目錄中文摘要……………1英文摘要……………2前言……………3文獻(xiàn)綜述……………4正文……………13預(yù)期結(jié)果……………17參考文獻(xiàn)……………18致謝……………21個(gè)人簡(jiǎn)歷……………22摘要目的：通過(guò)比較姜黃素固體分散體和純姜黃素藥物動(dòng)力學(xué)特征及生物利用度,為姜黃素的臨床研究和新藥設(shè)計(jì)提供理論基礎(chǔ)和方法。方法：以聚乙烯吡咯烷酮（PVP）為載體將姜黃素制成姜黃素PVP固體分散體，小鼠灌胃給藥后采用HPLC法測(cè)定不同時(shí)間下姜黃素的血藥濃度,通過(guò)3P97計(jì)算出藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)。預(yù)期結(jié)果：通過(guò)實(shí)驗(yàn)后可以計(jì)算姜黃素固體分散體和純姜黃素的藥峰濃度cmax、達(dá)峰時(shí)間tmax、半衰期t1/2、藥時(shí)曲線(xiàn)下面積AUC，生物利用度F。比較二者在大鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力參數(shù)可以得出姜黃素固體分散體與純姜黃素相比tmax、t1/2明顯增加，生物利用度有所提高，為姜黃素固體分散體的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：姜黃素；劑型；研究進(jìn)展；綜述AbstractPurpose：Thepharmacokineticcharacteristicsandbioavailabilityofcurcuminsoliddispersionandpurecurcuminwerecomparedtoprovidetheoreticalbasisandmethodsforclinicalresearchandnewdrugdesignofcurcumin.Materialandmethod：CurcuminwaspreparedintosoliddispersionofcurcuminPVPwithpolyvinylpyrrolidone(PVP)ascarrier.ThebloodconcentrationofcurcuminatdifferenttimeswasdeterminedbyHPLCafterintragastricadministrationinmice,andpharmacokineticparameterswerecalculatedby3P97.ForecastResults：Aftertheexperiment,thepeakconcentrationcmax,peaktimetmax,half-lifet1/2,AUCunderthedrug-timecurveandbioavailabilityFofcurcuminsoliddispersionandpurecurcumincanbecalculated.Comparingthepharmacokineticparametersofcurcuminandcurcumininrats,itcanbeconcludedthattmaxandt1/2ofcurcuminsoliddispersionaresignificantlyincreasedcomparedwithpurecurcumin,andthebioavailabilityisimproved,whichlaysafoundationforfurtherresearchofcurcuminsoliddispersion.Keyword：Curcumin;Dosageform;Researchprogress;Overview.

前言姜黃素是從姜科植物的根莖中提取的化學(xué)成分。其被發(fā)現(xiàn)具有抗氧化、抗炎、降血糖等藥理作用。但由于姜黃素在體內(nèi)研究中水溶性低，穩(wěn)定性差，生物利用度不高，很大程度上限制了其廣泛使用。學(xué)者們通過(guò)將姜黃素制成各種劑型來(lái)解決這些問(wèn)題。本文論述了姜黃素劑型的研究進(jìn)展，為姜黃素的臨床使用和新藥設(shè)計(jì)提供理論基礎(chǔ)和方法。姜黃素制劑研究進(jìn)展摘要：姜黃素具有許多種藥理作用，但是由于水溶性差、穩(wěn)定性差、生物利用度低限制了其臨床使用。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外報(bào)道了許多姜黃素新劑型，克服了以上缺點(diǎn)。本文將主要從姜黃素固體分散體、脂質(zhì)體、納米粒、膠束、微球、環(huán)糊精包合物等制劑進(jìn)行綜述，為姜黃素的開(kāi)發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。