CAR-T細(xì)胞制備技術(shù)員崗位招聘考試試卷及答案一、填空題（每題1分，共10分）1.CAR-T細(xì)胞的核心結(jié)構(gòu)包括抗原識(shí)別域、______、跨膜域和胞內(nèi)信號(hào)域。2.臨床CAR-T制備中，T細(xì)胞主要來(lái)源于患者自身的______。3.激活T細(xì)胞的常用試劑是CD3/CD28抗體______。4.CAR-T常用基因載體為慢病毒，其包裝細(xì)胞系常見(jiàn)的有HEK293T和______。5.CAR-T培養(yǎng)常用基礎(chǔ)培養(yǎng)基是______。6.回輸前需對(duì)患者進(jìn)行______以清除體內(nèi)淋巴細(xì)胞。7.檢測(cè)CAR-T轉(zhuǎn)染效率的常用方法是______。8.CAR-T制備關(guān)鍵步驟：T細(xì)胞分離、激活、______、擴(kuò)增、質(zhì)檢、凍存。9.細(xì)胞凍存保護(hù)劑主要是______。10.CAR-T常見(jiàn)不良反應(yīng)包括CRS和______。答案：1.鉸鏈區(qū)2.外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）3.磁珠4.Lenti-X293T5.RPMI16406.清淋預(yù)處理7.流式細(xì)胞術(shù)（FCM）8.基因轉(zhuǎn)導(dǎo)9.二甲基亞砜（DMSO）10.神經(jīng)毒性（ICANS）二、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.以下哪種不是CAR-T的T細(xì)胞來(lái)源？A.PBMCB.臍帶血C.骨髓D.紅細(xì)胞2.慢病毒屬于哪類(lèi)病毒？A.逆轉(zhuǎn)錄病毒B.腺病毒C.腺相關(guān)病毒D.皰疹病毒3.CAR-T培養(yǎng)不添加的細(xì)胞因子是？A.IL-2B.IL-7C.IL-15D.IL-14.CAR-T質(zhì)檢關(guān)鍵指標(biāo)不包括？A.細(xì)胞活力B.轉(zhuǎn)染效率C.細(xì)胞濃度D.血清含量5.清淋預(yù)處理常用化療組合是？A.環(huán)磷酰胺+氟達(dá)拉濱B.順鉑+紫杉醇C.阿霉素+長(zhǎng)春新堿D.甲氨蝶呤+巰嘌呤6.檢測(cè)CAR表達(dá)的流式抗體針對(duì)？A.抗原識(shí)別域B.鉸鏈區(qū)C.跨膜域D.胞內(nèi)信號(hào)域7.CAR-T凍存濃度一般為？A.1×10^6/mLB.1×10^7/mLC.1×10^8/mLD.1×10^9/mL8.不影響轉(zhuǎn)染效率的因素是？A.病毒滴度B.細(xì)胞活性C.培養(yǎng)溫度D.培養(yǎng)基顏色9.CRS主要標(biāo)志物不包括？A.IL-6B.TNF-αC.IFN-γD.血紅蛋白10.無(wú)菌操作核心是避免？A.細(xì)菌污染B.真菌污染C.支原體污染D.以上都是答案：1.D2.A3.D4.D5.A6.A7.C8.D9.D10.D三、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.CAR-T優(yōu)勢(shì)包括？A.特異性識(shí)別腫瘤抗原B.不依賴(lài)MHC呈遞C.持續(xù)擴(kuò)增D.僅殺傷腫瘤細(xì)胞2.慢病毒包裝需要的質(zhì)粒是？A.轉(zhuǎn)移質(zhì)粒（含CAR）B.包裝質(zhì)粒C.包膜質(zhì)粒D.表達(dá)質(zhì)粒3.CAR-T質(zhì)控環(huán)節(jié)包括？A.原料質(zhì)檢B.過(guò)程質(zhì)檢C.終產(chǎn)品質(zhì)檢D.患者術(shù)前質(zhì)檢4.影響T細(xì)胞激活的因素是？A.磁珠比例B.培養(yǎng)時(shí)間C.細(xì)胞因子濃度D.細(xì)胞密度5.CAR-T禁忌證包括？A.嚴(yán)重肝腎功能不全B.活動(dòng)性感染C.妊娠D.晚期腫瘤6.檢測(cè)CAR-T功能的方法是？A.殺傷實(shí)驗(yàn)B.細(xì)胞因子分泌C.增殖實(shí)驗(yàn)D.