廣西巴馬小型豬2型糖尿病動(dòng)物模型構(gòu)建及基因多態(tài)性解析：糖尿病研究新視角一、引言1.1研究背景與意義1.1.1糖尿病的現(xiàn)狀及危害糖尿病作為一種全球性的公共衛(wèi)生問(wèn)題，正以驚人的速度蔓延。國(guó)際糖尿病聯(lián)盟（IDF）的數(shù)據(jù)顯示，全球糖尿病患者數(shù)量持續(xù)攀升，截止到[具體年份]，全球約有[X]億人患有糖尿病，預(yù)計(jì)到[預(yù)測(cè)年份]，這一數(shù)字將增長(zhǎng)至[X]億。在眾多糖尿病類(lèi)型中，2型糖尿病占據(jù)了主導(dǎo)地位，約占所有糖尿病病例的90%-95%。2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制極為復(fù)雜，是遺傳因素與環(huán)境因素長(zhǎng)期相互作用的結(jié)果。肥胖、缺乏運(yùn)動(dòng)、不合理的飲食習(xí)慣（如高熱量、高脂肪、高糖飲食）等環(huán)境因素，在具有遺傳易感性的個(gè)體中，會(huì)引發(fā)一系列代謝紊亂，進(jìn)而導(dǎo)致胰島素抵抗和胰島素分泌不足，最終促使2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展。其危害是多方面的。持續(xù)的高血糖狀態(tài)會(huì)對(duì)人體的多個(gè)系統(tǒng)和器官造成嚴(yán)重?fù)p害，引發(fā)一系列并發(fā)癥。在心血管系統(tǒng)方面，糖尿病患者患冠心病、心肌梗死、腦卒中等心腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加，約70%-80%的糖尿病患者最終死于心腦血管并發(fā)癥。在神經(jīng)系統(tǒng)，糖尿病神經(jīng)病變較為常見(jiàn)，患者可能出現(xiàn)肢體麻木、疼痛、感覺(jué)異常等癥狀，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量。糖尿病腎病也是常見(jiàn)且嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，可導(dǎo)致腎功能逐漸減退，甚至發(fā)展為腎衰竭，需要透析或腎移植來(lái)維持生命。糖尿病視網(wǎng)膜病變則是導(dǎo)致失明的重要原因之一。此外，糖尿病還會(huì)增加感染的風(fēng)險(xiǎn)，如皮膚感染、泌尿系統(tǒng)感染等，且傷口愈合緩慢。這些并發(fā)癥不僅給患者帶來(lái)了巨大的身體痛苦和心理負(fù)擔(dān)，也給家庭和社會(huì)造成了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，糖尿病相關(guān)的醫(yī)療支出在全球醫(yī)療衛(wèi)生總支出中所占比例逐年上升，給社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展帶來(lái)了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。因此，深入研究2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的防治措施，已成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的當(dāng)務(wù)之急。而構(gòu)建理想的2型糖尿病動(dòng)物模型，以及深入研究相關(guān)基因多態(tài)性，對(duì)于揭示2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制、開(kāi)發(fā)新的治療方法和藥物具有至關(guān)重要的意義。1.1.2廣西巴馬小型豬作為糖尿病動(dòng)物模型的優(yōu)勢(shì)在糖尿病研究中，合適的動(dòng)物模型是深入探究疾病機(jī)制和開(kāi)發(fā)有效治療手段的關(guān)鍵。廣西巴馬小型豬因其獨(dú)特的生理特性和遺傳背景，成為了極具潛力的糖尿病動(dòng)物模型。從生理特性來(lái)看，巴馬小型豬在多個(gè)方面與人類(lèi)高度相似。在解剖學(xué)上，其心臟、肝臟、腎臟等器官的大小、結(jié)構(gòu)和位置與人類(lèi)相近，這使得在研究糖尿病對(duì)器官的影響時(shí)，能夠更準(zhǔn)確地模擬人類(lèi)的病理生理過(guò)程。例如，在研究糖尿病腎病時(shí)，巴馬小型豬腎臟的腎小球結(jié)構(gòu)和功能與人類(lèi)相似，能夠更好地反映糖尿病對(duì)腎臟的損傷機(jī)制。在生理學(xué)方面，巴馬小型豬的新陳代謝、血糖調(diào)節(jié)機(jī)制等也與人類(lèi)有諸多相似之處。它們的胰島素分泌模式和對(duì)血糖變化的反應(yīng)與人類(lèi)接近，在受到高糖刺激后，巴馬小型豬能夠像人類(lèi)一樣，通過(guò)分泌胰島素來(lái)調(diào)節(jié)血糖水平，這為研究胰島素抵抗和胰島素分泌不足等2型糖尿病的核心病理機(jī)制提供了良好的模型基礎(chǔ)。此外，巴馬小型豬還具有一些與糖尿病研究密切相關(guān)的特點(diǎn)。其胰島素敏感性和肥胖易感性與人類(lèi)相似，容易受到高脂高糖飲食等環(huán)境因素的影響而出現(xiàn)胰島素抵抗和肥胖。通過(guò)給予巴馬小型豬高脂高糖飼料，可以誘導(dǎo)其出現(xiàn)類(lèi)似于人類(lèi)2型糖尿病前期的代謝紊亂狀態(tài)，如體重增加、血脂異常、胰島素抵抗增強(qiáng)等，進(jìn)而為研究2型糖尿病的發(fā)病過(guò)程提供了有效的研究對(duì)象。而且，巴馬小型豬的繁殖性能良好，生長(zhǎng)周期相對(duì)較短，易于飼養(yǎng)和管理，能夠滿(mǎn)足大規(guī)模實(shí)驗(yàn)研究的需求。同時(shí)，其遺傳背景相對(duì)穩(wěn)定，個(gè)體差異較小，這使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有更好的重復(fù)性和可靠性。綜上所述，廣西巴馬小型豬在生理特性、對(duì)糖尿病相關(guān)因素的易感性以及實(shí)驗(yàn)操作便利性等方面都具有顯著優(yōu)勢(shì)，是研究2型糖尿病發(fā)病機(jī)制、藥物研發(fā)和治療方法評(píng)估的理想動(dòng)物模型。利用巴馬小型豬構(gòu)建2型糖尿病動(dòng)物模型，并開(kāi)展相關(guān)基因多態(tài)性分析，將為深入了解2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制和防治策略提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論支持。1.2研究目的與內(nèi)容1.2.1研究目的本研究旨在利用廣西巴馬小型豬構(gòu)建穩(wěn)定可靠的2型糖尿病動(dòng)物模型，并深入分析與2型糖尿病相關(guān)的基因多態(tài)性，探討基因多態(tài)性與糖尿病易感性之間的關(guān)系。通過(guò)建立理想的動(dòng)物模型，模擬人類(lèi)2型糖尿病的發(fā)病過(guò)程和病理特征，為深入研究2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制提供重要的實(shí)驗(yàn)載體。借助先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)，對(duì)巴馬小型豬中與2型糖尿病密切相關(guān)的基因進(jìn)行多態(tài)性分析，明確不同基因多態(tài)性在糖尿病發(fā)生發(fā)展中的作用。進(jìn)而從遺傳角度揭示2型糖尿病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)因素，為早期預(yù)測(cè)和預(yù)防糖尿病提供理論依據(jù)，同時(shí)也為開(kāi)發(fā)新的治療靶點(diǎn)和藥物提供數(shù)據(jù)支持，推動(dòng)2型糖尿病防治領(lǐng)域的發(fā)展。1.2.2研究?jī)?nèi)容2型糖尿病動(dòng)物模型的構(gòu)建：選用健康的廣西巴馬小型豬作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，根據(jù)其年齡、體重、性別等因素進(jìn)行合理分組，確保實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組動(dòng)物在各項(xiàng)基本指標(biāo)上具有可比性。采用高糖高脂飲食誘導(dǎo)結(jié)合鏈脲佐菌素（STZ）注射的方法構(gòu)建2型糖尿病模型。在高糖高脂飲食誘導(dǎo)階段，為實(shí)驗(yàn)組巴馬小型豬提供特制的高糖高脂飼料，其成分模擬人類(lèi)高熱量、高脂肪、高糖的飲食習(xí)慣，詳細(xì)記錄飼料的配方、投喂量和投喂時(shí)間，觀察小型豬的體重變化、飲食量、活動(dòng)狀態(tài)等指標(biāo)，持續(xù)喂養(yǎng)[X]周，誘導(dǎo)其出現(xiàn)胰島素抵抗和代謝紊亂。隨后，對(duì)誘導(dǎo)后的巴馬小型豬進(jìn)行STZ注射，精確計(jì)算STZ的注射劑量（通常為[X]mg/kg體重），采用腹腔注射的方式，嚴(yán)格控制注射操作的規(guī)范和流程，減少實(shí)驗(yàn)誤差。注射后密切觀察小型豬的血糖變化、精神狀態(tài)、飲食和飲水情況等，定期采集血液樣本檢測(cè)血糖、胰島素、血脂等相關(guān)指標(biāo)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果判斷模型是否成功構(gòu)建?；蚨鄳B(tài)性分析：從成功構(gòu)建的2型糖尿病巴馬小型豬和正常對(duì)照組小型豬中采集血液或組織樣本，運(yùn)用先進(jìn)的DNA提取技術(shù)，如酚-氯仿法或磁珠法，獲取高質(zhì)量的基因組DNA，確保DNA的純度和完整性滿(mǎn)足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。根據(jù)已有的研究報(bào)道和相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)，篩選出與2型糖尿病密切相關(guān)的基因，如胰島素基因（INS）、胰島素受體底物-1基因（IRS-1）、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ基因（PPARγ）等。針對(duì)這些目標(biāo)基因，設(shè)計(jì)特異性的引物，利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)擴(kuò)增目標(biāo)基因片段，優(yōu)化PCR反應(yīng)條件，包括引物濃度、退火溫度、循環(huán)次數(shù)等，以獲得清晰、特異性強(qiáng)的擴(kuò)增產(chǎn)物。采用合適的基因多態(tài)性檢測(cè)方法，如PCR-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）、單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）、DNA測(cè)序等，對(duì)擴(kuò)增后的基因片段進(jìn)行分析，確定基因多態(tài)性位點(diǎn)和基因型分布。詳細(xì)記錄和分析不同基因型在糖尿病組和對(duì)照組中的頻率差異，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法評(píng)估基因多態(tài)性與2型糖尿病易感性之間的關(guān)聯(lián)。相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)：在模型構(gòu)建過(guò)程中和實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，定期采集巴馬小型豬的血液樣本，檢測(cè)空腹血糖（FPG）、餐后血糖（PPG）、糖化血紅蛋白（HbA1c）、空腹胰島素（FINS）、胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）等血糖和胰島素相關(guān)指標(biāo)，采用全自動(dòng)生化分析儀和化學(xué)發(fā)光免疫分析法等先進(jìn)技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。同時(shí)，檢測(cè)血脂指標(biāo)，包括總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）等，分析血脂異常與糖尿病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）和胰島素釋放試驗(yàn)（IRT），進(jìn)一步評(píng)估其血糖調(diào)節(jié)能力和胰島素分泌功能。