臨床實驗室梅毒血清學檢測流程指南（2025版）臨床實驗室梅毒血清學檢測是梅毒診斷、療效評估及流行病學監(jiān)測的重要手段。為規(guī)范檢測流程，提升結果準確性與可靠性，結合當前檢驗醫(yī)學進展及臨床需求，制定本流程指南，適用于開展梅毒血清學檢測的各類臨床實驗室（含第三方醫(yī)學實驗室）。一、檢測前準備（一）人員要求檢測人員需具備醫(yī)學檢驗專業(yè)背景，經(jīng)過梅毒血清學檢測專項培訓并考核合格。培訓內(nèi)容應涵蓋檢測原理、操作規(guī)范、質(zhì)量控制、生物安全及結果判讀等，每2年復訓1次。實驗室需明確檢測人員、審核人員及質(zhì)量管理人員職責，確保分工清晰。（二）設備與試劑管理1.設備配置：需配備符合國家標準的檢測設備，包括但不限于酶標儀（含洗板機）、化學發(fā)光免疫分析儀、梅毒血清反應旋轉器（用于RPR/TRUST試驗）、離心機（轉速≥3000r/min，控溫范圍4-25℃）、生物安全柜（BSL-2級）及冷鏈存儲設備（2-8℃冰箱、-20℃冰柜）。設備需定期校準（每年至少1次）、維護并記錄，確保性能穩(wěn)定。2.試劑選擇：應選用經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）批準的檢測試劑，優(yōu)先選擇敏感性≥98%、特異性≥95%的高準確性試劑。非梅毒螺旋體抗原試驗（如RPR、TRUST）與梅毒螺旋體抗原試驗（如TPPA、ELISA、化學發(fā)光法）需分屬不同檢測原理的試劑組合，避免同源性干擾。試劑需按說明書要求存儲（2-8℃或-20℃），使用前檢查有效期及外觀（如無沉淀、變色），開瓶后標注啟用日期，超出穩(wěn)定期的試劑禁止使用。（三）環(huán)境與生物安全實驗室需分區(qū)明確，設置樣本接收區(qū)、前處理區(qū)、檢測區(qū)及廢棄物處理區(qū)，各區(qū)域標識清晰，避免交叉污染。檢測過程需在生物安全柜內(nèi)進行，操作人員需穿戴工作服、手套、口罩，接觸樣本后及時消毒。醫(yī)療廢棄物分類處理：感染性廢物（如樣本管、吸頭）需置于雙層黃色醫(yī)療廢物袋，經(jīng)高壓蒸汽滅菌（121℃，30分鐘）后由專業(yè)機構回收；化學廢物（如廢棄試劑）按實驗室化學品管理規(guī)范處理。（四）患者準備與樣本要求1.患者準備：檢測前無需嚴格禁食，但需避免溶血（如止血帶綁扎時間≤1分鐘、避免反復穿刺）、脂血（如空腹4小時以上）及嚴重黃疸（膽紅素＞342μmol/L可能干擾比色法）。近期（2周內(nèi)）接受免疫球蛋白輸注、血液制品治療或使用免疫抑制劑者，需在病歷中注明，檢測結果需結合臨床綜合分析。2.樣本類型：首選血清（無抗凝劑真空管采集），次選血漿（EDTA抗凝，避免肝素抗凝，因可能導致非特異性反應）。樣本量≥1.0ml（化學發(fā)光法）或≥0.5ml（ELISA法），確保滿足檢測需求。二、樣本處理流程（一）樣本接收與核查樣本接收時需核對以下信息：患者姓名、性別、年齡、唯一標識（如住院號、門診號）、樣本類型、采集時間（需標注具體時間，精確至分鐘）及臨床診斷（如“梅毒篩查”“療效監(jiān)測”）。對信息不全、樣本溶血（血紅蛋白＞5g/L）、脂血（乳糜指數(shù)＞3+）或采集后超過48小時未分離血清（2-8℃保存）的樣本，需登記為不合格樣本，聯(lián)系臨床重新采集并記錄溝通內(nèi)容。（二）樣本前處理1.血清分離：采集后2小時內(nèi)（室溫）或4小時內(nèi)（2-8℃）離心，轉速3000r/min，時間10分鐘，分離血清至潔凈離心管（避免反復凍融）。2.樣本保存：檢測前樣本需2-8℃保存，保存時間≤72小時；需復檢或備份的樣本-20℃保存（≤6個月），-80℃可長期保存（≤5年）。三、檢測方法與操作規(guī)范梅毒血清學檢測分為非梅毒螺旋體抗原試驗（非特異性試驗）與梅毒螺旋體抗原試驗（特異性試驗），臨床需結合兩種試驗結果綜合判讀。（一）非梅毒螺旋體抗原試驗（初篩/療效監(jiān)測）以快速血漿反應素試驗（RPR）為例：1.試劑準備：RPR抗原懸液使用前室溫平衡30分鐘，輕輕搖勻（避免氣泡）。2.操作步驟：取50μl血清（未稀釋）滴加于RPR卡片圓圈內(nèi)，均勻涂布；用專用滴管垂直滴加1滴抗原懸液（約50μl），置旋轉器（100±5r/min）水平旋轉8分鐘；立即在強光下觀察結果。3.