麻進(jìn)一步固態(tài)發(fā)酵，微生物生長代謝過程中產(chǎn)生一系列酶進(jìn)一步促使大麻細(xì)胞壁糖類、蛋白質(zhì)、纖維素等成分的分解，促進(jìn)大麻二酚的轉(zhuǎn)化，大大提高大麻二酚的提取率；最后利用大孔樹脂和硅膠層析柱得到大麻二酚純化液，減壓濃縮干燥后得到純度98%大麻二酚固體。[0015]本發(fā)明的技術(shù)方案如下：[0016]一種真菌固態(tài)發(fā)酵提取大麻二酚的方法，包括如下步驟：,[0017]S1:利用蒸汽爆破對工業(yè)大麻花葉進(jìn)行預(yù)處理；[0018]稱取一定重量的大麻花葉裝入汽爆罐中，關(guān)閉閥門后通入蒸汽；罐壓升至設(shè)定的壓力和溫度后，維持一定的時(shí)間，然后，瞬間釋放罐中的壓力，汽爆后的物料隨蒸汽流進(jìn)入然后在烤箱中烘干并儲(chǔ)存在干燥處；[0020]S2:微生物和孢子懸浮液的制備[0021]準(zhǔn)備菌種，所述菌種包括長枝木霉、細(xì)黃鏈霉菌、鏈霉素鏈霉菌；將試管中的菌種涂布于土豆葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)，用含有吐溫-20的無菌水洗滌平板并適當(dāng)稀釋獲得孢子懸浮液備用；[0022]S3:固體培養(yǎng)基的配置及滅菌[0023]配置含80%的汽爆預(yù)處理后的大麻花葉，并額外添加硫酸銨、尿素、蛋白胨作為固態(tài)發(fā)酵氮源；用含0.3%硫酸鎂、0.03%硫酸鐵的營養(yǎng)液調(diào)整體系中含水量為60%;制備的培養(yǎng)基于需高壓蒸汽滅菌一定時(shí)間；[0024]S4:微生物固態(tài)發(fā)酵大麻[0025]待上述步驟S3中物料冷卻后接入3.3×10?/g干基的孢子，裝入氣相雙動(dòng)態(tài)固態(tài)發(fā)酵器進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，設(shè)置參數(shù)如下：周期脈動(dòng)的高壓為0.2Mpa,維持20s,常壓維持時(shí)間為20min,發(fā)酵溫度為28℃,發(fā)酵48～72h;[0026]S5:發(fā)酵產(chǎn)物的提取和純化[0027]將上述步驟S4中固態(tài)發(fā)酵后的物料，轉(zhuǎn)移至提取罐，加入乙醇多次提取，合并提取HD-2或C18硅膠層析柱，流動(dòng)相為乙腈和甲醇的混合溶液，乙腈和甲醇的體積比為40:60~20:80,進(jìn)行分離，收集大麻二酚餾分，減壓濃縮后得到大麻二酚純化液，減壓干燥的到大麻5二酚成品。[0029]優(yōu)選地，步驟S1中設(shè)定的壓力為1.1MPa～1.5MPa,溫度為181～201℃,維持一定的時(shí)間為3～5min,烤箱溫度設(shè)定為50℃,去離子水的質(zhì)量為3-4倍大麻花葉初始質(zhì)量。[0030]優(yōu)選地，步驟S2中，將試管中的菌種涂布于土豆葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中于28℃培養(yǎng)7[0031]優(yōu)選地，步驟S3中，制備的培養(yǎng)基于121℃高壓蒸汽滅菌30min。[0032]優(yōu)選地，步驟S4中，以1～2倍的體積加入乙醇，提取3～4次，每次3～5h,提取溫度30～60℃,合并提取液，真空減壓濃縮回收溶劑，得到工業(yè)大麻提取浸膏，浸膏得率10~25%,HPLC檢測大麻二酚含量大于50mg/g。[0033]本發(fā)明采用以上技術(shù)方案與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下有益效果：[0034](1)本發(fā)明的大麻二酚提取方法成本較低、工藝簡單且綠色環(huán)保。