新型病毒及安全培訓試題及答案解析一、單選題（每題2分，共40分）1.2023年12月，世界衛(wèi)生組織首次將“X病毒”列為需要重點關注的變異株，其關鍵突變位點位于刺突蛋白的A.RBD318510區(qū)段?B.NTD14305區(qū)段?C.S2亞基融合肽區(qū)?D.Furin裂解位點答案：A解析：RBD（受體結合域）318510區(qū)段是中和抗體主要靶點，X病毒在此出現(xiàn)3處氨基酸替換（N354K、F456L、L455F），導致免疫逃逸能力提高2.7倍。2.某實驗室收到10份疑似高致病性病毒樣本，按《人間傳染的病原微生物實驗室生物安全管理條例》，最先應執(zhí)行的操作是A.在生物安全柜內開啟樣本?B.填寫接收登記表?C.進行病毒核酸提取?D.用75%乙醇表面消毒答案：D解析：條例第18條明確“外包裝消毒優(yōu)先”，防止運輸過程中潛在泄漏造成二次暴露。3.在病毒氣溶膠防護中，N95口罩的“95”含義是指A.對0.3μm氯化鈉顆粒過濾效率≥95%?B.對0.1μm病毒顆粒過濾效率≥95%?C.對油性顆粒過濾效率≥95%?D.對細菌過濾效率≥95%答案：A解析：NIOSH標準以0.3μm氯化鈉氣溶膠為測試介質，該粒徑最易穿透，病毒常依附于更大飛沫核，實際過濾效率高于95%。4.某醫(yī)院發(fā)現(xiàn)新型病毒院內感染，經全基因組測序發(fā)現(xiàn)其與社區(qū)流行株差異≥50nt，按《國家突發(fā)公共衛(wèi)生事件應急預案》應在幾小時內網絡直報A.1?B.2?C.3?D.5答案：B解析：預案規(guī)定“發(fā)現(xiàn)新型或顯著變異株”屬重大突發(fā)公共衛(wèi)生事件，2小時內完成直報。5.對含病毒廢液進行高壓滅菌時，下列參數組合最安全A.121℃15min?B.121℃30min?C.134℃3min?D.115℃45min答案：B解析：121℃30min可確保10^6CFU/ml的枯草芽孢桿菌指示菌全部被殺滅，對包膜病毒更具冗余度。6.病毒采樣管中添加的抗生素組合通常為A.青霉素+鏈霉素?B.萬古霉素+兩性霉素B?C.慶大霉素+制霉菌素?D.頭孢他啶+氟康唑答案：C解析：慶大霉素廣譜抗細菌，制霉菌素抑制真菌，且對病毒活性無影響，為WHO推薦配方。7.某研究需構建新型病毒反向遺傳系統(tǒng)，下列哪一步驟必須在BSL3實驗室完成A.質粒擴增?B.病毒拯救?C.序列分析?D.蛋白表達答案：B解析：病毒拯救產生活病毒，按《實驗室生物安全通用要求》必須在相應病原級別實驗室操作。8.在病毒滅活驗證中，常用細胞病變效應（CPE）觀察，下列細胞系對冠狀病毒最敏感A.VeroE6?B.MDCK?C.C6/36?D.BHK21答案：A解析：VeroE6細胞ACE2表達高，缺乏干擾素應答，冠狀病毒可快速產生典型CPE。9.某員工被污染針頭刺傷，已知病毒載量10^7copies/ml，按美國CDC指南首選的暴露后預防措施是A.立即擠出傷口血液+24小時內啟動PEP?B.碘伏消毒+觀察7天?C.服用奧司他韋10天?D.注射干擾素答案：A解析：對新型血源病毒，強調“第一時間擠壓+盡早PEP”，可降感染風險81%。10.病毒核酸檢測假陰性最常見技術原因是A.引物二聚體?B.采樣時機不當?C.熒光淬滅?D.內標失效答案：B解析：發(fā)病初期病毒載量低于檢測限，采樣過晚則病毒清除，均可致假陰性。11.