合成生物膠原蛋白研發(fā)工程師崗位招聘考試試卷及答案合成生物膠原蛋白研發(fā)工程師崗位招聘考試試卷一、填空題（共10題，每題1分，共10分）1.膠原蛋白按結(jié)構(gòu)可分為______型（如Ⅰ型、Ⅱ型等），皮膚中主要含______型。2.合成生物膠原蛋白常用表達(dá)系統(tǒng)包括______、酵母、昆蟲細(xì)胞、哺乳動物細(xì)胞等。3.膠原蛋白特征氨基酸是______，其羥化需要______酶參與。4.基因工程中，目的基因與載體連接的關(guān)鍵酶是______和______。5.重組膠原蛋白純度檢測常用______電泳（SDS）和HPLC。6.膠原蛋白功能包括細(xì)胞黏附、______、組織修復(fù)等。7.發(fā)酵核心參數(shù)包括溫度、pH、______、溶氧量等。8.膠原蛋白二級結(jié)構(gòu)主要為______螺旋，由三個α鏈組成。9.重組膠原蛋白活性檢測常通過______實驗（如細(xì)胞增殖）驗證。10.表達(dá)載體需包含啟動子、終止子、______等元件。二、單項選擇題（共10題，每題2分，共20分）1.最適合生產(chǎn)高活性重組膠原蛋白的表達(dá)系統(tǒng)是？A.大腸桿菌B.畢赤酵母C.哺乳動物細(xì)胞D.植物細(xì)胞2.脯氨酰羥化酶的作用是？A.促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄B.使脯氨酸羥化C.催化交聯(lián)D.降解膠原蛋白3.重組膠原蛋白分子量檢測常用？A.紫外分光光度法B.質(zhì)譜（MS）C.考馬斯亮藍(lán)法D.ELISA4.最常用于醫(yī)用敷料的膠原蛋白是？A.Ⅰ型B.Ⅱ型C.Ⅲ型D.Ⅳ型5.發(fā)酵溶氧量不足會導(dǎo)致？A.菌體生長加快B.膠原蛋白產(chǎn)量下降C.純度升高D.酶活性增強(qiáng)6.目的基因獲取方法不包括？A.PCR擴(kuò)增B.人工合成C.基因組文庫篩選D.物理誘變7.不屬于膠原蛋白交聯(lián)方式的是？A.戊二醛交聯(lián)B.熱交聯(lián)C.酶交聯(lián)D.鹽交聯(lián)8.重組膠原蛋白免疫原性檢測常用？A.SDSB.WesternBlotC.動物免疫實驗D.HPLC9.最常用于表達(dá)重組膠原蛋白的哺乳動物細(xì)胞是？A.CHO細(xì)胞B.HEK293細(xì)胞C.大腸桿菌D.酵母10.下游純化不包括的步驟是？A.細(xì)胞破碎B.親和層析C.基因克隆D.離子交換層析三、多項選擇題（共10題，每題2分，共20分）1.合成生物膠原蛋白的優(yōu)勢包括？A.來源穩(wěn)定B.無動物源病原體風(fēng)險C.可定制修飾D.產(chǎn)量高2.膠原蛋白表達(dá)需要的關(guān)鍵酶包括？A.脯氨酰羥化酶B.賴氨酸羥化酶C.轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶D.限制酶3.重組膠原蛋白應(yīng)用領(lǐng)域包括？A.醫(yī)用敷料B.化妝品C.組織工程支架D.食品添加劑4.哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點是？A.翻譯后修飾完善B.產(chǎn)量高C.成本低D.活性高5.膠原蛋白檢測方法包括？A.SDSB.ELISAC.細(xì)胞黏附實驗D.質(zhì)譜6.表達(dá)載體的元件包括？A.啟動子B.終止子C.標(biāo)記基因D.復(fù)制原點7.發(fā)酵影響產(chǎn)量的因素包括？A.溫度B.pHC.溶氧量D.誘導(dǎo)劑濃度8.膠原蛋白結(jié)構(gòu)特點包括？A.每3個殘基含1個甘氨酸B.含羥脯氨酸/羥賴氨酸C.三股螺旋D.分子量均勻9.純化策略包括？A.His-tag親和層析B.離子交換層析C.凝膠過濾D.疏水層析10.