無(wú)菌制劑生產(chǎn)工藝操作規(guī)范及指南無(wú)菌制劑（如注射劑、眼用制劑等）直接作用于人體循環(huán)系統(tǒng)或黏膜組織，其質(zhì)量安全與患者用藥安全高度關(guān)聯(lián)。規(guī)范的生產(chǎn)工藝操作是保障無(wú)菌制劑質(zhì)量的核心環(huán)節(jié)，需從環(huán)境控制、設(shè)備管理、工藝執(zhí)行到質(zhì)量監(jiān)控全流程嚴(yán)格把控，以符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GMP）及相關(guān)法規(guī)要求。本文結(jié)合行業(yè)實(shí)踐與法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)，梳理無(wú)菌制劑生產(chǎn)各環(huán)節(jié)的操作規(guī)范與實(shí)施指南，為生產(chǎn)實(shí)踐提供參考。一、生產(chǎn)環(huán)境與設(shè)施管理（一）潔凈區(qū)等級(jí)與監(jiān)測(cè)無(wú)菌制劑生產(chǎn)需在分級(jí)潔凈區(qū)內(nèi)開展（參考GMP附錄《無(wú)菌藥品》）：A級(jí)區(qū)（高風(fēng)險(xiǎn)操作區(qū)，如灌封、凍干加塞等）：動(dòng)態(tài)條件下懸浮粒子（≥0.5μm）≤3520個(gè)/m3、（≥5.0μm）≤20個(gè)/m3；微生物監(jiān)測(cè)（沉降菌）≤1CFU/4小時(shí)，浮游菌≤5CFU/m3。需連續(xù)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)懸浮粒子，每班次監(jiān)測(cè)微生物（沉降菌、浮游菌），監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)需實(shí)時(shí)記錄并趨勢(shì)分析。B級(jí)區(qū)（A級(jí)區(qū)的背景區(qū)域）：動(dòng)態(tài)懸浮粒子（≥0.5μm）≤____個(gè)/m3、（≥5.0μm）≤290個(gè)/m3；微生物（沉降菌）≤5CFU/4小時(shí)，浮游菌≤100CFU/m3。需定期監(jiān)測(cè)（如每班次或每日），監(jiān)測(cè)頻率可根據(jù)生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)調(diào)整。溫濕度、壓差需穩(wěn)定控制：溫度20-24℃，相對(duì)濕度45-60%；A級(jí)區(qū)相對(duì)于相鄰區(qū)域壓差≥10Pa，保證氣流單向流（風(fēng)速0.36-0.54m/s），避免交叉污染。（二）環(huán)境清潔與消毒1.消毒劑選擇與輪換：采用多種消毒劑輪換（如75%乙醇、0.1%新潔爾滅、過(guò)氧化氫噴霧等），每月更換消毒劑類型，避免微生物產(chǎn)生抗性。2.清潔流程：潔凈區(qū)需按“從高潔凈區(qū)到低潔凈區(qū)、從內(nèi)到外”的順序清潔。地面、墻面用專用清潔劑擦拭，設(shè)備表面用75%乙醇消毒；A級(jí)區(qū)需使用無(wú)菌抹布，清潔后需驗(yàn)證殘留（如清潔劑殘留量≤10μg/cm2）。3.消毒頻率：生產(chǎn)前、生產(chǎn)后需全面消毒；連續(xù)生產(chǎn)時(shí)，每班次中間需對(duì)A級(jí)區(qū)進(jìn)行局部消毒（如灌裝機(jī)周圍）；每周進(jìn)行深度清潔（如清潔高效過(guò)濾器風(fēng)口、回風(fēng)口）。