2025年病理免疫組化技師崗位認(rèn)證試卷與答案一、單項選擇題（每題2分，共40分）1.免疫組化技術(shù)中，最常用的熒光素是（）A.異硫氰酸熒光素（FITC）B.四乙基羅丹明（RB200）C.四甲基異硫氰酸羅丹明（TRITC）D.藻紅蛋白（PE）答案：A解析：異硫氰酸熒光素（FITC）是免疫組化技術(shù)中最常用的熒光素，它具有熒光效率高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，能發(fā)出明亮的黃綠色熒光，便于觀察和檢測。2.以下哪種固定劑對免疫組化抗原保存效果較好（）A.乙醇B.甲醛C.丙酮D.苦味酸答案：B解析：甲醛是最常用的固定劑之一，它能較好地保存組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)和抗原性。甲醛通過與蛋白質(zhì)的氨基結(jié)合，形成交聯(lián)，從而固定組織，并且在適當(dāng)?shù)奶幚硐?，能較好地保留抗原的免疫活性。3.免疫組化染色中，非特異性染色的主要原因不包括（）A.抗體濃度過高B.組織中內(nèi)源性過氧化物酶的存在C.抗原抗體反應(yīng)的特異性D.血清封閉不充分答案：C解析：抗原抗體反應(yīng)的特異性是免疫組化染色的基礎(chǔ)，它能保證染色的準(zhǔn)確性和特異性，而不是導(dǎo)致非特異性染色的原因?？贵w濃度過高、組織中內(nèi)源性過氧化物酶的存在以及血清封閉不充分等都可能導(dǎo)致非特異性染色。4.以下哪種抗體屬于多克隆抗體（）A.鼠抗人CD3單克隆抗體B.兔抗人IgG多克隆抗體C.羊抗鼠IgM單克隆抗體D.人抗乙肝表面抗原單克隆抗體答案：B解析：多克隆抗體是由多個B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，針對多種抗原決定簇的抗體混合物。兔抗人IgG多克隆抗體是用抗原免疫兔子后，從兔子血清中提取的抗體，屬于多克隆抗體。而單克隆抗體是由單一B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，只針對一種抗原決定簇。5.免疫組化染色中，酶消化的目的是（）A.去除組織中的雜質(zhì)B.暴露抗原決定簇C.增加抗體的親和力D.減少非特異性染色答案：B解析：在組織固定過程中，抗原決定簇可能被遮蔽。酶消化可以破壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，使被遮蔽的抗原決定簇暴露出來，從而提高抗體與抗原的結(jié)合能力，增強染色效果。6.以下哪種顯色劑常用于免疫組化過氧化物酶法（）A.二氨基聯(lián)苯胺（DAB）B.堿性磷酸酶底物（BCIP/NBT）C.吖啶酯D.魯米諾答案：A解析：二氨基聯(lián)苯胺（DAB）是免疫組化過氧化物酶法中最常用的顯色劑，它在過氧化物酶的作用下，與過氧化氫反應(yīng)，提供棕色沉淀，便于在光學(xué)顯微鏡下觀察。堿性磷酸酶底物（BCIP/NBT）常用于堿性磷酸酶標(biāo)記的免疫組化方法；吖啶酯和魯米諾常用于化學(xué)發(fā)光免疫分析。7.免疫組化切片的厚度一般為（）A.1-2μmB.3-5μmC.6-8μmD.9-10μm答案：B解析：免疫組化切片的厚度一般為3-5μm。過薄的切片可能會導(dǎo)致組織成分丟失，影響抗原的檢測；過厚的切片則會影響抗體的滲透和染色效果，同時也不利于顯微鏡觀察。8.在免疫組化實驗中，陽性對照的作用是（）A.檢測抗體的特異性B.檢測實驗操作的有效性C.排除非特異性染色D.確定抗原的表達部位答案：B解析：陽性對照是已知含有目標(biāo)抗原的組織切片，在相同的實驗條件下進行染色。如果陽性對照切片染色結(jié)果正常，說明實驗操作過程（如固定、脫水、透明、浸蠟、切片、染色等步驟）是有效的，試劑和抗體也能正常發(fā)揮作用。9.免疫組化技術(shù)中，雙標(biāo)記法是指（）A.同時使用兩種不同的抗體標(biāo)記同一種抗原B.同時使用兩種不同的抗原標(biāo)記同一種抗體C.同時檢測兩種不同的抗原D.同時使用兩種不同的顯色劑答案：C解析：雙標(biāo)記法是在同一張切片上同時檢測兩種不同的抗原。通常使用兩種不同的標(biāo)記物（如不同的熒光素或酶）分別標(biāo)記兩種抗體，通過不同的顯色或熒光信號來區(qū)分兩種抗原的表達情況。10.