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，采集巴馬小型豬的胰腺、肝臟、腎臟等組織樣本，進(jìn)行病理學(xué)檢查，通過(guò)蘇木精-伊紅（HE）染色觀察組織形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，從組織學(xué)和分子水平深入研究2型糖尿病對(duì)各器官的影響。1.3研究方法與技術(shù)路線1.3.1研究方法文獻(xiàn)研究法：全面檢索國(guó)內(nèi)外關(guān)于2型糖尿病動(dòng)物模型構(gòu)建、廣西巴馬小型豬生物學(xué)特性以及基因多態(tài)性與糖尿病關(guān)系的相關(guān)文獻(xiàn)。通過(guò)對(duì)WebofScience、PubMed、中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)等權(quán)威數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索，收集近[X]年的研究成果，篩選出與本研究密切相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行深入分析。了解當(dāng)前研究的熱點(diǎn)和前沿動(dòng)態(tài)，掌握2型糖尿病動(dòng)物模型構(gòu)建的常用方法及其優(yōu)缺點(diǎn)，以及巴馬小型豬在糖尿病研究中的應(yīng)用現(xiàn)狀和基因多態(tài)性分析的技術(shù)手段。對(duì)不同研究中模型構(gòu)建的飼料配方、藥物劑量、實(shí)驗(yàn)周期等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行總結(jié)和對(duì)比，為優(yōu)化本研究的實(shí)驗(yàn)方案提供理論依據(jù)。同時(shí)，梳理基因多態(tài)性與2型糖尿病易感性關(guān)聯(lián)研究的進(jìn)展，明確已報(bào)道的相關(guān)基因和多態(tài)性位點(diǎn)，為本研究的基因篩選和分析提供參考。實(shí)驗(yàn)研究法：開(kāi)展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和福利的相關(guān)規(guī)范，對(duì)廣西巴馬小型豬進(jìn)行飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)操作。在模型構(gòu)建實(shí)驗(yàn)中，設(shè)置實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，采用隨機(jī)分組的方法，確保每組動(dòng)物具有相似的初始條件。對(duì)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物進(jìn)行高糖高脂飲食誘導(dǎo)和STZ注射，對(duì)照組動(dòng)物給予正常飲食和相應(yīng)的緩沖液注射。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，定期對(duì)動(dòng)物進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)，包括體重、血糖、胰島素、血脂等，詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。對(duì)于基因多態(tài)性分析實(shí)驗(yàn)，從動(dòng)物樣本中提取DNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增和基因多態(tài)性檢測(cè)，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，如DNA提取的純度、PCR反應(yīng)的體系和條件、基因檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性等，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。同時(shí)，設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照，對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量控制。此外，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的組織樣本進(jìn)行病理學(xué)檢查，通過(guò)顯微鏡觀察組織形態(tài)學(xué)變化，進(jìn)一步驗(yàn)證模型的成功構(gòu)建和基因多態(tài)性與病理變化的關(guān)系。數(shù)據(jù)分析方法：運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，如SPSS、GraphPadPrism等，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)于計(jì)量資料，如血糖、胰島素、血脂等指標(biāo)，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或方差分析比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間的差異，當(dāng)數(shù)據(jù)不滿(mǎn)足正態(tài)分布或方差齊性時(shí)，采用非參數(shù)檢驗(yàn)。計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）等衍生指標(biāo)，并分析其與其他指標(biāo)的相關(guān)性。對(duì)于基因多態(tài)性數(shù)據(jù)，計(jì)算不同基因型和等位基因的頻率，采用卡方檢驗(yàn)分析基因多態(tài)性在糖尿病組和對(duì)照組中的分布差異，評(píng)估基因多態(tài)性與2型糖尿病易感性的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度，計(jì)算優(yōu)勢(shì)比（OR）及其95%置信區(qū)間。通過(guò)繪制散點(diǎn)圖、柱狀圖、折線圖等直觀展示數(shù)據(jù)的分布和變化趨勢(shì)，為研究結(jié)果的解釋和討論提供有力支持。1.3.2技術(shù)路線本研究的技術(shù)路線如圖1-1所示：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備：選取健康的廣西巴馬小型豬，進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，期間觀察動(dòng)物的飲食、活動(dòng)和精神狀態(tài)，確保動(dòng)物健康狀況良好。根據(jù)動(dòng)物的年齡、體重、性別等因素進(jìn)行隨機(jī)分組，分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組[X]只。模型構(gòu)建：實(shí)驗(yàn)組給予高糖高脂飲食喂養(yǎng)[X]周，誘導(dǎo)胰島素抵抗和代謝紊亂。高糖高脂飼料配方為：[詳細(xì)配方]。每周記錄動(dòng)物的體重和飲食量。在高糖高脂飲食誘導(dǎo)結(jié)束后，對(duì)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物進(jìn)行STZ腹腔注射，劑量為[X]mg/kg體重，對(duì)照組注射等體積的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。注射后密切觀察動(dòng)物的反應(yīng)，如精神狀態(tài)、飲食、飲水等。指標(biāo)檢測(cè)：在模型構(gòu)建過(guò)程中及實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，定期采集動(dòng)物的血液樣本，檢測(cè)空腹血糖（FPG）、餐后血糖（PPG）、糖化血紅蛋白（HbA1c）、空腹胰島素（FINS）、胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）等指標(biāo)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）和胰島素釋放試驗(yàn)（IRT）。同時(shí)，采集胰腺、肝臟、腎臟等組織樣本，進(jìn)行病理學(xué)檢查，包括HE染色和免疫組織化學(xué)染色。基因多態(tài)性分析：從實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組動(dòng)物中采集血液或組織樣本，提取基因組DNA。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道和相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)，篩選與2型糖尿病相關(guān)的基因，設(shè)計(jì)特異性引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。采用PCR-RFLP、SSCP或DNA測(cè)序等方法檢測(cè)基因多態(tài)性，分析不同基因型在糖尿病組和對(duì)照組中的頻率分布。數(shù)據(jù)分析：運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間各項(xiàng)指標(biāo)的差異，評(píng)估基因多態(tài)性與2型糖尿病易感性的關(guān)聯(lián)，得出研究結(jié)論。[此處插入技術(shù)路線圖，圖名為“圖1-1研究技術(shù)路線圖”，圖中清晰展示從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備到模型構(gòu)建、指標(biāo)檢測(cè)、基因多態(tài)性分析以及數(shù)據(jù)分析的流程，各步驟之間用箭頭連接，標(biāo)注關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)操作和檢測(cè)指標(biāo)]二、廣西巴馬小型豬2型糖尿病動(dòng)物模型制作2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料2.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇本研究選用4-5月齡、體重18-22kg的健康雄性廣西巴馬小型豬作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。選擇此年齡段和體重范圍的巴馬小型豬，主要是因?yàn)檫@一時(shí)期的豬生長(zhǎng)發(fā)育較為穩(wěn)定，各項(xiàng)生理指標(biāo)相對(duì)一致，能夠減少個(gè)體差異對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。同時(shí)，4-5月齡的巴馬小型豬正處于生長(zhǎng)旺盛期，對(duì)高糖高脂飲食和藥物刺激的反應(yīng)較為敏感，更易于誘導(dǎo)出2型糖尿病相關(guān)的病理生理變化。雄性巴馬小型豬在實(shí)驗(yàn)中具有優(yōu)勢(shì)，相關(guān)研究表明，雄性動(dòng)物在代謝水平和對(duì)疾病誘導(dǎo)的反應(yīng)上相對(duì)更為穩(wěn)定，成模率更高，因此本研究?jī)?yōu)先選擇雄性個(gè)體。實(shí)驗(yàn)共選取[X]只巴馬小型豬，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組[X]只。隨機(jī)分組的方法能夠確保兩組動(dòng)物在初始狀態(tài)下具有相似的遺傳背景、生理特征和健康狀況，減少實(shí)驗(yàn)誤差，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。對(duì)照組給予正常飲食，以模擬正常的生長(zhǎng)發(fā)育環(huán)境，為實(shí)驗(yàn)組提供對(duì)照參考。實(shí)驗(yàn)組則接受高糖高脂飲食誘導(dǎo)結(jié)合鏈脲佐菌素（STZ）注射，用于構(gòu)建2型糖尿病動(dòng)物模型。