Abstract:Curcuminhasmanypharmacologicaleffects,butitsclinicalapplicationislimitedduetoitspoorwatersolubility,stabilityandlowbioavailability.Inrecentyears,manynewformulationsofcurcuminhavebeenreportedathomeandabroad,overcomingtheaboveshortcomings.Thisarticlewillmainlyreviewpreparationssuchascurcuminsoliddispersions,liposomes,nanoparticles,micelles,microspheres,cyclodextrininclusioncompounds,etc.,whichwilllayafoundationforthedevelopmentandresearchofcurcumin.前言：姜黃素是從姜科植物的根莖中提取的化學(xué)成分[1]。其被發(fā)現(xiàn)具有抗氧化、抗炎、降血糖等藥理作用[2]。但由于姜黃素在體內(nèi)研究中水溶性低，穩(wěn)定性差，生物利用度不高，很大程度上限制了其廣泛使用。學(xué)者們通過(guò)將姜黃素制成各種劑型來(lái)解決這些問(wèn)題[3]。本文論述了姜黃素劑型的研究進(jìn)展，為姜黃素的臨床使用和新藥設(shè)計(jì)提供理論基礎(chǔ)和方法。1固體分散體固體分散體是指藥物高度分散于惰性載體或基質(zhì)中形成的固體制劑[4]。固體分散體有降低藥物粒徑的作用，可以增加藥物孔隙率，同時(shí)使藥物從結(jié)晶狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)椴欢ㄐ蜖顟B(tài)，從而提高藥物的溶解度和溶出速率。且由于藥物以過(guò)飽和狀態(tài)存在于固體分散體中，使其在體內(nèi)有較快的溶出速率，從而增加藥物的吸收，也能夠有效提高藥物生物利用度。固體分散體主要的制備方法有溶劑法、冷凍干燥法、研磨法，其優(yōu)缺點(diǎn)如表一：表一固體分散體的不同制備方法比較Table1ComparisonofDifferentPreparationMethodsofSolidDispersion醋酸纖維素是一種水不溶性的載體材料，ShuxinWan等[5]通過(guò)溶劑法以醋酸纖維素為載體制了姜黃素固體分散體，其在體外釋放試驗(yàn)表現(xiàn)出良好的緩釋作用，可達(dá)12小時(shí)的持續(xù)釋放。同時(shí)觀察藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)發(fā)現(xiàn)，與純姜黃素相比，姜黃素固體分散體的峰值Cmax增大了2倍，達(dá)峰時(shí)間Tmax增大了3倍,生物利用度也是原來(lái)的7倍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，固體分散體能夠在提高藥物溶解度的同時(shí)起到一定的緩釋作用，從而有效提高藥物生物利用度。SongIS等[6]以溶解度作為指標(biāo)，確定姜黃素與TPGS最佳比例為1:10，通過(guò)冷凍干燥法制得的固體分散體在不同pH溶液中測(cè)試溶解度未發(fā)現(xiàn)酸堿依賴(lài)性，且與游離姜黃素相比，溶解度增加了十倍。另外固體分散體的Cmax增加86倍，生物利用度也明顯增高。多糖阿拉伯半乳聚糖作為一種多糖聚合物，有較好的溶解性和血管滲透性，在提高藥物生物利用度的同時(shí)也能夠極大程度上減少用藥量。QihongZhang等[7]選以多糖阿拉伯半乳聚糖做為載體，采用機(jī)械研磨法制備姜黃素固體分散體。通過(guò)平行人工膜滲透試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)Cur-AG中姜黃素的滲透能力與純姜黃素比較明顯增加，生物利用度提高了一倍。2脂質(zhì)體脂質(zhì)體[8,9]是由磷脂、膽固醇等在水中自動(dòng)結(jié)合而成的同心脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)的囊泡，其脂質(zhì)雙層可以結(jié)合親脂藥物和雙親性藥物，而極性核心可包封親水性藥物。脂質(zhì)體類(lèi)似生物膜的囊泡的結(jié)構(gòu)使其有較好的組織相容性，能夠通過(guò)胞吞進(jìn)入細(xì)胞中，當(dāng)達(dá)到相變溫度時(shí)其膜流動(dòng)性增加，被包載于其中的藥物快速釋放，從而提高藥物在細(xì)胞中的濃度，提高生物利用度?，F(xiàn)今大部分脂質(zhì)體以天然分子材料如多糖、寡糖等進(jìn)行修飾來(lái)增強(qiáng)效果。