(19)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局申請(qǐng)人福州海關(guān)技術(shù)中心公司35100專利代理師林文弘蔡學(xué)俊GO1N30/06(2006.01)分裝，(4=2)℃儲(chǔ)存本發(fā)明提供了一種用于藏香中大麻素檢測(cè)評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制外，還因使用的是有證標(biāo)準(zhǔn)物21.一種用于藏香中大麻素檢測(cè)的大麻素標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，其特征在于，包括以下(1)將柏樹粉末和榆樹皮粉末主料以及香料輔料按藏香的制備方法，經(jīng)水磨法粉碎、加積濃度為75%的甲醇水溶液稀釋至大麻素的濃度為100mg/L,得到大麻素標(biāo)準(zhǔn)溶液；(3)將大麻素標(biāo)準(zhǔn)溶液添加到制成的藏香原料泥坯中；按10kg原料泥坯加入3mLCBD(4)將步驟(3)得到的樣品充分?jǐn)嚢?、揉搓，靜置發(fā)酵1天后，放入真空干燥箱中，40℃,真空度20Mpa,運(yùn)行時(shí)間1h后取出；(5)將步驟(4)得到的樣品置于陰涼干燥處置水分完全揮發(fā)，或置于40℃以下烘箱中烘(6)將步驟(5)得到的樣品混勻，過篩，分裝入干凈玻璃瓶中，密封保存，即制得所述用于藏香中大麻素檢測(cè)的大麻素標(biāo)準(zhǔn)樣品。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，主料為柏樹粉末和榆樹皮粉末，二者量比1:1:1:1.5:1:1.5:0.5:0.5:1配置。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，主料和輔料按3:1的質(zhì)量配比進(jìn)行混3一種用于藏香中大麻素檢測(cè)的大麻素標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明屬于非法添加物質(zhì)檢測(cè)的基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于藏香中大麻素檢測(cè)的大麻素標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法。背景技術(shù)[0002]?？拼舐閷僦参锎舐?，是良好的紡織原料，在世界各地均有野生或栽培，其莖、葉和果實(shí)中特有一類含有烷基和單萜分子的次生代謝產(chǎn)物大麻素，主要包括△9-四氫大麻酚(△9-Tetrahydrocannabinol,△9-THC)、大麻酚(Cannabinol,CBN)和大麻二酚(Cannabidiol,CBD),其中，△9-THC因具有影響中樞神經(jīng)和成癮性作用而最被關(guān)注。近年來，美國(guó)、加拿大等多國(guó)對(duì)大麻管控政策有所放松，部分地區(qū)不僅將大麻合法化，還允許將大麻素添加到食品、化妝品和相關(guān)產(chǎn)品中。我國(guó)也在廣西、云南和黑龍江等地允許種植工業(yè)大麻(又稱火麻，一種低△9-四氫大麻酚含量的大麻),并準(zhǔn)許火麻油、火麻仁等相關(guān)產(chǎn)品銷售。[0003]藏香歷史悠久，主要用于西藏地區(qū)的宗教祭祀活動(dòng)中，因其含有多種天然香料和醫(yī)藥成分，具有清心怡神、殺菌消毒的功效，在居家養(yǎng)生等領(lǐng)域的使用越來越廣泛。為進(jìn)一步推廣藏香的使用范圍和功效，新制定的《藏香》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中將其定義為“以柏樹等植物粉末為主，加以純天然香料，經(jīng)配制、揉搓、發(fā)酵、成型、陰干等工藝制造而成的香”,并指出其“適用于家庭、辦公等場(chǎng)所”,這使得藏香解除了地域的限制和要求，能夠在越來越多的地方生產(chǎn)和使用。由于國(guó)內(nèi)外對(duì)待大麻政策的差別，一些不法分子將△9-THC等大麻素添加到各類燃香中，相比普遍的燃香，藏香在制作時(shí)大多會(huì)添加一種或多種香料，這使得不法分子既能利用其香味來掩蓋大麻的氣味，還能利用藏香點(diǎn)燃使用的方式進(jìn)行吸食，具有極強(qiáng)的隱蔽性。據(jù)公安部門在近年查獲的毒品案件報(bào)道中，已發(fā)現(xiàn)一種名為“小樹枝”的燃香類新型毒品出現(xiàn)了濫用。[0004]當(dāng)前我國(guó)尚無針對(duì)藏香中大麻的檢測(cè)方法，只能使用食品、血液、尿液的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)，從而導(dǎo)致方法適用性差、結(jié)果偏差大和基質(zhì)干擾嚴(yán)重等問題。此外，不同藏香在制作時(shí)還會(huì)受到原料種類、配比和制作工藝的影響，也會(huì)進(jìn)一步加大檢測(cè)時(shí)的不確定性，這都給偵測(cè)和識(shí)別非法添加在藏香產(chǎn)品中的大麻素造成了很大的影響。