環(huán)境因素對(duì)微生物生長的影響演講者：XXX一、實(shí)驗(yàn)器材1、菌種大腸桿菌，嗜熱脂肪芽孢桿菌，熒光假單胞菌，釀酒酵母，

金黃色葡萄球菌，鹽沼鹽桿菌，糞產(chǎn)堿桿菌，枯草芽孢桿菌。2、培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，裝有蛋白胨葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基的Salt試管(內(nèi)含倒置德漢氏小管),分別含0

.85%、5%、10%、15%及25%NaCl

的營養(yǎng)瓊脂，胰胨豆胨液體培養(yǎng)基(用1mol/L

NaOH或1mol/L

HCl,將pH

分別調(diào)至5、7、11)。3、溶液和試劑無菌生理鹽水，無菌蒸餾水，青霉素溶

液(80萬單位/mL),氨芐青霉素溶液(80萬單

位/mL),2.5%碘酒，0.1%升汞，5%石炭酸，75%

乙醇，100%乙醇，1%來蘇爾，0.25%新潔爾滅，0.005%龍膽紫和0.05%龍膽紫等。4、儀器和其他用品酒精燈，接種環(huán)，鑷子，無菌平皿，無

菌吸管，三角涂棒，試管，

三角瓶，1cm比色杯722型分光光度計(jì)，

無菌濾紙條，

滴管和無菌

濾紙片(直徑5cm),紫外燈等。1、了解溫度、滲透壓及pH等因素對(duì)微生物生長的影

響。2、了解抗生素對(duì)微生物生長的影響，學(xué)習(xí)抗菌譜實(shí)

驗(yàn)的基本方法。3、了解常用化學(xué)消毒劑對(duì)微生物生長的影響，學(xué)習(xí)

測定石炭酸系數(shù)的方法。三、基本原理微生物的生長繁殖受外界環(huán)境因素的影響，環(huán)境條件

適宜時(shí)微生物生長良好，環(huán)境條件不適宜時(shí)微生物生

長受到抑制，甚至導(dǎo)致微生物的死亡。物理、化學(xué)、生物及營養(yǎng)等不同環(huán)境因素影響微生物

生長繁殖的機(jī)制不盡相同，而不同類型的微生物對(duì)同

一環(huán)境因素的適應(yīng)能力也有差別。溫度對(duì)微生物

等)

穩(wěn)定性、酶的活

面有重要影響，過高溫

失活，細(xì)胞膜破壞等，

細(xì)胞新陳代謝活動(dòng)減弱因此，每種微平

,都具有自己的最低、嗜冷微生物可

15℃,最高生長溫度在：45℃范圍內(nèi)生長，大多

物可在55℃以上生長，80℃,最高生長溫度高。溫度一溫度對(duì)生長速度的影響三、基本原理1。溫度微生物在等滲溶液中可正常生長繁殖；在高滲溶

液中細(xì)胞失水，生長受到抑制；在低滲溶液中，

細(xì)胞吸水膨脹，因?yàn)榇蠖鄶?shù)微生物具有較為堅(jiān)韌

的細(xì)胞壁，細(xì)胞一般不會(huì)裂解，可以正常生長，

但低滲溶液中溶質(zhì)(包括營養(yǎng)物質(zhì))含量低，在

某些情況下也會(huì)影響微生物的生長。另一方面，不同類型微生物對(duì)滲透壓變化的適應(yīng)能

力不盡相同，大多數(shù)微生物在0.5%～3%

NaCl條件下

正常生長，在10%～15%以上NaCl

濃度條件下生長

受到抑制，但某些極端嗜鹽菌可在30%以上NaCl濃

度條件下正常生長。2、滲透壓三、基本原理pH過高或過低會(huì)使蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子所帶電荷

發(fā)生變化，影響其生物活性，甚至導(dǎo)致變性失活，還可以

引起細(xì)胞膜電荷變化，影響細(xì)胞對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，同時(shí)

還改變環(huán)境中營養(yǎng)物質(zhì)的可給性及有害物質(zhì)的毒性。因此，微生物都只能在一定的PH范圍內(nèi)生長。嗜酸微生物、中性微生物和嗜堿微生物的最適生長PH分

別為0

.

