2025年艾梅乙技能操作考試試題及答案一、操作題（共4題，每題20分，合計(jì)80分）（一）HIV快速檢測(cè)試劑（免疫層析法）操作流程及質(zhì)量控制要求：模擬對(duì)門(mén)診患者血清樣本進(jìn)行HIV抗體快速檢測(cè)，需完整演示從樣本接收至結(jié)果判讀的全流程，并說(shuō)明關(guān)鍵質(zhì)量控制環(huán)節(jié)。操作步驟及評(píng)分要點(diǎn)：1.樣本接收與核對(duì)（2分）：核對(duì)樣本標(biāo)識(shí)（姓名、ID號(hào)、采集時(shí)間）與檢測(cè)申請(qǐng)單一致，檢查樣本狀態(tài)（無(wú)溶血、脂血、凝塊，血清量≥0.3ml），記錄樣本接收時(shí)間。2.環(huán)境與試劑準(zhǔn)備（3分）：檢測(cè)環(huán)境溫度控制在15-30℃（需現(xiàn)場(chǎng)確認(rèn)溫度計(jì)讀數(shù)），濕度≤80%；檢查試劑有效期（需展示試劑標(biāo)簽并口述有效期），平衡至室溫（靜置15分鐘）；準(zhǔn)備一次性手套、計(jì)時(shí)器、生物安全垃圾袋、消毒棉球（75%乙醇）。3.加樣操作（5分）：戴手套，用移液器吸取50μl血清樣本（需展示移液器量程調(diào)節(jié)至50μl并確認(rèn)校準(zhǔn)標(biāo)識(shí)），垂直滴加于檢測(cè)卡加樣孔（每孔1滴，避免氣泡），立即啟動(dòng)計(jì)時(shí)器。4.孵育與觀察（5分）：靜置15分鐘（嚴(yán)格計(jì)時(shí)，中途不得移動(dòng)檢測(cè)卡），15-20分鐘內(nèi)判讀結(jié)果（超過(guò)20分鐘結(jié)果無(wú)效需重新檢測(cè)）。觀察檢測(cè)線（T線）與質(zhì)控線（C線）顯色情況：C線未顯色為無(wú)效試驗(yàn)（需復(fù)述原因：試劑失效或操作錯(cuò)誤）；C線顯色、T線未顯色為陰性；C線顯色、T線顯色為陽(yáng)性（需說(shuō)明“陽(yáng)性”為初篩結(jié)果，需進(jìn)一步確證）。5.質(zhì)量控制環(huán)節(jié)（5分）：每批次檢測(cè)需同時(shí)做陽(yáng)性對(duì)照（已知HIV抗體陽(yáng)性血清）和陰性對(duì)照（已知HIV抗體陰性血清），對(duì)照結(jié)果需符合預(yù)期（陽(yáng)性對(duì)照T/C線均顯色，陰性對(duì)照僅C線顯色）；記錄檢測(cè)時(shí)間、操作人員、試劑批號(hào)、對(duì)照結(jié)果；檢測(cè)后廢棄物按醫(yī)療廢物處理（檢測(cè)卡放入黃色醫(yī)療垃圾袋，移液器吸頭放入利器盒，臺(tái)面用1000mg/L含氯消毒液擦拭）。（二）梅毒螺旋體血清學(xué)檢測(cè)（TPPA法）樣本稀釋與加樣操作要求：使用患者血清（1:80稀釋）進(jìn)行TPPA檢測(cè)，需正確完成樣本稀釋、微板加樣及孵育步驟。操作步驟及評(píng)分要點(diǎn)：1.稀釋液準(zhǔn)備（2分）：取專用稀釋液（含阻斷劑），檢查無(wú)渾濁、沉淀（需展示稀釋液瓶身并口述“無(wú)異?！保?。2.樣本初稀釋（4分）：用移液器吸取25μl患者血清（原倍）加入第1孔（標(biāo)記為“1:2”），加25μl稀釋液，吹吸3次混勻；取25μl至第2孔（1:4），重復(fù)稀釋至第6孔（1:64）；第7孔加25μl稀釋液（陰性對(duì)照），第8孔加25μl陽(yáng)性對(duì)照血清（需口述“第1-6孔為患者樣本倍比稀釋，1:2至1:64”）。3.致敏粒子與未致敏粒子加樣（6分）：第1-4孔加25μl未致敏粒子（NS粒子），第5-8孔加25μl致敏粒子（TS粒子）（需核對(duì)試劑瓶標(biāo)簽“NS”“TS”無(wú)誤）；加樣時(shí)移液器頭距孔底2-3mm，避免交叉污染。4.孵育與判讀準(zhǔn)備（5分）：微板水平靜置（避免振動(dòng)），25℃孵育2小時(shí)（需設(shè)置計(jì)時(shí)器并展示）；孵育后輕拍微板側(cè)面，觀察粒子凝集狀態(tài)（需說(shuō)明“NS孔應(yīng)無(wú)凝集，TS孔出現(xiàn)均勻凝集為陽(yáng)性”）。5.