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化妝品防腐功效多次加菌試驗(yàn)評(píng)價(jià)方法

1范圍

本文件規(guī)定了化妝品防腐功效多次加菌試驗(yàn)評(píng)價(jià)方法的術(shù)語和定義、實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、樣品無

菌檢測(cè)、中和劑效果驗(yàn)證試驗(yàn)、防腐功效多次加菌試驗(yàn)。

本文件適用于以水為外相/水溶性或水混溶性的等常見化妝品的防腐功效評(píng)價(jià)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織ISO11930Cosmetics-Microbiology-Evaluationoftheantimicrobial

protectionofacosmeticproduction

歐洲藥典EP<11.0>5.1.3EfficacyofAntimicrobialPreservation

美國(guó)個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品協(xié)會(huì)PCPCMicrobiologyGuidelines

美國(guó)藥典-國(guó)家處方集通則51

《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

標(biāo)準(zhǔn)菌株（typeculturestrain/referencestrain）

國(guó)內(nèi)或國(guó)際菌種保藏機(jī)構(gòu)保藏的、遺傳學(xué)特性得到確認(rèn)和保證并可追溯的菌株。

4實(shí)驗(yàn)原理

根據(jù)化妝品生產(chǎn)和消費(fèi)者使用過程中可能存在的污染（一次污染和二次污染），在產(chǎn)品中加入定量

的標(biāo)準(zhǔn)菌株，每隔一定時(shí)間測(cè)量微生物的存活數(shù)量，計(jì)算菌株的對(duì)數(shù)減少值，并將其與評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比

較，來評(píng)判抑菌劑的防腐效果。

5實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

儀器設(shè)備

5.1.1生物安全柜；

5.1.2超凈工作臺(tái)；

5.1.3高壓蒸汽滅菌鍋；

5.1.4恒溫干燥箱；

5.1.5恒溫培養(yǎng)箱：32.5℃±2.5℃，22.5℃±2.5℃；

5.1.6電子天平；

5.1.7水浴鍋；

5.1.8移液槍；

5.1.9過濾器；

5.1.10冰箱；

5.1.11培養(yǎng)皿；（直徑為90mm）

5.1.12酒精燈；

1

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5.1.13顯微鏡；

5.1.14漩渦震蕩器。

培養(yǎng)基

5.2.1大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）；

5.2.2沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA）；

5.2.3SCDLP液體培養(yǎng)基；

5.2.4EugonLT100肉湯；

5.2.5D/E中和肉湯；

5.2.6改良Letheen肉湯。

測(cè)試菌株（或等效菌株）

5.3.1大腸埃希氏菌（ATCC8739）；

5.3.2銅綠假單胞菌（ATCC9027）；

5.3.3金黃色葡萄球菌（ATCC6538）；

5.3.4白色假絲酵母（ATCC10231）

5.3.5巴西曲霉（ATCC16404）；

5.3.6洋蔥伯克霍爾德氏菌（ATCC25416）；

5.3.7惡臭假單胞菌（ATCC17485）。

注：用于測(cè)試的工作菌株傳代次數(shù)不得超過五代。

注：企業(yè)可根據(jù)實(shí)際需求，自行添加其他菌株按本方法進(jìn)行試驗(yàn)和評(píng)價(jià)。

其他試劑（應(yīng)符合微生物試驗(yàn)無菌操作的相關(guān)要求）

5.4.1氯化三苯四氮唑（TTC）；

5.4.2聚山梨酯-80（吐溫-80）；

5.4.3生理鹽水；

5.4.4吐溫-80生理鹽水（0.5g/L）。

菌懸液的制備（麥?zhǔn)媳葷岱ǎ?/p>

菌懸液的制備只對(duì)活化至3-5代的培養(yǎng)物進(jìn)行說明，不涉及前期菌種購(gòu)買、活化及傳代過程。

5.5.1麥?zhǔn)媳葷峁艿闹苽?/p>

在微生物學(xué)中，通過比對(duì)溶液濁度，麥?zhǔn)媳葷峁艹Ｓ脕硇?duì)細(xì)菌懸浮液至某個(gè)特定濃度。例如在醫(yī)