脂質(zhì)體常用的制備方法有薄膜蒸發(fā)法、乙醇注入法、冷凍干燥法等，其優(yōu)缺點(diǎn)如圖一：圖一脂質(zhì)體制備方法比較Fig.1comparisonofpreparationmethodsofliposomes尤佳等[10]以乙醇注入法制得的含有PEG2000-DSPE的長(zhǎng)循環(huán)姜黃素脂質(zhì)體包封率高，藥物分布均勻，呈現(xiàn)類(lèi)圓形，粒徑大約115nm。藥物動(dòng)力學(xué)研究表明該脂質(zhì)體T1/2是普通姜黃素脂質(zhì)體的1.8倍，游離姜黃素的10倍。該方法制備的長(zhǎng)循環(huán)姜黃素脂質(zhì)體能夠有效地降低藥物的體內(nèi)清除率，提高口服藥物的生物利用度。為了提高藥物的生物利用度，顧吉晉等[11]通過(guò)孵化法對(duì)姜黃素脂質(zhì)體進(jìn)行卡波姆包衣。藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)顯示，相同條件下，姜黃素脂質(zhì)體的吸收速度較混懸液明顯加快，Cmax和AUC0-∞表現(xiàn)為包衣脂質(zhì)體>普通脂質(zhì)體>混懸液。通過(guò)計(jì)算發(fā)現(xiàn)負(fù)載卡波姆脂質(zhì)體的相對(duì)生物利用度為281%，約為普通姜黃素脂質(zhì)體的2倍。肝癌是近些年來(lái)多發(fā)的癌癥之一，為了治療肝癌,HongJiang等[12]通過(guò)薄膜蒸發(fā)法制備了甘草次酸修飾的姜黃素-康布瑞汀磷酸二鈉脂多糖脂質(zhì)體。通過(guò)MTT法觀察細(xì)胞毒性發(fā)現(xiàn)姜黃素-康布瑞汀磷酸二鈉脂多糖脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性最高，姜黃素-康布瑞汀磷酸二鈉脂質(zhì)體次之，游離姜黃素和康布瑞汀磷酸二鈉較低，并且體內(nèi)實(shí)時(shí)成像也表明，甘草次酸可以加強(qiáng)脂質(zhì)體的靶向性，增加藥物在腫瘤細(xì)胞中藥物的積累。綜上表明該方法制備的脂質(zhì)體可以作為肝癌靶向共遞送給藥的重要途徑。3納米粒納米粒是通過(guò)人工技術(shù)制備的直徑在1-100nm的顆粒。納米粒粒徑小，可以通過(guò)胞飲的方式進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮作用以提高藥物生物利用度。同時(shí)能有效增大藥物的表面積，即加大其在體內(nèi)與胃腸道的接觸機(jī)會(huì)，從而增加藥物的溶解性。也可以將納米制劑加工后制成靶向制劑從而提高藥效、降低副作用。納米粒常用的制備方法有乳化-溶劑蒸發(fā)法、雙乳化劑蒸發(fā)法，其優(yōu)缺點(diǎn)如圖二：圖二納米粒制備方法比較Figure2ComparisonofPreparationMethodsofNanoparticles為了驗(yàn)證納米顆粒提高姜黃素生物利用度的說(shuō)法，J.Shaikh等[13]以乳化-溶劑蒸發(fā)法制備了姜黃素納米粒，并將PLGA負(fù)載在藥物表面。動(dòng)態(tài)光散射實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其平均粒徑約為264±2nm，PDI為0.31±0.05，載藥量為15%。觀察藥物在雄性SD大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)發(fā)現(xiàn)姜黃素PLGA納米粒比姜黃素混懸液的AUC0-∞增加了十倍有余，達(dá)峰時(shí)間Tmax和峰值Cmax也顯著增加，表現(xiàn)出較好提高口服生物利用度的作用。鄭毅等[14]為觀察姜黃素納米粒對(duì)姜黃素生物利用度的提高效果，以雙乳化劑蒸發(fā)法制備了姜黃素納米粒。通過(guò)掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)姜黃素納米粒為粒徑在200nm左右的類(lèi)圓形。同時(shí)發(fā)現(xiàn)姜黃素納米粒的Cmax和Tmax都遠(yuǎn)大于姜黃素混懸液，經(jīng)過(guò)梯形法計(jì)算納米粒曲線(xiàn)下面積發(fā)現(xiàn)，姜黃素-PLGA納米粒組的藥時(shí)曲線(xiàn)下面積為(110.86±10.45)μg/ml/min遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于姜黃素混懸液組的藥時(shí)曲線(xiàn)下面積(21.32±3.56)μg/ml/min。藥物生物利用度整整提高了5倍有余。RohitMulik等[15]以微乳法制備了負(fù)載聚氰基丙烯酸丁酯-姜黃素納米粒，通過(guò)透視電子顯微和核磁共振氫譜發(fā)現(xiàn)姜黃素以分子形式存在。