ICS65.020.30CCSB44DB44廣東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布IDB44/TXXXXX—XXXX前言 Ⅱ 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14試驗(yàn)原理 15試驗(yàn)要求 1 15.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 25.3染毒環(huán)境條件 25.4試驗(yàn)步驟和觀察指標(biāo) 26數(shù)據(jù)處理和結(jié)果評(píng)價(jià) 46.1數(shù)據(jù)處理 46.2結(jié)果評(píng)價(jià) 47試驗(yàn)報(bào)告 48試驗(yàn)結(jié)果的解釋 5附錄A（資料性）一般臨床觀察 6附錄B（資料性）眼科檢查 7參考文獻(xiàn) 8DB44/TXXXXX—XXXX本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由廣東省科學(xué)技術(shù)廳提出并組織實(shí)施。本文件由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（GD/TC93）歸口。本文件起草單位：廣州質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，廣州市從化區(qū)教育局，廣州市花都區(qū)教育局，廣州市教育基建和裝備中心，廣東省奧林匹克中心，廣東省體育場(chǎng)館協(xié)會(huì)，廣東省體育設(shè)施制造商協(xié)會(huì)，廣州同欣體育股份有限公司，廣東杰銳新材料有限公司，江門市長(zhǎng)河化工實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司，廣州信源體育產(chǎn)業(yè)有限公司，廣東川奧高新科技有限公司。本文件主要起草人：劉香梅、李培寧、黃宇梁、劉冬虹、郭燕華、龐增雄、吳劍輝、梁俊杰、鄧以健、陳秀娟、李光先、黃曉輝、李睿、黃玨靖、賴浩亮、楊漢華、劉軍、成冬來(lái)、蔡陳敏、詹金城、趙文海、劉威、趙克勤。DB44/TXXXXX—XXXX1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層吸入毒性安全技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層大鼠急性（5d）和亞急性（28d）吸入毒性安全技術(shù)規(guī)范的試驗(yàn)要求、數(shù)據(jù)處理和結(jié)果評(píng)價(jià)、試驗(yàn)報(bào)告、試驗(yàn)結(jié)果的解釋。本文件適用于合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層及其原料的吸入毒性安全性評(píng)價(jià)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB14922實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物、寄生蟲學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)GB14924.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合飼料通用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB14924.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB14924.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合飼料營(yíng)養(yǎng)成分GB14925實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境及設(shè)施GB36246中小學(xué)合成材料面層運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地GB/T43564中小學(xué)合成材料面層田徑場(chǎng)地3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層syntheticmaterialssportsfieldsurfaces鋪裝在瀝青混凝土或水泥混凝土等基礎(chǔ)層上，用于運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地的高分子合成材料層。4試驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)吸入途徑暴露于合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層釋放的揮發(fā)性物質(zhì)，通過(guò)觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的毒性反應(yīng)及死亡情況，評(píng)價(jià)合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層的吸入毒性。5試驗(yàn)要求5.1受試物DB44/TXXXXX—XXXX25.1.1合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層成品應(yīng)按照GB36246有關(guān)規(guī)定，確定取樣位置及裁取規(guī)格（300mm×400mm×實(shí)際厚度取樣后裝入聚乙烯或聚四氟乙烯袋密封保存。