實驗儀器操作規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)考試題集前言實驗儀器操作規(guī)范的掌握是保障實驗安全、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性及儀器使用壽命的核心前提。本考試題集圍繞液相色譜儀、氣相色譜儀、紫外可見分光光度計、電子天平、高壓滅菌鍋等常用實驗儀器，通過選擇題、判斷題、簡答題、實操題四類題型，系統(tǒng)考查操作人員對儀器操作流程、維護(hù)要點、安全規(guī)范的理解與應(yīng)用能力，適用于實驗室人員考核、技能培訓(xùn)及自我檢驗。一、選擇題（每題2分，共30分）1.液相色譜儀操作規(guī)范（1）液相色譜儀流動相配置時，需使用的過濾膜孔徑為（）A.0.22μm有機(jī)相膜B.0.45μm水相膜C.0.22μm水相膜（流動相為純水體系）D.0.8μm混合膜（解析：流動相過濾膜需匹配溶劑類型，水相體系選0.22μm水相膜，有機(jī)相用有機(jī)相膜；0.45μm膜精度不足，0.8μm更粗，故C正確。）（2）液相色譜儀開機(jī)順序正確的是（）A.工作站→泵→檢測器B.泵→檢測器→工作站C.檢測器→泵→工作站D.泵→工作站→檢測器（解析：需先開泵使流動相穩(wěn)定，再開檢測器預(yù)熱，最后啟動工作站，B正確。）2.氣相色譜儀操作規(guī)范（1）氣相色譜進(jìn)樣時，微量注射器需（）A.直接插入進(jìn)樣口注射B.排氣泡后快速注入C.緩慢推注樣品D.注射后停留5秒再拔出（解析：進(jìn)樣需排氣泡，快速注入避免樣品擴(kuò)散，注射后立即拔出，B正確。）（2）氣相色譜柱老化的目的是（）A.去除柱內(nèi)殘留污染物B.降低柱溫C.增加柱效D.縮短分析時間（解析：老化通過高溫烘烤去除柱內(nèi)殘留雜質(zhì)，A正確；老化會升高初始溫度，不直接增加柱效或縮短時間。）3.紫外可見分光光度計操作規(guī)范（1）紫外比色皿的正確使用方法是（）A.用手觸摸透光面B.待測液潤洗比色皿3次C.比色皿裝滿樣品后測定D.不同樣品共用同一比色皿（不清洗）（解析：透光面不可觸摸，需潤洗避免殘留干擾，樣品量以沒過光程為宜，不同樣品需清洗，B正確。）（2）紫外分光光度計波長校準(zhǔn)應(yīng)使用（）A.蒸餾水B.重鉻酸鉀溶液C.鐠釹濾光片D.氯化鈉溶液（解析：鐠釹濾光片用于波長校準(zhǔn)，重鉻酸鉀用于吸光度校準(zhǔn)，C正確。）4.電子天平操作規(guī)范（1）電子天平稱量時，應(yīng)（）A.打開防風(fēng)罩快速放樣品B.待天平穩(wěn)定后讀數(shù)C.稱量腐蝕性樣品直接放秤盤D.多次稱量同一樣品取平均值（未清零）（解析：需關(guān)閉防風(fēng)罩、待穩(wěn)定讀數(shù)，腐蝕性樣品需用容器，多次稱量需清零，B正確。）（2）電子天平的校準(zhǔn)周期為（）A.每月一次B.每季度一次C.半年一次D.每年一次（解析：根據(jù)使用頻率，通常每季度校準(zhǔn)一次，B正確；高頻使用可每月，低頻可半年。）5.高壓滅菌鍋操作規(guī)范（1）高壓滅菌鍋滅菌時，需先（）A.加熱升壓B.排冷空氣C.放入樣品D.設(shè)置滅菌時間（解析：冷空氣會影響滅菌溫度，需先排盡，B正確。）（2）高壓滅菌鍋的滅菌溫度與壓力對應(yīng)關(guān)系（100kPa下）為（）A.100℃B.115℃C.121℃D.134℃（解析：標(biāo)準(zhǔn)滅菌條件為100kPa（表壓）下121℃，C正確。）二、判斷題（每題2分，共20分）1.液相色譜儀使用完畢后，應(yīng)直接關(guān)閉電源，無需沖洗系統(tǒng)。（×）（解析：需用純水/甲醇沖洗色譜柱和管路，避免殘留堵塞。）2.