（三）人員進(jìn)入潔凈區(qū)規(guī)范1.更衣流程：人員需經(jīng)過(guò)“一般區(qū)更衣→洗手消毒→潔凈區(qū)更衣（穿無(wú)菌服、戴口罩、手套、鞋套）”三級(jí)更衣，無(wú)菌服需定期滅菌（濕熱滅菌121℃×30分鐘），更衣后需在氣鎖間停留≥30秒，確保氣流帶走體表微粒。2.行為規(guī)范：潔凈區(qū)內(nèi)禁止化妝、佩戴首飾，避免快速走動(dòng)、大幅度動(dòng)作（如甩動(dòng)胳膊），減少說(shuō)話頻率（可佩戴無(wú)菌口罩）；操作時(shí)保持與產(chǎn)品/設(shè)備的安全距離（如灌封時(shí)手臂與瓶口距離≥15cm），避免人為污染。二、設(shè)備與器具管理（一）設(shè)備選型與驗(yàn)證無(wú)菌生產(chǎn)設(shè)備需滿足密閉性、易清潔、無(wú)死角設(shè)計(jì)（如灌裝機(jī)采用密閉管道傳輸，凍干機(jī)腔體光滑無(wú)凹陷）。設(shè)備需通過(guò)DQ（設(shè)計(jì)確認(rèn)）、IQ（安裝確認(rèn)）、OQ（運(yùn)行確認(rèn)）、PQ（性能確認(rèn)）：DQ：確認(rèn)設(shè)備設(shè)計(jì)符合法規(guī)（如材質(zhì)為316L不銹鋼）、工藝需求（如灌裝精度±1%）；IQ：驗(yàn)證設(shè)備安裝位置、電氣連接、儀表校準(zhǔn)符合要求；OQ：確認(rèn)設(shè)備在設(shè)定參數(shù)下（如灌裝機(jī)轉(zhuǎn)速、溫度）穩(wěn)定運(yùn)行；PQ：通過(guò)模擬灌裝試驗(yàn)（使用培養(yǎng)基代替藥液，灌裝后培養(yǎng)14天）驗(yàn)證設(shè)備無(wú)菌生產(chǎn)能力，試驗(yàn)需覆蓋最差條件（如最小灌裝量、最快速度）。（二）設(shè)備清潔與滅菌1.清潔方法：設(shè)備表面用專用清潔劑（如堿性清潔劑去除有機(jī)物，酸性清潔劑去除無(wú)機(jī)鹽）清洗，管道需用純化水、注射用水依次沖洗，最終沖洗水需檢測(cè)TOC（總有機(jī)碳）≤0.5mg/L、電導(dǎo)率≤2μS/cm。2.滅菌參數(shù)確認(rèn)：濕熱滅菌設(shè)備需驗(yàn)證滅菌溫度（____℃）、時(shí)間（≥30分鐘）、壓力（0.103-0.116MPa），確保滅菌后微生物殘留≤10CFU/設(shè)備；干熱滅菌設(shè)備需驗(yàn)證溫度（180℃×3小時(shí)或250℃×45分鐘），確保熱分布均勻（腔體內(nèi)溫差≤2℃）。3.滅菌后處理：滅菌后設(shè)備需在無(wú)菌環(huán)境下冷卻（如A級(jí)區(qū)），避免冷卻過(guò)程中引入污染；轉(zhuǎn)移滅菌后器具時(shí)，需使用無(wú)菌轉(zhuǎn)運(yùn)車，全程保持密閉。（三）器具的清洗、滅菌與存放清洗：膠塞、鋁蓋等器具需用注射用水超聲清洗（功率≥40kHz，時(shí)間≥15分鐘），去除表面微粒；滅菌：膠塞采用濕熱滅菌（121℃×30分鐘），鋁蓋采用干熱滅菌（180℃×3小時(shí)），滅菌后需檢測(cè)無(wú)菌性（取滅菌后器具，浸入培養(yǎng)基培養(yǎng)14天，無(wú)微生物生長(zhǎng)）；存放：滅菌后器具需存放在無(wú)菌存放區(qū)（A級(jí)背景下的B級(jí)區(qū)），使用前需檢查包裝完整性，開啟時(shí)需在A級(jí)區(qū)進(jìn)行無(wú)菌操作。三、原輔料與包材管理（一）原輔料質(zhì)量控制1.