ICS11.120.99CCSB38QAS青海省標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)發(fā)布IT/QAS150—2026本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所提出。本文件由青海省標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)歸口。本文件起草單位：中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所、中國(guó)科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所、西寧海關(guān)技術(shù)中心、青海省心腦血管病?？漆t(yī)院、青海省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院、東營(yíng)市工業(yè)產(chǎn)品檢驗(yàn)與計(jì)量檢定中心。本文件主要起草人：馬家麟、李玉林、譚亮、陳濤、王環(huán)、汪園、楊麗、丁成麗、薛賓、海玥、達(dá)洛嘉、賈靜。T/QAS150—20261訶子、毛訶子中沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸、鞣花酸的測(cè)定高效液相色譜法本文件描述了訶子、毛訶子中沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸和鞣花酸的含量測(cè)定高效液相色譜法。本文件適用于訶子、毛訶子及其炮制品中沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸和鞣花酸的測(cè)定。本文件沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸和鞣花酸的檢出限為0.003g/100g，定量限為0.010g/100g。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1訶子（TerminaliachebulaRetz.或TerminaliachebulaRetz.var.tomentellaKurt.）使君子科植物訶子或絨毛訶子的干燥成熟果實(shí)。3.2毛訶子（Terminaliabellirica（Gaertn.）Roxb.）使君子科植物毗黎勒的干燥成熟果實(shí)。4原理訶子、毛訶子試樣中的沒(méi)食子酸、訶子酸、訶黎勒酸、鞣花酸經(jīng)70%甲醇超聲提取1h后，用配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器的高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果以待測(cè)組分保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。5試劑和材料5.1試劑5.1.1水：GB/T6682，一級(jí)。5.1.2甲醇：色譜純。5.1.3磷酸：色譜純。5.1.4二甲基亞砜：色譜純。5.1.5沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品：CAS號(hào)149-91-7，純度≥98%。5.1.6訶子酸標(biāo)準(zhǔn)品：CAS號(hào)18942-26-2，純度≥98%。5.1.7訶黎勒酸標(biāo)準(zhǔn)品：CAS號(hào)23094-71-5，純度≥98%。5.1.8鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品：CAS號(hào)476-66-4，純度≥98%。5.2試劑配制5.2.170%甲醇溶液：量取甲醇（5.1.2）700mL，用水稀釋，定容至1000mL，混勻。5.2.20.2%磷酸溶液：量取磷酸（5.1.3）2mL，用水稀釋，定容至1000mL，混勻。T/QAS150—202625.2.3沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.00mg/mL）：精密稱取沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品25mg（精確至0.01mg）于25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，轉(zhuǎn)移至棕色試劑瓶，-20℃下保存，有效期為1個(gè)月。5.2.4訶黎勒酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.00mg/mL）：精密稱取訶黎勒酸標(biāo)準(zhǔn)品25mg（精確至0.01mg）于25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，臨用現(xiàn)配。5.2.5訶子酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.00mg/mL）：精密稱取訶子酸標(biāo)準(zhǔn)品25mg（精確至0.01mg）于25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，轉(zhuǎn)移至棕色試劑瓶，-20℃下保存，有效期為1個(gè)月。5.2.6鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.00mg/mL）：精密稱取鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品25mg（精確至0.01mg）于25mL容量瓶中，用二甲基亞砜定容至刻度，搖勻，轉(zhuǎn)移至棕色試劑瓶，常溫下保存，有效期為1個(gè)月。5.2.7混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：準(zhǔn)確移取適量沒(méi)食子酸、訶子酸、訶黎勒酸、鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶液（5.2.1）稀釋至刻度，搖勻，使混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中4種待測(cè)組分濃度分別為5.00μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、250μg/mL，臨用現(xiàn)配。標(biāo)準(zhǔn)系列溶液上機(jī)前過(guò)微孔濾膜（6.5），棄去1mL初濾液，取續(xù)濾液待測(cè)。6儀器和設(shè)備6.1高效液相色譜儀：帶紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。6.2分析天平：精度為0.1mg和0.01mg。6.3超聲波清洗機(jī)。6.4藥材粉碎機(jī)：可將樣品粉碎并通過(guò)65目篩。6.5微孔濾膜：孔徑0.45μm，有機(jī)系。7分析步驟7.1試樣制備除去可見(jiàn)雜質(zhì)后，取有代表性試樣50g~100g，用藥材粉碎機(jī)粉碎后，過(guò)65目篩，混勻裝于密閉容器，陰涼干燥處保存。7.2供試品溶液的制備稱取試樣0.25g（精確至0.1mg）于150mL具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確加入70%甲醇溶液（5.2.1）20mL，密塞，稱定重量，超聲1h，放冷，再稱定重量，用70%甲醇溶液（5.2.1）補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)微孔濾膜（6.5），棄去1mL初濾液，取續(xù)濾液待測(cè)。7.3測(cè)定7.3.1液相色譜參考條件7.3.1.1色譜柱：C18色譜柱，柱長(zhǎng)250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5.0μm，或性能相當(dāng)者。7.3.1.2流動(dòng)相：A相為0.2%磷酸溶液（5.2.2）；B相為甲醇（5.1.2）。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。7.3.1.3流速：1.0mL/min。7.3.1.4柱溫：30℃。7.3.1.5進(jìn)樣量：10μL。7.3.1.6檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm。表1梯度洗脫程序A相/%05553表1梯度洗脫程序（續(xù)）A相/%557.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作在儀器最佳條件下，按照液相色譜參考條件（7.3.1），分別取混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（5.2.7）和試樣溶液（7.2）上機(jī)測(cè)定，混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖見(jiàn)附錄A。7.3.3定性以保留時(shí)間定性，被測(cè)試樣中待測(cè)組分色譜峰的保留時(shí)間應(yīng)與質(zhì)量濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中相應(yīng)組分色譜峰的保留時(shí)間一致，其相對(duì)偏差在±2.5%之內(nèi)。7.3.4定量分別以沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸和鞣花酸的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。試樣溶液中沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸和鞣花酸的質(zhì)量濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，超過(guò)線性范圍，應(yīng)將試樣溶液用70%甲醇溶液（5.2.1）稀釋后重新測(cè)定。8數(shù)據(jù)處理試樣中沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸、鞣花酸的含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，數(shù)值以g/100g表示。按公式（1）計(jì)算：式中：ρ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸、鞣花酸質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL）；V——試樣溶液的定容體積，單位為毫升（mL）；10000——換算系數(shù)；n——超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍后的稀釋倍數(shù)；m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）。測(cè)定結(jié)果以平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留3位有效數(shù)字。9精密度在重復(fù)條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過(guò)算術(shù)平均值的10%。270nm,4nmT/QAS270nm,4nm4（資料性）沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸、鞣花酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液液相色譜圖沒(méi)食子酸、訶黎勒酸、訶子酸、鞣花酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見(jiàn)圖A.1。14135000.05.010.0