下列哪種消毒劑對含血清蛋白環(huán)境的新型病毒滅活效果最差A.0.5%次氯酸鈉?B.2%戊二醛?C.75%乙醇?D.5%來蘇兒答案：C解析：血清蛋白可競爭性結合乙醇，使其有效濃度降至40%以下，滅活效率下降2個log。12.病毒冷凍電鏡解析中，為降低輻射損傷，通常采用的電子劑量為A.10e/?2?B.50e/?2?C.100e/?2?D.200e/?2答案：B解析：≤50e/?2可在保持高分辨與減少冰晶損傷間取得平衡，為國際共識。13.某航班出現(xiàn)新型病毒病例，疾控人員開展密切接觸者判定，標準為與病例相距A.1米同艙≥15min?B.2米同艙≥30min?C.1米同艙≥5min?D.同一車廂即可答案：A解析：ICAO與WHO聯(lián)合指南采用“1米+15min”作為航空器密接閾值。14.病毒抗原檢測試劑評估中，臨床靈敏度計算式為A.真陽性/(真陽性+假陰性)?B.真陽性/(真陽性+假陽性)?C.真陰性/(真陰性+假陽性)?D.真陽性+真陰性/總例數答案：A解析：靈敏度關注實際感染者中被正確檢出的比例，分母為“所有感染者”。15.對新型病毒進行動物感染實驗，需首先取得A.實驗室認可證書?B.動物實驗倫理批件?C.轉基因安全證書?D.輻射安全許可證答案：B解析：《實驗動物管理條例》第14條，涉及病原的動物實驗必須經倫理委員會審查。16.病毒培養(yǎng)出現(xiàn)“鬼影細胞”現(xiàn)象，最可能的原因是A.支原體污染?B.細菌過度繁殖?C.病毒誘導凋亡?D.培養(yǎng)液滲透壓異常答案：C解析：某些新型病毒可早期激活Caspase3，致細胞核固縮但胞膜完整，形成鬼影。17.在病毒進化分析中，dN/dS>1提示A.純化選擇?B.平衡選擇?C.正向選擇?D.中性進化答案：C解析：非同義突變顯著多于同義突變，表明抗原位點可能受免疫正向選擇。18.某醫(yī)院采用紫外線循環(huán)風消毒機，其紫外線波長應為A.185nm?B.254nm?C.280nm?D.320nm答案：B解析：254nm為低壓汞燈主譜線，可破壞病毒RNA，且臭氧產生量低。19.病毒樣本運輸采用三層包裝，第二層要求A.吸水材料?B.95kPa壓力測試通過?C.冷藏冰袋?D.生物危害標識答案：B解析：IATAPI650規(guī)定第二層容器必須能承受95kPa壓差無滲漏。20.對新型病毒進行血清中和試驗，下列細胞固定液最佳A.4%多聚甲醛?B.10%中性甲醛?C.丙酮?D.95%乙醇答案：A解析：4%多聚甲醛可保持病毒抗原構象，減少中和抗體結合位點遮蔽。二、多選題（每題3分，共30分）21.關于新型病毒變異監(jiān)測，下列哪些樣本類型可用于高通量測序A.鼻咽拭子?B.肛拭子?C.環(huán)境污水?D.血清游離RNA?E.唾液答案：ABCE解析：血清游離RNA含量極低，需超高速離心富集，常規(guī)監(jiān)測不采用。22.進入BSL3實驗室前，必須完成的安全檢查包括A.正壓服密封測試?B.生命體征監(jiān)測?C.應急藥品點驗?D.化學噴淋系統(tǒng)功能測試?E.自動門鎖報警測試答案：ACDE解析：生命體征監(jiān)測為出口步驟，用于確認人員安全撤離。23.病毒核酸檢測室內質控圖出現(xiàn)下列哪些情況視為失控A.連續(xù)5點落在均值同一側?B.1點超出3SD?C.連續(xù)2點超出2SD?D.連續(xù)14點交替上下?E.連續(xù)10點位于1SD內答案：BCD解析：A需7點、E為“優(yōu)秀精密度”表現(xiàn)，均不判失控。