以下哪種組織處理方法不利于免疫組化抗原的保存（）A.新鮮組織立即固定B.組織長時間暴露在空氣中C.固定后及時脫水D.脫水后及時透明和浸蠟答案：B解析：組織長時間暴露在空氣中會導(dǎo)致組織干燥、自溶和腐敗，抗原會被破壞和降解，不利于免疫組化抗原的保存。而新鮮組織立即固定、固定后及時脫水、脫水后及時透明和浸蠟等步驟都是為了盡可能地保存組織的抗原性。11.免疫組化染色中，抗體的稀釋度是根據(jù)（）來確定的A.抗體的濃度B.組織的類型C.抗原的表達水平D.以上都是答案：D解析：抗體的稀釋度需要綜合考慮抗體的濃度、組織的類型以及抗原的表達水平等因素。抗體濃度過高可能會導(dǎo)致非特異性染色，過低則可能檢測不到抗原；不同組織的結(jié)構(gòu)和成分不同，對抗體的結(jié)合能力也有差異；抗原表達水平高的組織可以適當(dāng)稀釋抗體，而抗原表達水平低的組織可能需要使用較高濃度的抗體。12.以下哪種免疫組化方法靈敏度最高（）A.直接法B.間接法C.親和組織化學(xué)法D.酶橋法答案：C解析：親和組織化學(xué)法利用了親和物質(zhì)之間的高度親和力，如抗原-抗體、生物素-親和素等。這種方法可以通過多級放大效應(yīng)，顯著提高檢測的靈敏度，比直接法、間接法和酶橋法等具有更高的靈敏度。13.免疫組化實驗中，內(nèi)源性生物素的存在可能會導(dǎo)致（）A.假陽性結(jié)果B.假陰性結(jié)果C.染色強度減弱D.染色不均勻答案：A解析：內(nèi)源性生物素存在于某些組織細(xì)胞中，當(dāng)使用生物素-親和素系統(tǒng)進行免疫組化染色時，內(nèi)源性生物素會與親和素結(jié)合，導(dǎo)致非特異性染色，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。14.免疫組化切片脫蠟時，常用的脫蠟劑是（）A.乙醇B.二甲苯C.丙酮D.氯仿答案：B解析：二甲苯是免疫組化切片脫蠟時常用的脫蠟劑，它能有效溶解石蠟，使組織切片中的石蠟去除干凈，便于后續(xù)的水化和染色步驟。乙醇主要用于脫水和水化；丙酮常用于固定和脫水；氯仿也可用于脫蠟，但由于其毒性較大，使用相對較少。15.免疫組化染色結(jié)果的判斷主要依據(jù)（）A.染色的強度B.染色的定位C.陽性細(xì)胞的數(shù)量D.以上都是答案：D解析：免疫組化染色結(jié)果的判斷需要綜合考慮染色的強度、染色的定位以及陽性細(xì)胞的數(shù)量等因素。染色強度反映了抗原的表達水平；染色的定位可以確定抗原在細(xì)胞或組織中的分布位置；陽性細(xì)胞的數(shù)量則可以反映抗原表達的范圍和程度。16.以下哪種情況會導(dǎo)致免疫組化染色出現(xiàn)背景染色過深（）A.抗體稀釋過度B.血清封閉時間過長C.顯色時間過短D.洗滌不充分答案：D解析：洗滌不充分會導(dǎo)致切片上殘留過多的抗體、血清等物質(zhì)，從而引起背景染色過深?？贵w稀釋過度可能會導(dǎo)致染色強度減弱；血清封閉時間過長一般不會導(dǎo)致背景染色過深；顯色時間過短則會使染色結(jié)果不明顯。17.免疫組化技術(shù)中，抗原修復(fù)的方法不包括（）A.酶消化法B.微波加熱法C.高壓加熱法D.冷凍切片法答案：D解析：抗原修復(fù)的目的是暴露被遮蔽的抗原決定簇，常用的方法包括酶消化法、微波加熱法、高壓加熱法等。冷凍切片法是一種組織切片的制備方法，不是抗原修復(fù)的方法。18.以下哪種抗體標(biāo)記物常用于熒光免疫組化（）A.辣根過氧化物酶（HRP）B.堿性磷酸酶（AP）C.異硫氰酸熒光素（FITC）D.膠體金答案：C解析：異硫氰酸熒光素（FITC）是常用的熒光標(biāo)記物，用于熒光免疫組化。辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（AP）常用于酶免疫組化；膠體金常用于免疫金染色。19.免疫組化實驗中，陰性對照的作用是（）A.檢測抗體的特異性B.檢測實驗操作的有效性C.排除非特異性染色D.確定抗原的表達部位答案：C解析：陰性對照是用已知不含有目標(biāo)抗原的組織切片或用無關(guān)抗體代替一抗進行染色。如果陰性對照切片沒有出現(xiàn)染色，說明染色結(jié)果不是由于非特異性結(jié)合或其他因素導(dǎo)致的假陽性，從而排除非特異性染色的干擾。20.免疫組化染色中，蘇木精復(fù)染的目的是（）A.