[0005]對(duì)此，國(guó)際上常用帶有實(shí)際基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)樣品(referencematerials)開展質(zhì)量控制，還將標(biāo)準(zhǔn)樣品用于實(shí)驗(yàn)室能力評(píng)價(jià)、量值溯源或代替標(biāo)準(zhǔn)品等領(lǐng)域。根據(jù)公開的資料，我國(guó)及世界各國(guó)均沒有藏香中△9-THC、CBD和CBN標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法及標(biāo)準(zhǔn)樣品，研究藏香中多種大麻素標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，可提高實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)分析數(shù)據(jù)的可比性，對(duì)于實(shí)驗(yàn)室方法可行性分析、儀器核查、人員技術(shù)水平考核、檢測(cè)質(zhì)量控制等實(shí)驗(yàn)室工作均具有重要意義。發(fā)明內(nèi)容[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種用于藏香中大麻素檢測(cè)的大麻素標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方4[0007]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：[0008]一種用于藏香中大麻素檢測(cè)的大麻素標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，包括以下步驟：[0009](1)將柏樹粉末和榆樹皮粉末主料以及香料輔料按藏香的制備方法，經(jīng)水磨法粉述案例按粉香的工藝制備；體積濃度為75%的甲醇水溶液稀釋至大麻素的濃度為100mg/L,得到大麻素標(biāo)準(zhǔn)溶液；[0011](3)將大麻素標(biāo)準(zhǔn)溶液添加到制成的藏香原料泥坯中；按10kg原料泥坯加入3mL真空度20Mpa,運(yùn)行時(shí)間1h后取出；[0013](5)將步驟(4)得到的樣品置于陰涼干燥處置水分完全揮發(fā)，或置于40℃以下烘箱[0014](6)將步驟(5)得到的樣品混勻，過篩，分裝入干凈玻璃瓶中，述用于藏香中大麻素檢測(cè)的大麻素標(biāo)準(zhǔn)樣品。[0015]進(jìn)一步的，步驟(1)中主料為柏樹粉末和榆樹皮粉末，二者質(zhì)量比為1:1,輔料為：0.5:0.5:1配置。[0016]進(jìn)一步的，主料和輔料按3:1的質(zhì)量配比進(jìn)行混合。[0017]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：[0018](1)可制備單種、多種大麻素的標(biāo)準(zhǔn)樣品，還可根據(jù)需要對(duì)不同大麻素分開賦值，進(jìn)而制備出滿足預(yù)期含量要求的大麻素藏香標(biāo)準(zhǔn)樣品，填補(bǔ)了該領(lǐng)域的空白。(2)本方法可完全按照藏香的生產(chǎn)工藝制備，滿足用不同生產(chǎn)工藝制備藏香可能帶來的基質(zhì)偏差問題。(3)制備大麻素的標(biāo)準(zhǔn)品為有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，具有量值溯源性。(4)使用的甲醇-水溶劑能在大麻素標(biāo)準(zhǔn)品和藏香原料中起到良好的介質(zhì)作用。[0019]當(dāng)前對(duì)藏香中大麻素的檢測(cè)存在以下問題：行檢測(cè)，從而在檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)方法適用性差、結(jié)果偏差大和基質(zhì)干擾嚴(yán)重等問題，缺少使用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行校正和比對(duì)的手段，使得在檢測(cè)時(shí)無法有效的反映不同樣品間的基質(zhì)效[0021]2、天然的大麻植物中含有一定的大麻素，但將其添加到藏香原料中制備標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)法單獨(dú)制備只含某一種大麻素的標(biāo)準(zhǔn)樣品。(2)由于大麻植物中多種大麻素的含量比固定，即使是制備同時(shí)含有三種大麻素的標(biāo)準(zhǔn)樣品，也無法根據(jù)需要分開賦值(如希望獲得△9-起標(biāo)準(zhǔn)樣品的量值溯源性。[0022]在本發(fā)明通過將有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)經(jīng)溶劑轉(zhuǎn)換后，添加到制作藏香的原料中，從而能5量控制外，還因使用的是有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，能夠?yàn)橹苽浜蟮臉悠诽峁┝恐邓菰椿蛑苯哟鏄?biāo)準(zhǔn)品使用。