藥學(xué)領(lǐng)域常見的微生物抗藥物敏感性試驗(yàn)中，用來測(cè)量最小抑菌濃度。麥?zhǔn)媳葷峁苁峭ㄟ^混合特定濃度

的氯化鋇和硫酸，從而形成硫酸鋇懸浮液。如表1，麥?zhǔn)媳葷峁懿煌芴?hào)的配比。

麥?zhǔn)媳葷峁艿呐浔纫姳?。

表1麥?zhǔn)媳葷峁艿呐浔?/p>

管號(hào)（McFarland）0.512345

0.25%Bacl2(mL)0.20.40.81.21.62.0

1%H2SO4(mL)9.89.69.28.88.48.0

細(xì)菌的近似濃度（×108mL）13691215

注：也可用其他方法如定量小球、分光光度法進(jìn)行菌懸液制備。

5.5.2細(xì)菌菌懸液的制備

2

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取第3-5代培養(yǎng)物，吸取適量的無菌生理鹽水加入斜面試管內(nèi)，反復(fù)吹洗，洗下菌苔。將洗液轉(zhuǎn)移

至另一無菌試管中，渦旋混勻20s。用無菌生理鹽水將細(xì)菌與麥?zhǔn)媳葷峁鼙葘?duì)稀釋成約107CFU/mL～108

CFU/mL的菌懸液，建議與2號(hào)管比對(duì)。制備好的菌懸液應(yīng)在2h內(nèi)使用。

5.5.3白色假絲酵母菌懸液的制備

取第3-5代培養(yǎng)物，吸取適量的無菌生理鹽水加入斜面試管內(nèi)，反復(fù)吹洗，洗下菌苔。將洗液轉(zhuǎn)移

至另一無菌試管中，渦旋混勻20s。用無菌生理鹽水將白色假絲酵母稀釋成106CFU/mL～107CFU/mL的菌

懸液，建議使用分光光度計(jì)或細(xì)胞計(jì)數(shù)器（如血細(xì)胞計(jì)數(shù)器）來調(diào)整酵母數(shù)量。制備好的菌懸液應(yīng)在2h

內(nèi)使用。

5.5.4巴西曲霉孢子懸液的制備

取第3-5代培養(yǎng)物，吸取適量的吐溫-80生理鹽水（制備方法見附錄A.2）加入斜面試管內(nèi)，刮洗巴

西曲霉孢子于溶液中。將孢子懸液轉(zhuǎn)移至裝有玻璃珠的無菌三角瓶中，輕輕振搖1min后，用無菌過濾

器過濾除去菌絲。過濾后用吐溫-80生理鹽水將其稀釋成約106CFU/mL～107CFU/mL的孢子懸液，建議使

用細(xì)胞計(jì)數(shù)器（如血細(xì)胞計(jì)數(shù)器）來調(diào)整孢子數(shù)量。制備好的孢子懸液應(yīng)當(dāng)在同一工作日內(nèi)使用。

6樣品無菌檢測(cè)

按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》第五章微生物檢驗(yàn)方法2菌落總數(shù)檢驗(yàn)方法和6霉菌和酵母菌檢驗(yàn)方

法執(zhí)行。

最終得到含菌落總數(shù)、霉菌酵母菌總數(shù)均＜10CFU/g（mL）的樣品。

7中和劑效果驗(yàn)證試驗(yàn)

工作菌懸液的制備

用稀釋液將上述107CFU/mL～108CFU/mL細(xì)菌菌懸液和106CFU/mL～107CFU/mL的真菌菌懸液10倍系列

稀釋至103CFU/mL，用于中和劑效果驗(yàn)證。

試驗(yàn)分組

7.2.1試驗(yàn)組：將1g(mL)的樣品加入到9mL中和劑中混勻，室溫放置30min±15min，使其充分作用，

共制備3份；

7.2.2中和劑對(duì)照組：用1mL稀釋液加入9ml中和劑中，室溫放置30min±15min，作為中和劑對(duì)照

組，共制備3份；

7.2.3菌液對(duì)照組：取10mL生理鹽水作為菌液計(jì)數(shù)組，共制備3份；

7.2.4在以上三組中，分別加入7.1中制備的工作菌懸液各1mL。

培養(yǎng)、計(jì)數(shù)要求

分別對(duì)試驗(yàn)組、中和劑對(duì)照組和菌液對(duì)照組進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，每組進(jìn)行雙平行實(shí)驗(yàn)。細(xì)菌培養(yǎng)基為TSA，

