Q/LB.□XXXXX-XXXX前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究所提出。本文件由安徽省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。本文件起草單位：安徽省植物保護(hù)總站、壽縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心、臨泉縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣推廣中心、安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所。本文件主要起草人：趙偉、何振輝、遲元?jiǎng)P、鮑穎、周楠、張梅、戚仁德、鄭兆陽、何賢芳、何艷秋、徐阿妹、曹舜。小麥莖基腐病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了小麥品種（系）抗莖基腐病的接種體制備、田間調(diào)查方法、分級標(biāo)準(zhǔn)、抗性評價(jià)和技術(shù)歸檔。本文件適用于小麥種質(zhì)資源(品種/品系）對莖基腐病抗性篩選。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4404.1糧食作物種子第1部分:禾谷類GB/T8321（所有部分）農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則GB10395（所有部分）農(nóng)林機(jī)械NY/T496肥料合理使用準(zhǔn)則通則NY/T1276農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。 小麥莖基腐病主要有鐮刀菌侵染所引起，其中假禾谷鐮孢菌（Fusariumpseudograminearum）為優(yōu)勢病原菌。苗期主要引起小麥根部、莖基部產(chǎn)生褐色病斑、葉鞘變褐干枯，分蘗減少，植株矮小；拔節(jié)期主要危害第1～2節(jié)，莖稈變褐；成株期病害可擴(kuò)展至第6節(jié)，節(jié)間變褐干枯，莖稈變脆，易折斷，空氣濕度大時(shí)產(chǎn)生白色或粉紅色霉層，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)造成“白穗”。接種體通過人工制備培養(yǎng)能夠侵染寄主并引起相應(yīng)病害的病原體。鑒定圃按不同試驗(yàn)?zāi)康暮鸵笤O(shè)計(jì)的，供試小麥材料排布的試驗(yàn)小區(qū)?？共⌒灾参锞哂械哪軌虮苊?、中止或阻滯病原物侵入與擴(kuò)展、減輕發(fā)病和損失程度的可遺傳性狀。嚴(yán)重度表示植株或器官的罹病面積所占的植物單元的比率．亦可用病害等級來表示，即將發(fā)病的嚴(yán)重程度由輕到重劃分出幾個(gè)級別，分別用一些數(shù)值來表示，表明病害發(fā)生的嚴(yán)重程度。病情指數(shù)（DI）通過對植株個(gè)體發(fā)病程度（病情級別）數(shù)值的綜合計(jì)算所獲得的群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述，病情指數(shù)計(jì)算公式如下：病情指數(shù)=∑(各級病株數(shù)×相應(yīng)的病害級別值)/(調(diào)查總株數(shù)×最高級級別值)×100%接種體的制備病原菌的獲取采用組織分離法得到病原菌，經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，確定為假禾谷鐮孢菌，經(jīng)致病力測定，選擇致病力強(qiáng)的菌株作為接種體。分生孢子懸浮液的制備接種菌株活化后，在PDA平板25℃黑暗培養(yǎng)5d，切取菌絲塊轉(zhuǎn)接入羧甲基纖維素培養(yǎng)液（CNC），25℃，180rpm震蕩培養(yǎng)5d。使用紗布進(jìn)行過濾，去除菌絲，濾液通過200目網(wǎng)篩進(jìn)一步出去剩余菌絲，調(diào)節(jié)濃度至每毫升1×105個(gè)孢子的孢子懸浮液。谷粒接種體的制備假禾谷鐮孢菌（F.pseudogramineaum）接種體的制備：高粱粒200g，置于500mL三角燒瓶中，加入100mL去離子水浸泡過夜，去除多余水分，121℃高壓滅菌40min，連續(xù)滅菌2次。將活化的假禾谷鐮孢菌接種于高粱粒培養(yǎng)基，每瓶接種10個(gè)菌絲塊，置于25℃培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)10～14d，每天搖晃三角瓶，確保菌絲能均勻生長。鐮孢菌菌絲完全覆蓋高粱后，取出，置于28℃干燥箱進(jìn)行風(fēng)干，使用組織粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，過60目篩去除較大顆粒，裝入密封袋，于15℃通風(fēng)廚中黑暗保存。