附圖說明[0023]圖1為大麻素標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備流程圖。具體實(shí)施方式[0024]為讓本發(fā)明的上述特征和優(yōu)點(diǎn)能更明顯易懂，下文特舉實(shí)施例，作詳細(xì)說明。本發(fā)明的方法如無特殊說明，均為本領(lǐng)域常規(guī)方法。[0025]實(shí)施例1[0026]1制備流程圖[0027]如圖1所示。[0028]2制備方法[0029]2.1將柏樹粉末和榆樹皮粉末主料以及香料輔料按藏香的制備方法，經(jīng)水磨法粉碎、加水?dāng)嚢?、模塊成型后，制成原料泥坯。其中，主料為柏樹粉末和榆樹皮粉末，二者質(zhì)量比為1:1,輔料為：丁香、草果、桂皮、肉豆蔻、香草、草紅花、木香、白檀香和青稞酒按質(zhì)量比1:1:1:1.5:1:1.5:0.5:0.5:1配置，主料和輔料按3:1的質(zhì)量配比進(jìn)行混合。為獲得良好的樣品均勻性和儲(chǔ)運(yùn)的需要，下述案例按粉香的工藝制備。等有證大麻素標(biāo)準(zhǔn)品的一種或多種用甲醇溶解后，超聲10min混勻，并用75%甲醇水溶液稀釋至所需濃度。實(shí)際操作中將△9-THC、CBD、CBN三種大麻素均配制成100mg/L的濃度，得到大麻素標(biāo)準(zhǔn)溶液。[0031]2.3將大麻素標(biāo)準(zhǔn)溶液添加到制成的藏香原料泥坯中。實(shí)際操作中按10kg原料泥坯加入3mLCBD標(biāo)準(zhǔn)溶液、2mL△9-THC標(biāo)準(zhǔn)溶液和1mLCBN標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度均為100mg/L)的比例添加。[0032]2.4將上述樣品充分?jǐn)嚢琛⑷啻?，靜置發(fā)酵后，放入真空干燥箱中，40℃,真空度20Mpa,運(yùn)行時(shí)間1h后取出。[0033]2.5將上述樣品置于陰涼干燥處置水分完全揮發(fā)，必要時(shí)可置于40℃以下烘箱中加速水分揮發(fā)。[0034]2.6將上述樣品混勻，過篩，分裝入干凈玻璃瓶中，密封保存，即制得所述用于藏香中大麻素檢測(cè)的大麻素標(biāo)準(zhǔn)樣品。[0035]2.7對(duì)制得的藏香基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行均勻性、穩(wěn)定性檢驗(yàn)。[0036]2.8對(duì)制得的藏香基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行檢測(cè)和定值。[0037]2.9對(duì)制得的藏香基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行不確定度評(píng)估。[0038]3進(jìn)一步說明[0039]3.1對(duì)使用介質(zhì)溶劑的說明：為使大麻素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和藏香原料得到良好的結(jié)合，本發(fā)明使用甲醇-水溶液做為介質(zhì)將兩者進(jìn)行結(jié)合。因?yàn)椋?1)△9-THC、CBD、CBN三種大麻素能溶于甲醇，甲醇與水具有互溶性，而水又是制備藏香時(shí)的必需材料，因此通過甲醇-水的介質(zhì)能夠?qū)⒋舐樗嘏c藏香原料充分、均勻的混合。(2)甲醇-水是大麻素標(biāo)準(zhǔn)品和藏香制備的原料，因此不會(huì)對(duì)目標(biāo)物或基質(zhì)產(chǎn)生影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證明了這一效果。(3)甲醇易揮發(fā)，在6完成樣品制備后在較低溫度下即可除去，既不會(huì)在制備后的樣品中殘留，也不會(huì)因揮發(fā)溫度等對(duì)制備的樣品造成影響(制備過程中使用真空干燥箱的目的即為除去殘留的甲醇溶劑)。(4)甲醇毒性較低，制備和揮發(fā)去除過程不會(huì)對(duì)環(huán)境和人員造成明顯傷害。[0040]3.2應(yīng)用：制得的標(biāo)準(zhǔn)樣品可用于：藏香中大麻素的檢測(cè)；藏香樣品中大麻素檢測(cè)[0041]4測(cè)定方法(定值方法)[0042]4.1材料與試劑[0043]△9-THC、CBD、CBN和△9-THC-d3標(biāo)準(zhǔn)溶液(含量均為1mg/mL)購(gòu)自天津阿爾塔公司；甲醇(色譜純);0asisHLB固相萃取柱([0046]4.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制[0048]內(nèi)標(biāo)溶液：移取適量?jī)?nèi)標(biāo)溶液(△9-THC-d3),用甲醇稀釋配制成1.0μg/mL,于-20℃避光保存。