在40℃、75%相對(duì)濕度下無(wú)論有光或無(wú)光保存6個(gè)月仍處于穩(wěn)定狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明納米制劑可以顯著提高藥物的穩(wěn)定性。4膠束當(dāng)表面活性劑在超過(guò)臨界膠束濃度的水介質(zhì)中組裝成有組織的疏水核-親水性殼結(jié)構(gòu)的締合物稱(chēng)為膠束[16]。膠束有明顯的增溶作用，難溶性藥物進(jìn)入膠束疏水核心中均勻分布，當(dāng)膠束溶于水中時(shí)，藥物能夠分散在膠束中，從而能夠充分溶解于水溶液中，以達(dá)到增加難溶性藥物的溶解度，提高藥物生物利用度的作用。膠束常用制備方法有溶劑蒸發(fā)法、乳化法、透析法，其優(yōu)缺點(diǎn)如圖三：圖三膠束制備方法比較Fig.3comparisonofpreparationmethodsofmicelles李晨晨等[17]以mPEG–PCL-PHE(BOC）作為載體通過(guò)溶劑蒸發(fā)法制備了姜黃素膠束。通過(guò)HPLC法測(cè)定其大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)表明，與姜黃素溶液相比，膠束制劑的AUC0-∞增大6.7倍，半衰期T1/2顯著延長(zhǎng)，清除率降低，生物利用度明顯提高。李晨晨等還發(fā)現(xiàn)姜黃素可以對(duì)抗阿霉素的心臟毒性，與阿霉素連用治療癌癥有良好的治療前景。由于腫瘤細(xì)胞中谷胱甘肽濃度遠(yuǎn)高于正常細(xì)胞，可以通過(guò)制備氧化還原敏感的膠束來(lái)實(shí)現(xiàn)藥物的遞送。CihuiTian等[18]用透析法制備了氧化還原敏感透明質(zhì)酸-β-姜黃素膠束，又加入吐溫80進(jìn)行修飾（吐溫80可以透過(guò)腦屏障）。大鼠靜脈注射膠束后觀察發(fā)現(xiàn)其符合雙室藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征。給藥5分鐘后比較二者血藥濃度發(fā)現(xiàn)姜黃素膠束血藥濃度是游離姜黃素的8.8倍。將姜黃素制成膠束顯著增加了其AUC0-∞并降低了清除率，有效提高了藥物的生物利用度。同時(shí)經(jīng)過(guò)體外釋放試驗(yàn)觀察也發(fā)現(xiàn)在10mmol谷胱甘肽存在下藥物釋放率明顯增加，膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡數(shù)量和攝取都顯著增加。說(shuō)明該方法在神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療中有很好的應(yīng)用前景。阿爾茨海默癥是一種常見(jiàn)的老年病，有文獻(xiàn)提出姜黃素可以抑制糖基化過(guò)程從而治療阿爾茨海默癥。ZeinabMirzaie[19]通過(guò)乳化法制得的姜黃素膠束平均直徑為21nm，ζ電位為-16.64。通過(guò)硫黃素?zé)晒庠囼?yàn)發(fā)現(xiàn)加入膠束的組分熒光明顯減少，表明姜黃素膠束在降低蛋白質(zhì)糖基化反應(yīng)方面有一定的作用。5微球微球是藥物分散于高分子材料中形成的骨架型微球分散體，一般做注射或口服使用。微球粒徑范圍在1-200μm，呈球形或類(lèi)球形。微球最主要的特點(diǎn)是緩釋性，微球骨架的降解速度決定了其中藥物的釋放速度，故可以用高分子材料作為載體制成微球使藥物緩慢釋放．達(dá)到長(zhǎng)效的目的，從而提高生物利用度。微球常用制備方法有乳化-加熱固化法、噴霧干燥法、乳化-交聯(lián)法、液中干燥法等，其優(yōu)缺點(diǎn)如圖四：圖四微球制備方法比較Figure4ComparisonofPreparationMethodsofMicrospheres由于姜黃素在堿性條件下極易降解，PreetiG.Karade等[20]在姜黃素微球上負(fù)載抗壞血酸，發(fā)現(xiàn)當(dāng)姜黃素和抗壞血酸比例為1:1條件下，在堿性試劑中姜黃素不會(huì)降解，穩(wěn)定性顯著增加。同時(shí)通過(guò)大鼠眼眶取血發(fā)現(xiàn)姜黃素微球的血藥濃度比姜黃素混懸液增加了7.33倍，其峰值Cmax和曲線(xiàn)下面積AUC也明顯增加，姜黃素生物利用度增加了7倍。結(jié)果可見(jiàn)負(fù)載抗壞血酸的姜黃素微球穩(wěn)定性更好，生物利用度也明顯增加，有利于其結(jié)腸靶向給藥。林媚等[21]以乳化法制得的微球表面光滑，粒徑平均。通過(guò)紫外分光光譜儀觀察發(fā)現(xiàn)，隨著聚己內(nèi)酯分子量的增大，姜黃素微球載藥率和包封率也有所提高高。