武漢尚恩生物支持巨噬細(xì)胞功能可塑性研究全流程抗體服務(wù)巨噬細(xì)胞是由單核細(xì)胞（Monocyte）分化而來的，廣泛分布于全身各組織器官中，根據(jù)其所處的組織環(huán)境，有不同的名稱（如肝臟中的庫普弗細(xì)胞、肺中的肺泡巨噬細(xì)胞等）。巨噬細(xì)胞具有吞噬作用(Phagocytosis)、抗原呈遞(AntigenPresentation)、免疫調(diào)節(jié)(ImmuneRegulation)、組織修復(fù)與重塑(TissueRepairandRemodeling)等多種功能，是免疫系統(tǒng)重要的中的“多面手”，其極化狀態(tài)決定了它在不同生理和病理條件下扮演的角色。極化是指巨噬細(xì)胞在不同的微環(huán)境刺激下，會表現(xiàn)出不同的功能狀態(tài)和分子特征的現(xiàn)象，這種極化是一個動態(tài)的過程，并非非此即彼的絕對狀態(tài)，而是一個連續(xù)的譜系。巨噬細(xì)胞極化主要分為：經(jīng)典激活(ClassicalActivation-M1型)：M1型極化主要由干擾素-γ(IFN-γ)和脂多糖(LPS)等病原體相關(guān)分子模式（PAMPs）或促炎細(xì)胞因子刺激誘導(dǎo)，高表達(dá)促炎細(xì)胞因子，如TNF-α(腫瘤壞死因子-α)、IL-1β(白細(xì)胞介素-1β)、IL-6(白細(xì)胞介素-6)和IL-12/23(白細(xì)胞介素-12/23)。它們主要發(fā)揮促炎和抗腫瘤作用，具有強(qiáng)大的吞噬和殺傷病原體及腫瘤細(xì)胞的能力，同時能招募和激活其他免疫細(xì)胞，形態(tài)通常表現(xiàn)為阿米巴樣或不規(guī)則的圓形，偽足豐富，具有很強(qiáng)的運(yùn)動能力。替代性激活(AlternativeActivation-M2型)：M2型極化主要由IL-4、IL-13等Th2型細(xì)胞因子或糖皮質(zhì)激素（如地塞米松）刺激誘導(dǎo)，高表達(dá)抗炎和組織修復(fù)相關(guān)的細(xì)胞因子，如IL-10(白細(xì)胞介素-10)、TGF-β(轉(zhuǎn)化生長因子-β)。它們主要參與組織修復(fù)、血管生成和免疫抑制，它們還能清除凋亡細(xì)胞，促進(jìn)組織再生，并抑制過度的炎癥反應(yīng)，形態(tài)通常表現(xiàn)為圓形或橢圓形，偽足較少。在腫瘤微環(huán)境中，還存在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（Tumorassociatedmacrophages，TAM）,其極化狀態(tài)主要受腫瘤微環(huán)境（如IL-4、IL-10、TGF-β等因子）調(diào)控，絕大多數(shù)TAMs呈現(xiàn)M2樣表型（即M2型的促腫瘤亞型），屬于M2型在腫瘤場景下的“功能特化亞型”。研究巨噬細(xì)胞時，細(xì)胞極化實驗的意義非常核心，它是理解巨噬細(xì)胞“功能可塑性”與病理生理機(jī)制的關(guān)鍵。體外誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞主要通過兩種方式進(jìn)行：外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞，然后再誘導(dǎo)極化；單核細(xì)胞系（THP-1、U937）誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞后再誘導(dǎo)極化，或巨噬細(xì)胞系（Ana-1、RAW264.7）直接誘導(dǎo)極化。其本質(zhì)區(qū)別在于前者采用原代外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)，細(xì)胞功能相對更接近體內(nèi)環(huán)境，缺點就是條件控制不好的話重復(fù)性會較差同時原代細(xì)胞獲得和體外培養(yǎng)成本會更高；而后者采用細(xì)胞系，細(xì)胞獲得和培養(yǎng)難度低，重復(fù)性好但實際細(xì)胞少部分功能可能和體內(nèi)略有差異。極化方案：一：人外周血單核細(xì)胞M1/M2極化（僅供參考）實驗方案：①使用Ficoll分離液從外周血中分離PBMCs。②通過CD14單核細(xì)胞磁珠分選試劑盒富集單核細(xì)胞，或?qū)?0-20x10?PBMC種在2ml無血清培養(yǎng)基中，2-3小時后洗去未黏附細(xì)胞，獲得約1x10?個單核細(xì)胞。③在6孔板中加入含M-CSF（50ng/ml）的培養(yǎng)基，將單核細(xì)胞濃度調(diào)整為1-2x10?/ml，誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞。④3天后吸出1ml培養(yǎng)基，補(bǔ)充1ml新鮮培養(yǎng)基。⑤6天后誘導(dǎo)M1和M2極化，分別添加LPS（10ng/ml）和IFN-γ（50ng/ml）或IL-4（20ng/ml），刺激18-20小時。⑥最后通過流式細(xì)胞術(shù)檢測M1、M2相關(guān)Marker的表達(dá)。二：細(xì)胞系M1/M2極化（以THP-1為例，僅供參考）人單核細(xì)胞系THP-1的定向分化是研究巨噬細(xì)胞的重要體外模型。常用佛波酯PMA、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子GM-CSF和巨噬細(xì)胞集落刺激因子M-CSF等細(xì)胞因子來激活THP-1細(xì)胞。實驗方案：①細(xì)胞培養(yǎng)：在RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，添加10%FBS。②誘導(dǎo)分化：使用25nM的類維生素D3或phorbol12-myristate13-acetate（PMA）處理細(xì)胞，48小時。③M1/M2極化：M1極化：添加IFN-γ和LPS，培養(yǎng)24至48小時。M2極化：添加IL-4和IL-13，培養(yǎng)24至48小時。④檢測：通過流式細(xì)胞術(shù)或qPCR分析極化后的細(xì)胞標(biāo)志物。巨噬細(xì)胞流式抗體：尚恩生物流式抗體產(chǎn)品采用國內(nèi)外高分文獻(xiàn)同樣克隆號的抗體為原料，進(jìn)口熒光染料通過優(yōu)化工藝高效標(biāo)記，有效保障了流式抗體特異性、靈敏度、穩(wěn)定性、熒光強(qiáng)度等基礎(chǔ)參數(shù)，實驗結(jié)果可重復(fù)性、認(rèn)可度都同時得到保障，實際使用