24.下列哪些操作可產生病毒氣溶膠A.打開離心機蓋?B.火焰封口?C.超聲波破碎?D.滴加液體過快?E.真空抽濾答案：ACDE解析：火焰封口產生熱上升氣流，但氣溶膠生成量極低。25.對新型病毒進行疫苗效力評價，常用動物模型包括A.轉基因hACE2小鼠?B.金黃地鼠?C.雪貂?D.非人靈長類?E.BALB/c小鼠答案：ABCD解析：野生型BALB/c小鼠缺乏人ACE2，需適應毒株或轉基因。26.病毒滅活驗證需設置的對照有A.病毒陽性對照?B.細胞毒性對照?C.中和劑毒性對照?D.中和劑效力對照?E.空白對照答案：ABCD解析：空白對照為常規(guī)細胞培養(yǎng)對照，非滅活驗證特有。27.下列哪些屬于個人防護裝備脫卸“污染區(qū)”A.外層手套?B.正壓服?C.防水圍裙?D.內層鞋套?E.護目鏡答案：ACE解析：正壓服與內層鞋套在“半污染區(qū)”脫卸。28.病毒基因功能研究中，常用反向遺傳技術有A.Gibson組裝?B.酵母人工染色體?C.CRISPR敲除?D.體外轉錄?E.同源重組答案：ABDE解析：CRISPR用于宿主基因編輯，非病毒反向遺傳。29.關于病毒持續(xù)性感染，下列描述正確的是A.可檢測到病毒基因?B.病毒復制水平低?C.無免疫逃逸?D.可間歇排毒?E.組織損傷輕微答案：ABDE解析：持續(xù)性感染仍需免疫逃逸避免清除，如病毒miRNA下調MHCI。30.某實驗室發(fā)生病毒溢灑，面積1m2，下列消毒處置正確的是A.用吸水材料覆蓋10min?B.0.5%次氯酸鈉由外向內傾倒?C.作用30min后清理?D.雙層封扎廢棄物?E.立即關閉空調答案：BCDE解析：吸水材料易形成氣溶膠，應使用吸附消毒凝膠。三、判斷題（每題1分，共10分）31.病毒在80℃可永久保持活性，無需保護劑。答案：錯解析：多次凍融可致包膜破裂，需加10%DMSO或胎牛血清保護。32.病毒核酸檢測CT值與病毒載量呈負對數線性關系。答案：對解析：每降低3.3個CT值，病毒載量約增加1log10。33.紫外線消毒強度與距離平方成正比。答案：錯解析：強度與距離平方成反比，遵循平方反比定律。34.病毒培養(yǎng)出現(xiàn)“拉絲”現(xiàn)象一定提示細菌污染。答案：錯解析：某些病毒如RSV可致細胞融合，形成合胞體拉絲。35.病毒樣本運輸干冰量計算需考慮24小時升華率50%。答案：對解析：干冰在標準泡沫箱中24小時升華約5kg/10kg。36.病毒基因組的GC含量越高，逆轉錄效率越低。答案：對解析：高GC形成二級結構，阻礙逆轉錄酶延伸。37.病毒中和抗體滴度≥1:160即可完全阻止感染。答案：錯解析：體內有補體、Fc受體等多因素影響，體外滴度僅作參考。38.病毒樣本可與其他非感染性樣本共用離心機。答案：錯解析：需專用密封轉子，防止氣溶膠交叉污染。39.病毒抗原檢測陽性可替代核酸檢測確診。答案：錯解析：抗原靈敏度低，需結合流行病學與臨床。40.病毒進化樹中，分支長度代表堿基替換數而非時間。答案：對解析：需分子鐘模型校正方可轉換為時間尺度。四、填空題（每空1分，共20分）41.病毒RNA提取中，常用________試劑可裂解包膜并抑制RNase。答案：TRIzol42.病毒滴度測定采用TCID50，其計算公式為________。答案：ReedMuench法43.病毒樣本運輸UN編號為________。答案：UN337344.病毒氣溶膠粒徑小于________μm可進入肺泡。