0～5

.5、5

.5～8.

0和8.5～11

.5。一般細(xì)菌和放線菌最適生長pH為6.5～7.5,霉菌和酵母最

適生長pH一般為4～6。三

、

基本3.pH三、基本原4、生物因素(抗生素)

理在自然界中普遍存在微生物間的拮抗作用，許多微

生物可以產(chǎn)生抗生素，能選擇性地抑制或殺死其他微生

物。不同抗生素的抗菌譜是不同的，例如青霉素和多黏

菌素分別作用于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌，屬于窄

譜抗生素；四環(huán)素和土霉素對(duì)許多革蘭氏陽性菌和革蘭

氏陰性菌都有作用，屬于廣譜抗生素。了解某種抗生素的抗菌譜在臨床治療上有重要意義，

利用濾紙條法可初步測定抗生素的抗菌譜。當(dāng)濾紙條上的抗生素溶液在瓊脂平板上向四周擴(kuò)散后可形成抗生素溶液由高到低的梯度，將

不同試驗(yàn)菌與濾紙條垂直劃線接種、培養(yǎng)后，根

據(jù)抑菌帶的長短可判斷該抗生素對(duì)不同試驗(yàn)菌生

長的影響程度，初步確定其抗菌譜。常用化學(xué)消毒劑包括有機(jī)溶劑(酚、醇、醛等)、重

金屬鹽、鹵族元素及其化合物、染料和表面活性劑等。有機(jī)溶劑使蛋白質(zhì)(酶)和核酸變性失活，破壞細(xì)胞

膜；重金屬鹽也可使蛋白質(zhì)(酶)和核酸變性失活，或與

細(xì)胞代謝產(chǎn)物螯合使之變?yōu)闊o效化合物；碘與蛋白質(zhì)酪氨酸殘基不可逆結(jié)合而使蛋白質(zhì)失活；氯與水作用產(chǎn)生強(qiáng)氧化劑使蛋白質(zhì)氧化變性；低濃度染料可抑制細(xì)菌生長，革蘭氏陽性菌比革蘭氏

陰性菌對(duì)染料更加敏感；表面活性劑可改變細(xì)胞膜透性，也可使蛋白質(zhì)變性。5、化學(xué)消毒劑三、基本原理通常以石炭酸為標(biāo)準(zhǔn)確定化學(xué)消毒劑的殺(抑)菌能力，

用石炭酸系數(shù)(酚系數(shù))表示。將某種消毒劑作系列稀釋，在一定時(shí)間及條件下，該消

毒劑殺死全部試驗(yàn)菌的最高稀釋倍數(shù)與達(dá)到同樣效果的石炭酸最高稀釋倍數(shù)的比值被稱為該消毒劑的石炭酸系數(shù).石炭酸系數(shù)數(shù)值越大，說明該消毒劑對(duì)試驗(yàn)菌殺(抑)

菌能力越強(qiáng)。三、基本原6、紫外線

紫外線主要作用于細(xì)胞內(nèi)的DNA。

使同一條鏈DNA

相鄰嘧啶間形成胸腺嘧啶二聚體，引起雙鏈結(jié)構(gòu)扭曲變形，阻

礙堿基正常配對(duì)，從而抑制DNA的復(fù)制，輕則使微生物發(fā)生

突變；重則造成微生物死亡。紫外線照射的劑量與所用紫外光燈的功率(瓦數(shù))、照射距

離和照射時(shí)間有關(guān)。當(dāng)紫外光燈和照射距離固定，照射的時(shí)間越長則照射的

劑量越高。紫外線透過物質(zhì)的能力弱，

一層黑紙足以擋住紫

外線的通過。本實(shí)驗(yàn)是驗(yàn)證紫外線的殺菌作用及不同微生物對(duì)紫外線

的抵抗能力。理四

、實(shí)驗(yàn)步驟(一)溫度對(duì)微生物生長的影響1.倒平板將牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基熔化后倒平板，厚度為一般平板的1.5~2倍。2.標(biāo)記取十二套平板，分別用記號(hào)筆在皿底劃分4個(gè)區(qū)域，標(biāo)記上熒光假單胞

菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和嗜熱脂肪芽孢桿菌。3.接種無菌操作用接種環(huán)分別取上述4種菌，在平板相應(yīng)位置劃