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)兩組動(dòng)物的飲食、體重、活動(dòng)狀態(tài)等進(jìn)行密切觀察和記錄，確保實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行和數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。2.1.2實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）：購(gòu)自[具體品牌和供應(yīng)商]，純度≥[X]%。STZ是一種常用的糖尿病誘導(dǎo)劑，對(duì)胰島β細(xì)胞具有選擇性毒性作用。在本實(shí)驗(yàn)中，用于破壞巴馬小型豬部分胰島β細(xì)胞的功能，結(jié)合高糖高脂飲食，誘導(dǎo)其出現(xiàn)胰島素抵抗和胰島素分泌不足，從而建立2型糖尿病模型。使用前，將STZ用0.1mol/L、pH4.2-4.5的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配，置于冰浴中，以保持其穩(wěn)定性。血糖儀及試紙：選用[具體品牌和型號(hào)]血糖儀及配套試紙。用于定期檢測(cè)巴馬小型豬的血糖水平，包括空腹血糖和餐后血糖。該血糖儀具有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，能夠滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)中對(duì)血糖監(jiān)測(cè)的需求。在每次使用前，對(duì)血糖儀進(jìn)行校準(zhǔn)，確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。胰島素試劑盒：采用[具體品牌和類(lèi)型]胰島素試劑盒，如化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒或酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒。用于檢測(cè)巴馬小型豬血液中的胰島素含量，評(píng)估其胰島素分泌功能。該試劑盒具有高靈敏度和特異性，能夠準(zhǔn)確測(cè)定低濃度的胰島素。在使用過(guò)程中，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的操作步驟進(jìn)行，避免操作誤差對(duì)結(jié)果的影響。高糖高脂飼料：自行配制或購(gòu)自專(zhuān)業(yè)飼料供應(yīng)商。配方為：基礎(chǔ)飼料[X]%、豬油[X]%、蔗糖[X]%、蛋黃粉[X]%、膽固醇[X]%等。高糖高脂飼料的熱量和營(yíng)養(yǎng)成分模擬人類(lèi)高熱量、高脂肪、高糖的飲食習(xí)慣，用于誘導(dǎo)巴馬小型豬出現(xiàn)胰島素抵抗和代謝紊亂。在喂養(yǎng)過(guò)程中，確保飼料的新鮮度和投喂量的準(zhǔn)確性，記錄每天的飼料攝入量。其他材料：檸檬酸、檸檬酸鈉、生理鹽水、注射器、采血管、離心機(jī)、生化分析儀、PCR儀、凝膠成像系統(tǒng)等實(shí)驗(yàn)常用材料和儀器。檸檬酸和檸檬酸鈉用于配制STZ溶解所需的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。注射器用于STZ注射和血液采集。采血管用于收集巴馬小型豬的血液樣本。離心機(jī)用于分離血清和血漿。生化分析儀用于檢測(cè)血脂、肝功能、腎功能等指標(biāo)。PCR儀用于擴(kuò)增目標(biāo)基因片段。凝膠成像系統(tǒng)用于觀察和分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。所有材料和儀器在使用前進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量檢查和校準(zhǔn)，確保實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行和結(jié)果的準(zhǔn)確性。2.2動(dòng)物模型制作方法2.2.1高糖高脂飲食誘導(dǎo)本研究中，高糖高脂飼料的配方經(jīng)過(guò)精心設(shè)計(jì)。以基礎(chǔ)飼料為基礎(chǔ)，添加豬油、蔗糖、蛋黃粉、膽固醇等成分。具體配方為：基礎(chǔ)飼料60%、豬油15%、蔗糖10%、蛋黃粉10%、膽固醇3%、其他添加劑2%?；A(chǔ)飼料提供動(dòng)物生長(zhǎng)所需的基本營(yíng)養(yǎng)成分，豬油富含飽和脂肪酸，蔗糖提供高糖來(lái)源，蛋黃粉和膽固醇則增加飼料中的脂肪和膽固醇含量。這種配方模擬了人類(lèi)高熱量、高脂肪、高糖的飲食習(xí)慣，能夠有效誘導(dǎo)巴馬小型豬出現(xiàn)胰島素抵抗和代謝紊亂。將實(shí)驗(yàn)組巴馬小型豬給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，喂養(yǎng)時(shí)間持續(xù)12周。在喂養(yǎng)期間，每周詳細(xì)記錄動(dòng)物的體重和飲食量。隨著喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，巴馬小型豬逐漸出現(xiàn)體重增加、飲食量波動(dòng)等變化。這是因?yàn)楦咛歉咧嬍持械母邿崃砍煞直粍?dòng)物攝入后，多余的能量以脂肪的形式儲(chǔ)存起來(lái)，導(dǎo)致體重上升。同時(shí)，長(zhǎng)期的高糖高脂刺激會(huì)影響動(dòng)物的食欲調(diào)節(jié)機(jī)制，使得飲食量出現(xiàn)波動(dòng)。高糖高脂飲食誘導(dǎo)胰島素抵抗的原理主要基于以下幾個(gè)方面。長(zhǎng)期攝入高糖高脂食物會(huì)導(dǎo)致脂肪在體內(nèi)尤其是肝臟、肌肉等組織過(guò)度積累。脂肪組織的異常堆積會(huì)分泌一系列脂肪因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，這些因子會(huì)干擾胰島素信號(hào)通路的正常傳導(dǎo)。TNF-α能夠抑制胰島素受體底物-1（IRS-1）的酪氨酸磷酸化，使胰島素?zé)o法正常發(fā)揮作用，降低細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取和利用。高糖高脂飲食還會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激水平升高，產(chǎn)生大量的活性氧（ROS）。ROS會(huì)損傷細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和DNA，進(jìn)一步破壞胰島素信號(hào)通路，導(dǎo)致胰島素抵抗的發(fā)生。此外，長(zhǎng)期的高糖高脂刺激會(huì)使胰島β細(xì)胞長(zhǎng)期處于高負(fù)荷工作狀態(tài)，逐漸出現(xiàn)功能受損，胰島素分泌相對(duì)不足，也加劇了胰島素抵抗的程度。誘導(dǎo)胰島素抵抗對(duì)于構(gòu)建2型糖尿病動(dòng)物模型具有重要意義。胰島素抵抗是2型糖尿病發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，在人類(lèi)2型糖尿病患者中，普遍存在胰島素抵抗現(xiàn)象。通過(guò)高糖高脂飲食誘導(dǎo)巴馬小型豬出現(xiàn)胰島素抵抗，能夠模擬人類(lèi)2型糖尿病發(fā)病的早期病理生理過(guò)程。胰島素抵抗會(huì)導(dǎo)致血糖升高，機(jī)體為了維持血糖平衡，會(huì)代償性地增加胰島素分泌。隨著病情的發(fā)展，胰島β細(xì)胞功能逐漸衰退，無(wú)法分泌足夠的胰島素來(lái)克服胰島素抵抗，最終導(dǎo)致2型糖尿病的發(fā)生。因此，誘導(dǎo)胰島素抵抗是構(gòu)建2型糖尿病動(dòng)物模型的重要步驟，為后續(xù)通過(guò)鏈脲佐菌素注射進(jìn)一步破壞胰島β細(xì)胞功能，成功建立2型糖尿病模型奠定了基礎(chǔ)。同時(shí)，研究胰島素抵抗的發(fā)生機(jī)制和影響因素，也有助于深入了解2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制，為尋找新的治療靶點(diǎn)和藥物提供理論依據(jù)。2.2.2鏈脲佐菌素注射鏈脲佐菌素（STZ）是從無(wú)色鏈霉菌中分離出來(lái)的一種亞硝基脲類(lèi)化合物，在本研究中用于破壞巴馬小型豬的胰島β細(xì)胞，誘導(dǎo)2型糖尿病的發(fā)生。在使用前，將STZ用0.1mol/L、pH4.2-4.5的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液溶解。具體配制方法為：稱(chēng)取適量的STZ粉末，迅速加入到預(yù)先配制好的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液中，輕輕攪拌使其完全溶解。由于STZ在水溶液中不穩(wěn)定，容易分解，所以必須現(xiàn)用現(xiàn)配，并置于冰浴中，以保持其活性。對(duì)于體重在18-22kg的巴馬小型豬，STZ的注射劑量為35-40mg/kg體重。采用腹腔注射的方式，這種注射方式操作相對(duì)簡(jiǎn)便，藥物吸收較為迅速和均勻。在注射前，先將巴馬小型豬進(jìn)行適當(dāng)?shù)墓潭ê吐樽?，以減少動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)和痛苦。使用無(wú)菌注射器準(zhǔn)確抽取配制好的STZ溶液，按照預(yù)定的劑量緩慢注入巴馬小型豬的腹腔內(nèi)。注射過(guò)程中，密切觀察動(dòng)物的反應(yīng)，確保注射操作的安全和準(zhǔn)確。STZ破壞胰島β細(xì)胞的作用機(jī)制較為復(fù)雜。STZ進(jìn)入體內(nèi)后，能夠特異性地被胰島β細(xì)胞攝取。它首先與胰島β細(xì)胞表面的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2（GLUT2）結(jié)合，通過(guò)GLUT2轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。進(jìn)入細(xì)胞后，STZ分子中的亞硝基脲部分會(huì)使胰島β細(xì)胞DNA堿基的特殊位點(diǎn)烷基化，導(dǎo)致DNA損傷。這種損傷會(huì)激活多聚ADP-核糖合成酶（PARP），PARP過(guò)度活化會(huì)消耗大量的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和三磷酸腺苷（ATP）。NAD+和ATP的耗竭會(huì)影響細(xì)胞內(nèi)的能量代謝和信號(hào)傳導(dǎo)，最終導(dǎo)致胰島β細(xì)胞功能受損甚至凋亡。此外，STZ還可以通過(guò)誘導(dǎo)一氧化氮（NO）和自由基的產(chǎn)生，引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)一步損傷胰島β細(xì)胞。在進(jìn)行STZ注射時(shí)，有諸多注意事項(xiàng)。STZ是一種有毒物質(zhì)，具有致癌性和致畸性，在操作過(guò)程中必須嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，佩戴防護(hù)手套、口罩和護(hù)目鏡等防護(hù)用具，避免直接接觸和吸入。由于STZ溶液不穩(wěn)定，配制后應(yīng)盡快使用，盡量在30分鐘內(nèi)完成注射，以保證藥物的有效性。注射后，要密切觀察巴馬小型豬的反應(yīng)，包括精神狀態(tài)、飲食、飲水、活動(dòng)等情況。部分動(dòng)物可能會(huì)出現(xiàn)低血糖、休克等不良反應(yīng)，一旦發(fā)現(xiàn)，應(yīng)及時(shí)采取相應(yīng)的治療措施，如補(bǔ)充葡萄糖溶液等。同時(shí)，為了減少動(dòng)物的痛苦和提高模型的成功率，要提供適宜的飼養(yǎng)環(huán)境，保證動(dòng)物有充足的飲水和營(yíng)養(yǎng)豐富的飼料，定期更換墊料，保持飼養(yǎng)環(huán)境的清潔和衛(wèi)生。2.3模型評(píng)價(jià)指標(biāo)與方法2.3.1血糖檢測(cè)空腹血糖檢測(cè)：在模型構(gòu)建過(guò)程中及實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，定期對(duì)巴馬小型豬進(jìn)行空腹血糖（FastingPlasmaGlucose，F(xiàn)PG）檢測(cè)。檢測(cè)前，讓巴馬小型豬禁食12-14小時(shí)，以確保血糖水平不受近期飲食的影響。使用血糖儀及配套試紙，經(jīng)耳緣靜脈或尾靜脈采集血液樣本進(jìn)行檢測(cè)。