32.5℃±2.5℃培養(yǎng)3d～5d；真菌培養(yǎng)基為SDA，22.5℃±2.5℃培養(yǎng)3d～7d。

結(jié)果判斷

7.4.1若試驗(yàn)組菌落總數(shù)回收率達(dá)到菌液對(duì)照組計(jì)數(shù)（平均值）的50%至200%之間，說明中和劑有效；

7.4.2若中和劑對(duì)照組菌落總數(shù)回收率達(dá)到菌液對(duì)照組計(jì)數(shù)（平均值）的50%至200%之間，說明中和

劑毒性可接受；

7.4.3以上結(jié)果若超出范圍，應(yīng)更換合適的中和劑重新驗(yàn)證。

8防腐功效多次加菌試驗(yàn)

加菌方式

多次加菌指加菌次數(shù)在兩次以上（含兩次）的加菌試驗(yàn)。采用細(xì)菌混合、真菌混合加菌方式。

3

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受試樣品的制備

每個(gè)樣品品至少稱取兩份各30g于兩個(gè)無菌容器中，備用。

試驗(yàn)用混合菌懸液的制備及計(jì)數(shù)

8.3.1菌懸液制備

將107CFU/mL～108CFU/mL的單一細(xì)菌菌懸液按1:1混合，制成試驗(yàn)用細(xì)菌混合菌懸液，將106

CFU/mL～107CFU/mL的單一真菌菌懸液按1:1混合，制成試驗(yàn)用真菌混合菌懸液。

8.3.2試驗(yàn)用菌懸液的計(jì)數(shù)

分別將制備好的試驗(yàn)用細(xì)菌、真菌混合菌懸液用生理鹽水制成1:10稀釋液，以此類推，梯度稀釋

1:102～1:107；選取1:105、1:106、1:107等濃度梯度進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，計(jì)算混合菌懸液中細(xì)菌菌落總數(shù)和

真菌菌落總數(shù)，即為初始加菌濃度。若初始混合菌懸液濃度不在加菌要求范圍內(nèi)，則樣品需重新加菌測(cè)

試。

樣品接菌及培養(yǎng)

分別在分裝好的樣品中加入≤1%樣品量的試驗(yàn)用細(xì)菌、真菌混合菌懸液，使得樣品中細(xì)菌的含量為

105CFU/g（mL）～106CFU/g（mL），真菌的含量為104CFU/g（mL）～105CFU/g（mL）。將樣品與菌懸液

充分混勻。置于22.5℃±2.5℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

樣品檢測(cè)與分析

8.5.1檢測(cè)節(jié)點(diǎn)

在每次加菌后的第7d、14d取樣檢測(cè)。

8.5.2樣品稀釋

取1g檢樣注入到9mL中和稀釋液中，充分混合，制成1:10的溶液?？筛鶕?jù)需要多梯度稀釋，如制成

1:100，1:1000，1:10000等。

8.5.3平板傾注

取適宜梯度的稀釋液分別取1mL注入到無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋液共計(jì)2個(gè)平皿，細(xì)菌用大豆酪蛋白

瓊脂培養(yǎng)基（TSA），于32.5℃±2.5℃培養(yǎng)3d～5d；真菌用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA），于22.5℃

±2.5℃培養(yǎng)3d～7d。

8.5.4計(jì)算公式

化妝品的防腐效果可以以菌落數(shù)的對(duì)數(shù)減少值（Rx）作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，計(jì)算方式見式（1）：

···················································(1)

式中：??=lg?0?lg??