增強特異性染色B.顯示細(xì)胞核C.減少非特異性染色D.提高染色的對比度答案：B解析：蘇木精是一種常用的細(xì)胞核染色劑，在免疫組化染色中，蘇木精復(fù)染可以使細(xì)胞核呈現(xiàn)藍色，便于觀察細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，同時也可以與免疫組化的特異性染色結(jié)果形成對比，更好地判斷陽性染色的位置和范圍。二、多項選擇題（每題3分，共30分）1.免疫組化技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.腫瘤的診斷和鑒別診斷B.病原體的檢測C.自身免疫性疾病的診斷D.細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的定位和定量分析答案：ABCD解析：免疫組化技術(shù)在腫瘤的診斷和鑒別診斷中可以檢測腫瘤標(biāo)志物，幫助判斷腫瘤的來源、分級和分期；可以檢測病原體的抗原，用于感染性疾病的診斷；在自身免疫性疾病中，檢測自身抗體和相關(guān)抗原有助于疾病的診斷和病情評估；還可以對細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)進行定位和定量分析。2.免疫組化實驗中，常用的固定劑有（）A.甲醛B.乙醇C.丙酮D.戊二醛答案：ABCD解析：甲醛、乙醇、丙酮和戊二醛都是常用的固定劑。甲醛能較好地保存組織形態(tài)和抗原性；乙醇對某些抗原的保存效果較好，常用于快速固定；丙酮固定速度快，能較好地保存酶的活性；戊二醛固定效果強，常用于電鏡標(biāo)本的固定，在免疫組化中也可使用。3.免疫組化染色中，減少非特異性染色的方法有（）A.適當(dāng)稀釋抗體B.充分血清封閉C.延長洗滌時間和次數(shù)D.去除內(nèi)源性過氧化物酶答案：ABCD解析：適當(dāng)稀釋抗體可以減少非特異性結(jié)合；充分血清封閉可以封閉組織切片上的非特異性結(jié)合位點；延長洗滌時間和次數(shù)可以去除切片上殘留的未結(jié)合抗體和其他雜質(zhì)；去除內(nèi)源性過氧化物酶可以避免其與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。4.免疫組化技術(shù)中，常用的抗體標(biāo)記物有（）A.酶B.熒光素C.放射性核素D.膠體金答案：ABCD解析：酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、熒光素（如異硫氰酸熒光素、四甲基異硫氰酸羅丹明等）、放射性核素（如碘-125等）和膠體金都可以作為抗體標(biāo)記物。不同的標(biāo)記物適用于不同的檢測方法和應(yīng)用場景。5.免疫組化切片制備過程中，脫水的目的是（）A.使組織變硬，便于切片B.去除組織中的水分C.為透明和浸蠟做準(zhǔn)備D.保存組織的抗原性答案：ABC解析：脫水是組織切片制備中的重要步驟，其目的是去除組織中的水分，使組織變硬，便于切片；同時，脫水后的組織可以更好地被透明劑穿透，為后續(xù)的透明和浸蠟做準(zhǔn)備。但脫水過程本身并不能直接保存組織的抗原性，而是需要在固定等步驟中加以注意。6.免疫組化雙標(biāo)記法可以使用的標(biāo)記物組合有（）A.熒光素-熒光素B.酶-酶C.熒光素-酶D.膠體金-酶答案：ABCD解析：免疫組化雙標(biāo)記法可以使用不同的標(biāo)記物組合，如兩種不同的熒光素（可以發(fā)出不同顏色的熒光）、兩種不同的酶（可以使用不同的顯色劑顯色）、熒光素和酶（可以同時進行熒光觀察和酶顯色觀察）、膠體金和酶等，以實現(xiàn)同時檢測兩種不同抗原的目的。7.免疫組化實驗中，影響抗原修復(fù)效果的因素有（）A.修復(fù)方法B.修復(fù)液的選擇C.修復(fù)時間和溫度D.組織的類型答案：ABCD解析：不同的抗原修復(fù)方法（如酶消化法、微波加熱法、高壓加熱法等）、不同的修復(fù)液（如檸檬酸緩沖液、EDTA緩沖液等）、修復(fù)時間和溫度以及組織的類型都會影響抗原修復(fù)的效果。不同的組織和抗原可能需要選擇合適的修復(fù)方法、修復(fù)液和修復(fù)條件。8.免疫組化染色結(jié)果的質(zhì)量控制包括（）A.陽性對照和陰性對照B.抗體的質(zhì)量和效價C.