當(dāng)分子量達(dá)到80000時(shí)，藥物載藥率為13.9%，包封率為62.4%，此時(shí)釋藥時(shí)間也最長(zhǎng)，可達(dá)250小時(shí)，且滿(mǎn)足Fickian擴(kuò)散方程。結(jié)果表明聚已內(nèi)酯姜黃素微球能明顯延長(zhǎng)姜黃素的釋放時(shí)間，為提高生物利用度奠定基礎(chǔ)。計(jì)竹娃等[22]研究乳化交聯(lián)法制備的姜黃素微球?qū)?型糖尿病的影響發(fā)現(xiàn)姜黃素微球降低血糖作用有劑量依賴(lài)性，藥物作用與藥物濃度成正比，即藥物濃度高時(shí)作用更強(qiáng)。在高劑量下對(duì)血脂和microRNA也有顯著地降低作用。6環(huán)糊精包合物環(huán)糊精包合物是通過(guò)將藥物全部或部分包圍在中心環(huán)糊精空腔中而形成。環(huán)糊精是具有親水外表面和親脂中心空腔的環(huán)狀寡糖，在水溶液中有較好的溶解度和包合能力，其親脂性空腔能夠包合親脂性藥物，使其隨著環(huán)糊精的溶解而分散于溶液中，同時(shí)環(huán)糊精分子的極性外表面可以提供增溶效果，從而提高藥物溶解度。環(huán)糊精分子穩(wěn)定性較好，用以包合藥物分子可達(dá)到保護(hù)和緩釋作用，達(dá)到提高藥物生物利用度的目的。環(huán)糊精包合物常用制備方法有溶劑法、研磨法、冷凍干燥法。其優(yōu)缺點(diǎn)如圖五：圖五包合物制備方法比較Figure5ComparisonofPreparationMethodsofInclusionCompound高振坤等[23]制備了姜黃素-羥丙基-β-環(huán)糊精包合物，制得的藥物包封率達(dá)到97%，在水中的溶解度為35μg/mL。觀察50小時(shí)后包合物中姜黃素還剩余95%，而游離姜黃素完全消失。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明姜黃素制成環(huán)糊精包合物顯著增高其水溶性和穩(wěn)定性，具有很好的臨床應(yīng)用前景。李藝等[24]測(cè)得姜黃素包合物在水中溶解度大約在1.76mg/mL，藥物的Cmax，Tmax和T1/2分別為95.05mg/L，10min和21.67min，相比于姜黃素原料藥明顯提高。由此可見(jiàn)，包合物制劑能夠明顯增加姜黃素的口服生物利用度。李寧[25]通過(guò)冷凍干燥法制備姜黃素羥丙基β環(huán)糊精包合物。通過(guò)大鼠灌胃給藥得出藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)發(fā)現(xiàn)，與姜黃素原料藥相比，姜黃素包合物的Tmax略有減少，說(shuō)明包合物可以顯著促進(jìn)藥物的吸收。另外發(fā)現(xiàn)包合物的曲線(xiàn)下面積AUC0-t是游離姜黃素的約3倍，證明了包合物能夠顯著提高姜黃素的口服生物利用度。7結(jié)論：姜黃素作為一種天然藥物，在治療乳腺癌，腸道癌和炎癥性疾病等方面都有很好的療效。學(xué)者們通過(guò)對(duì)姜黃素劑型的研究，發(fā)現(xiàn)了各種提高姜黃素的溶解度和生物利用度、增加其藥物作用的方法。但還存在一些缺陷，如藥物包封率低，生物代謝快，給藥途徑少等，因此對(duì)于姜黃素制劑還需要進(jìn)一步的研究。

正文姜黃素姜黃素固體分散體藥物動(dòng)力學(xué)研究通過(guò)中國(guó)知網(wǎng)，萬(wàn)方，維普，pubmed等各大數(shù)據(jù)庫(kù)檢索姜黃素藥物動(dòng)力學(xué)研究的相關(guān)文獻(xiàn)，參考文獻(xiàn)后發(fā)現(xiàn)以下內(nèi)容：1.高效液相色譜法（HPLC）是首選的藥物動(dòng)力學(xué)研究的常規(guī)方法，通常情況下姜黃素的檢測(cè)波長(zhǎng)基本在428nm左右。2.姜黃素制劑的藥物動(dòng)力學(xué)研究對(duì)象多為大鼠，可采用灌胃給藥的方法，給藥前需禁食12h。3.血樣經(jīng)處理后保存在-20℃下，防止藥物發(fā)生變化。4.血樣中藥物提取可選用乙酸乙酯。其對(duì)不同極性的物質(zhì)都有較好的萃取效果，易于揮干，安全無(wú)毒，是首選的提取溶劑。5.藥物動(dòng)力學(xué)研究實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組給藥劑量，操作方法等都相同。6.藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的計(jì)算可以通過(guò)3P87，3P97，DAS等軟件完成。7.正式實(shí)驗(yàn)前需要進(jìn)行精密度和回收率實(shí)驗(yàn)，以確保實(shí)驗(yàn)方法的可行性。