鑒定方法小麥品種試驗(yàn)各小麥品種（系）種子質(zhì)量應(yīng)符合GB4404.1的要求。苗期鑒定苗期鑒定采用灌根法或菌土法。灌根法：在9cm營養(yǎng)缽中裝入滅菌土（大田土：細(xì)河沙=1.5：1），播種表面消毒小麥種子，每缽10粒，覆蓋1cm滅菌土，置于溫度25℃、濕度75%、12h光周期的溫室中。待小麥出苗10d后，在幼苗周圍用注射器接種分生孢子懸浮液，每缽接種10mL。菌土法：高粱菌粉接種物與滅菌土按照1%比例混勻制成菌土，小麥播種后，覆蓋2cm菌土，放置于溫度20℃，濕度75%的培養(yǎng)箱中孵育48h，轉(zhuǎn)移至25℃、濕度75%、12h光周期的溫室中繼續(xù)培養(yǎng)。田間鑒定鑒定圃應(yīng)設(shè)在人工營造的的病圃或病害常發(fā)田塊，應(yīng)遵循利于發(fā)病、地勢平整，肥力均勻、方便管理的特點(diǎn)。鑒定圃不施用任何殺菌劑，試驗(yàn)期間可防蟲、除草，農(nóng)藥使用應(yīng)符合GB/T8321和NY/T1276的要求。適當(dāng)進(jìn)行肥水管理，所使用農(nóng)業(yè)機(jī)械和肥料應(yīng)符合GB10395和NY/T496的要求。鑒定圃周圍設(shè)置1m隔離帶，小區(qū)之間設(shè)置0.5m隔離帶，小區(qū)大小為長×寬=2m×1m，行距為0.2m，小麥采用條播，播種后覆蓋2cm土壤，在表面均勻撒上菌粉接種體（菌粉接種量：種子質(zhì)量比為1：1），再次覆蓋1cm土壤。每個(gè)小區(qū)一個(gè)品種，每個(gè)品種3個(gè)重復(fù)。小區(qū)采用隨機(jī)區(qū)組排布，每15個(gè)品種設(shè)置1組對照品種。病害調(diào)查苗期調(diào)查接菌3周后，將小麥幼苗連根拔起，清洗根部，根據(jù)下列標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級，計(jì)算病情指數(shù)：0級：小麥植株無病變；1級：胚芽鞘或第一葉鞘出現(xiàn)輕微發(fā)病，淡黃山至褐色2級：小麥第一葉鞘出現(xiàn)明顯褐變，地下根冠出現(xiàn)病變；3級：第二葉鞘顯著褐變，葉鞘下根冠節(jié)間完全壞死，植株矮化不超過1/2；4級：第三葉鞘變褐，其下節(jié)間部分或完全壞死，植株顯著矮化，生長緩慢；5級：整株枯死。成株期調(diào)查在小麥成熟期（乳熟或蠟熟期）每個(gè)小區(qū)采用五點(diǎn)采樣法，隨機(jī)采集小麥植株，每點(diǎn)采樣20莖，剝?nèi)ジ煽萑~鞘，統(tǒng)計(jì)發(fā)病率和嚴(yán)重度，計(jì)算病情指數(shù)和相對病情指數(shù)。分級標(biāo)準(zhǔn)如下：0級：植株無發(fā)??；1級：莖基部第一節(jié)莖稈變褐；2級：莖基部第一節(jié)完全變褐，并擴(kuò)展至第二節(jié)；3級：莖基部第二節(jié)莖稈完全變褐，并擴(kuò)展至第三節(jié)；4級：莖基部第三節(jié)莖稈完全變褐，并擴(kuò)展至第四節(jié)；5級：未抽穗或枯白穗、壞死?？剐栽u價(jià)標(biāo)準(zhǔn)小麥苗期莖基腐病抗性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)病情指數(shù)（DI）大小進(jìn)行抗性級別的劃分，免疫（I）：病情指數(shù)（DI）為0：高抗（HR）：0<DI≤25；中抗（MR）：25<DI≤35；中感（MS）：35<DI≤45；高感（HS）：DI>45；小麥成株期莖基腐病抗性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)病情指數(shù)（DI）大小進(jìn)行抗性級別的劃分，共分五級：免疫（I）：平均病情指數(shù)為0：抗病（R）：平均病情指數(shù)為0<DI≤10；中抗（MR）：平均病情指數(shù)為10<DI≤20；感病（S）：平均病情指數(shù)為20<DI≤30；高感（HS）：平均病情指數(shù)為DI>30。鑒定有效性判斷同一批次，對照感病品種苗期病情指數(shù)>35，成株期>20，該批次鑒定有效?？剐再|(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)同一品種要有兩年以上鑒定結(jié)果，如果連續(xù)2年鑒定結(jié)果一致或相差1個(gè)抗性級別，則無需進(jìn)行第三次鑒定，以最低抗性級別為準(zhǔn)；如果連續(xù)2年鑒定結(jié)果相差2個(gè)抗性級別或以上，則需進(jìn)行第三次鑒定，以相同或相差1個(gè)級別中較低抗性級別為準(zhǔn)。技術(shù)歸檔建立小麥莖基腐病人工接種鑒定技術(shù)檔案，內(nèi)容包括環(huán)境條件、技術(shù)流程、評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及試驗(yàn)數(shù)據(jù)等。數(shù)據(jù)記錄參照附錄A。