研發(fā)關(guān)鍵步驟包括？A.基因設(shè)計合成B.載體構(gòu)建C.工程菌/細(xì)胞構(gòu)建D.發(fā)酵純化四、判斷題（共10題，每題2分，共20分）1.大腸桿菌可生產(chǎn)完整三股螺旋膠原蛋白。（）2.脯氨酰羥化酶是正確折疊的必要條件。（）3.重組膠原蛋白免疫原性比動物源低。（）4.畢赤酵母產(chǎn)量比哺乳動物細(xì)胞高。（）5.膠原蛋白二級結(jié)構(gòu)是α-螺旋。（）6.轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶可提高膠原蛋白穩(wěn)定性。（）7.啟動子的作用是終止轉(zhuǎn)錄。（）8.考馬斯亮藍(lán)法可檢測純度。（）9.醫(yī)用敷料主要用于止血和傷口愈合。（）10.合成膠原蛋白無需病毒檢測。（）五、簡答題（共4題，每題5分，共20分）1.簡述合成生物膠原蛋白與動物源的主要區(qū)別。2.簡述重組膠原蛋白表達(dá)載體構(gòu)建的主要步驟。3.簡述發(fā)酵生產(chǎn)的關(guān)鍵控制參數(shù)及作用。4.簡述重組膠原蛋白的主要檢測項目及方法。六、討論題（共2題，每題5分，共10分）1.討論如何提高重組膠原蛋白的表達(dá)產(chǎn)量？2.討論合成生物膠原蛋白在組織工程中的應(yīng)用前景及挑戰(zhàn)？參考答案一、填空題答案1.纖維；Ⅰ2.大腸桿菌3.甘氨酸；脯氨酰羥化酶4.限制酶；DNA連接酶5.十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠6.支架作用（或保濕、抗氧化）7.攪拌速率（或轉(zhuǎn)速）8.三股9.細(xì)胞生物學(xué)10.標(biāo)記基因（或復(fù)制原點）二、單項選擇題答案1.C2.B3.B4.A5.B6.D7.D8.C9.A10.C三、多項選擇題答案1.ABCD2.ABC3.ABCD4.AD5.ABCD6.ABCD7.ABCD8.ABC9.ABCD10.ABCD四、判斷題答案1.×2.√3.√4.√5.×6.√7.×8.√9.√10.×五、簡答題答案1.區(qū)別：①來源：重組依賴基因工程表達(dá)，無動物組織；動物源來自豬/牛等。②安全性：重組無病原體風(fēng)險，免疫原性低；動物源可能帶病原體。③定制性：重組可修飾序列優(yōu)化功能；動物源序列固定。④產(chǎn)量：重組可規(guī)?；l(fā)酵，穩(wěn)定；動物源受原料限制。2.構(gòu)建步驟：①獲取目的基因（PCR/人工合成）；②選擇載體（匹配表達(dá)系統(tǒng)）；③酶切連接（相同限制酶切割+DNA連接酶）；④轉(zhuǎn)化鑒定（導(dǎo)入感受態(tài)細(xì)胞，標(biāo)記基因篩選+測序驗證）。3.關(guān)鍵參數(shù)：①溫度：影響生長/酶活性（如大腸桿菌37℃）；②pH：維持細(xì)胞環(huán)境（6.0-7.5）；③溶氧量：好氧發(fā)酵需充足，否則抑制合成；④誘導(dǎo)劑：如畢赤酵母甲醇誘導(dǎo)，濃度需適宜；⑤攪拌速率：平衡溶氧與剪切力。4.檢測項目：①純度：SDS、HPLC；②分子量：質(zhì)譜、SDS；③結(jié)構(gòu)：圓二色譜（三股螺旋）；④活性：細(xì)胞黏附/增殖實驗；⑤安全性：免疫實驗、內(nèi)毒素檢測；⑥含量：ELISA、考馬斯亮藍(lán)法。六、討論題答案1.提高產(chǎn)量策略：①表達(dá)系統(tǒng)優(yōu)化：選畢赤酵母/CHO細(xì)胞，敲除宿主蛋白酶基因；②載體優(yōu)化：用強(qiáng)啟動子（如AOX1）、密碼子偏好性匹配；③發(fā)酵工藝：流加發(fā)酵減少副產(chǎn)物，控制溫度/pH/溶氧；④折疊優(yōu)化：共表達(dá)脯氨酰羥化酶；⑤純化優(yōu)化：高效層析組合減少損失。例如畢赤酵母密碼子優(yōu)化+甲醇流加