研究設(shè)計(jì)一、研究目的及意義：姜黃素是中藥姜黃的主要有效成分,現(xiàn)代藥理研究表明其具有抗癌、抗凝、抑制HIV酶、抗炎、抗氧化、降血脂等作用，這些作用主要是通過(guò)局部注射或體外試驗(yàn)所觀察到的藥效。而在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,由于姜黃素的溶解度極低,生物利用度低,其血藥濃度在檢測(cè)限之下(10μg/L),以致體內(nèi)試驗(yàn)效果不佳。而固體分散體技術(shù)主要起到增加難溶性藥物的溶解度和溶出速率，提高生物利用度的作用。為此筆者以聚乙烯吡咯烷酮（PVP）為載體將姜黃素制成姜黃素PVP固體分散體，小鼠灌胃給藥后測(cè)定不同時(shí)間下姜黃素的血藥濃度,獲得藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù),通過(guò)比較姜黃素固體分散體和純姜黃素藥物動(dòng)力學(xué)特征及生物利用度,為姜黃素的臨床研究和新藥設(shè)計(jì)提供理論基礎(chǔ)和方法。二、儀器與試劑1.1儀器高效液相色譜儀包括HITACHIL-7420紫外檢測(cè)器日本日立公司HITACHIL-7110泵日本日立公司FA-1104電子天平上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司LD5-2A低速離心機(jī)北京醫(yī)用離心機(jī)廠RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上海亞榮生化儀器廠KQ-3000DA型超聲波清洗器昆山市超聲儀器有限公司NAI-DCY-96G氮?dú)獯蹈蓛x上海那艾精密儀器有限公司MixMax

渦旋儀上海那艾精密儀器有限公司1.2試劑姜黃素浙江康裕藥業(yè)有限公司PVPK30天津市博迪化工有限公司無(wú)水甲醇(分析純)天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司乙酸乙酯酯天津市博迪化工有限公司冰醋酸天津博迪化工股份有限公司肝素納注射液天津市博迪化工有限公司1.3動(dòng)物：健康雄性SD大鼠20只。3姜黃素固體分散體的制備：通過(guò)對(duì)比溶劑法，熔融法，研磨法制到的固體分散體的各項(xiàng)數(shù)據(jù)，總結(jié)出最優(yōu)方法如下：將純姜黃素和輔料(PVP)以1:4的比例在無(wú)水乙醇溶解超聲后，置磁力攪拌器上攪拌3h，轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸干溶劑，將析出物置于真空干燥箱內(nèi)24h，粉碎，過(guò)26目篩備用。4給藥方法：取SD雄性大鼠20只，實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)，自由飲水，隨機(jī)分為兩組，每組10只，A組灌胃200mg/kg姜黃素，B組灌胃給予姜黃素固體分散體(姜黃素固體分散體劑量相當(dāng)于純姜黃素200mg/kg）。給藥后，分別于0，0.5，1，1.5，2，3，4，5，6，8，12，24h從大鼠眼眶取血0.5mL。5血漿樣品預(yù)處理：血漿置于涂有肝素的離心管中在3000r/min離心機(jī)中離心5min后，用取樣槍取0.2mL上清，置于-20攝氏度下凍存。6測(cè)定方法6.1樣品處理：取血漿0.2ml加入1.0ml乙酸乙酯,旋渦振蕩萃取2min,10000r/min離心5min,吸取有機(jī)相0.9ml,再加入1.0ml乙酸乙酯相同方法萃取一次,合并有機(jī)相,在氮吹儀中揮干有機(jī)物,殘留物以100μl甲醇溶解,取上清液20μL留作HPLC測(cè)定。6.2色譜條件：色譜柱：DiamonsilC18（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙酸乙酯：0.5%冰醋酸=60:40；檢測(cè)波長(zhǎng)：428nm；流速：1.0Ml/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量:20μL。6.3空白血樣的處理：在大鼠給藥前取血作為空白血漿，加入1.0ml乙酸乙酯,旋渦振蕩萃取2min,10000r/min離心5min,吸取有機(jī)相0.9ml,再加入1.0ml乙酸乙酯萃取一次,合并有機(jī)相,在氮吹儀中揮干,殘留物以100μl甲醇溶解,上清液置于-20攝氏度下凍存。7方法學(xué)7.1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備：準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥后的姜黃素對(duì)照品約5mg，置于25mL量瓶中甲醇定容，取1mL上述溶液于5mL量瓶中定容即為姜黃素儲(chǔ)備液。