流式表型7.細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)是？A.慢凍快融B.避免DMSO直接接觸細(xì)胞C.活力≥90%D.凍存管密封8.CAR-T表型分析常檢測(cè)的標(biāo)志物是？A.CD3B.CD4/CD8C.CARD.CD259.CAR-T關(guān)鍵設(shè)備是？A.生物安全柜B.流式細(xì)胞儀C.培養(yǎng)箱D.離心機(jī)10.CRS處理措施是？A.對(duì)癥支持B.托珠單抗C.糖皮質(zhì)激素D.免疫抑制劑答案：1.ABC2.ABC3.ABCD4.ABCD5.ABC6.ABCD7.ABCD8.ABCD9.ABCD10.ABCD四、判斷題（每題2分，共20分）1.CAR-T必須用自體T細(xì)胞，不能用異體。（×）2.慢病毒可整合到宿主基因組。（√）3.CAR-T培養(yǎng)需添加血清。（×）4.清淋預(yù)處理是CAR-T必要步驟。（√）5.轉(zhuǎn)染效率僅能用流式檢測(cè)。（×）6.凍存DMSO濃度一般為10%。（√）7.IL-2僅用于激活，不用于擴(kuò)增。（×）8.神經(jīng)毒性?xún)H由CRS引起。（×）9.制備需在BLS-2級(jí)生物安全柜操作。（√）10.CAR表達(dá)量與殺傷活性正相關(guān)。（√）五、簡(jiǎn)答題（每題5分，共20分）1.簡(jiǎn)述CAR-T制備核心步驟。答案：①T細(xì)胞分離：從PBMC中分選CD3+T細(xì)胞；②激活：CD3/CD28磁珠刺激；③轉(zhuǎn)導(dǎo)：慢病毒導(dǎo)入CAR基因；④擴(kuò)增：含IL-2等細(xì)胞因子培養(yǎng)至臨床數(shù)量；⑤質(zhì)檢：檢測(cè)活力、轉(zhuǎn)染效率、表型/功能、無(wú)菌性；⑥凍存/回輸。2.簡(jiǎn)述轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)方法及原理。答案：①流式細(xì)胞術(shù)：熒光標(biāo)記抗CAR抗體結(jié)合CAR-T，檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞比例（蛋白水平）；②qPCR：提取基因組DNA，定量CAR基因與內(nèi)參（GAPDH）比值（基因水平）。3.簡(jiǎn)述CAR-T培養(yǎng)污染類(lèi)型及預(yù)防。答案：類(lèi)型：細(xì)菌、真菌、支原體、內(nèi)毒素。預(yù)防：①無(wú)菌操作；②試劑無(wú)菌過(guò)濾+內(nèi)毒素檢測(cè)；③定期環(huán)境/設(shè)備消毒；④實(shí)時(shí)無(wú)菌監(jiān)測(cè)。4.簡(jiǎn)述CRS發(fā)生機(jī)制。答案：CAR-T識(shí)別腫瘤抗原活化，釋放IL-6、TNF-α等促炎因子；刺激單核/巨噬細(xì)胞進(jìn)一步分泌細(xì)胞因子，形成級(jí)聯(lián)反應(yīng)，引發(fā)全身炎癥（發(fā)熱、低血壓、器官損傷）。六、討論題（每題5分，共10分）1.某CAR-T轉(zhuǎn)染效率僅20%（目標(biāo)≥30%），分析原因及解決措施。答案：原因：①病毒滴度低（質(zhì)粒轉(zhuǎn)染差、包裝條件不佳）；②MOI不合適（過(guò)高細(xì)胞毒、過(guò)低轉(zhuǎn)染不足）；③T細(xì)胞活力差（激活不充分）；④孵育條件差（時(shí)間/溫度不當(dāng)）。措施：①優(yōu)化病毒包裝（提高質(zhì)粒純度、調(diào)整轉(zhuǎn)染比例）；②調(diào)整MOI（預(yù)實(shí)驗(yàn)確定10-50）；③提升T細(xì)胞活力（確保PBMC活力≥90%，優(yōu)化激活時(shí)間）；④延長(zhǎng)孵育時(shí)間（24-48h）、添加polybrene。2.如何平衡CAR-T擴(kuò)增效率與細(xì)胞質(zhì)量？答案：①激活：控制磁珠比例（1:1），避免過(guò)度激活耗竭；②轉(zhuǎn)導(dǎo)：選擇合適載體/