成品樣品應(yīng)在合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層鋪裝完畢后14d~60d內(nèi)開始取樣檢測(cè)。5.1.2合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層原料5.1.2.1固體原料，應(yīng)按照GB/T43564有關(guān)規(guī)定，根據(jù)生產(chǎn)者提供的建議鋪裝量（kg/m2按照0.024m2的面積計(jì)算取樣量，取樣量應(yīng)在報(bào)告中注明。當(dāng)無(wú)法獲得建議鋪裝量時(shí)，取樣量為30g。5.1.2.2非固體原料，應(yīng)按照GB/T43564有關(guān)規(guī)定，根據(jù)生產(chǎn)者提供的建議鋪裝量（kg/m2）和工藝，將非固體原料均勻地涂在無(wú)味且化學(xué)惰性的基材上（如玻璃板、不銹鋼板、聚四氟乙烯板等）。5.1.2.3合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層原料在送達(dá)實(shí)驗(yàn)室后14d內(nèi)開始檢測(cè)。注：固體原料，如丁苯橡膠顆粒、三元乙丙橡膠顆粒、聚氨酯橡膠顆粒、熱塑性彈性體非固體原料，如各種膠粘劑、現(xiàn)澆型面層用預(yù)聚5.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物5.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)符合GB14922有關(guān)規(guī)定。大鼠周齡不超過(guò)6周，體重差異不超過(guò)同批次同性別平均體重的±20%。每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)至少10只（雌雄各半），對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別和數(shù)量應(yīng)與染毒組相同。必要時(shí)，增設(shè)追蹤觀察組，每組10只（雌雄各半）。5.2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)前應(yīng)進(jìn)行3d～5d環(huán)境適應(yīng)和檢疫觀察。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境應(yīng)符合GB14925，飲用水應(yīng)符合GB5749，飼料質(zhì)量、衛(wèi)生和營(yíng)養(yǎng)成分應(yīng)符合GB14924.1、GB14924.2和GB14924.3的有關(guān)規(guī)定。試驗(yàn)期間，動(dòng)物自由飲水和攝食。大鼠按性別分籠群飼，每籠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)（一般不超過(guò)3只）應(yīng)滿足實(shí)驗(yàn)動(dòng)物最低需要的空間，以不影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由活動(dòng)和觀察動(dòng)物的體征為宜。5.3染毒環(huán)境條件5.3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)在吸入染毒裝置中進(jìn)行染毒。吸入染毒裝置應(yīng)配備動(dòng)態(tài)氣流系統(tǒng)，且密閉，以防止受試物揮發(fā)性物質(zhì)泄露到外部環(huán)境中。染毒期間，換氣次數(shù)維持在12次/h~15次/h，氧氣體積分?jǐn)?shù)不低于19%，保證動(dòng)物總體積不能超過(guò)染毒柜容積的5%，并能最大程度的接觸受試物的揮發(fā)性物質(zhì)。5.3.2試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)連續(xù)監(jiān)測(cè)染毒柜內(nèi)的溫度和相對(duì)濕度，染毒過(guò)程中溫度應(yīng)保持在20℃~26℃,相對(duì)濕度應(yīng)保持在30%~70%。5.4試驗(yàn)步驟和觀察指標(biāo)5.4.1吸入染毒參照GB36246有關(guān)規(guī)定，設(shè)置受試物/染毒柜的載荷比為0.4m2/m3，合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層成品根據(jù)上表面積計(jì)算，合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層原料以建議鋪裝量（kg/m2）和工藝計(jì)算。取相應(yīng)面積的合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層成品或原料加熱至（60±2）℃,維持1h。染毒期間，染毒柜內(nèi)溫度應(yīng)維持在20℃~26℃,并停止供食給水。染毒組每日染毒至少1h，對(duì)照組動(dòng)物除無(wú)受試物染毒外，其他處置均與染毒組相同。急性吸入染毒連續(xù)5d，亞急性吸入染毒連續(xù)28d。DB44/TXXXXX—XXXX35.4.2一般臨床觀察5.4.2.1染毒期間，每日至少進(jìn)行1次臨床觀察，或者根據(jù)動(dòng)物反應(yīng)，增加觀察頻次。急性吸入染毒（5d）觀察期至少14d。亞急性吸入染毒（28d）試驗(yàn)結(jié)束，追蹤觀察組（如設(shè)）繼續(xù)觀察至少14d，以評(píng)估毒性效應(yīng)的持續(xù)性、可逆性或遲發(fā)性。