2025年大學生物化學與分子生物學（蛋白提?。┰囶}及答案

（考試時間：90分鐘滿分100分）班級______姓名______第I卷（選擇題共40分）每題只有一個正確答案，請將正確答案的序號填在括號內(nèi)。(總共20題，每題2分，每題給出的選項中，只有一項符合題目要求)1.蛋白質(zhì)提取過程中，常用的緩沖液成分不包括以下哪種？（）A.Tris-HClB.NaClC.SDSD.EDTA2.以下哪種方法不能用于蛋白質(zhì)的初步分離？（）A.離子交換層析B.親和層析C.透析D.離心3.蛋白質(zhì)提取時，為防止蛋白質(zhì)降解，通常需要加入的抑制劑是（）A.蛋白酶KB.苯甲基磺酰氟C.尿素D.鹽酸胍4.細胞破碎的方法中，哪種適用于對細胞器損傷較小的情況？（）A.超聲破碎法B.研磨法C.滲透壓沖擊法D.反復(fù)凍融法5.用于蛋白質(zhì)定量的方法中，靈敏度最高的是（）A.考馬斯亮藍法B.雙縮脲法C.酚試劑法D.Bradford法6.蛋白質(zhì)提取液中去除核酸雜質(zhì)常用的方法是（）A.離心B.過濾C.加入核酸酶D.透析7.親和層析中，與蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的配體通常固定在（）A.層析柱底部B.層析柱頂部C.層析介質(zhì)表面D.溶液中8.離子交換層析中，陽離子交換樹脂可結(jié)合（）A.帶正電荷的蛋白質(zhì)B.帶負電荷的蛋白質(zhì)C.中性蛋白質(zhì)D.所有蛋白質(zhì)9.蛋白質(zhì)提取過程中，為保持蛋白質(zhì)的活性，一般需要控制的條件不包括（）A.溫度B.pH值C.離子強度D.攪拌速度10.以下哪種蛋白質(zhì)提取方法適用于大規(guī)模提?。浚ǎ〢.柱層析法B.超濾法C.沉淀法D.親和萃取法11.蛋白質(zhì)提取液的濃縮方法中，不涉及相分離的是（）A.超濾B.透析袋濃縮C.冷凍干燥D.離心濃縮12.用于蛋白質(zhì)提取的細胞裂解液中，哪種成分可破壞細胞膜的脂質(zhì)雙分子層？（）A.去污劑B.鹽類C.緩沖劑D.蛋白酶抑制劑13.蛋白質(zhì)提取過程中，如何去除提取液中的小分子雜質(zhì)？（）A.凝膠過濾層析B.離子交換層析C.親和層析D.超濾14.以下哪種蛋白質(zhì)沉淀劑不會使蛋白質(zhì)變性？（）A.硫酸銨B.乙醇C.丙酮D.三氯乙酸15.蛋白質(zhì)提取時，為保證蛋白質(zhì)的溶解性，可適當加入（）A.變性劑B.助溶劑C.還原劑D.氧化劑16.離子交換層析的洗脫方式不包括（）A.改變離子強度B.改變pH值C.改變溫度D.改變洗脫劑種類17.蛋白質(zhì)提取過程中，如何檢測提取液中是否含有核酸污染？（）A.紫外分光光度法B.考馬斯亮藍染色C.雙縮脲反應(yīng)D.茚三酮反應(yīng)18.親和層析的特異性主要取決于（）A.層析介質(zhì)的孔徑B.配體與蛋白質(zhì)的親和力C.洗脫條件D.蛋白質(zhì)的濃度19.蛋白質(zhì)提取時，對于一些膜蛋白的提取，可采用（）A.高鹽緩沖液B.低鹽緩沖液C.中性緩沖液D.堿性緩沖液20.蛋白質(zhì)提取過程中，如何判斷提取的蛋白質(zhì)是否保持了天然構(gòu)象？（）A.SDS電泳B.圓二色光譜C.紫外分光光度法D.凝膠過濾層析第II卷（非選擇題共60分）(總共3題，每題20分，按題目要求作答)21.簡述蛋白質(zhì)提取的一般流程及每一步的目的。22.在蛋白質(zhì)提取過程中，如何選擇合適的緩沖液體系？請說明理由。23.材料：有一批細胞樣品，需要從中提取某一種特定的蛋白質(zhì)。已知該蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量較大，且在細胞內(nèi)以與其他蛋白質(zhì)形成復(fù)合物的形式存在，同時對溫度敏感。請設(shè)計一個蛋白質(zhì)提取方案，并說明理由。答案1.C2.C3.B4.C5.C6.C7.C8.B9.D10.C11.A12.A13.D14.A15.B16.C17.A18.B19.A20.B21.蛋白質(zhì)提取一般流程及目的：首先是細胞破碎，目的是使細胞內(nèi)蛋白質(zhì)釋放出來，常用方法有超聲破碎法、研磨法等。然后進行離心，去除細胞碎片等雜質(zhì)，獲取含有蛋白質(zhì)的上清液。接著可采用沉淀法初步分離蛋白質(zhì)，如硫酸銨沉淀等，沉淀蛋白質(zhì)。之后進行初步分離，可利用離子交換層析、親和層析等方法進一步純化蛋白質(zhì)，去除其他雜質(zhì)蛋白。最后對蛋白質(zhì)進行濃縮和保存，常用超濾、冷凍干燥等方法濃縮，保存于合適緩沖液中。22.選擇合適緩沖液體系要考慮多方面。首先要根據(jù)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，選擇能維持其穩(wěn)定的pH范圍，一般接近蛋白質(zhì)的等電點。比如對于酸性蛋白可選擇偏酸性緩沖液。離子強度要適中，避免過高或過低影響蛋白質(zhì)溶解性和活性。溫度敏感的蛋白質(zhì)，緩沖液體系要能在合適溫度下保持性能穩(wěn)定。此外，緩沖液成分不能與蛋白質(zhì)發(fā)生化學反應(yīng)，也不能干擾后續(xù)的分離和檢測步驟。還要考慮成本和操作便利性等因素。23.方案：首先采用溫和的細胞破碎方法，如滲透壓沖擊法，因為該方法對細胞器損傷較小，能減少目標蛋白與其他蛋白質(zhì)復(fù)合物的解離和變性。破碎后進行低速離心，去除未破碎細胞和大顆粒雜質(zhì)。然后在較低