供應(yīng)商審計(jì)：原輔料供應(yīng)商需通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)，確認(rèn)其生產(chǎn)環(huán)境、質(zhì)量體系符合GMP要求；2.進(jìn)廠檢驗(yàn)：原輔料需檢測(cè)微生物限度（注射用原料需無(wú)菌、無(wú)熱原）、含量、有關(guān)物質(zhì)等，檢驗(yàn)合格后方可放行；3.儲(chǔ)存與有效期：原輔料需按說(shuō)明書要求儲(chǔ)存（如蛋白類原料2-8℃冷藏），定期檢查有效期，近效期原料需優(yōu)先使用，避免過(guò)期。（二）包材處理膠塞/鋁蓋：需經(jīng)過(guò)清洗、硅化（膠塞）、滅菌處理，硅化后膠塞需檢測(cè)硅油含量（≤0.3mg/個(gè)），避免影響產(chǎn)品穩(wěn)定性；玻璃瓶：需用注射用水沖洗，去除內(nèi)表面微粒，沖洗后檢測(cè)可見異物（≤2個(gè)/瓶），合格后烘干（溫度180℃×2小時(shí)）去除熱原。（三）物料轉(zhuǎn)運(yùn)與傳遞物料進(jìn)入潔凈區(qū)前，需在外包裝清潔間用75%乙醇擦拭外包裝，去除表面污染物；傳遞窗使用時(shí)需互鎖關(guān)閉，傳遞后需對(duì)傳遞窗內(nèi)部進(jìn)行消毒（75%乙醇噴霧）；無(wú)菌物料（如滅菌后膠塞）需用無(wú)菌轉(zhuǎn)運(yùn)袋傳遞，避免與非無(wú)菌環(huán)境接觸。四、生產(chǎn)工藝關(guān)鍵操作（一）配制與過(guò)濾1.配液環(huán)境：配液需在C級(jí)區(qū)背景下的A級(jí)區(qū)進(jìn)行，配液罐需預(yù)熱（如100℃×30分鐘）去除熱原，配液用水為注射用水（電導(dǎo)率≤5.1μS/cm，TOC≤0.5mg/L）。2.攪拌與溫度控制：攪拌速度需均勻（如____rpm），避免產(chǎn)生泡沫；配液溫度需根據(jù)原料特性控制（如蛋白類原料2-8℃，普通原料25±2℃）。3.過(guò)濾驗(yàn)證：除菌過(guò)濾前需進(jìn)行完整性測(cè)試（如起泡點(diǎn)試驗(yàn)，濾芯起泡點(diǎn)≥規(guī)定值的80%），過(guò)濾后需檢測(cè)濾液微生物（≤1CFU/100mL）、可見異物（≤2個(gè)/100mL）。（二）灌封操作1.灌裝機(jī)參數(shù)設(shè)置：灌裝量精度需校準(zhǔn)（偏差≤±1%），灌裝速度需與封口設(shè)備匹配（如灌裝100瓶/分鐘，封口速度同步）；2.無(wú)菌操作：灌裝機(jī)操作人員需每小時(shí)檢查手套完整性（充氣試驗(yàn)，無(wú)漏氣），避免裸手接觸瓶口；3.封口質(zhì)量控制：鋁蓋封口后需檢測(cè)密封性（負(fù)壓法，真空度-80kPa，保持30秒無(wú)氣泡），軋蓋后需檢查鋁蓋平整度（無(wú)卷邊、翹邊）。（三）滅菌工藝1.滅菌方法選擇：耐熱制劑（如玻璃瓶裝注射液）采用濕熱滅菌（121℃×20分鐘，F(xiàn)0≥8）；不耐熱制劑（如蛋白類注射液）采用除菌過(guò)濾+終端滅菌（需驗(yàn)證滅菌前微生物負(fù)荷≤10CFU/100mL）。2.滅菌參數(shù)驗(yàn)證：滅菌柜需進(jìn)行熱分布、熱穿透試驗(yàn)，確認(rèn)腔體內(nèi)各點(diǎn)溫度均勻（溫差≤2℃），產(chǎn)品內(nèi)部達(dá)到滅菌溫度；3.滅菌后處理：滅菌后產(chǎn)品需快速冷卻（如從121℃冷卻至40℃，時(shí)間≤30分鐘），避免藥液降解；冷卻后需進(jìn)行檢漏試驗(yàn)（如色水法，浸入色水30分鐘，無(wú)滲漏）。