氣相色譜進(jìn)樣后，注射器應(yīng)立即拔出進(jìn)樣口。（√）（解析：快速拔出可減少樣品擴(kuò)散，避免進(jìn)樣口污染。）3.紫外分光光度計測定樣品時，比色皿可裝樣至滿刻度。（×）（解析：樣品量以沒過光程（約2/3體積）為宜，過滿易溢出腐蝕儀器。）4.電子天平稱量時，可在天平開啟狀態(tài)下添加砝碼校準(zhǔn)。（×）（解析：校準(zhǔn)需在天平關(guān)閉、空載狀態(tài)下進(jìn)行。）5.高壓滅菌鍋滅菌結(jié)束后，可立即打開鍋蓋取樣品。（×）（解析：需待壓力降至0、自然冷卻后開蓋，避免蒸汽燙傷。）6.液相色譜流動相可直接用自來水配制。（×）（解析：需用超純水，避免雜質(zhì)干擾檢測。）7.氣相色譜儀柱溫箱溫度可設(shè)置高于色譜柱最高使用溫度。（×）（解析：柱溫需低于色譜柱最高溫度，否則損壞色譜柱。）8.紫外分光光度計的比色皿使用后，可用鉻酸洗液浸泡清洗。（×）（解析：鉻酸洗液會腐蝕石英比色皿，應(yīng)使用純水或乙醇清洗。）9.電子天平的防風(fēng)罩可在稱量過程中打開。（×）（解析：防風(fēng)罩需關(guān)閉，避免氣流影響稱量精度。）10.高壓滅菌鍋的安全閥需每月手動排氣檢查。（√）（解析：定期檢查安全閥確保壓力釋放功能正常。）三、簡答題（每題10分，共30分）1.簡述液相色譜儀日常維護(hù)的關(guān)鍵步驟。答：①流動相維護(hù)：實驗前過濾、脫氣，實驗后用純水/甲醇沖洗管路及色譜柱（梯度洗脫需先過渡到低有機(jī)相）；②色譜柱維護(hù)：使用后用適配流動相沖洗，柱壓過高時反向沖洗（部分色譜柱不可），長期不用需封存（兩端堵頭）；③儀器清潔：進(jìn)樣針、進(jìn)樣口定期清洗，檢測器池體用溶劑沖洗；④軟件與硬件檢查：工作站數(shù)據(jù)備份，泵、檢測器壓力/波長校準(zhǔn)。2.氣相色譜儀進(jìn)樣操作的“三快一慢”指什么？有何作用？答：“三快”指進(jìn)樣快、拔針快、程序升溫快（或進(jìn)樣后快速啟動分析程序），“一慢”指推樣慢。進(jìn)樣、拔針快：減少樣品在進(jìn)樣口的擴(kuò)散，保證峰形尖銳；推樣慢：避免樣品倒吸或進(jìn)樣量不均；程序升溫快：快速達(dá)到分析溫度，縮短分析時間，減少峰展寬。3.高壓滅菌鍋滅菌失敗的常見原因有哪些？如何排查？答：常見原因及排查：①冷空氣未排盡：觀察滅菌過程中壓力-溫度曲線，若溫度滯后壓力，需重新排氣；②安全閥故障：手動排氣時壓力無法維持，檢查安全閥是否堵塞；③密封圈老化：滅菌時壓力下降快，更換密封圈；④加熱管損壞：升溫緩慢，檢測加熱管電阻；⑤樣品過多/過緊：滅菌腔內(nèi)蒸汽循環(huán)受阻，減少樣品量、松散擺放。四、實操題（每題20分，共20分）考核項目：液相色譜儀開機(jī)與系統(tǒng)平衡操作操作步驟及評分點（總分20分）：1.準(zhǔn)備工作（3分）：檢查流動相余量（≥500mL），確認(rèn)色譜柱連接正確（流動相流向與柱箭頭一致），廢液桶未滿。2.開機(jī)順序（4分）：依次開啟泵→檢測器→工作站（順序錯誤扣2分）；設(shè)置泵流速（1mL/min）、柱溫（30℃）、檢測器波長（254nm）。3.流動相排氣（4分）：打開泵“排氣閥”，按“purge”鍵排氣3-5min（無氣泡后關(guān)閉排氣閥）。4.系統(tǒng)平衡（5分）：觀察泵壓力穩(wěn)定（波動≤0.5MPa）、基線噪聲≤1×10??AU，記錄平衡時間（≤30min為合格）。5.關(guān)機(jī)前準(zhǔn)備（4分）：提前10min切換至10%甲醇水沖洗系統(tǒng)（梯度洗脫需過渡），沖洗后關(guān)閉泵、檢測器、工作站，填寫使用記錄。附錄：儀器操作規(guī)范核心文件清單1.《液相色譜儀操作維護(hù)SOP》2.《氣相色譜儀進(jìn)樣與色譜