12

小鼠鎮(zhèn)痛藥效實驗小鼠熱甩尾試驗（tail-flick

test）小鼠福爾馬林試驗（writhing

test）1.1

任務和目的掌握和熟悉感覺生理中重要的組成—痛覺的基本原理；學習痛覺與鎮(zhèn)痛實驗的方法；觀察腹腔注射嗎啡在兩個動物模型中的鎮(zhèn)痛作用1.2

原理—疼痛的分級世界衛(wèi)生組織將疼痛程度劃分為：0度：不痛；1度：輕度痛，為間歇痛，可不用藥;2度：中度痛，為持續(xù)痛，影響休息，需用止痛藥；3度：重度痛，為持續(xù)痛，不用藥不能緩解疼痛；4度：嚴重痛，為持續(xù)劇痛伴血壓、脈搏等變化。1.2

原理—疼痛的分級江湖傳說第1級：蚊子叮咬第2級：打過麻藥后動手術第3級：情人間友好的打情罵俏第4級：父母恨鐵不成鋼的打罵第5級：用巴掌抽打，留下紅色掌印第6級：不注意飲食引起的腸胃炎，肚子痛第7級：用棍棒打，留下黑紫色印記第8級：各種方式引起的大面積流血性外傷

第9級：皮肉之苦，老虎凳、扎竹簽、紅烙鐵第10級：造成肢體殘疾，如打仗中受傷被炸掉手指第11級：內臟痛，第12級：女性分娩時的感覺1.2

原理—痛覺生理研究的重要性據(jù)報道，全世界約有1/3的人都在忍受持續(xù)或周期性疼痛的折磨，而美國每年在解決疼痛相關社會問題的花費大約是1000億美元。自20世紀90年代開始，我國每年有400萬癌癥患者，目前有增加的趨勢，每年有50％的患者死亡，大部分患者曾出現(xiàn)中、重度疼痛。1.2

原理—不同類型疼痛的機制引自Scholz

J,

Woolf

CJ.

Can

we

conquer

pain?Nat

Neurosci.2002,5:1062-7.1.2

原理—不同類型疼痛的機制引自Scholz

J,

Woolf

CJ.

Can

we

conquer

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Neurosci.2002,5:1062-7.1.2

原理—不同類型疼痛的機制引自Scholz

J,

Woolf

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Can

we

conquer

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Neurosci.2002,5:1062-7.1.2

原理—不同類型疼痛的機制1.2

原理—鎮(zhèn)痛藥效研究的實驗原理鎮(zhèn)痛藥效研究常采用一些篩選實驗，其主要原理是對實驗動物施加引起疼痛的刺激引起痛反應，觀察藥物對痛反應的影響以定量疼痛，較客觀的評價藥效。痛刺激方法很多，概括起來可分為物理（熱、電、機械）性和化學性兩大類。所引起的反應也各不相同，主要有反射性退縮（Reflectivewithdrawal）、利于逃避刺激的姿勢、強力逃避行為（如跑動、跳躍）和延長的保護性活動（如舔、咬、掙扎）等等。小鼠甩尾實驗熱板法1.3 實驗技術—熱刺激的痛覺檢測方法1.3 實驗技術—熱刺激的痛覺檢測方法光熱甩尾法1.3 實驗技術—化學刺激的痛覺檢測方法1.3 實驗技術—機械刺激的痛覺檢測方法壓痛儀1.4

實驗內容小鼠熱浴甩尾（tail-flick

test）福爾馬林試驗（formalin

test）在本實驗中主要是利用熱浴甩尾和福爾馬林（化學刺激、延長的保護性活動）試驗來評價嗎啡的鎮(zhèn)痛藥效。1.4

實驗內容—熱浴甩尾熱水浴甩尾法：昆明系小鼠，體重20±2g，環(huán)境溫度20±1℃，把水浴鍋溫度調至48±0.5℃，給藥前先測定基礎甩尾閾(3~6s)，測3次，過于敏感或遲鈍的小鼠棄去不用。腹腔(i.p.)注射各種藥物（200uL），測定給藥后5、10、20、30、40、50、60分鐘時的甩尾潛伏期。為防止燙傷，浸入時間不超過15s

（cut-off時間）。對照組注射同樣體積的生理鹽水.結果計算按如下等式：MPE(%)percentage

of

maximal

possibleeffect=100×[(post-drug

response?baselineresponse)/(cut-offresponse?baseline

response)]。原始數(shù)據(jù)轉換為0-60分鐘的曲線下面積（area

under

the

curve，AUC），并用于統(tǒng)計分析。1.4

實驗內容—熱浴甩尾實驗的具體分組，每組5只小鼠：No.1-2腹腔注射生理鹽水對照，測定給藥后5、10、20、30、40、50、60分鐘時的甩尾潛伏期。為防止燙傷，浸入時間（cut-off時間）不超過15s。No.3-5

腹腔注射200

uL的的嗎啡溶液（最終濃度為

1、2.5、5mg/kg），測定給藥后5、10、20、30、40、50、60分鐘時的甩尾潛伏期。為防止燙傷，浸入時間（cut-off

時間）不超過15

s。1.4

實驗內容—熱浴甩尾1.4

實驗內容—福爾馬林試驗稱量小鼠的體重，用于注射福爾馬林的后右腳掌進行標記，以便于行為學反應觀察；將小鼠放入大玻璃燒杯（1500或2000

mL）中，讓它適應環(huán)境10－15min；下面放置傾斜30度的鏡子，以便于觀察小鼠的足部反應；配好藥物：空白溶劑對照（生理鹽水）和嗎啡溶液（1、2.5、5mg/kg）200μL；在注射福爾馬林溶液前15min提前腹腔注射生理鹽水和待測的藥物；然后迅速將小鼠放回玻璃大燒杯中；1.4

實驗內容—福爾馬林試驗在腹腔注射后15

min，將小鼠取出，將小鼠裝入小紙筒或用手輕柔的抓住后，在其標記的后右腳掌的腳底中間皮膚下用微量進樣器注射20uL的福爾馬林溶液，迅速放回燒杯中；開始計時，并在注射后30

min記錄小鼠的行為學反應，記錄不同時相每五分鐘內舔、抖被注射足時間為疼痛指標；重復以上實驗操作，直至獲得所需的實驗動物只數(shù)。1.4

實驗內容—福爾馬林試驗實驗的具體分組，每組5只小鼠：No.1腹腔不注射任何藥物，按照實驗步驟1-5操作，來熟悉一下實驗，并觀察小鼠的行為學反應，以便于分級評價。No.2提前15

min腹腔注射空白溶劑對照，按照實驗步驟1-5操作來觀察生理鹽水對腳掌注射福爾馬林溶液小鼠的行為學影響，按照第二種記錄方法來記錄，記錄0-30分鐘內每五分鐘內舔或抖的時間。No.3-5提前15min腹腔注射200uL的嗎啡溶液（1、2.5、5mg/kg），按照實驗步驟1－5操作來觀察嗎啡對腳掌注射福爾馬林溶液小鼠的行為學影響，記錄同學按照第二種方法來記錄；1.4

實驗內容—福爾馬林試驗Peptides

31

(2010)

1878–1883每2min的記錄一次（記錄每2min中的第一個1

min），共記錄40

minNeuroscience

157

(2008)

214–222前10分鐘

后20分鐘記錄0-30分鐘每五分鐘內舔或抖的時間1.4

實驗內容術后觀察手術后保持體溫恒定直至蘇醒，并注射青霉素10萬單位/只大鼠預防感染；攝食量的測定手術后每天測定一次它