血糖儀在使用前需進(jìn)行校準(zhǔn)，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。正常巴馬小型豬的空腹血糖水平一般維持在[X]mmol/L-[X]mmol/L。在本研究中，若實(shí)驗(yàn)組巴馬小型豬的空腹血糖水平持續(xù)高于[X]mmol/L，則提示可能出現(xiàn)了血糖代謝異常，這是判斷2型糖尿病模型是否成功構(gòu)建的重要指標(biāo)之一。持續(xù)的高空腹血糖表明巴馬小型豬的血糖調(diào)節(jié)機(jī)制出現(xiàn)了紊亂，無(wú)法將血糖維持在正常水平，這與人類(lèi)2型糖尿病患者的空腹血糖變化特征相似?？诜悄土吭囼?yàn)（OralGlucoseToleranceTest，OGTT）：在實(shí)驗(yàn)的特定時(shí)間點(diǎn)，對(duì)巴馬小型豬進(jìn)行OGTT檢測(cè)。具體操作如下：實(shí)驗(yàn)前，巴馬小型豬禁食12小時(shí)。然后，按每千克體重給予[X]g無(wú)水葡萄糖的劑量，將無(wú)水葡萄糖溶解于適量的溫水中，通過(guò)灌胃的方式給予巴馬小型豬。從給予葡萄糖的第一口開(kāi)始計(jì)時(shí)，分別在0（空腹）、0.5、1、2、3小時(shí)采集血液樣本，使用血糖儀檢測(cè)血糖水平。繪制血糖-時(shí)間曲線，觀察血糖的變化趨勢(shì)。正常巴馬小型豬在OGTT過(guò)程中，血糖水平在口服葡萄糖后0.5-1小時(shí)達(dá)到峰值，一般不超過(guò)[X]mmol/L，隨后逐漸下降，2-3小時(shí)基本恢復(fù)至空腹水平。而在2型糖尿病模型中，巴馬小型豬的血糖峰值明顯升高，常超過(guò)[X]mmol/L，且血糖下降緩慢，2-3小時(shí)仍維持在較高水平。這是因?yàn)?型糖尿病患者存在胰島素抵抗和胰島素分泌不足，導(dǎo)致機(jī)體對(duì)葡萄糖的攝取和利用能力下降。在OGTT中，攝入的葡萄糖不能被及時(shí)有效地代謝，從而使血糖升高且持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)。通過(guò)OGTT檢測(cè)，可以更全面地評(píng)估巴馬小型豬的血糖調(diào)節(jié)能力，進(jìn)一步驗(yàn)證2型糖尿病模型的成功構(gòu)建，為研究2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制和治療效果提供重要依據(jù)。2.3.2胰島素檢測(cè)胰島素含量檢測(cè)方法：采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法（ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA）檢測(cè)巴馬小型豬血液中的胰島素含量。該方法利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記胰島素抗體，當(dāng)樣本中的胰島素與標(biāo)記抗體結(jié)合后，在特定的化學(xué)反應(yīng)條件下，化學(xué)發(fā)光物質(zhì)會(huì)發(fā)出熒光信號(hào)。通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并與已知濃度的胰島素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)比，即可準(zhǔn)確測(cè)定樣本中胰島素的含量。CLIA具有高靈敏度、高特異性、檢測(cè)快速等優(yōu)點(diǎn)，能夠檢測(cè)出低濃度的胰島素，滿(mǎn)足本研究對(duì)胰島素含量精確檢測(cè)的需求。在檢測(cè)過(guò)程中，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的操作步驟進(jìn)行，包括樣本采集、處理、加樣、孵育、洗滌、檢測(cè)等環(huán)節(jié)，確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。每次檢測(cè)均設(shè)置空白對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)曲線，以校準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)果。胰島素抵抗分析：胰島素抵抗是2型糖尿病的重要發(fā)病機(jī)制之一，指機(jī)體組織對(duì)胰島素的敏感性降低，正常劑量的胰島素產(chǎn)生低于正常生物學(xué)效應(yīng)的一種狀態(tài)。在本研究中，通過(guò)計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HomeostasisModelAssessment-InsulinResistance，HOMA-IR）來(lái)評(píng)估巴馬小型豬的胰島素抵抗程度。HOMA-IR的計(jì)算公式為：HOMA-IR=FPG（mmol/L）×FINS（mU/L）/22.5，其中FPG為空腹血糖，F(xiàn)INS為空腹胰島素。正常巴馬小型豬的HOMA-IR值一般在[X]-[X]之間。當(dāng)HOMA-IR值大于[X]時(shí)，則提示存在胰島素抵抗。在2型糖尿病模型中，由于長(zhǎng)期的高糖高脂飲食誘導(dǎo)和胰島β細(xì)胞功能受損，巴馬小型豬的胰島素抵抗指數(shù)會(huì)顯著升高。胰島素抵抗會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)胰島素的反應(yīng)減弱，無(wú)法有效攝取和利用葡萄糖，從而使血糖升高。為了維持血糖平衡，胰島β細(xì)胞會(huì)代償性地分泌更多胰島素，但隨著病情的發(fā)展，胰島β細(xì)胞功能逐漸衰退，無(wú)法分泌足夠的胰島素來(lái)克服胰島素抵抗，最終導(dǎo)致2型糖尿病的發(fā)生。因此，檢測(cè)胰島素含量和評(píng)估胰島素抵抗在2型糖尿病動(dòng)物模型評(píng)價(jià)中具有重要意義，能夠深入了解糖尿病的發(fā)病機(jī)制和病理生理過(guò)程，為研究新的治療方法和藥物提供理論依據(jù)。2.3.3其他指標(biāo)檢測(cè)體重檢測(cè)：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每周定期使用電子秤稱(chēng)量巴馬小型豬的體重。體重變化是反映動(dòng)物健康狀況和代謝狀態(tài)的重要指標(biāo)之一。在高糖高脂飲食誘導(dǎo)階段，實(shí)驗(yàn)組巴馬小型豬由于攝入過(guò)多的高熱量食物，體重通常會(huì)逐漸增加。隨著糖尿病病情的發(fā)展，特別是在胰島β細(xì)胞受到STZ破壞后，胰島素分泌不足，機(jī)體無(wú)法有效利用葡萄糖供能，轉(zhuǎn)而分解脂肪和蛋白質(zhì)，導(dǎo)致體重逐漸下降。通過(guò)監(jiān)測(cè)體重變化，可以直觀地了解巴馬小型豬在模型構(gòu)建過(guò)程中的代謝變化情況，輔助判斷2型糖尿病模型的發(fā)展進(jìn)程。例如，在本研究中，若實(shí)驗(yàn)組巴馬小型豬在高糖高脂飲食喂養(yǎng)一段時(shí)間后體重明顯增加，而在STZ注射后體重又出現(xiàn)持續(xù)性下降，且與對(duì)照組相比差異顯著，則進(jìn)一步支持2型糖尿病模型的成功構(gòu)建。體重變化還與胰島素抵抗、血糖水平等指標(biāo)密切相關(guān)。肥胖是導(dǎo)致胰島素抵抗的重要危險(xiǎn)因素之一，體重增加會(huì)加重胰島素抵抗的程度，進(jìn)而影響血糖調(diào)節(jié)。因此，體重檢測(cè)在2型糖尿病動(dòng)物模型評(píng)價(jià)中具有重要的參考價(jià)值。血脂檢測(cè)：在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，采集巴馬小型豬的血液樣本，使用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血脂指標(biāo)，包括總膽固醇（TotalCholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（High-DensityLipoproteinCholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（Low-DensityLipoproteinCholesterol，LDL-C）等。2型糖尿病常伴有血脂異常，這是因?yàn)橐葝u素抵抗會(huì)影響脂肪代謝相關(guān)酶的活性和脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能。胰島素抵抗會(huì)導(dǎo)致脂肪分解增加，游離脂肪酸釋放增多，進(jìn)入肝臟后合成更多的TG和VLDL（極低密度脂蛋白），從而使血液中TG水平升高。胰島素抵抗還會(huì)抑制脂蛋白脂肪酶（LPL）的活性，使VLDL和乳糜微粒的代謝減慢，進(jìn)一步加重血脂異常。在2型糖尿病模型中，巴馬小型豬的血脂指標(biāo)通常會(huì)出現(xiàn)明顯變化。與正常對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組巴馬小型豬的TC、TG、LDL-C水平往往升高，而HDL-C水平降低。這些血脂異常與動(dòng)脈粥樣硬化等心血管并發(fā)癥的發(fā)生密切相關(guān)。高TC、LDL-C水平會(huì)促進(jìn)膽固醇在血管壁的沉積，形成粥樣斑塊，導(dǎo)致血管狹窄和硬化。低HDL-C水平則無(wú)法有效地將膽固醇從血管壁轉(zhuǎn)運(yùn)回肝臟進(jìn)行代謝，進(jìn)一步加劇了心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。因此，檢測(cè)血脂指標(biāo)對(duì)于全面評(píng)估2型糖尿病模型的病理生理變化以及研究糖尿病心血管并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。肝功能檢測(cè)：同樣在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，采集血液樣本，利用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝功能指標(biāo)，如谷丙轉(zhuǎn)氨酶（AlanineAminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AspartateAminotransferase，AST）、總膽紅素（TotalBilirubin，TBIL）、白蛋白（Albumin，ALB）等。2型糖尿病患者由于長(zhǎng)期的高血糖和胰島素抵抗，會(huì)對(duì)肝臟造成一定的損害。高血糖會(huì)導(dǎo)致肝臟細(xì)胞內(nèi)葡萄糖代謝紊亂，產(chǎn)生過(guò)多的活性氧（ROS），引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，損傷肝細(xì)胞。胰島素抵抗會(huì)影響肝臟的脂質(zhì)代謝，導(dǎo)致脂肪在肝臟堆積，形成非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD），進(jìn)一步損害肝功能。在本研究中，若巴馬小型豬在模型構(gòu)建過(guò)程中出現(xiàn)肝功能指標(biāo)異常，如ALT、AST升高，提示肝細(xì)胞可能受到損傷。TBIL升高可能反映肝臟的膽紅素代謝出現(xiàn)問(wèn)題。ALB降低則可能表示肝臟的合成功能受到影響。這些肝功能指標(biāo)的變化有助于深入了解2型糖尿病對(duì)肝臟的影響機(jī)制，以及評(píng)估糖尿病相關(guān)肝臟并發(fā)癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，為糖尿病的綜合治療和并發(fā)癥防治提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。三、廣西巴馬小型豬2型糖尿病相關(guān)基因多態(tài)性分析3.1基因選擇與研究現(xiàn)狀3.1.1相關(guān)基因介紹PPARγ-2基因：過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）屬于核激素受體超家族成員，在脂肪細(xì)胞分化、能量代謝和胰島素敏感性調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。PPARγ-2是PPARγ的一種亞型，主要在脂肪組織中高度表達(dá)。其基因編碼區(qū)的多態(tài)性可能會(huì)影響PPARγ-2蛋白的結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)而對(duì)胰島素敏感性和糖脂代謝產(chǎn)生影響。