結果判讀：-陰性：無凝集顆粒，液體均勻。-陽性：可見中等或大的凝集顆粒（1+：顆粒分布均勻；2+：較大顆粒，背景清晰；3+：大顆?；驂K狀物；4+：大的塊狀物）。-臨界值：需用原倍血清重復檢測，仍為臨界者判為陰性。-滴度檢測：將血清用生理鹽水做1:2、1:4…1:32稀釋，按上述步驟操作，記錄最高稀釋度的陽性結果（如1:16陽性）。（二）梅毒螺旋體抗原試驗（確認/診斷）以化學發(fā)光免疫分析法（CLIA）為例：1.試劑與儀器準備：試劑卡、校準品、質(zhì)控品需與儀器型號匹配，上機前檢查試劑位、樣本架及反應杯狀態(tài)。2.操作步驟：-樣本加載：將處理后的血清（或血漿）按順序放入樣本架，設置檢測項目（梅毒螺旋體抗體IgG/IgM）。-儀器運行：儀器自動完成加樣、溫育（37℃，15分鐘）、洗滌（3次）、加化學發(fā)光底物（吖啶酯標記物）、檢測光子信號。3.結果判讀：以S/CO值表示，S/CO≥1.0為陽性，0.9≤S/CO＜1.0為灰區(qū)（需48小時后復檢或換用其他方法確認），S/CO＜0.9為陰性。四、質(zhì)量控制與結果審核（一）室內(nèi)質(zhì)量控制（IQC）1.質(zhì)控品選擇：使用與檢測項目匹配的第三方質(zhì)控品（涵蓋陰性、臨界、陽性水平），每批號試劑至少檢測1次，日常檢測每批次樣本需同步檢測質(zhì)控品。2.質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則（12s、13s、22s、R4s、41s、10x），每日記錄質(zhì)控值并繪制Levey-Jennings圖。若出現(xiàn)失控，需立即排查原因（如試劑失效、儀器故障、操作失誤），重新檢測失控批次樣本并記錄處理過程。（二）室間質(zhì)量評價（EQA）實驗室需每年參加國家或省級臨床檢驗中心組織的梅毒血清學室間質(zhì)評，評價項目包括陽性符合率、陰性符合率及滴度準確性。對EQA結果不滿意的項目，需分析偏差原因（如方法學差異、校準錯誤），制定改進措施并記錄。（三）結果審核與復核1.雙人審核：檢測結果需經(jīng)檢測人員初核、授權審核人員復核，重點核對樣本信息、檢測方法、結果一致性（如非特異性試驗陽性需核查特異性試驗結果）及異常值（如滴度突然升高4倍以上）。2.復核規(guī)則：對以下情況需重新檢測：-初篩陽性但確認試驗陰性（需換用另一種特異性試驗復核）；-滴度變化≥4倍（如治療前1:32，治療后1:8，需排除樣本混淆）；-灰區(qū)結果（S/CO0.9-1.0）需用原樣本復檢，仍為灰區(qū)者報告“灰區(qū)，建議結合臨床”。五、報告發(fā)放與后處理（一）報告內(nèi)容與格式檢測報告需包含以下信息：-實驗室名稱、地址、聯(lián)系方式（僅公開實驗室官方電話，無私人信息）；-患者信息（姓名、性別、年齡、唯一標識）；-檢測項目（如“梅毒螺旋體抗體（CLIA）”“RPR滴度”）；-檢測結果（陽性/陰性，滴度需注明稀釋倍數(shù)）；-參考范圍（如“梅毒螺旋體抗體：陰性（S/CO＜1.0）”）；-檢測時間、報告時間；-檢測人員與審核人員簽名（電子簽名需符合《電子簽名法》要求）。（二）報告發(fā)放與隱私保護報告通過實驗室信息系統(tǒng)（LIS）發(fā)送至臨床科室，或打印后密封傳遞，禁止通過公共社交平臺發(fā)送。患者本人查詢結果需提供有效身份證件，授權他人代領需簽署委托書。（三）樣本與記錄保存1.樣本保存：檢測后剩余樣本2-8℃保存7天，需復檢的樣本-20℃保存3個月；陽性樣本建議-80℃長期保存（≤5年），用于追溯或科研（需患者知情同意）。2.記錄歸檔：檢測原始記錄（包括質(zhì)控數(shù)據(jù)、儀器運行日志、結果審核記錄）需電子備份并紙質(zhì)存檔，保存期限≥5年（法律另有規(guī)定的從其規(guī)定）。六、特殊場景處理（一）新生兒檢測新生兒梅毒抗體可能來自母體IgG（可通過胎盤），需檢測特異性IgM抗體（CLIA法或免疫熒光法）。若IgM陽性或非特異性試驗滴度≥母體4倍，提示先天感染；IgM陰性但非特異性試驗陽性，需隨訪至18月齡（若18月齡后仍陽性，需重新評估）。（二）HIV合并感染HIV感染者因免疫功能異常，可能出現(xiàn)梅毒血清學假陰性（早期感染）或假陽性（自身抗體干擾）。建議同時檢測非特異性試驗（滴度≥1:8）與兩種不同原理的特異性試驗（如CLIA+TPPA），必要時結合暗