線接種。4.培養(yǎng)、觀察各取3套平板倒置與低溫、37℃條件下保溫24~48h及煮沸兩分鐘，觀

察細(xì)菌生長狀況并記錄。60溫

度

(℃

)5(二)滲透壓對(duì)微生物生長的影響1.倒平板將0.85%、5%、10%、15%及25%NaCI的營養(yǎng)瓊脂熔化后分別倒平板。2.標(biāo)記各取三套上述平板

區(qū)域，標(biāo)記上鹽沼鹽3.接種無菌操作用接種環(huán)分O培養(yǎng)、觀察將上述平板倒置與30℃保溫24d,觀祭細(xì)菌生長狀況并記錄。6.低滲溶液a.等滲溶液c.高滲溶液齊

話

率0

5

101520

253035鹽度(g/L)(五)化學(xué)消毒劑對(duì)微生物的影響濾紙片法(1)菌液制備：無菌操作將金黃色葡萄球菌接種至裝有5mL牛

肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的試管中，37℃培養(yǎng)18h。(2)倒平板：將牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基熔化后倒平板，注

意平皿中培養(yǎng)基厚度均勻。(3)涂平板：無菌操作0.2mL金黃色葡萄球菌菌液加入到上述

平板，用無菌三角涂棒涂布均勻。(4)標(biāo)記：將上述平板皿底用記號(hào)筆劃分成4~6等份，分別標(biāo)

明一種消毒劑名稱。(5)貼濾紙條：無菌操作，用鑷子取無菌濾紙片分別浸入各

種消毒劑潤濕，在容器內(nèi)壁瀝去多余溶液，再將濾紙片分別貼

在平板的相應(yīng)位置，在平板中央貼上浸有無菌生理鹽水的濾紙

片作為對(duì)照。(6)培養(yǎng)、觀察：將上述平板倒置于37℃

保溫24h,觀察并記錄抑菌圈的大小。齪有不同濃度吉

素?阿紙片(思國是透明圖)熔養(yǎng)基(37T

恒氓熔

蔣

)授有無萌水的園紙片(思國無活晰區(qū))圖1?(六)紫外線對(duì)微生物的影響(1)取肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板3個(gè)，分別標(biāo)明大腸桿菌、枯

草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌等試驗(yàn)菌的名稱。(2)分別用無菌移液管取培養(yǎng)18-20h的大腸桿菌、枯草芽

孢桿菌和金黃色葡萄球菌菌液0.1mL(或2滴),加在相應(yīng)的

平板上，再用無菌涂棒涂右

人然斤田干勞匣紙遮羊部

分平板。(3)紫外燈預(yù)熱10-15mi打開培養(yǎng)皿蓋，紫外線

被黑紙遮蓋的部位，有

上皿蓋。(4)37℃培養(yǎng)24h后觀察

2

3

4

的抵抗能力。圖20-1紫外線對(duì)微生物生長的影響試驗(yàn)1.擋紫外線照射的黑紙2.紫外線直接照射處3.培養(yǎng)后細(xì)菌生長4.培養(yǎng)后細(xì)菌不生長種類各稱100

%滅所需時(shí)間

〔

秒

〕種類各稱100

%殺

滅所需時(shí)間

〔

秒

〕細(xì)煎類炭

宿

桿

煎0.30細(xì)煎類練

核

(

分

支

)

托

煎0.41白喉?xiàng)U煎0.25宦

乩

匹

散0.64堿

傷

風(fēng)

桿煎0.3S假

單

胞

桿

煎

屬0.37崗西校放0.80沙門

氏

煎

屬0.51瑕

疾

桿

煎0.15腸

道

發(fā)

曉

煎

屬0.41大腸桿黃0.36鼠傷寒桿煎0.53病類原病0.10病每類滬

感

病0.23噬煎胞病西0.20咨

鵠

灰

質(zhì)

炎

病0.80柯薩奇病0.08輪

狀

病0.52愛

柯

病0.73炮

單

花

葉

病

面16愛柯病I型0.75乙

肝

病0.7S露前他子黑的萃6.67露煎他子軟色子0.3S的霉屬0.73-8.80青萃前屬