取姜黃素儲(chǔ)備液分別加入到2mL大鼠空白血漿中，得到質(zhì)量濃度分別為0.2，0.5，1，2，4，6，8，10，20mg/L的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品系列。按照“4”血漿預(yù)處理步驟和HPLC測(cè)定方法進(jìn)行操作，以峰面積對(duì)血漿中姜黃素濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。7.2專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)：取大鼠血漿，分別配制空白血漿、空白血漿加姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品及給藥后血漿，按“4”對(duì)血漿樣品進(jìn)行預(yù)處理操作后，在“5.1,5.2”操作后，測(cè)得各樣品的HPLC色譜圖。7.3精密度實(shí)驗(yàn)：取空白血漿加入姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品配制10、4、0.5mg/L高、中、低3個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品各5份,按“5.1”操作處理后在“5.2”色譜條件下進(jìn)樣分析,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)求出樣品濃度并計(jì)算日內(nèi)RSD值，連續(xù)測(cè)試5天計(jì)算日間RSD值。7.4回收率實(shí)驗(yàn)：取空白血漿加入姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品配制10、4、0.5mg/L高、中、低3個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品各5份,按“5.1”操作處理后在“5.2”色譜條件下進(jìn)樣分析,由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程求出樣品濃度,將其與已知添加濃度比較,計(jì)算姜黃素的回收率。7.5數(shù)據(jù)處理：使用3P97軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。8大鼠藥代動(dòng)力學(xué)研究：將禁食12h的20只大鼠隨機(jī)分成兩組，第一組十只大鼠灌胃純姜黃素組，另一組大鼠灌胃姜黃素固體分散體，給藥量均為200mg/kg。在灌胃后的在0，0.5，1，1.5，2，3，4，5，6，8，12，24h分別取20只大鼠的血漿0.5ml，用高效液相法分別測(cè)出大鼠不同時(shí)間血漿中姜黃素的藥物濃度，采用軟件3P97計(jì)算出藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。預(yù)期結(jié)果：通過(guò)實(shí)驗(yàn)后可以計(jì)算姜黃素固體分散體和純姜黃素的藥峰濃度cmax、達(dá)峰時(shí)間tmax、半衰期t1/2、藥時(shí)曲線(xiàn)下面積AUC，生物利用度F。比較二者在大鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力參數(shù)可以得出姜黃素固體分散體與純姜黃素相比tmax、t1/2明顯增加，生物利用度有所提高，為姜黃素固體分散體的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。參考文獻(xiàn)[1]張婧菲.姜黃素對(duì)動(dòng)物線(xiàn)粒體氧化損傷的保護(hù)作用及其抗氧化機(jī)制研究[D].2015.[2]ZhangX,GuanZ.Curcuminalleviatesoxaliplatin-inducedperipheralneuropathicpainthroughinhibitingoxidativestress-mediatedactivationofNF-κBandmitigatinginflammation[J].[3]方敏.姜黃素納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備及其靶向性研究[D].華中科技大學(xué),2013.[4]KarolewiczB,AgataGórniak,ProbstS,etal.Soliddispersionsinpharmaceuticaltechnology.PartI.Classificationandmethodstoobtainsoliddispersions[J].Polimerywmedycynie,2012,42(1):17-27.