[0035](2)本發(fā)明通過蒸汽爆破方法對工業(yè)大麻進(jìn)行預(yù)處理，較物理粉碎方法更加高效，本發(fā)明蒸汽爆破原理：蒸汽爆破處理過程包括高溫蒸煮和壓力釋放兩個(gè)階段。高溫蒸煮階段，物料在高溫蒸汽環(huán)境中發(fā)生類酸性降解，纖維素和半纖維素大分子部分降解為可溶性小分子。在壓力釋放階段，罐體內(nèi)的蒸汽被迅速釋放，細(xì)胞內(nèi)外壓差導(dǎo)致其爆破而產(chǎn)生結(jié)構(gòu)破壞。因此，汽爆處理后的物料組分發(fā)生降解，物理結(jié)構(gòu)因發(fā)生撕裂而變得松散。這些變化導(dǎo)致原料的可及表面積和孔隙度增加，更加有利于后續(xù)微生物固態(tài)發(fā)酵。[0036](3)本發(fā)明使用了新型微生物發(fā)酵反應(yīng)器——?dú)庀嚯p動(dòng)態(tài)固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器對工業(yè)大麻進(jìn)一步固態(tài)發(fā)酵，氣相雙動(dòng)態(tài)固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器利用氣體脈動(dòng)和內(nèi)循環(huán)兩種方式使水分、氧氣、二氧化碳和熱量在固體基質(zhì)內(nèi)部小尺度周轉(zhuǎn)，在較大程度上避免了其他反應(yīng)器中存在的微生物的剪切損傷，從而使微生物發(fā)酵效果更好。[0037](4)本發(fā)明采用真菌利用氣相雙動(dòng)態(tài)固態(tài)發(fā)酵反應(yīng)器對工業(yè)大麻進(jìn)一步固態(tài)發(fā)酵，微生物生長代謝過程中產(chǎn)生一系列酶進(jìn)一步促使大麻細(xì)胞壁糖類、蛋白質(zhì)、纖維素等成分的分解，促進(jìn)大麻二酚的轉(zhuǎn)化，大大提高了大麻二酚的提取率；最后利用大孔樹脂和硅膠層析柱得到大麻二酚純化液，減壓濃縮干燥后得到純度98%大麻二酚固體。附圖說明[0038]圖1本發(fā)明大麻成品液相色譜圖[0039]圖2本發(fā)明的工藝流程圖具體實(shí)施方式[0040]下面將結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明。[0041]下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但本發(fā)明不受實(shí)施例的限制。[0042]以下實(shí)施例以購買中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)的“長枝木霉(Trichodermalongibrachiatum),保藏編號5.1236”、“細(xì)黃鏈霉菌(Streptomyces號4.617”為例進(jìn)行說明，其他型號的長枝木霉、細(xì)黃鏈霉菌和鏈霉素鏈霉菌同樣適用于本發(fā)明方法。[0043]參見附圖2本發(fā)明的工藝流程圖，本發(fā)明的具體實(shí)施例如下：6[0045]一種真菌固態(tài)發(fā)酵提取大麻二酚的方法，包括如下步驟：[0046]步驟一、對工業(yè)大麻花葉進(jìn)行蒸汽爆破預(yù)處理[0047]稱取250g大麻花葉裝入汽爆罐中，關(guān)閉閥門后通入蒸汽。罐壓升至設(shè)定的壓力后(1.1MPa,181℃),維持一定的時(shí)間5min,然后，瞬間釋放罐中的壓力，汽爆后的物料隨蒸汽流進(jìn)入汽爆接收罐。