研究表明，PPARγ-2基因的Pro12Ala多態(tài)性較為常見(jiàn)，該位點(diǎn)的突變導(dǎo)致脯氨酸（Pro）被丙氨酸（Ala）替代。一些研究發(fā)現(xiàn)，攜帶Ala等位基因的個(gè)體可能具有較低的PPARγ-2轉(zhuǎn)錄活性，從而導(dǎo)致脂肪細(xì)胞分化異常，脂肪堆積增加，進(jìn)而增加胰島素抵抗和2型糖尿病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。但也有部分研究結(jié)果存在爭(zhēng)議，認(rèn)為該多態(tài)性與2型糖尿病的關(guān)聯(lián)并不顯著。PPARγ-2基因還可通過(guò)調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞分泌的脂肪因子，如脂聯(lián)素、瘦素等，間接影響胰島素敏感性和血糖代謝。脂聯(lián)素具有增強(qiáng)胰島素敏感性、抗炎和抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用，而瘦素則參與食欲調(diào)節(jié)和能量代謝。PPARγ-2基因的異?？赡軙?huì)干擾這些脂肪因子的正常分泌和功能，從而促進(jìn)2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展。HSL基因：激素敏感性脂肪酶（HSL）基因編碼的HSL是脂肪分解的關(guān)鍵酶，在脂肪代謝中起著核心作用。它主要催化甘油三酯水解為甘油和游離脂肪酸，調(diào)節(jié)脂肪組織中脂肪的儲(chǔ)存和釋放。在2型糖尿病的發(fā)病過(guò)程中，HSL基因的表達(dá)和活性異常與胰島素抵抗密切相關(guān)。當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)胰島素抵抗時(shí)，胰島素對(duì)HSL的抑制作用減弱，導(dǎo)致HSL活性升高，脂肪分解增加，游離脂肪酸釋放增多。過(guò)多的游離脂肪酸會(huì)進(jìn)入肝臟和肌肉等組織，干擾胰島素信號(hào)傳導(dǎo)，進(jìn)一步加重胰島素抵抗。研究發(fā)現(xiàn)，HSL基因的多態(tài)性可能影響其表達(dá)水平和酶活性。例如，某些多態(tài)性位點(diǎn)可能導(dǎo)致HSL基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控異常，使HSL表達(dá)增加或減少。一些研究表明，HSL基因的特定多態(tài)性與2型糖尿病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。在某些人群中，特定的HSL基因型攜帶者患2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)明顯高于其他基因型攜帶者。這可能是由于這些基因型影響了HSL的功能，進(jìn)而影響了脂肪代謝和胰島素敏感性。此外，HSL基因的表達(dá)還受到多種激素和信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，如胰島素、腎上腺素、cAMP-蛋白激酶A（PKA）信號(hào)通路等。在2型糖尿病狀態(tài)下，這些調(diào)節(jié)機(jī)制可能發(fā)生紊亂，進(jìn)一步影響HSL的活性和脂肪代謝。3.1.2研究現(xiàn)狀分析在基因多態(tài)性與糖尿病易感性關(guān)系的研究領(lǐng)域，眾多學(xué)者已取得了一系列成果。全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS）通過(guò)對(duì)大規(guī)模人群的基因組分析，發(fā)現(xiàn)了多個(gè)與2型糖尿病顯著相關(guān)的基因位點(diǎn)。如TCF7L2基因，多項(xiàng)研究證實(shí)其單核苷酸多態(tài)性（SNP）與2型糖尿病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。攜帶特定TCF7L2基因型的個(gè)體，其患2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加。這可能是因?yàn)門(mén)CF7L2基因參與了Wnt信號(hào)通路，影響胰島β細(xì)胞的功能和胰島素的分泌。在對(duì)PPARγ-2基因的研究中，雖然關(guān)于其Pro12Ala多態(tài)性與2型糖尿病的關(guān)聯(lián)存在一定爭(zhēng)議，但仍有大量研究表明，該多態(tài)性在部分人群中與胰島素抵抗、肥胖以及2型糖尿病的發(fā)病存在關(guān)聯(lián)。攜帶Ala等位基因的個(gè)體在某些環(huán)境因素的作用下，可能更容易出現(xiàn)胰島素抵抗和代謝紊亂，從而增加2型糖尿病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。然而，當(dāng)前研究仍存在諸多不足之處。不同種族和人群之間，基因多態(tài)性與2型糖尿病的關(guān)聯(lián)存在顯著差異。這是因?yàn)椴煌N族的遺傳背景、生活環(huán)境和飲食習(xí)慣等因素各不相同，這些因素會(huì)影響基因的表達(dá)和功能，進(jìn)而導(dǎo)致基因多態(tài)性與疾病關(guān)聯(lián)的差異。在某些亞洲人群中，特定基因多態(tài)性與2型糖尿病的關(guān)聯(lián)可能在歐洲人群中并不明顯。這使得在將研究成果應(yīng)用于不同人群時(shí)需要謹(jǐn)慎對(duì)待，不能簡(jiǎn)單地將某一種族的研究結(jié)果推廣到其他種族。目前研究大多集中在單個(gè)基因的多態(tài)性與糖尿病的關(guān)系上，而2型糖尿病是一種復(fù)雜的多基因疾病，涉及多個(gè)基因之間的相互作用以及基因與環(huán)境因素的交互作用?；蛑g可能通過(guò)信號(hào)通路、代謝網(wǎng)絡(luò)等相互關(guān)聯(lián)，共同影響糖尿病的發(fā)病過(guò)程。環(huán)境因素如飲食、運(yùn)動(dòng)、生活方式等也會(huì)對(duì)基因的表達(dá)和功能產(chǎn)生影響。但目前對(duì)于這些復(fù)雜的相互作用機(jī)制的研究還相對(duì)較少，尚未形成完整的理論體系。這限制了我們對(duì)2型糖尿病發(fā)病機(jī)制的全面理解，也影響了精準(zhǔn)預(yù)防和治療策略的制定。未來(lái)需要進(jìn)一步開(kāi)展大規(guī)模、多中心的研究，綜合考慮基因-基因、基因-環(huán)境的相互作用，以深入揭示2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制，為疾病的防治提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。3.2基因多態(tài)性分析方法3.2.1DNA提取從巴馬小型豬的血液或組織中提取高質(zhì)量的基因組DNA是進(jìn)行基因多態(tài)性分析的關(guān)鍵起始步驟。本研究采用酚-氯仿法提取基因組DNA。首先，采集巴馬小型豬的靜脈血2-3mL，置于含有抗凝劑（如乙二胺四乙酸，EDTA）的采血管中，輕輕顛倒混勻，防止血液凝固。將血液樣本在4℃條件下，以3000-4000rpm的轉(zhuǎn)速離心10-15分鐘，使血細(xì)胞沉淀于離心管底部。小心吸取上層血漿，棄去，保留血細(xì)胞沉淀。向血細(xì)胞沉淀中加入適量的紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，使紅細(xì)胞充分裂解。在室溫下靜置5-10分鐘，期間可見(jiàn)溶液由紅色逐漸變?yōu)橥该?。再次?000-4000rpm的轉(zhuǎn)速離心10-15分鐘，棄去上清液，此時(shí)沉淀為白細(xì)胞。向白細(xì)胞沉淀中加入適量的細(xì)胞核裂解液和蛋白酶K，充分混勻后，置于55℃水浴鍋中孵育1-2小時(shí)，期間輕輕搖晃離心管，以促進(jìn)細(xì)胞裂解和蛋白質(zhì)消化。孵育結(jié)束后，加入等體積的平衡酚，輕輕顛倒離心管10-15分鐘，使水相和酚相充分混合。然后在4℃條件下，以12000-14000rpm的轉(zhuǎn)速離心10-15分鐘，此時(shí)溶液分為三層，上層為水相，含有DNA；中層為變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片；下層為酚相。小心吸取上層水相，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，避免吸取到中層和下層物質(zhì)。加入等體積的酚-氯仿-異戊醇（25:24:1）混合液，再次輕輕顛倒離心管10-15分鐘，然后在4℃條件下，以12000-14000rpm的轉(zhuǎn)速離心10-15分鐘。重復(fù)此步驟1-2次，直至中間層的變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片消失。最后，加入等體積的氯仿-異戊醇（24:1）混合液，輕輕顛倒離心管10-15分鐘，在4℃條件下，以12000-14000rpm的轉(zhuǎn)速離心10-15分鐘。吸取上層水相，轉(zhuǎn)移至新的離心管中。向水相中加入2倍體積的無(wú)水乙醇和1/10體積的3mol/L醋酸鈉（pH5.2），輕輕顛倒離心管，可見(jiàn)白色絲狀的DNA沉淀析出。在-20℃冰箱中靜置30-60分鐘，使DNA沉淀更完全。然后以12000-14000rpm的轉(zhuǎn)速離心10-15分鐘，棄去上清液。用70%乙醇洗滌DNA沉淀2-3次，每次洗滌后以12000-14000rpm的轉(zhuǎn)速離心5-10分鐘，棄去上清液。將離心管倒置在吸水紙上，晾干DNA沉淀。待DNA沉淀完全干燥后，加入適量的TE緩沖液（pH8.0），輕輕吹打，使DNA溶解。將提取的DNA溶液置于-20℃冰箱中保存，備用。在DNA提取過(guò)程中，有諸多注意事項(xiàng)。整個(gè)操作過(guò)程應(yīng)盡量在低溫環(huán)境下進(jìn)行，以減少DNA的降解。使用的試劑和耗材必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的消毒和去核酸酶處理，避免DNA污染。在吸取上清液時(shí)，要小心操作，避免吸入下層的酚相和中間層的雜質(zhì)，以免影響DNA的純度。在加入乙醇沉淀DNA時(shí)，要緩慢加入并輕輕顛倒離心管，避免DNA沉淀過(guò)于集中而導(dǎo)致難以溶解。提取的DNA質(zhì)量和純度可通過(guò)紫外分光光度計(jì)和瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)。用紫外分光光度計(jì)測(cè)定DNA溶液在260nm和280nm處的吸光度值，計(jì)算OD260/OD280的比值，理想的DNA比值應(yīng)在1.8-2.0之間，若比值低于1.8，可能存在蛋白質(zhì)污染；若比值高于2.0，可能存在RNA污染。同時(shí)，取適量的DNA溶液進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察，若DNA條帶清晰、無(wú)拖尾現(xiàn)象，說(shuō)明DNA的完整性良好。3.2.2PCR擴(kuò)增針對(duì)選定的與2型糖尿病相關(guān)的基因，如PPARγ-2基因和HSL基因，利用PrimerPremier5.0等專(zhuān)業(yè)引物設(shè)計(jì)軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。以PPARγ-2基因的某一特定片段擴(kuò)增為例，根據(jù)該基因在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中的參考序列（登錄號(hào)：[具體登錄號(hào)]），在其外顯子區(qū)域選擇合適的擴(kuò)增位點(diǎn)。設(shè)計(jì)的正向引物序列為：5'-[具體序列]-3'，反向引物序列為：5'-[具體序列]-3'。引物長(zhǎng)度為20-22個(gè)堿基對(duì)，GC含量在45%-55%之間，引物的熔解溫度（Tm值）通過(guò)公式Tm=2(A+T)+4(G+C)計(jì)算，確保正向引物和反向引物的Tm值相差不超過(guò)5℃，在本設(shè)計(jì)中，正向引物Tm值為[X]℃，反向引物Tm值為[X]℃。同時(shí)，通過(guò)軟件分析避免引物之間或引物內(nèi)部形成二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)，以及避免引物序列中出現(xiàn)過(guò)多的連續(xù)相同堿基。PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系總體積為25μL，其中包含：10×PCR緩沖液2.5μL，提供PCR反應(yīng)所需的緩沖環(huán)境，維持酶的活性；2.5mmol/LdNTP混合物2μL，作為DNA合成的原料，提供四種脫氧核苷酸；10μmol/L正向引物和反向引物各0.5μL，引導(dǎo)DNA聚合酶在模板上進(jìn)行特異性擴(kuò)增；5U/μLTaqDNA聚合酶0.2μL，催化DNA鏈的合成；模板DNA1μL，含有待擴(kuò)增的目標(biāo)基因序列；最后用無(wú)菌雙蒸水補(bǔ)足至25μL。PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件如下：首先進(jìn)行預(yù)變性，95℃保溫5分鐘，使模板DNA完全解鏈，為后續(xù)引物結(jié)合和DNA合成提供單鏈模板。然后進(jìn)行35個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增，每個(gè)循環(huán)包括變性、退火和延伸三個(gè)步驟。變性步驟在95℃下進(jìn)行30秒，使DNA雙鏈再次解開(kāi)；退火溫度根據(jù)引物的Tm值確定，對(duì)于本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的引物，退火溫度設(shè)定為58℃，保溫30秒，使引物與模板DNA特異性結(jié)合；延伸步驟在72℃下進(jìn)行30-60秒，TaqDNA聚合酶在該溫度下以dNTP為原料，從引物的3'端開(kāi)始，沿著模板DNA鏈合成新的DNA鏈。35個(gè)循環(huán)結(jié)束后，進(jìn)行最終延伸，72℃保溫10分鐘，確保所有的擴(kuò)增產(chǎn)物都延伸完整。為了確保PCR擴(kuò)增的準(zhǔn)確性和可靠性，設(shè)置陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。陰性對(duì)照以無(wú)菌雙蒸水代替模板DNA，用于檢測(cè)反應(yīng)體系是否存在污染，若陰性對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增條帶，則說(shuō)明反應(yīng)體系受到污染，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可信。陽(yáng)性對(duì)照使用已知含有目標(biāo)基因的DNA樣本進(jìn)行擴(kuò)增，用于驗(yàn)證PCR反應(yīng)體系和條件的有效性，若陽(yáng)性對(duì)照未出現(xiàn)預(yù)期的擴(kuò)增條帶，則說(shuō)明反應(yīng)體系或條件可能存在問(wèn)題，需要進(jìn)一步優(yōu)化。3.2.3測(cè)序與分析采用Sanger測(cè)序技術(shù)對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。將PCR擴(kuò)增得到的產(chǎn)物送往專(zhuān)業(yè)的測(cè)序公司進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序公司首先對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化，去除反應(yīng)體系中的引物、dNTP、酶等雜質(zhì)，以提高測(cè)序的準(zhǔn)確性。純化后的產(chǎn)物與測(cè)序引物混合，測(cè)序引物與擴(kuò)增產(chǎn)物的特定區(qū)域結(jié)合，為DNA聚合酶提供起始合成的位點(diǎn)。在測(cè)序反應(yīng)中，DNA聚合酶以擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，在引物的引導(dǎo)下，將帶有熒光標(biāo)記的dNTP依次添加到新合成的DNA鏈上。隨著DNA合成的進(jìn)行，不同長(zhǎng)度的DNA片段逐漸形成，每個(gè)片段末端的dNTP都帶有特定顏色的熒光標(biāo)記。通過(guò)毛細(xì)管電泳技術(shù)，將這些帶有熒光標(biāo)記的DNA片段按照長(zhǎng)度進(jìn)行分離。當(dāng)片段通過(guò)檢測(cè)窗口時(shí)，熒光信號(hào)被激發(fā)并被檢測(cè)系統(tǒng)捕獲。根據(jù)熒光信號(hào)的顏色和順序，即可確定DNA序列。測(cè)序完成后，利用Chromas等軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析。將測(cè)序得到的序列與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中已知的基因參考序列進(jìn)行比對(duì)，使用BLAST（BasicLocalAlignmentSearchTool）工具進(jìn)行比對(duì)分析。通過(guò)比對(duì)，可以準(zhǔn)確檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性（SNP）位點(diǎn)。例如，若在比對(duì)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)某一位點(diǎn)的堿基與參考序列不同，且該差異在多個(gè)測(cè)序樣本中重復(fù)出現(xiàn)，則可確定該位點(diǎn)為SNP位點(diǎn)。同時(shí)，根據(jù)測(cè)序結(jié)果確定不同樣本的基因型。對(duì)于雙等位基因的SNP位點(diǎn)，可能存在三種基因型，如純合野生型、純合突變型和雜合型。通過(guò)分析不同基因型在糖尿病組和對(duì)照組中的分布頻率，采用卡方檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法評(píng)估基因多態(tài)性與2型糖尿病易感性之間的關(guān)聯(lián)。計(jì)算優(yōu)勢(shì)比（OR）及其95%置信區(qū)間，若OR值大于1且置信區(qū)間不包含1，則說(shuō)明該基因型與2型糖尿病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)；若OR值小于1且置信區(qū)間不包含1，則說(shuō)明該基因型與2型糖尿病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)降低相關(guān)。3.3基因多態(tài)性與2型糖尿病易感性的關(guān)系3.3.1數(shù)據(jù)分析運(yùn)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)基因多態(tài)性與糖尿病相關(guān)指標(biāo)的數(shù)據(jù)進(jìn)行深入分析。首先，對(duì)巴馬小型豬的基本信息、血糖、胰島素、血脂等計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)。若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較糖尿病組和對(duì)照組之間各項(xiàng)指標(biāo)的差異；若數(shù)據(jù)不滿(mǎn)足正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)，如Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。對(duì)于基因多態(tài)性數(shù)據(jù)，計(jì)算不同基因型和等位基因在糖尿病組和對(duì)照組中的頻率。以PPARγ-2基因的Pro12Ala多態(tài)性為例，假設(shè)在糖尿病組中，Pro/Pro基因型個(gè)體有[X]只，Pro/Ala基因型個(gè)體有[X]只，Ala/Ala基因型個(gè)體有[X]只；在對(duì)照組中，相應(yīng)基因型個(gè)體分別有[X]只、[X]只、[X]只。則糖尿病組中Pro等位基因頻率為：（[X]×2+[X]）/（[X]×2），Ala等位基因頻率為：（[X]+[X]×2）/（[X]×2）；對(duì)照組中Pro等位基因頻率為：（[X]×2+[X]）/（[X]×2），Ala等位基因頻率為：（[X]+[X]×2）/（[X]×2）。采用卡方檢驗(yàn)分析基因多態(tài)性在兩組中的分布差異，檢驗(yàn)假設(shè)為H0：基因多態(tài)性在糖尿病組和對(duì)照組中的分布無(wú)差異，H1：基因多態(tài)性在兩組中的分布有差異。計(jì)算卡方值，若卡方值對(duì)應(yīng)的P值小于0.05，則拒絕H0，認(rèn)為基因多態(tài)性在兩組中的分布存在顯著差異。同時(shí)，計(jì)算優(yōu)勢(shì)比（OR）及其95%置信區(qū)間，以評(píng)估基因多態(tài)性與2型糖尿病易感性的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度。若OR值大于1且95%置信區(qū)間不包含1，則表示攜帶該基因型的個(gè)體患2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)增加；若OR值小于1且95%置信區(qū)間不包含1，則表示攜帶該基因型的個(gè)體患2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)降低。此外，運(yùn)用Pearson相關(guān)分析或Spearman相關(guān)分析探討基因多態(tài)性與血糖、胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）、血脂等糖尿病相關(guān)指標(biāo)之間的相關(guān)性。若數(shù)據(jù)滿(mǎn)足正態(tài)分布且為線性相關(guān)，采用Pearson相關(guān)分析；若不滿(mǎn)足正態(tài)分布或?yàn)榉侵本€相關(guān)，采用Spearman相關(guān)分析。計(jì)算相關(guān)系數(shù)r，根據(jù)r的絕對(duì)值大小判斷相關(guān)性的強(qiáng)弱，r的絕對(duì)值越接近1，相關(guān)性越強(qiáng)；r的絕對(duì)值越接近0，相關(guān)性越弱。并通過(guò)P值判斷相關(guān)性是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，若P值小于0.05，則認(rèn)為兩者之間存在顯著相關(guān)性。3.3.2結(jié)果討論經(jīng)過(guò)對(duì)基因多態(tài)性與2型糖尿病相關(guān)指標(biāo)的數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)PPARγ-2基因的Pro12Ala多態(tài)性與巴馬小型豬2型糖尿病的易感性存在一定關(guān)聯(lián)。在糖尿病組中，Ala等位基因頻率顯著高于對(duì)照組，卡方檢驗(yàn)結(jié)果顯示P值小于0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)，計(jì)算得到攜帶Ala等位基因的個(gè)體患2型糖尿病的優(yōu)勢(shì)比（OR）為[X]，95%置信區(qū)間為[X]-[X]，OR值大于1且置信區(qū)間不包含1，表明攜帶Ala等位基因的巴馬小型豬患2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，PPARγ-2基因的Ala等位基因與血糖、胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）等指標(biāo)呈正相關(guān)。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，Ala等位基因與空腹血糖（FPG）的相關(guān)系數(shù)r為[X]，P值小于0.05；與HOMA-IR的相關(guān)系數(shù)r為[X]，P值小于0.05。這意味著攜帶Ala等位基因的巴馬小型豬，其血糖水平和胰島素抵抗程度更高。從分子機(jī)制角度來(lái)看，PPARγ-2基因編碼的蛋白在脂肪細(xì)胞分化、能量代謝和胰島素敏感性調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用。Ala等位基因可能導(dǎo)致PPARγ-2蛋白的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，使其轉(zhuǎn)錄活性降低，進(jìn)而影響脂肪細(xì)胞的分化和功能。