關(guān)鍵注意事項(xiàng)（3分）：稀釋過(guò)程中需更換吸頭（每孔1個(gè)）；TS粒子使用前需搖勻（上下顛倒5次）；孵育溫度偏離25℃±2℃時(shí)需延長(zhǎng)或縮短孵育時(shí)間（如20℃需孵育2.5小時(shí)）。（三）乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）ELISA檢測(cè)洗板操作要求：完成包被有抗-HBs的96孔板洗板流程，需正確使用洗板機(jī)并處理異常情況。操作步驟及評(píng)分要點(diǎn)：1.洗板液配制（2分）：用去離子水稀釋濃縮洗板液（10×）至1×（需計(jì)算：100ml濃縮液+900ml水），pH值7.2-7.4（用pH試紙檢測(cè)并口述結(jié)果），無(wú)絮狀物。2.洗板機(jī)參數(shù)設(shè)置（3分）：設(shè)置每孔加液量300μl，浸泡時(shí)間30秒，洗滌次數(shù)5次（需展示洗板機(jī)屏幕參數(shù)并確認(rèn)“浸泡-抽吸”模式）。3.洗板操作（6分）：棄去孔內(nèi)液體（扣于吸水紙上拍干，避免孔間交叉污染）；啟動(dòng)洗板機(jī)，觀察加液是否均勻（無(wú)漏加、溢出現(xiàn)象）；每輪洗滌后拍干（最后一次拍干后倒置10秒，確認(rèn)無(wú)殘留液體）。4.異常情況處理（5分）：若某孔液體未吸凈（可見(jiàn)殘留），用單道移液器吸取殘留液（需更換吸頭）；若洗板機(jī)堵塞（某列無(wú)液體噴出），立即關(guān)閉機(jī)器，檢查針頭是否堵塞（用細(xì)針疏通），更換洗板液后重新洗滌該列。5.質(zhì)量控制（4分）：每塊板洗滌后需做空白對(duì)照（僅加顯色液），OD值應(yīng)≤0.1（需口述“空白孔OD值異常提示洗板不徹底”）；記錄洗板機(jī)型號(hào)、洗板液批號(hào)、洗滌時(shí)間。（四）生物安全柜內(nèi)樣本處理操作（HIV陽(yáng)性血清）要求：在Ⅱ級(jí)A2型生物安全柜內(nèi)完成HIV陽(yáng)性血清的分裝（500μl/管），需符合生物安全規(guī)范。操作步驟及評(píng)分要點(diǎn)：1.安全柜準(zhǔn)備（2分）：提前30分鐘啟動(dòng)安全柜（需確認(rèn)紫外線燈已關(guān)閉，風(fēng)機(jī)運(yùn)行正常，壓差表顯示-10Pa至-15Pa）；用75%乙醇擦拭臺(tái)面（從里向外，從前到后），放置所需物品（移液器、吸頭、離心管、標(biāo)記筆，距前窗10cm，避免阻擋氣流）。2.個(gè)人防護(hù)（3分）：穿戴一次性防護(hù)服（袖口扎緊）、雙層手套（內(nèi)層乳膠，外層丁腈，手套邊緣覆蓋防護(hù)服袖口）、N95口罩（做密合性測(cè)試：雙手捂住口罩呼氣，無(wú)漏氣）、護(hù)目鏡（無(wú)破損）。3.樣本分裝（6分）：打開(kāi)血清管（傾斜45°，避免氣溶膠），用移液器吸取500μl（調(diào)節(jié)量程至500μl，檢查吸頭密封性）；轉(zhuǎn)移至離心管時(shí)，吸頭深入管內(nèi)1/3處緩慢釋放（避免噴濺）；每分裝1管更換吸頭（丟棄至安全柜內(nèi)利器盒）；分裝后旋緊管蓋（確認(rèn)無(wú)液體附著管口）。4.臺(tái)面清潔與廢棄物處理（5分）：操作結(jié)束后，用1000mg/L含氯消毒液擦拭臺(tái)面（作用15分鐘）；陽(yáng)性血清管放入防漏運(yùn)輸盒（內(nèi)層防水袋，外層生物危害標(biāo)識(shí)）；一次性物品放入安全柜內(nèi)黃色醫(yī)療垃圾袋（鵝頸式封口），利器盒滿3/4時(shí)封閉。5.安全柜關(guān)閉（4分）：取出所有物品，關(guān)閉風(fēng)機(jī)前運(yùn)行5分鐘（凈化內(nèi)部空氣）；填寫(xiě)使用記錄（包括操作人員、操作時(shí)間、樣本類型、異常情況）。二、簡(jiǎn)答題（共3題，每題10分，合計(jì)30分）1.簡(jiǎn)述乙肝病毒（HBV）血清學(xué)“大三陽(yáng)”與“小三陽(yáng)”的檢測(cè)指標(biāo)及臨床意義。答案：大三陽(yáng)指標(biāo)為HBsAg（+）、HBeAg（+）、抗-HBc（+），提示病毒復(fù)制活躍，傳染性強(qiáng)；小三陽(yáng)指標(biāo)為HBsAg（+）、抗-HBe（+）、抗-HBc（+），通常提示病毒復(fù)制減弱或停止，傳染性降低（部分患者可能存在HBVDNA陽(yáng)性，需結(jié)合核酸檢測(cè)判斷）。