（四）凍干工藝1.凍干曲線設(shè)置：預(yù)凍溫度需低于藥液共晶點(diǎn)（如-40℃×2小時(shí)），升華溫度≤-20℃，解析溫度≤30℃，凍干總時(shí)間需驗(yàn)證（如普通制劑24小時(shí)，蛋白類制劑48小時(shí)）；2.加塞時(shí)機(jī)：凍干結(jié)束后，需在真空狀態(tài)下加塞（避免空氣進(jìn)入引入污染），加塞后破空壓力需≤0.02MPa，防止膠塞彈出；3.凍干后檢測(cè)：凍干產(chǎn)品需檢測(cè)水分含量（≤3%）、復(fù)溶時(shí)間（≤5分鐘），確保產(chǎn)品穩(wěn)定性。五、無(wú)菌操作與人員行為規(guī)范（一）無(wú)菌操作基本原則操作時(shí)需使用無(wú)菌工具（如鑷子、剪刀需滅菌后使用），避免裸手接觸產(chǎn)品/包材；減少不必要的操作（如頻繁開啟設(shè)備艙門），操作間隔需用75%乙醇消毒手套；產(chǎn)品暴露區(qū)域（如灌裝機(jī)瓶口上方）需保持單向流氣流（風(fēng)速0.45m/s±20%），避免人員活動(dòng)干擾氣流。（二）人員培訓(xùn)與考核新員工需接受無(wú)菌操作培訓(xùn)（理論+實(shí)操），考核通過(guò)后需每半年進(jìn)行模擬灌裝考核（使用培養(yǎng)基灌裝，培養(yǎng)后無(wú)微生物生長(zhǎng)）；培訓(xùn)內(nèi)容包括：潔凈區(qū)行為規(guī)范、設(shè)備操作、應(yīng)急處理（如培養(yǎng)基污染后的處置）。（三）更衣與行為管理更衣時(shí)需逐層穿戴（從內(nèi)到外依次穿內(nèi)衣、無(wú)菌服、口罩、手套），避免無(wú)菌服觸碰非無(wú)菌區(qū)域；潔凈區(qū)內(nèi)禁止飲食、吸煙，禁止在設(shè)備表面書寫（如需記錄，使用無(wú)菌筆在滅菌后的記錄板上書寫）；人員需每小時(shí)進(jìn)行手部消毒（75%乙醇噴霧），避免手部微生物污染產(chǎn)品。六、質(zhì)量控制與監(jiān)測(cè)（一）環(huán)境監(jiān)測(cè)懸浮粒子：A級(jí)區(qū)用粒子計(jì)數(shù)器連續(xù)監(jiān)測(cè)（每30分鐘記錄一次），B級(jí)區(qū)每小時(shí)監(jiān)測(cè)；微生物監(jiān)測(cè)：沉降菌（A級(jí)區(qū)每4小時(shí)放置φ90mm培養(yǎng)皿，暴露30分鐘）、浮游菌（A級(jí)區(qū)每班次用采樣器采樣1m3空氣），監(jiān)測(cè)結(jié)果需≤標(biāo)準(zhǔn)值；超標(biāo)處理：若環(huán)境監(jiān)測(cè)超標(biāo)，需立即停止生產(chǎn)，調(diào)查原因（如高效過(guò)濾器泄漏、人員操作失誤），采取糾正措施（如更換過(guò)濾器、加強(qiáng)消毒）后重新監(jiān)測(cè)，合格后方可恢復(fù)生產(chǎn)。（二）產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)無(wú)菌檢查：每批產(chǎn)品需取≥200支（或按法規(guī)要求）進(jìn)行無(wú)菌檢查（培養(yǎng)基灌裝法，培養(yǎng)14天無(wú)微生物生長(zhǎng)）；細(xì)菌內(nèi)毒素：采用鱟試劑法，檢測(cè)結(jié)果需≤規(guī)定值（如注射劑≤0.5EU/mL）；可見異物：采用燈檢法，每瓶需檢測(cè)（背景照度____lx，檢查時(shí)間≤5秒/瓶），可見異物≤2個(gè)/瓶。