N0——初始接菌濃度；

Nx——樣品在不同檢測(cè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)的菌落數(shù)。

評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

每次加菌后的第7d、14d對(duì)數(shù)減少值均應(yīng)滿足表二中規(guī)定方可評(píng)判為通過，如有一個(gè)節(jié)點(diǎn)未達(dá)到要

求，即該次測(cè)試結(jié)果評(píng)判為不通過，具體要求見表二。

評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)見表2。

4

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表2評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)數(shù)減少值（）

??=lg?0?lg??

每次加菌后細(xì)菌真菌

7d≥1不增加

14d≥3≥2

5

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附錄A

（資料性）

培養(yǎng)基與試劑制備

A.1生理鹽水

配方（每升）

氯化鈉9.0g

蒸餾水或去離子水水1000mL

制法：攪拌至完全溶解，分裝后121℃高壓滅菌15min。

A.2吐溫-80生理鹽水（0.5g/L）

配方（每升）

氯化鈉9.0g

蒸餾水或去離子水水1000mL

制法：加入0.5g吐溫-80攪拌至完全溶解，分裝后121℃高壓滅菌15min。

A.3大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）

配方（每升）

胰酪胨15.0g

大豆木瓜蛋白酶水解物5.0g

氯化鈉5.0g

瓊脂15.0g

最終pH7.3±0.2

制法：稱取本品40g，加入蒸餾水或去離子水1L，攪拌加熱煮沸至完全溶解后分裝，121℃高壓滅

菌15min。

A.4沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)

配方（每升）

動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物10.0g

葡萄糖40.0g

瓊脂15.0g

pH值（25℃）5.6±0.2

制法：稱取本品65.1g，加入蒸餾水或去離子水1L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝后121℃高壓

滅菌15min。

A.5SCDLP液體培養(yǎng)基

配方（每升）

酪蛋白胨17.0g

大豆蛋白胨3.0g

磷酸氫二鉀10g

氯化鈉5.0g

葡萄糖2.5g

卵磷脂1.0g

吐溫807.0g

最終pH7.2±0.2

使用方法：稱取本品38g，加入蒸餾水或去離子水1L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝試管或三角

瓶，121℃高壓滅菌20min。

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A.6EugonLT100肉湯

配方（每升）

胰蛋白胨15.0g

大豆蛋白胨5.0g

氯化鈉4.0g

L-胱氨酸0.7g

亞硫酸鈉0.2g

葡萄糖5.5g

卵磷脂1.0g

吐溫805.0g

辛基酚聚醚-91.0g

制法：稱取本品37.4g,加熱溶解于1000mL蒸餾水或去離子水中，121℃高壓滅菌15min，備用。

A.7D/E中和肉湯

配方（每升）

胰酪胨5.0g

酵母膏粉5.0g

葡萄糖10.0g

巰基乙醇酸鈉1.0g

硫代硫酸鈉6.0g

亞硫酸氫鈉2.5g

卵磷脂7.0g

溴甲酚紫0.02g

最終pH7.6±0.2

制法：稱取本品34g，加入蒸餾水或去離子水1L和5g吐溫-80，攪拌加熱煮沸至完全溶解;121℃高

壓滅菌15min。

A.8改良Letheen肉湯

配方（每升）

牛肉浸粉5.0g

氯化鈉5.0g

卵磷脂0.7g

吐溫805.0g

酵母浸粉2.0g

亞硫酸氫鈉0.1g

酪蛋白胰酶水解物5.0g

肉類胃蛋白酶水解物20.0g

制法：稱取本品43.8g，加熱溶解于1000mL蒸餾水或去離子水中，分裝；121℃高壓滅菌15min。

A.90.5%氯化三苯四氮唑（2,3,5-triphenylterazoliumchloride，TTC）

成分：TTC0.5g

蒸餾水100mL

制法：溶解后過濾除菌，或115℃高壓滅菌20min，裝于棕色試劑瓶，置4℃冰箱備用。

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附錄B

（資料性）

防腐劑和洗滌劑抗菌活性中和劑實(shí)例

能夠中和防腐劑抗菌活性

防腐劑合適的中和劑和清洗液（用于膜過濾方法）

的化學(xué)物質(zhì)