5.4.2.2每日記錄動(dòng)物出現(xiàn)的中毒體征、程度和持續(xù)時(shí)間及死亡情況。觀察內(nèi)容見附錄A和附錄B。5.4.2.3試驗(yàn)期間，對(duì)每只瀕死、死亡的動(dòng)物，條件允許情況下應(yīng)進(jìn)行血液學(xué)檢查、血液生化檢查、大體解剖以及病理學(xué)檢查，并分析原因。5.4.3體重和攝食量5.4.3.1急性吸入染毒（5d）試驗(yàn)：在第0d、第5d、第14d記錄大鼠體重。5.4.3.2亞急性吸入染毒（28d）試驗(yàn)：每周記錄大鼠體重和攝食量，計(jì)算食物利用率。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，計(jì)算動(dòng)物體重增長(zhǎng)量、總攝食量、總食物利用率。5.4.4臨床檢查亞急性吸入染毒（28d）試驗(yàn)結(jié)束后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)禁食過(guò)夜，麻醉后采血，用于血液學(xué)檢查、血液生化檢查。注：急性吸入染毒（5d）試驗(yàn)無(wú)需進(jìn)行臨床檢查。5.4.4.1血液學(xué)檢查亞急性吸入染毒（28d）試驗(yàn)在染毒結(jié)束、追蹤觀察（如設(shè)）結(jié)束進(jìn)行血液學(xué)指標(biāo)測(cè)定。測(cè)定指標(biāo)應(yīng)包含血細(xì)胞比容、血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類、血小板計(jì)數(shù)、凝血功能（凝血酶原時(shí)間、活化部分凝血活酶時(shí)間，必要時(shí)可增加凝血酶時(shí)間和纖維蛋白原）。如懷疑對(duì)血液系統(tǒng)有影響，應(yīng)增加骨髓涂片細(xì)胞學(xué)檢查。5.4.4.2血液生化檢查亞急性吸入染毒（28d）試驗(yàn)在染毒結(jié)束、追蹤觀察（如設(shè)）結(jié)束進(jìn)行血液生化指標(biāo)測(cè)定。測(cè)定指標(biāo)應(yīng)包含鈉、鉀、葡萄糖、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、尿素、尿素氮、肌酐、總蛋白和白蛋白，以及至少兩種反映肝功能的酶（如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶和山梨醇脫氫酶等）。必要時(shí)可根據(jù)所觀察到的毒性作用進(jìn)行其他更大范圍的血液生化檢查，測(cè)定指標(biāo)可包括鈣、磷、甘油三酯、特定激素、高鐵血紅蛋白和膽堿酯酶等。5.4.4.3尿液檢查預(yù)期或觀察到有腎毒性時(shí)應(yīng)進(jìn)行尿液檢查，測(cè)定指標(biāo)包含尿液外觀、尿液量、尿比重、pH、尿蛋白、尿糖和潛血等。5.4.5病理學(xué)檢查5.4.5.1應(yīng)對(duì)所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行大體解剖，包括在試驗(yàn)中死亡的、或出于動(dòng)物福利原因被安樂(lè)死以及從試驗(yàn)中撤離的。記錄每只動(dòng)物肉眼可見的病變，并特別注意眼部、鼻腔、咽喉、氣管、肺等器官和組織的改變。5.4.5.2急性吸入染毒（5d）試驗(yàn)結(jié)束，對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行大體解剖，對(duì)肉眼觀察異常的器官和組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。5.4.5.3亞急性吸入染毒（28d）試驗(yàn)結(jié)束，對(duì)所有動(dòng)物的器官和組織進(jìn)行稱重和組織病理學(xué)檢查：DB44/TXXXXX—XXXX4a）稱重：對(duì)心臟、胸腺、肺、肝、脾、腎、腎上腺、卵巢、子宮、睪丸、附睪進(jìn)行稱重，并計(jì)算臟器系數(shù)（以g/100gBW或mg/100gBW表示）；b）組織病理學(xué)檢查：大體解剖異常的器官，以及腦（包括延髓/腦橋、小腦和大腦皮層）、嗅球、眼（視網(wǎng)膜、視神經(jīng)）及眼瞼、鼻咽組織（至少4層，1層包括鼻咽管和鼻腔相關(guān)淋巴組織）、喉（包括會(huì)厭基底層在內(nèi)的3層）、氣管（至少2層，包括1個(gè)通過(guò)肺外支氣管分叉處隆凸的縱切面和1個(gè)橫切面）、甲狀腺、心臟、胸腺、肺、肝、脾、腎、腎上腺、卵巢、子宮、睪丸、附睪。追蹤觀察組（如設(shè)）應(yīng)檢查染毒組有病變的器官和組織。5.4.6其他指標(biāo)必要時(shí)，根據(jù)所觀察的毒性反應(yīng)，增加其他指標(biāo)（如神經(jīng)毒性、免疫毒性、內(nèi)分泌毒性、精子活力等）的觀察和評(píng)價(jià)。6數(shù)據(jù)處理和結(jié)果評(píng)價(jià)6.1數(shù)據(jù)處理將所有的數(shù)據(jù)和結(jié)果以表格形式進(jìn)行總結(jié)，列出各組試驗(yàn)前的動(dòng)物數(shù)、試驗(yàn)期間動(dòng)物死亡數(shù)及死亡時(shí)間、出現(xiàn)毒性反應(yīng)的動(dòng)物數(shù)，列出所見的毒性反應(yīng)，包括出現(xiàn)毒性效應(yīng)的時(shí)間、持續(xù)時(shí)間及程度。