（三）過(guò)程控制關(guān)鍵工藝參數(shù)（如配液溫度、滅菌時(shí)間、凍干曲線）需實(shí)時(shí)記錄，操作人員需每小時(shí)檢查并簽名；偏差處理：若參數(shù)偏離規(guī)定范圍（如滅菌溫度低2℃），需啟動(dòng)偏差調(diào)查，分析原因（如設(shè)備故障、人員操作），評(píng)估對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響，采取糾正措施（如重新滅菌、報(bào)廢產(chǎn)品）。七、文件與記錄管理（一）批生產(chǎn)記錄批記錄需包含所有關(guān)鍵參數(shù)（如原輔料批號(hào)、配液量、滅菌時(shí)間、檢測(cè)結(jié)果），記錄需及時(shí)、準(zhǔn)確、清晰，不得追溯填寫或修改（如需修改，需劃改并簽名、注明日期）；記錄需保存至產(chǎn)品有效期后1年（或按法規(guī)要求），便于追溯。（二）驗(yàn)證文件設(shè)備驗(yàn)證（DQ、IQ、OQ、PQ）、工藝驗(yàn)證（如滅菌工藝驗(yàn)證、凍干工藝驗(yàn)證）需形成完整報(bào)告，報(bào)告需包含驗(yàn)證方案、數(shù)據(jù)、結(jié)論；驗(yàn)證文件需定期回顧（如每年），確認(rèn)設(shè)備/工藝仍符合要求。（三）變更與偏差管理變更管理：任何變更（如原輔料供應(yīng)商變更、設(shè)備參數(shù)調(diào)整）需經(jīng)過(guò)質(zhì)量部門評(píng)估，確認(rèn)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量無(wú)影響后方可實(shí)施，變更需記錄在案；偏差管理：偏差發(fā)生后需在24小時(shí)內(nèi)啟動(dòng)調(diào)查，分析根本原因（如魚骨圖分析），制定糾正預(yù)防措施（CAPA），跟蹤措施有效性直至關(guān)閉。八、風(fēng)險(xiǎn)控制與持續(xù)改進(jìn)（一）風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估采用FMEA（失效模式與效應(yīng)分析）識(shí)別生產(chǎn)過(guò)程中的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)（如人員操作失誤導(dǎo)致污染、設(shè)備故障導(dǎo)致滅菌不徹底），評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)優(yōu)先級(jí)（RPN值），優(yōu)先控制高風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)；風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估需每年更新，結(jié)合新設(shè)備、新工藝進(jìn)行補(bǔ)充。（二）糾正預(yù)防措施（CAPA）針對(duì)偏差、客戶投訴、審計(jì)發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題，制定CAPA（如人員培訓(xùn)不足則增加培訓(xùn)頻次，設(shè)備故障則優(yōu)化維護(hù)計(jì)劃）；CAPA需跟蹤驗(yàn)證（如培訓(xùn)后考核通過(guò)率需≥95%，設(shè)備維護(hù)后故障次數(shù)減少50%），確保措施有效。（