聚山梨醇酯80，30克/升+卵磷脂，3克/升

酚類物質(zhì)卵磷脂脂肪醇環(huán)氧乙烷縮合物，7克/升+卵磷脂，20克/升+

對(duì)羥基苯甲酸酯、苯氧乙聚山梨醇酯80聚山梨醇酯80，4克/升

醇、苯乙醇等脂肪醇環(huán)氧乙烷縮合物D/E中和肉湯；SDCLP肉湯b洗滌液：蒸餾水；胰蛋白

苯胺類非離子表面活性劑胨，1克/升+氯化鈉，9克/升；聚山梨醇酯80，5克/

升

聚山梨醇酯80，30克/升+十二烷基硫酸鈉，4克/升+

卵磷脂，3克/升

卵磷脂、皂昔、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯80，30克/升+皂素，30克/升+卵磷脂，3克

季銨鹽

十二烷基硫酸鈉/升

陽離子表面活性劑

脂肪醇環(huán)氧乙烷縮合物D/E中和肉湯；SDCLP肉湯b

洗滌液：蒸餾水；胰蛋白胨，1克/升+氯化鈉，9克/

升；聚山梨醇酯80，5克/升

卵磷脂，3克/升+聚山梨醇酯80，30克/升+L-組氨酸，

1克/升

醛類聚山梨醇酯80，30克/升+皂甙，30克/升+L-組氨酸，1

甘氨酸、組氨酸

甲醛生成劑克/升+L-半胱氨酸，1克/升

D/E中和肉湯；SDCLP肉湯b

洗滌液：聚山梨醇酯80，3克/升+L-組氨酸0.5克/升

硫代硫酸鈉，5克/升

氧化劑硫代硫酸鈉

清洗液：硫代硫酸鈉，3克/升

聚山梨醇酯80，30克/升+皂素，30克/升+卵磷脂，3

異噻唑啉酮類咪唑類化合卵磷脂、皂苷胺、硫酸鹽、硫醇、克/升

物亞硫酸氫鈉、硫代乙醇酸鈉洗滌液:胰蛋白胨，1克/升+氯化鈉，9克/升；聚山梨

醇酯80，5克/升

聚山梨醇酯80，30克/升+皂素，30克/升+卵磷脂，3

克/升

雙胍類卵磷脂、皂苷、聚山梨醇酯80

洗滌液:胰蛋白陳，1克/升+氯化鈉，9克/升；聚山梨

醇酯80，5克/升

硫代乙醇酸鈉，0.5克/升或5克/升

金屬鹽（銅、鋅、汞）亞硫酸氫鈉、L-半胱氨酸半胱氨酸，0.8克/升或1.5克/升

有機(jī)巰基化合物巰基化合物、硫代乙醇酸D/E中和肉湯；SDCLP肉湯b

清洗液：巰基乙酸鈉，0.5克/升

a、Dey/Engley中和肉湯

b、含有卵磷脂和聚山梨醇酯80的大豆酪蛋白消化液

8

ICS71.100.70

CCSY42

GDCA

廣東省化妝品學(xué)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

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化妝品防腐功效多次加菌試驗(yàn)評(píng)價(jià)方法

Testmethodforevaluationofcosmeticpreservativeefficacybymultipleadditionofbacteria

（征求意見稿）

在提交反饋意見時(shí)，請(qǐng)將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

??發(fā)布

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化妝品防腐功效多次加菌試驗(yàn)評(píng)價(jià)方法

1范圍

本文件規(guī)定了化妝品防腐功效多次加菌試驗(yàn)評(píng)價(jià)方法的術(shù)語和定義、實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、樣品無

菌檢測(cè)、中和劑效果驗(yàn)證試驗(yàn)、防腐功效多次加菌試驗(yàn)。

本文件適用于以水為外相/水溶性或水混溶性的等常見化妝品的防腐功效評(píng)價(jià)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織ISO11930Cosmetics-Microbiology-Evaluationoftheantimicrobial

protectionofacosmeticproduction

歐洲藥典EP<11.0>5.1.3EfficacyofAntimicrobialPreservation

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美國(guó)藥典-國(guó)家處方集通則51

《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

標(biāo)準(zhǔn)菌株（typeculturestrain/referencestrain）

國(guó)內(nèi)或國(guó)際菌種保藏機(jī)構(gòu)保藏的、遺傳學(xué)特性得到確認(rèn)和保證并可追溯的菌株。

4實(shí)驗(yàn)原理

根據(jù)化妝品生產(chǎn)和消費(fèi)者使用過程中可能存在的污染（一次污染和二次污染），在產(chǎn)品中加入定量

的標(biāo)準(zhǔn)菌株，每隔一定時(shí)間測(cè)量微生物的存活數(shù)量，計(jì)算菌株的對(duì)數(shù)減少值，并將其與評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比