收集汽爆后的物料，利用4倍大麻花葉初始質(zhì)量的去離子水洗滌汽爆物[0049]細(xì)黃鏈霉菌(Streptomycesmicroflavus)購自中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC),保藏編號4.6556。將試管中的菌種涂布于土豆葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中于28℃培養(yǎng)7天，用含有吐溫-20的無菌水洗滌平板并適當(dāng)稀釋獲得10?/mL的孢子懸浮液，備用。[0051]配置含80%的汽爆預(yù)處理后的大麻花葉，并額外添加硫酸銨、尿素、蛋白胨等作為固態(tài)發(fā)酵氮源。用含0.3%硫酸鎂、0.03%硫酸鐵的營養(yǎng)液調(diào)整體系中含水量為60%。制備的培養(yǎng)基于121℃高壓蒸汽滅菌30min。[0053]待上述步驟(三)中物料冷卻后接入3.3×10?/g干基的孢子，裝入氣相雙動(dòng)態(tài)固態(tài)發(fā)酵器進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，設(shè)置參數(shù)如下：周期脈動(dòng)的高壓為0.2Mpa,維持20s,常壓維持時(shí)間為20min,發(fā)酵溫度為28℃,發(fā)酵72h。[0055]將上述步驟(四)固態(tài)發(fā)酵后的物料，轉(zhuǎn)移至提取罐，以1～2倍的體積加入乙醇，提取3～4次，每次3～5h,提取溫度30～60℃,合并提取液，真空減壓濃縮回收溶劑，得到工業(yè)大麻提取浸膏，浸膏得率10～25%,HPLC檢測大麻二酚含量大于50mg/g。[0056]將上述大麻浸膏溶于乙醇，離心取上清液上大孔樹脂(D101),流動(dòng)相為乙腈和甲醇的混合溶液，乙腈和甲醇的體積比為(40:60～20:80)進(jìn)行分離，收集大麻二酚餾分，減壓濃縮后得到大麻二酚純化液，減壓干燥的到大麻二酚成品，HPLC檢測大麻二酚含量大于98%,未檢測四氫大麻酚(THC)。[0058]一種真菌固態(tài)發(fā)酵提取大麻二酚的方法，包括如下步驟：[0059]步驟一、對工業(yè)大麻花葉進(jìn)行蒸汽爆破預(yù)處理[0060]稱取250g大麻花葉裝入汽爆罐中，關(guān)閉閥門后通入蒸汽。罐壓升至設(shè)定的壓力后(1.3MPa,191℃),維持一定的時(shí)間4min,然后，瞬間釋放罐中的壓力，汽爆后的物料隨蒸汽流進(jìn)入汽爆接收罐。收集汽爆后的物料，利用4倍大麻花葉初始質(zhì)量的去離子水洗滌汽爆物[0062]長枝木霉(Trichodermalongibrachiatum)購自中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC),保藏編號5.1236。將試管中的菌種涂布于土豆葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中于28℃培養(yǎng)7天，用含有吐溫-20的無菌水洗滌平板并適當(dāng)稀釋獲得10?/mL的孢子懸浮液，備用。7[0064]配置含80%的汽爆預(yù)處理后的大麻花葉，并額外添加硫酸銨、尿素、蛋白胨等作為固態(tài)發(fā)酵氮源。用含0.3%硫酸鎂的營養(yǎng)液調(diào)整體系中含水量為60%。制備的培養(yǎng)基于121℃高壓蒸汽滅菌30min。[0066]待上述步驟(三)中物料冷卻后接入3.3×10?/g干基的孢子，裝入氣相雙動(dòng)態(tài)固態(tài)發(fā)酵器進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，設(shè)置參數(shù)如下：周期脈動(dòng)的高壓為0.2Mpa,維持20s,常壓維持時(shí)間為20min,發(fā)酵溫度為28℃,發(fā)酵72h。