2.梅毒非特異性抗體（RPR）與特異性抗體（TPPA）檢測(cè)的聯(lián)合應(yīng)用原則是什么？答案：RPR用于初篩和療效觀察（滴度變化反映活動(dòng)性），TPPA用于確證（陽(yáng)性提示感染過(guò)梅毒，終身陽(yáng)性）；初篩RPR陽(yáng)性需用TPPA確證，避免生物學(xué)假陽(yáng)性（如自身免疫病、妊娠）；治療后RPR滴度應(yīng)下降4倍以上（如從1:32降至1:8），TPPA仍陽(yáng)性不提示復(fù)發(fā)。3.HIV快速檢測(cè)出現(xiàn)“灰區(qū)”結(jié)果時(shí)應(yīng)如何處理？答案：灰區(qū)指檢測(cè)結(jié)果接近臨界值（OD值在Cut-off值的0.9-1.1倍），需重新檢測(cè)原樣本（用同一試劑重復(fù)）；若重復(fù)結(jié)果仍為灰區(qū)，換用另一種原理快速試劑檢測(cè)（如化學(xué)發(fā)光法）；兩種試劑均灰區(qū)或不一致，需采集靜脈血送確證實(shí)驗(yàn)室做WB試驗(yàn)或核酸檢測(cè)（HIVRNA）；全程記錄樣本信息、檢測(cè)時(shí)間、試劑批號(hào)及處理過(guò)程。三、案例分析題（共1題，40分）患者男性，35歲，因“術(shù)前篩查”就診，檢測(cè)結(jié)果如下：HIV抗體快速檢測(cè)（膠體金法）陽(yáng)性，梅毒RPR1:16陽(yáng)性，TPPA陽(yáng)性，HBsAg陽(yáng)性（ELISA法S/CO=3.2），抗-HBc陽(yáng)性，抗-HBs陰性，HBeAg陰性，抗-HBe陽(yáng)性。問(wèn)題1：請(qǐng)綜合判讀各檢測(cè)結(jié)果的臨床意義。（15分）答案：HIV抗體快速檢測(cè)陽(yáng)性為初篩結(jié)果，需進(jìn)一步做確證試驗(yàn)（如WB或核酸檢測(cè)）以確認(rèn)感染狀態(tài)；梅毒RPR1:16陽(yáng)性、TPPA陽(yáng)性提示現(xiàn)癥梅毒感染（需結(jié)合病史判斷是否為早期或晚期）；乙肝血清學(xué)結(jié)果為HBsAg（+）、抗-HBc（+）、抗-HBe（+）（小三陽(yáng)），HBeAg（-）、抗-HBs（-），提示HBV感染，病毒復(fù)制可能處于低水平（需檢測(cè)HBVDNA定量評(píng)估傳染性）。問(wèn)題2：針對(duì)該患者的樣本處理，需重點(diǎn)注意哪些生物安全事項(xiàng)？（15分）答案：樣本標(biāo)識(shí)需標(biāo)注“HIV初篩陽(yáng)性”“梅毒陽(yáng)性”“乙肝陽(yáng)性”三重生物危害標(biāo)識(shí)；樣本運(yùn)輸需使用雙層防漏容器（內(nèi)層防水袋，外層硬質(zhì)盒），填寫(xiě)《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸包裝說(shuō)明》；實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)時(shí)需在Ⅱ級(jí)生物安全柜內(nèi)操作，避免氣溶膠產(chǎn)生（如禁止反復(fù)吹打樣本）；檢測(cè)后廢棄物分類處理（液體廢棄物用10000mg/L含氯消毒液浸泡2小時(shí)，固體廢棄物高壓蒸汽滅菌（121℃，30分鐘）后按醫(yī)療廢物處理）；檢測(cè)人員需穿戴符合要求的防護(hù)裝備（防護(hù)服、雙層手套、護(hù)目鏡），操作后立即用肥皂流動(dòng)水洗手（時(shí)間≥20秒）。問(wèn)題3：若該患者HIV確證試驗(yàn)（WB）結(jié)果為gp160、gp120、p24條帶陽(yáng)性，應(yīng)如何報(bào)告？后續(xù)需提供哪些醫(yī)療建議？（10分）答案：WB結(jié)果符合HIV感染確診標(biāo)準(zhǔn)（至少2條env帶（gp160/gp120）和1條p24帶陽(yáng)性），應(yīng)報(bào)告“HIV抗體陽(yáng)性”；后續(xù)建議：轉(zhuǎn)介至定點(diǎn)醫(yī)院進(jìn)行CD4+T淋巴細(xì)