較，來評(píng)判抑菌劑的防腐效果。

5實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

儀器設(shè)備

5.1.1生物安全柜；

5.1.2超凈工作臺(tái)；

5.1.3高壓蒸汽滅菌鍋；

5.1.4恒溫干燥箱；

5.1.5恒溫培養(yǎng)箱：32.5℃±2.5℃，22.5℃±2.5℃；

5.1.6電子天平；

5.1.7水浴鍋；

5.1.8移液槍；

5.1.9過濾器；

5.1.10冰箱；

5.1.11培養(yǎng)皿；（直徑為90mm）

5.1.12酒精燈；

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T/XXXXXXX—XXXX

5.1.13顯微鏡；

5.1.14漩渦震蕩器。

培養(yǎng)基

5.2.1大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）；

5.2.2沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA）；

5.2.3SCDLP液體培養(yǎng)基；

5.2.4EugonLT100肉湯；

5.2.5D/E中和肉湯；

5.2.6改良Letheen肉湯。

測(cè)試菌株（或等效菌株）

5.3.1大腸埃希氏菌（ATCC8739）；

5.3.2銅綠假單胞菌（ATCC9027）；

5.3.3金黃色葡萄球菌（ATCC6538）；

5.3.4白色假絲酵母（ATCC10231）

5.3.5巴西曲霉（ATCC16404）；

5.3.6洋蔥伯克霍爾德氏菌（ATCC25416）；

5.3.7惡臭假單胞菌（ATCC17485）。

注：用于測(cè)試的工作菌株傳代次數(shù)不得超過五代。

注：企業(yè)可根據(jù)實(shí)際需求，自行添加其他菌株按本方法進(jìn)行試驗(yàn)和評(píng)價(jià)。

其他試劑（應(yīng)符合微生物試驗(yàn)無菌操作的相關(guān)要求）

5.4.1氯化三苯四氮唑（TTC）；

5.4.2聚山梨酯-80（吐溫-80）；

5.4.3生理鹽水；

5.4.4吐溫-80生理鹽水（0.5g/L）。

菌懸液的制備（麥?zhǔn)媳葷岱ǎ?/p>

菌懸液的制備只對(duì)活化至3-5代的培養(yǎng)物進(jìn)行說明，不涉及前期菌種購(gòu)買、活化及傳代過程。

5.5.1麥?zhǔn)媳葷峁艿闹苽?/p>

在微生物學(xué)中，通過比對(duì)溶液濁度，麥?zhǔn)媳葷峁艹Ｓ脕硇?duì)細(xì)菌懸浮液至某個(gè)特定濃度。例如在醫(yī)

藥學(xué)領(lǐng)域常見的微生物抗藥物敏感性試驗(yàn)中，用來測(cè)量最小抑菌濃度。麥?zhǔn)媳葷峁苁峭ㄟ^混合特定濃度

的氯化鋇和硫酸，從而形成硫酸鋇懸浮液。如表1，麥?zhǔn)媳葷峁懿煌芴?hào)的配比。

麥?zhǔn)媳葷峁艿呐浔纫姳?。

表1麥?zhǔn)媳葷峁艿呐浔?/p>

管號(hào)（McFarland）0.512345

0.25%Bacl2(mL)0.20.40.81.21.62.0

1%H2SO4(mL)9.89.69.28.88.48.0

細(xì)菌的近似濃度（×108mL）13691215

注：也可用其他方法如定量小球、分光光度法進(jìn)行菌懸液制備。

5.5.2細(xì)菌菌懸液的制備

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