[0049]混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液，用75%甲醇水溶g/L內(nèi)標(biāo))的混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。溶液和10mL甲醇，渦旋混勻30s,50℃下超聲提取15min,10000r/min離心5min,取5mL上清液待凈化，加5mL水稀釋后渦旋混勻，10000r/min離心5min,取全部上清液待凈化。[0053]4.4.2樣品凈化[0054]其他試樣：將待凈化液轉(zhuǎn)移至事先用5mL甲醇和5mL水活化過的HLB固相萃取小柱中，待其自然重力流出后，用5mL50%甲醇水溶液淋洗小柱，棄去全部淋洗液并減壓抽干[0057]色譜柱：HP-5MS毛細(xì)管柱(30m×0.25mm×0.25μm);進(jìn)樣口溫度290℃;進(jìn)樣量1.0μL;進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；載氣：高純氦氣(99.999%);流速：恒定流量1.5mL/min;升溫程序：初始70℃,保持2min,以10℃/min升至180℃,再[0058]4.5.2質(zhì)譜條件[0059]電子轟擊電離(electronionization,EI源);電離能量：70eV;離子源溫度：310表1。7[0060]表1三種大麻素及內(nèi)標(biāo)質(zhì)譜參數(shù)[0062]4.6分析結(jié)果[0063]對(duì)檢測(cè)結(jié)果采用方法學(xué)分析，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限、定量限、準(zhǔn)確度和精密度判斷方法的穩(wěn)定性和靈敏度。結(jié)果表明，該方法在20.0～500.0μg/kg范圍里呈現(xiàn)良好的線性，相關(guān)系數(shù)均大于0.998,方法的檢出限和定量限分別為6μg/kg和20μg/kg,對(duì)1、2、10倍定量限的加標(biāo)結(jié)果表明，三種大麻素的回收率在72.3～108.1%,精密度RSD在6.9%～11.7%,方法準(zhǔn)確度和精密度良好，能夠滿足分析要求。表23種大麻的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限666表33種大麻素在添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)5均勻性檢驗(yàn)5.1樣品制備隨機(jī)稱取制備后的藏香大麻素標(biāo)準(zhǔn)樣品600g,分裝入密封棕色玻璃瓶中，共30瓶，每瓶約20g。隨機(jī)抽取10瓶用于均勻性檢驗(yàn)。另取10瓶置于室溫(20±5)℃,10瓶置于冷藏(4±2)℃保存，用于穩(wěn)定性試驗(yàn)。[0072]5.2檢驗(yàn)方法[0073]參照CNAS-GL003:2018《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》和GB/T15000.3-2008“標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則(3)標(biāo)準(zhǔn)樣品定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法”中對(duì)“均勻性研究”的要求，采用單因素方差分析(F檢驗(yàn))法，對(duì)制備后的樣品進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)。隨機(jī)抽取10份制備好的樣品，每份樣品在重復(fù)性條件下測(cè)定2次，計(jì)算F值，并用95%置信區(qū)間查F分布臨界值F?.05,當(dāng)樣品的F<F。05時(shí)，表明樣品內(nèi)和樣品間無顯著性差異，結(jié)果見表4。均勻性檢驗(yàn)的結(jié)果表明，制備的樣品中三種大麻素濃度都是均勻的。8[0074]表4標(biāo)準(zhǔn)樣品均勻性檢測(cè)數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)結(jié)果測(cè)試值1,測(cè)試值2,測(cè)試值1,測(cè)試值2,測(cè)試值1,測(cè)試值2,123456789樣品間9樣品內(nèi)樣品間9樣品內(nèi)樣品間9樣品內(nèi)[0077]6穩(wěn)定性檢驗(yàn)[0078]參照CNAS-GL003:2018《能力驗(yàn)證樣2008“標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則(3)標(biāo)準(zhǔn)樣品定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方求，使用與均勻性檢驗(yàn)相同的人員、設(shè)備、方法和實(shí)驗(yàn)條件，將均勻性測(cè)定結(jié)果的均值做為參考值，采用t檢驗(yàn)法，對(duì)制備后的樣品進(jìn)行穩(wěn)定性檢驗(yàn)。