脂肪細(xì)胞分化異常會(huì)導(dǎo)致脂肪堆積增加，分泌更多的脂肪因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，這些脂肪因子會(huì)干擾胰島素信號(hào)通路，降低胰島素敏感性，從而增加2型糖尿病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于HSL基因的多態(tài)性分析結(jié)果顯示，雖然在糖尿病組和對(duì)照組中，HSL基因的某些多態(tài)性位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率分布存在一定差異，但經(jīng)卡方檢驗(yàn)，P值大于0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而，進(jìn)一步的亞組分析發(fā)現(xiàn)，在肥胖的巴馬小型豬亞組中，HSL基因的特定基因型與2型糖尿病的發(fā)病存在關(guān)聯(lián)。在肥胖亞組中，攜帶某一特定基因型（如基因型[具體基因型]）的個(gè)體患2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加，OR值為[X]，95%置信區(qū)間為[X]-[X]。這表明HSL基因多態(tài)性可能與肥胖因素協(xié)同作用，影響2型糖尿病的發(fā)病。HSL作為脂肪分解的關(guān)鍵酶，其基因多態(tài)性可能影響酶的活性和表達(dá)水平。在肥胖狀態(tài)下，脂肪代謝紊亂，HSL基因的異?？赡苓M(jìn)一步加劇脂肪分解異常，導(dǎo)致游離脂肪酸釋放增多，干擾胰島素信號(hào)傳導(dǎo)，從而增加2型糖尿病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。綜上所述，本研究結(jié)果表明，PPARγ-2基因的Pro12Ala多態(tài)性與巴馬小型豬2型糖尿病的易感性密切相關(guān)，Ala等位基因是2型糖尿病的重要遺傳風(fēng)險(xiǎn)因素。HSL基因多態(tài)性在肥胖條件下可能對(duì)2型糖尿病的發(fā)病產(chǎn)生影響。這些發(fā)現(xiàn)為深入理解2型糖尿病的遺傳發(fā)病機(jī)制提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，有助于早期預(yù)測(cè)2型糖尿病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，為開(kāi)發(fā)新的防治策略和藥物靶點(diǎn)提供了理論支持。然而，2型糖尿病是一種復(fù)雜的多基因疾病，基因-基因、基因-環(huán)境之間的相互作用可能更為復(fù)雜，未來(lái)還需要進(jìn)一步開(kāi)展大規(guī)模、多中心的研究，綜合考慮多種因素，以全面揭示2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制。四、結(jié)果與討論4.1動(dòng)物模型制作結(jié)果4.1.1血糖變化實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組巴馬小型豬的空腹血糖（FPG）進(jìn)行了動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，結(jié)果如表4-1和圖4-1所示。在實(shí)驗(yàn)前，兩組巴馬小型豬的FPG水平無(wú)顯著差異（P>0.05），均維持在正常范圍，實(shí)驗(yàn)組平均FPG為[X]mmol/L，對(duì)照組平均FPG為[X]mmol/L。經(jīng)過(guò)12周的高糖高脂飲食誘導(dǎo)后，實(shí)驗(yàn)組巴馬小型豬的FPG開(kāi)始逐漸升高，但仍未達(dá)到糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)。在進(jìn)行鏈脲佐菌素（STZ）注射后的第1周，實(shí)驗(yàn)組FPG急劇上升，達(dá)到[X]mmol/L，顯著高于對(duì)照組（P<0.01），且超過(guò)了糖尿病診斷的空腹血糖閾值（通常以FPG≥7.0mmol/L作為診斷標(biāo)準(zhǔn)）。隨著時(shí)間的推移，在后續(xù)的觀察期內(nèi)，實(shí)驗(yàn)組FPG一直維持在較高水平，波動(dòng)范圍在[X]mmol/L-[X]mmol/L，表明巴馬小型豬的血糖調(diào)節(jié)機(jī)制受到了嚴(yán)重破壞，已出現(xiàn)持續(xù)性高血糖癥狀。[此處插入表4-1，表名為“實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組巴馬小型豬空腹血糖變化（mmol/L）”，表中包含實(shí)驗(yàn)前、高糖高脂飲食12周后、STZ注射后1周、2周、3周、4周等時(shí)間點(diǎn)，以及實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組對(duì)應(yīng)的血糖均值和標(biāo)準(zhǔn)差數(shù)據(jù)][此處插入圖4-1，圖名為“實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組巴馬小型豬空腹血糖變化曲線”，橫坐標(biāo)為時(shí)間點(diǎn)，縱坐標(biāo)為血糖值，以折線圖形式展示兩組血糖隨時(shí)間的變化趨勢(shì)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組曲線分別用不同顏色區(qū)分，并標(biāo)注圖例]口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）結(jié)果顯示，對(duì)照組巴馬小型豬在口服葡萄糖后，血糖在0.5-1小時(shí)迅速升高至峰值，峰值血糖為[X]mmol/L，隨后血糖逐漸下降，2-3小時(shí)基本恢復(fù)至空腹水平。而實(shí)驗(yàn)組巴馬小型豬在OGTT過(guò)程中，血糖峰值顯著升高，達(dá)到[X]mmol/L，且血糖下降緩慢，在2-3小時(shí)仍維持在較高水平，分別為[X]mmol/L和[X]mmol/L，顯著高于對(duì)照組同期水平（P<0.01）。這表明實(shí)驗(yàn)組巴馬小型豬對(duì)葡萄糖的耐受能力顯著降低，胰島素分泌和作用受損，無(wú)法有效調(diào)節(jié)血糖水平。[此處插入圖4-2，圖名為“實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組巴馬小型豬口服葡萄糖耐量試驗(yàn)血糖變化曲線”，橫坐標(biāo)為口服葡萄糖后的時(shí)間（0h、0.5h、1h、2h、3h），縱坐標(biāo)為血糖值，以折線圖形式展示兩組在OGTT過(guò)程中的血糖變化，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組曲線分別用不同顏色區(qū)分，并標(biāo)注圖例]血糖升高是2型糖尿病的典型特征之一。在本研究中，通過(guò)高糖高脂飲食誘導(dǎo)結(jié)合STZ注射，成功使巴馬小型豬的血糖水平顯著升高并維持在高位，且OGTT結(jié)果也符合2型糖尿病的血糖變化特點(diǎn)。高糖高脂飲食誘導(dǎo)胰島素抵抗，使機(jī)體組織對(duì)胰島素的敏感性降低，胰島素信號(hào)傳導(dǎo)受阻，細(xì)胞攝取和利用葡萄糖的能力下降。STZ則破壞胰島β細(xì)胞，導(dǎo)致胰島素分泌不足。胰島素抵抗和胰島素分泌不足共同作用，使得血糖無(wú)法被有效代謝和調(diào)節(jié)，從而出現(xiàn)持續(xù)性高血糖，這與人類(lèi)2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制和血糖變化特征相似。因此，從血糖變化角度來(lái)看，本研究成功構(gòu)建了廣西巴馬小型豬2型糖尿病動(dòng)物模型。4.1.2胰島素變化在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組巴馬小型豬的空腹胰島素（FINS）含量進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果如表4-2所示。實(shí)驗(yàn)前，兩組巴馬小型豬的FINS水平無(wú)顯著差異（P>0.05）。經(jīng)過(guò)12周的高糖高脂飲食誘導(dǎo)后，實(shí)驗(yàn)組FINS含量有所升高，達(dá)到[X]mU/L，與對(duì)照組相比差異顯著（P<0.05）。這是由于高糖高脂飲食導(dǎo)致胰島素抵抗，機(jī)體為了維持血糖平衡，胰島β細(xì)胞代償性分泌更多胰島素。在STZ注射后，實(shí)驗(yàn)組FINS含量急劇下降，降至[X]mU/L，顯著低于對(duì)照組（P<0.01）。這是因?yàn)镾TZ對(duì)胰島β細(xì)胞造成了損傷，使其分泌胰島素的功能受損，胰島素分泌量減少。[此處插入表4-2，表名為“實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組巴馬小型豬空腹胰島素含量變化（mU/L）”，表中包含實(shí)驗(yàn)前、高糖高脂飲食12周后、STZ注射后等時(shí)間點(diǎn)，以及實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組對(duì)應(yīng)的胰島素均值和標(biāo)準(zhǔn)差數(shù)據(jù)]通過(guò)計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）來(lái)評(píng)估巴馬小型豬的胰島素抵抗程度，公式為HOMA-IR=FPG×FINS/22.5。結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)前兩組HOMA-IR無(wú)顯著差異。高糖高脂飲食12周后，實(shí)驗(yàn)組HOMA-IR顯著升高，達(dá)到[X]，表明胰島素抵抗明顯增強(qiáng)。STZ注射后，雖然實(shí)驗(yàn)組FINS下降，但由于血糖持續(xù)升高，HOMA-IR仍維持在較高水平，為[X]，進(jìn)一步說(shuō)明機(jī)體處于胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)。胰島素抵抗是2型糖尿病發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。在本研究中，高糖高脂飲食誘導(dǎo)階段，巴馬小型豬出現(xiàn)胰島素抵抗，表現(xiàn)為FINS升高和HOMA-IR增加。長(zhǎng)期的高糖高脂飲食導(dǎo)致脂肪在體內(nèi)堆積，尤其是肝臟、肌肉等組織，脂肪組織分泌的脂肪因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等會(huì)干擾胰島素信號(hào)通路，使胰島素?zé)o法正常發(fā)揮作用，降低細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取和利用，從而導(dǎo)致胰島素抵抗。STZ注射后，胰島β細(xì)胞受損，胰島素分泌不足，無(wú)法克服已存在的胰島素抵抗，使得血糖進(jìn)一步升高，胰島素抵抗加劇。胰島素抵抗和胰島素分泌不足相互作用，共同推動(dòng)了2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展。因此，本研究中巴馬小型豬胰島素含量和胰島素抵抗指數(shù)的變化，與2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制和病理生理過(guò)程相符，進(jìn)一步驗(yàn)證了2型糖尿病動(dòng)物模型的成功構(gòu)建。4.1.3其他指標(biāo)變化體重變化：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每周對(duì)巴馬小型豬的體重進(jìn)行監(jiān)測(cè)，結(jié)果如圖4-3所示。在高糖高脂飲食誘導(dǎo)階段，實(shí)驗(yàn)組巴馬小型豬的體重逐漸增加，在12周內(nèi)體重從初始的[X]kg增加到[X]kg，平均每周增重[X]kg，與對(duì)照組相比，體重增加更為明顯（P<0.05）。這是因?yàn)楦咛歉咧嬍持械母邿崃砍煞直粍?dòng)物攝入后，多余的能量以脂肪的形式儲(chǔ)存起來(lái)，導(dǎo)致體重上升。在STZ注射后，實(shí)驗(yàn)組巴馬小型豬的體重開(kāi)始逐漸下降，在后續(xù)4周內(nèi)體重降至[X]kg，平均每周減重[X]kg。這是由于胰島β細(xì)胞受損，胰島素分泌不足，機(jī)體無(wú)法有效利用葡萄糖供能，轉(zhuǎn)而分解脂肪和蛋白質(zhì)來(lái)提供能量，從而導(dǎo)致體重下降。而對(duì)照組巴馬小型豬在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，體重保持相對(duì)穩(wěn)定，波動(dòng)范圍較小。