對(duì)動(dòng)物體重、攝食量、食物利用率、血液學(xué)檢查、血液生化檢查、尿液檢查、臟器重量和臟器系數(shù)、病理學(xué)檢查等結(jié)果應(yīng)以適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。一般情況，計(jì)量資料采用T檢驗(yàn)，分類資料采用Fisher精確分布檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)，等級(jí)資料采用Ridit分析、秩和檢驗(yàn)等。6.2結(jié)果評(píng)價(jià)6.2.1急性吸入染毒（5d）試驗(yàn)：若染毒組大鼠在試驗(yàn)期間未死亡，體重?zé)o下降或體重雖有下降，但觀察期結(jié)束與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則判定該合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層吸入毒性合格，否則為不合格。6.2.2亞急性吸入染毒（28d）試驗(yàn)：若染毒組大鼠體重和攝食量、血液學(xué)指標(biāo)、血液生化指標(biāo)、尿液指標(biāo)、臟器重量和臟器系數(shù)等結(jié)果與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且病理學(xué)結(jié)果無(wú)異常，則判定該合成材料運(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層吸入毒性合格，否則為不合格。7試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包括但不限于以下內(nèi)容：a）試驗(yàn)名稱、試驗(yàn)單位名稱和聯(lián)系方式、報(bào)告編號(hào)；b）試驗(yàn)委托單位名稱和聯(lián)系方式、樣品受理日期；c）試驗(yàn)開始和結(jié)束日期、簽發(fā)日期；d）受試物：名稱、批號(hào)、狀態(tài)（包裝完整性、標(biāo)識(shí)）、數(shù)量；e）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：物種、品系、級(jí)別、數(shù)量、體重、性別、來(lái)源（供應(yīng)商名稱、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)），動(dòng)物適應(yīng)和檢疫情況，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)，飼養(yǎng)環(huán)境（溫度、相對(duì)濕度），飼料來(lái)源（供應(yīng)商名稱、飼料生產(chǎn)許可證號(hào)）；f）試驗(yàn)方法：試驗(yàn)分組、每組動(dòng)物數(shù)、染毒時(shí)間、染毒條件（溫度、相對(duì)濕度、換氣次數(shù)、氧氣體積分?jǐn)?shù)等）、觀察指標(biāo)、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法；g）試驗(yàn)結(jié)果：1）急性吸入染毒（5d）試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡情況、一般臨床觀察情況、體重等結(jié)果；DB44/TXXXXX—XXXX52）亞性吸入染毒（28d）試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡情況、一般臨床觀察情況、毒性反應(yīng)、體重、攝食量、食物利用率、血液學(xué)檢查、血液生化檢查、尿液檢查、臟器重量和臟器系數(shù)、病理學(xué)檢查結(jié)果；h）試驗(yàn)結(jié)論。8試驗(yàn)結(jié)果的解釋急性吸入染毒（5d）試驗(yàn)、亞急性吸入染毒（28d）試驗(yàn)?zāi)芴峁┖铣刹牧线\(yùn)動(dòng)場(chǎng)地面層短期的吸入毒性資料。由于動(dòng)物和人存在物種差異，試驗(yàn)結(jié)果外推到人存在一定的局限性。DB44/TXXXXX—XXXX6一般臨床觀察A.1一般臨床觀察急性吸入染毒（5d）試驗(yàn)、亞急性吸入染毒（28d）試驗(yàn)大鼠一般臨床觀察應(yīng)按照表A.1進(jìn)行。表A.1一般臨床觀察序號(hào)器官系統(tǒng)觀察及檢查項(xiàng)目中毒后一般表現(xiàn)01020304中樞神經(jīng)系統(tǒng)及神經(jīng)肌肉系統(tǒng)動(dòng)作行為體位異常，叫聲異常，不安或呆滯，反復(fù)抓撓口周，反復(fù)梳理，轉(zhuǎn)圈，痙攣，麻痹，震顫，運(yùn)動(dòng)失調(diào)，甚至倒退行走或自殘各種刺激的反應(yīng)易興奮，知覺(jué)過(guò)敏或缺乏知覺(jué)大腦及脊髓反射減弱或消失肌肉張力強(qiáng)直，弛緩0506植物神經(jīng)系統(tǒng)瞳孔大小擴(kuò)大或縮小分泌流涎，流淚0708呼吸系統(tǒng)鼻孔流液，鼻翼煽動(dòng)呼吸性質(zhì)和速率深緩，過(guò)速09心血管系統(tǒng)心區(qū)觸診心動(dòng)過(guò)緩，心律不齊，心跳過(guò)強(qiáng)或過(guò)弱消化系統(tǒng)腹形氣脹或收縮，腹瀉或便秘糞便硬度和顏色糞便不成形，黑色或灰色泌尿生殖系統(tǒng)陰道，乳腺膨脹脫垂會(huì)陰部污穢，有分泌物皮膚和被毛顏色，張力發(fā)紅，褶皺，松弛，皮疹血完整性豎毛黏膜黏膜流粘液，充血，出血性紫紺，蒼白潰瘍眼上瞼下垂眼球突出或震顫，結(jié)膜充血，角膜混濁，晶狀體混濁其他直腸或皮膚溫度降低或升高一般情況消瘦DB44/TXXXXX—XXXX7