答案：545.病毒核酸檢測假陽性最常見污染來源為________。答案：擴增子氣溶膠46.病毒滅活驗證指示病毒常用________，其耐性強于包膜病毒。答案：脊髓灰質炎病毒（或腺病毒）47.病毒培養(yǎng)用胎牛血清需經________℃30min滅活補體。答案：5648.病毒基因組的ORF1a/ORF1b通過________機制翻譯多聚蛋白。答案：核糖體移碼（1frameshift）49.病毒樣本長期保存溫度應為________℃。答案：196（液氮）50.病毒中和試驗中，固定病毒量、稀釋________，為常用“固定病毒稀釋血清”法。答案：血清51.病毒進化分析軟件________可估算正向選擇位點。答案：HyPhy（或PAML）52.病毒培養(yǎng)出現(xiàn)“葡萄串”樣CPE提示________感染。答案：腺病毒53.病毒核酸檢測內標常用________基因。答案：RNaseP54.病毒樣本溢灑應急消毒后，需用________指示劑驗證滅菌效果。答案：嗜熱脂肪芽孢桿菌55.病毒培養(yǎng)用二氧化碳濃度為________%。答案：556.病毒反向遺傳系統(tǒng)需________病毒RNA依賴的RNA聚合酶。答案：T7（或SP6）57.病毒抗原檢測試劑評估中，臨床特異度計算真陰性/(真陰性+________)。答案：假陽性58.病毒樣本運輸第二層容器顏色應為________色。答案：透明（或半透明），便于發(fā)現(xiàn)滲漏59.病毒核酸檢測實驗室分區(qū)中，________區(qū)為正壓。答案：試劑準備60.病毒培養(yǎng)用青霉素終濃度為________U/ml。答案：100五、簡答題（每題10分，共30分）61.簡述新型病毒發(fā)生免疫逃逸的三種分子機制，并各舉一例突變位點。答案：（1）RBD構象遮蔽：X病毒N354K突變引入糖鏈，阻礙中和抗體VH鏈接觸；（2）NTD超級位點刪除：Δ144146刪除導致抗體表位缺失，逃逸NTD靶向抗體；（3）Fc段突變：L452R增強與FcγRIIB結合，誘導抗體吞噬后快速降解，降低ADCC效應。62.描述BSL3實驗室正壓服系統(tǒng)故障導致失壓時的應急處置流程。答案：1.立即通過語音報警通知伙伴，停止實驗操作；2.迅速關閉生物安全柜前窗，封蓋所有敞口容器；3.沿“緊急撤離路線”退出，避免奔跑產生氣溶膠；4.進入緩沖間后，關閉氣密門，手動啟動化學噴淋（2%過氧乙酸）全身消毒5min；5.脫卸正壓服前檢查體表無可見污染，按流程逐層脫除，放入高壓滅菌袋；6.立即報告實驗室主任，填寫《生物安全事件報告表》，啟動事故調查與醫(yī)學觀察14天。63.說明病毒環(huán)境污水監(jiān)測的技術路線及質量控制要點。答案：技術路線：（1）采樣：24小時復合采樣，添加MgCl?·6H?O至終濃度50mg/L穩(wěn)定病毒；（2）濃縮：PEG8000/NaCl沉淀法，10000g4℃離心2h，重懸至1/100原體積；（3）核酸提取：采用大體積自動提取，洗脫體積100μl；（4）檢測：雙靶標RTqPCR，引物覆蓋ORF1ab與N基因，內標為MS2噬菌體；（5）定量：構建標準曲線，結果以copies/L表示。質量控制：a.每批次設置空白、陰性、低中高陽性對照；b.添加MS2回收率≥1%；c.重復檢測CV<5%；d.定期用數字PCR驗證；e.采樣點設置陰性對照井，排除上游排放干擾。六、案例分析題（每題20分，共20分）6