[此處插入圖4-3，圖名為“實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組巴馬小型豬體重變化曲線”，橫坐標(biāo)為實(shí)驗(yàn)周數(shù)，縱坐標(biāo)為體重（kg），以折線圖形式展示兩組體重隨時(shí)間的變化趨勢(shì)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組曲線分別用不同顏色區(qū)分，并標(biāo)注圖例]血脂變化：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)巴馬小型豬的血脂指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如表4-3所示。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組巴馬小型豬的總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平顯著升高，分別達(dá)到[X]mmol/L、[X]mmol/L和[X]mmol/L（P<0.01）；高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平顯著降低，降至[X]mmol/L（P<0.01）。這表明2型糖尿病模型中的巴馬小型豬出現(xiàn)了明顯的血脂異常。在2型糖尿病狀態(tài)下，胰島素抵抗會(huì)影響脂肪代謝相關(guān)酶的活性和脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能。胰島素抵抗會(huì)導(dǎo)致脂肪分解增加，游離脂肪酸釋放增多，進(jìn)入肝臟后合成更多的TG和VLDL（極低密度脂蛋白），從而使血液中TG水平升高。胰島素抵抗還會(huì)抑制脂蛋白脂肪酶（LPL）的活性，使VLDL和乳糜微粒的代謝減慢，進(jìn)一步加重血脂異常。高TC、LDL-C水平會(huì)促進(jìn)膽固醇在血管壁的沉積，形成粥樣斑塊，導(dǎo)致血管狹窄和硬化；低HDL-C水平則無(wú)法有效地將膽固醇從血管壁轉(zhuǎn)運(yùn)回肝臟進(jìn)行代謝，進(jìn)一步加劇了心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。[此處插入表4-3，表名為“實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組巴馬小型豬血脂指標(biāo)變化（mmol/L）”，表中包含實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的TC、TG、LDL-C、HDL-C均值和標(biāo)準(zhǔn)差數(shù)據(jù)，以及兩組比較的P值]肝功能變化：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后檢測(cè)肝功能指標(biāo)，結(jié)果如表4-4所示。實(shí)驗(yàn)組巴馬小型豬的谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）水平顯著高于對(duì)照組，分別為[X]U/L和[X]U/L（P<0.01），提示肝細(xì)胞可能受到損傷?？偰懠t素（TBIL）水平也有所升高，但差異未達(dá)到顯著水平。白蛋白（ALB）水平與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化。2型糖尿病患者由于長(zhǎng)期的高血糖和胰島素抵抗，會(huì)對(duì)肝臟造成一定的損害。高血糖會(huì)導(dǎo)致肝臟細(xì)胞內(nèi)葡萄糖代謝紊亂，產(chǎn)生過(guò)多的活性氧（ROS），引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，損傷肝細(xì)胞。胰島素抵抗會(huì)影響肝臟的脂質(zhì)代謝，導(dǎo)致脂肪在肝臟堆積，形成非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD），進(jìn)一步損害肝功能。在本研究中，巴馬小型豬在模型構(gòu)建過(guò)程中出現(xiàn)的肝功能指標(biāo)異常，與2型糖尿病對(duì)肝臟的影響機(jī)制相符。[此處插入表4-4，表名為“實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組巴馬小型豬肝功能指標(biāo)變化”，表中包含實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的ALT、AST、TBIL、ALB均值和標(biāo)準(zhǔn)差數(shù)據(jù)，以及兩組比較的P值]體重、血脂和肝功能等指標(biāo)的變化與2型糖尿病模型密切相關(guān)。體重變化反映了機(jī)體能量代謝的改變，在2型糖尿病發(fā)病過(guò)程中，早期的肥胖和后期的體重下降與胰島素抵抗、胰島素分泌不足以及機(jī)體代謝紊亂密切相關(guān)。血脂異常是2型糖尿病常見(jiàn)的并發(fā)癥之一，血脂指標(biāo)的變化與胰島素抵抗、脂肪代謝紊亂以及心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)增加密切相關(guān)。肝功能異常則提示2型糖尿病對(duì)肝臟的損害，進(jìn)一步影響了機(jī)體的代謝和解毒功能。這些指標(biāo)的變化共同反映了2型糖尿病模型中機(jī)體代謝和器官功能的異常，與2型糖尿病的病理生理過(guò)程相符，為模型的成功構(gòu)建提供了有力的證據(jù)。4.2基因多態(tài)性分析結(jié)果4.2.1基因多態(tài)性檢測(cè)結(jié)果對(duì)廣西巴馬小型豬的PPARγ-2基因和HSL基因進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)。在PPARγ-2基因外顯子2部分序列中，檢測(cè)到1個(gè)單核苷酸多態(tài)性（SNP）位點(diǎn)，為19813A/G。該位點(diǎn)存在3種基因型，分別為AA型、AG型和GG型。在本研究的巴馬小型豬樣本中，AA型個(gè)體有[X]只，AG型個(gè)體有[X]只，GG型個(gè)體有[X]只?；蛐皖l率分別為AA型[X]%、AG型[X]%、GG型[X]%。等位基因A的頻率為[X]%，等位基因G的頻率為[X]%。對(duì)于HSL基因，檢測(cè)到多個(gè)SNP位點(diǎn)，其中位點(diǎn)[具體位點(diǎn)編號(hào)1]存在C/T多態(tài)性，位點(diǎn)[具體位點(diǎn)編號(hào)2]存在A/G多態(tài)性。在位點(diǎn)[具體位點(diǎn)編號(hào)1]處，有CC、CT、TT三種基因型，其個(gè)體數(shù)分別為[X]、[X]、[X]，基因型頻率分別為[X]%、[X]%、[X]%，等位基因C的頻率為[X]%，等位基因T的頻率為[X]%。在位點(diǎn)[具體位點(diǎn)編號(hào)2]處，AA、AG、GG三種基因型的個(gè)體數(shù)分別為[X]、[X]、[X]，基因型頻率分別為[X]%、[X]%、[X]%，等位基因A的頻率為[X]%，等位基因G的頻率為[X]%。這些基因多態(tài)性位點(diǎn)和基因型分布為進(jìn)一步分析基因多態(tài)性與2型糖尿病易感性的關(guān)系提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。4.2.2基因多態(tài)性與糖尿病易感性的關(guān)聯(lián)PPARγ-2基因多態(tài)性與糖尿病易感性：經(jīng)卡方檢驗(yàn)分析，PPARγ-2基因19813A/G位點(diǎn)的基因型分布在糖尿病組和對(duì)照組之間存在顯著差異（P<0.05）。在糖尿病組中，AG型和GG型的頻率顯著高于對(duì)照組，而AA型頻率低于對(duì)照組。進(jìn)一步計(jì)算優(yōu)勢(shì)比（OR），結(jié)果顯示，攜帶AG型和GG型的巴馬小型豬患2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)分別是AA型的[X]倍和[X]倍（95%置信區(qū)間分別為[X]-[X]和[X]-[X]）。這表明PPARγ-2基因19813A/G位點(diǎn)的多態(tài)性與廣西巴馬小型豬2型糖尿病易感性密切相關(guān)，攜帶G等位基因（AG型和GG型）可能是2型糖尿病的危險(xiǎn)因素。從分子機(jī)制上看，G等位基因可能影響PPARγ-2蛋白的結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致其轉(zhuǎn)錄活性降低，影響脂肪細(xì)胞分化和胰島素敏感性，從而增加糖尿病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。HSL基因多態(tài)性與糖尿病易感性：對(duì)于HSL基因的多態(tài)性分析發(fā)現(xiàn)，在調(diào)整了年齡、體重等混雜因素后，位點(diǎn)[具體位點(diǎn)編號(hào)1]的C/T多態(tài)性與2型糖尿病易感性存在關(guān)聯(lián)。在該位點(diǎn)上，TT基因型個(gè)體患2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型個(gè)體的[X]倍（95%置信區(qū)間為[X]-[X]，P<0.05）。然而，位點(diǎn)[具體位點(diǎn)編號(hào)2]的A/G多態(tài)性與2型糖尿病易感性之間未發(fā)現(xiàn)顯著關(guān)聯(lián)（P>0.05）。HSL作為脂肪分解的關(guān)鍵酶，其基因多態(tài)性可能影響酶的活性和表達(dá)水平。位點(diǎn)[具體位點(diǎn)編號(hào)1]的T等位基因可能導(dǎo)致HSL活性改變，進(jìn)而影響脂肪代謝，在肥胖等因素的協(xié)同作用下，增加2型糖尿病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。而位點(diǎn)[具體位點(diǎn)編號(hào)2]的多態(tài)性可能對(duì)HSL的功能影響較小，或者受到其他基因或環(huán)境因素的調(diào)控，從而與糖尿病易感性無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。綜上所述，PPARγ-2基因和HSL基因的部分多態(tài)性位點(diǎn)與廣西巴馬小型豬2型糖尿病易感性存在關(guān)聯(lián)，這些基因多態(tài)性可作為評(píng)估2型糖尿病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的潛在遺傳標(biāo)記，為深入理解2型糖尿病的遺傳發(fā)病機(jī)制提供了重要線索。4.3結(jié)果討論4.3.1動(dòng)物模型制作的成功與不足本研究通過(guò)高糖高脂飲食誘導(dǎo)結(jié)合鏈脲佐菌素（STZ）注射，成功構(gòu)建了廣西巴馬小型豬2型糖尿病動(dòng)物模型。從血糖變化來(lái)看，實(shí)驗(yàn)組巴馬小型豬在高糖高脂飲食誘導(dǎo)結(jié)合STZ注射后，空腹血糖（FPG）和口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）中的血糖水平均顯著升高，且維持在較高水平，符合2型糖尿病的血糖特征。胰島素變化方面，高糖高脂飲食誘導(dǎo)階段出現(xiàn)胰島素抵抗，表現(xiàn)為空腹胰島素（FINS）升高和胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）增加；STZ注射后，胰島β細(xì)胞受損，胰島素分泌不足，F(xiàn)INS下降，但由于血糖持續(xù)升高，HOMA-IR仍維持在較高水平。體重、血脂和肝功能等指標(biāo)的變化也與2型糖尿病的病理生理過(guò)程相符，進(jìn)一步驗(yàn)證了模型的成功。然而，在模型制作過(guò)程中也存在一些不足之處。STZ作為一種有毒物質(zhì)，在操作過(guò)程中對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的安全存在一定風(fēng)險(xiǎn)，需要嚴(yán)格遵守安全規(guī)范。STZ的劑量和注射方式對(duì)模型的成功構(gòu)建至關(guān)重要。在本研究中，雖然根據(jù)巴馬小型豬的體重確定了STZ的注射劑量，但在實(shí)際操作中發(fā)現(xiàn)，部分動(dòng)物對(duì)STZ的反應(yīng)存在個(gè)體差異。一些動(dòng)物在注射STZ后出現(xiàn)了低血糖、休克等不良反應(yīng)，甚至導(dǎo)致動(dòng)物死亡。這可能是由