實驗操作的規(guī)范性D.染色結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)答案：ABCD解析：免疫組化染色結(jié)果的質(zhì)量控制需要多方面的考慮。陽性對照和陰性對照可以驗證實驗的有效性和排除非特異性染色；抗體的質(zhì)量和效價直接影響染色結(jié)果的準(zhǔn)確性；實驗操作的規(guī)范性（如固定、脫水、染色等步驟）是保證染色質(zhì)量的關(guān)鍵；明確的染色結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)可以使結(jié)果的評價更加客觀和準(zhǔn)確。9.免疫組化技術(shù)與傳統(tǒng)病理診斷相比，具有的優(yōu)點是（）A.特異性高B.靈敏度高C.可以定位抗原D.可以檢測微量抗原答案：ABCD解析：免疫組化技術(shù)利用抗原-抗體反應(yīng)的特異性，具有很高的特異性；通過多級放大等技術(shù)，靈敏度也較高；可以在組織切片上準(zhǔn)確地定位抗原的分布位置；能夠檢測到組織中微量的抗原，對于一些早期病變或低表達抗原的檢測具有重要意義。10.免疫組化實驗中，洗滌的作用有（）A.去除未結(jié)合的抗體B.減少非特異性染色C.保持切片的濕潤D.去除內(nèi)源性生物素答案：AB解析：洗滌的主要作用是去除切片上未結(jié)合的抗體和其他雜質(zhì)，減少非特異性染色。保持切片的濕潤并不是洗滌的主要目的；去除內(nèi)源性生物素需要使用專門的方法，如使用生物素阻斷劑，而不是通過洗滌來實現(xiàn)。三、簡答題（每題10分，共20分）1.簡述免疫組化技術(shù)的基本原理。免疫組化技術(shù)的基本原理是基于抗原與抗體特異性結(jié)合的特性。抗原是能刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，并能與相應(yīng)抗體或致敏淋巴細(xì)胞在體內(nèi)外發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)；抗體則是機體免疫系統(tǒng)受抗原刺激后，由B淋巴細(xì)胞分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。在免疫組化實驗中，首先將組織或細(xì)胞標(biāo)本進行適當(dāng)?shù)奶幚?，如固定、脫水、透明、浸蠟、切片等，以保持組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)和抗原性。然后，將特異性抗體（一抗）與標(biāo)本中的抗原進行孵育，使抗體與抗原發(fā)生特異性結(jié)合。為了檢測這種結(jié)合，通常會使用標(biāo)記物標(biāo)記的二抗，二抗能與一抗結(jié)合。標(biāo)記物可以是酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、熒光素（如異硫氰酸熒光素等）、放射性核素、膠體金等。如果使用酶標(biāo)記的二抗，在加入相應(yīng)的顯色劑后，酶會催化顯色劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生可見的顏色沉淀，通過光學(xué)顯微鏡可以觀察到抗原的分布位置和表達情況。如果使用熒光素標(biāo)記的二抗，則可以通過熒光顯微鏡觀察到熒光信號，從而確定抗原的存在和分布。2.請列舉免疫組化實驗中常見的問題及解決方法。（1）非特異性染色-原因：抗體濃度過高、血清封閉不充分、內(nèi)源性過氧化物酶或生物素的存在、洗滌不充分等。-解決方法：適當(dāng)稀釋抗體；延長血清封閉時間或增加血清濃度；使用過氧化氫等方法去除內(nèi)源性過氧化物酶，使用生物素阻斷劑去除內(nèi)源性生物素；延長洗滌時間和增加洗滌次數(shù)。（2）染色強度弱或無染色-原因：抗體效價低、抗原修復(fù)不充分、組織固定不當(dāng)、顯色時間過短等。-解決方法：更換高質(zhì)量的抗體；調(diào)整抗原修復(fù)方法、時間和溫度；確保組織及時固定和正確固定；適當(dāng)延長顯色時間。（3）背景染色過深-原因：洗滌不充分、抗體非特異性結(jié)合、封閉劑選擇不當(dāng)?shù)取?解決方法：加強洗滌；優(yōu)化