[5]WanS,SunY,QiX,etal.ImprovedBioavailabilityofPoorlyWater-SolubleDrugCurcumininCelluloseAcetateSolidDispersion[J].AapsPharmscitech,2012,13(1):159-166.[6]Im-SookS,Jin-SunC,Min-KooC.Characterization,inVivoandinVitroEvaluationofSolidDispersionofCurcuminContainingd-α-TocopherylPolyethyleneGlycol1000SuccinateandMannitol[J].Molecules,2016,21(10):1386.[7]QihongZhang,LubovSuntsova.Preparation,physicochemicalandpharmacologicalstudyofcurcuminsoliddispersionwithanarabinogalactancomplexationagent[J].S0141-8130(18)37109-5[8]El-HammadiMM,JoséL.Arias.Anupdateonliposomesindrugdelivery:apatentreview(2014-2018)[J].[9]SinghM,DeviS,RanaVS,etal.DeliveryofPhytochemicalsbyLiposomecargos:Recentprogress,challengesandopportunities[J].JournalofMicroencapsulation,2019,36(3):1-55.[10]尤佳,戴東波,何雯潔等.姜黃素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備及藥動(dòng)學(xué)研究[J].中國(guó)中藥雜志,2014,39(7):1238.[11]顧吉晉,鄧英杰,GUJi-jin等.口服姜黃素脂質(zhì)體制備及其大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)考察[J].成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,05(2):97-100.[12]hongJiang,Zhi-Pengli，liver-targetedliposomesforcodeliveryofcurcuminandcombretastatina4phosphate:preparation,characterization,andantitumoreffects.[13]ShaikhJ,AnkolaDD,BeniwalV,etal.Nanoparticleencapsulationimprovesoralbioavailabilityofcurcuminbyatleast9-foldwhencomparedtocurcuminadministeredwithpiperineasabsorptionenhancer[J].EuropeanJournalofPharmaceuticalSciences,2009,37(3-4):223-230.[14]鄭毅,鄭施施.姜黃素-PLGA納米粒提高口服給藥生物利用度的研究[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2014,31(6):717-721.[15]MulikR,MahadikK,ParadkarA.Developmentofcurcuminoidsloadedpoly(butyl)cyanoacrylatenanoparticles:Physicochemicalcharacterizationandstabilitystudy[J].EuropeanJournalofPharmaceuticalSciences,2009,37(3-4):395-404.[16]Mandal,Abhirup,Bisht,Rohit,Rupenthal,IlvaD,等.Polymericmicellesforoculardrugdelivery:Fromstructuralframeworkstorecentpreclinicalstudies[J].JournalofControlledRelease,248(Complete):96-116.[17]李晨晨龔飛榮程樹(shù)軍韓肖雄張玲玲.姜黃素緩釋膠束的制備、表征及其抗細(xì)胞毒類(lèi)藥物的多藥耐藥性評(píng)價(jià)[J].華東理工大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版,2014(4