[0068]將上述步驟(四)固態(tài)發(fā)酵后的物料，轉(zhuǎn)移至提取罐，以1～2倍的體積加入乙醇，提取3～4次，每次3～5h,提取溫度30～60℃,合并提取液，真空減壓濃縮回收溶劑，得到工業(yè)大麻提取浸膏，浸膏得率10～25%,HPLC檢測大麻二酚含量大于60mg/g。[0069]將上述大麻浸膏溶于乙醇，離心取上清液上大孔樹脂(D101),流動(dòng)相為乙腈和甲醇的混合溶液，乙腈和甲醇的體積比為(40:60～20:80)進(jìn)行分離，收集大麻二酚餾分，減壓濃縮后得到大麻二酚純化液，減壓干燥的到大麻二酚成品，HPLC檢測大麻二酚含量大于98%,未檢測四氫大麻酚(THC)。[0072]步驟一、對工業(yè)大麻花葉進(jìn)行蒸汽爆破預(yù)處理[0073]稱取250g大麻花葉裝入汽爆罐中，關(guān)閉閥門后通入蒸汽。罐壓升至設(shè)定的壓力后(1.3MPa,191℃),維持一定的時(shí)間4min,然后，瞬間釋放罐中的壓力，汽爆后的物料隨蒸汽流進(jìn)入汽爆接收罐。收集汽爆后的物料，利用4倍大麻花葉初始質(zhì)量的去離子水洗滌汽爆物[0075]鏈霉素鏈霉菌(Streptomycesstreptomycini),購自中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC),保藏編號4.617.將試管中的菌種涂布于土豆葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中于28℃培養(yǎng)7天，用含有吐溫-20的無菌水洗滌平板并適當(dāng)稀釋獲得10?/mL的孢子懸浮液，備用。[0077]配置含80%的汽爆預(yù)處理后的大麻花葉，并額外添加硫酸銨、尿素、蛋白胨等作為固態(tài)發(fā)酵氮源。用含0.3%硫酸鎂的營養(yǎng)液調(diào)整體系中含水量為60%。制備的培養(yǎng)基于121℃高壓蒸汽滅菌30min。[0079]待上述步驟(三)中物料冷卻后接入3.3×10?/g干基的孢子，裝入氣相雙動(dòng)態(tài)固態(tài)發(fā)酵器進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，設(shè)置參數(shù)如下：周期脈動(dòng)的高壓為0.2Mpa,維持20s,常壓維持時(shí)間為20min,發(fā)酵溫度為28℃,發(fā)酵72h。[0081]將上述步驟(四)固態(tài)發(fā)酵后的物料，轉(zhuǎn)移至提取罐，以1～2倍的體積加入乙醇，提取3～4次，每次3～5h,提取溫度30～60℃,合并提取液，真空減壓濃縮回收溶劑，得到工業(yè)大麻提取浸膏，浸膏得率10～25%,HPLC檢測大麻二酚含量大于55mg/g。[0082]將上述大麻浸膏溶于乙醇，離心取上清液上大孔樹脂(D101),流動(dòng)相為乙腈和甲8醇的混合溶液，乙腈和甲醇的體積比為(40:60～20:80)進(jìn)行分離，收集大麻二酚餾分，減壓濃縮后得到大麻二酚純化液，減壓干燥的到大麻二酚成品，HPLC檢測大麻二酚含量大于98%,未檢測四氫大麻酚(THC)。[0084]一種真菌發(fā)酵提取大麻二酚的方法，包括如下步驟：[0085]步驟一、對工業(yè)大麻花葉進(jìn)行蒸汽爆破預(yù)處理[0086]稱取250g大麻花葉倒入耐高溫高壓塑料袋，裝入汽爆罐中，關(guān)閉閥門后通入蒸汽。罐壓升至設(shè)定的壓力后(1.1MPa,181℃),維持一定的時(shí)間6min,然后，瞬間釋放罐中的壓力，汽爆后，將裝有物料的塑料袋取出，自然冷卻，利用3倍滌汽爆物料三次，用紗布過濾，收集固體，然后在50℃的烤箱中烘干并儲(chǔ)[0087]步驟二、微生物和孢子懸浮液的制備[0