心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠的療效及作用機(jī)制探究一、引言1.1研究背景與意義慢性心力衰竭（ChronicHeartFailure，CHF）是各種心臟疾病的嚴(yán)重表現(xiàn)或晚期階段，被視為心血管類疾病生命終結(jié)的前站，也是21世紀(jì)心血管疾病領(lǐng)域面臨的最嚴(yán)重挑戰(zhàn)之一。其主要是由于長期心臟疾病，如心肌梗死、心臟瓣膜病、心肌炎癥等原因造成心肌損傷，使心臟結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，最終導(dǎo)致心臟收縮和充盈功能減低?！吨袊难芙】蹬c疾病報(bào)告2021》顯示，我國≥35歲居民心衰患病率為1.3%，以此推算，我國約有1370萬心衰患者。隨著人口老齡化加劇以及急性心肌梗死等心血管疾病救治成功率的提高，慢性心力衰竭的發(fā)病率和患病率呈持續(xù)上升趨勢。慢性心力衰竭嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，給患者及其家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)。患者常常會出現(xiàn)呼吸困難、乏力、水腫等癥狀，這些癥狀不僅限制了患者的日常活動和工作能力，還導(dǎo)致患者睡眠質(zhì)量下降、心理壓力增大，甚至引發(fā)焦慮和抑郁等心理問題。從對全身臟器和系統(tǒng)功能的影響來看，慢性心力衰竭會引起肺淤血，誘發(fā)呼吸道感染；導(dǎo)致胃腸道淤血、肝硬化，出現(xiàn)食欲減退、消化不良，長期可引發(fā)營養(yǎng)不良、惡病質(zhì)等；還會影響泌尿系統(tǒng)，造成尿少、腎功能下降，甚至發(fā)生腎衰竭。其死亡率與常見惡性腫瘤相近，5年生存率甚至低于多種癌癥，且再住院率居高不下，形成了巨大的疾病負(fù)擔(dān)，給社會醫(yī)療資源也帶來了嚴(yán)峻考驗(yàn)。目前，慢性心力衰竭的治療主要包括藥物治療、器械治療和心臟移植等方法。藥物治療方面，雖然有血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI）、β受體阻滯劑、醛固酮受體拮抗劑、血管緊張素受體拮抗劑（ARB）等藥物，可在一定程度上改善患者的癥狀和預(yù)后，但這些藥物存在不同程度的不良反應(yīng)和局限性，部分患者對藥物的耐受性較差，且長期使用可能出現(xiàn)療效下降等問題。例如，ACEI可能導(dǎo)致干咳、低血壓、腎功能損害等不良反應(yīng)；β受體阻滯劑可能引起心動過緩、乏力、支氣管痙攣等。器械治療如心臟再同步化治療（CRT）、植入式心律轉(zhuǎn)復(fù)除顫器（ICD）等，雖然能為部分患者帶來益處，但存在嚴(yán)格的適應(yīng)證限制，且費(fèi)用高昂，難以廣泛普及。心臟移植是終末期心力衰竭的有效治療方法，但由于供體短缺、免疫排斥反應(yīng)和高昂的治療費(fèi)用等問題，其應(yīng)用受到極大限制。因此，研發(fā)安全有效、不良反應(yīng)少的治療慢性心力衰竭的新方法和新藥物具有重要的臨床意義和迫切需求。中醫(yī)藥在治療慢性心力衰竭方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢，可與西醫(yī)形成相輔相成的效果。中藥多成分、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)，能夠從整體上調(diào)節(jié)機(jī)體的生理功能，改善心臟的舒縮功能，減輕心肌損傷，抑制神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的過度激活，從而延緩心室重構(gòu)，提高患者的生活質(zhì)量和生存率。心衰Ⅰ號作為一種具有益氣養(yǎng)陰、活血化痰作用的中藥配方，在前期臨床研究中已顯示出對慢性收縮性心力衰竭具有一定的治療效果，能改善患者癥狀、體征、生活質(zhì)量評分、腦鈉肽（BNP）、左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、6分鐘步行試驗(yàn)（6MWT）等指標(biāo)，且安全性良好。然而，其具體作用機(jī)制尚未完全明確。深入研究心衰Ⅰ號治療慢性心力衰竭大鼠的作用及機(jī)制，不僅可以為其臨床應(yīng)用提供更堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)支持，進(jìn)一步推廣其在慢性心力衰竭治療中的應(yīng)用，還能豐富中醫(yī)藥治療慢性心力衰竭的理論體系，為開發(fā)治療慢性心力衰竭的新型中藥制劑提供新思路和方法，具有重要的科學(xué)研究價(jià)值和臨床應(yīng)用前景。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在慢性心力衰竭的治療方面，國外研究起步較早，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)已經(jīng)形成了一套較為成熟的治療體系。藥物治療是慢性心力衰竭治療的基礎(chǔ)，國外在這方面進(jìn)行了大量的臨床研究和實(shí)踐。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI）被證實(shí)能夠抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS），減少血管緊張素Ⅱ的生成，從而降低心臟負(fù)荷，改善心室重構(gòu)，多項(xiàng)大規(guī)模臨床試驗(yàn)如SOLVD研究、CONSENSUS研究等，均有力地證明了ACEI在降低慢性心力衰竭患者病死率和改善預(yù)后方面的顯著效果，使其成為慢性心力衰竭治療的基石藥物之一。β受體阻滯劑通過抑制交感神經(jīng)系統(tǒng)的過度激活，減慢心率，降低心肌耗氧量，改善心肌重構(gòu)，CIBISⅡ、MERIT-HF及COPERNICUS等大規(guī)模實(shí)驗(yàn)表明，長期應(yīng)用β受體阻滯劑可降低心力衰竭患者總體死亡率、心血管病死亡率、心源性猝死以及心力衰竭惡化引起的死亡，在慢性心力衰竭治療中具有不可或缺的地位。醛固酮受體拮抗劑以往多作為利尿劑使用，近年來的研究發(fā)現(xiàn)其在慢性心力衰竭治療中具有重要作用，RALES、EPHESUS、EMPHASIS-HF等大規(guī)模循證醫(yī)學(xué)研究結(jié)果證實(shí)，依普利酮等醛固酮受體拮抗劑不僅能改善心力衰竭患者的預(yù)后，還對NYHAⅡ級患者同樣有益，可降低心力衰竭患者心臟性病死率，減少死亡風(fēng)險(xiǎn)。此外，血管緊張素受體拮抗劑（ARB）、伊伐布雷定等藥物也在慢性心力衰竭治療中發(fā)揮著各自的作用，不斷完善著慢性心力衰竭的藥物治療方案。在器械治療方面，國外的研究和應(yīng)用也處于領(lǐng)先地位。心臟再同步化治療（CRT）通過改善心臟不同部位的收縮同步性，提高心臟泵血功能，適用于存在心臟收縮不同步的慢性心力衰竭患者，相關(guān)臨床研究顯示，CRT可顯著改善患者的心功能和生活質(zhì)量，降低死亡率。植入式心律轉(zhuǎn)復(fù)除顫器（ICD）則主要用于預(yù)防慢性心力衰竭患者發(fā)生致命性心律失常，降低心源性猝死的風(fēng)險(xiǎn)，MADIT-II、SCD-HeFT等研究表明，ICD能有效改善慢性心力衰竭患者的生存率。然而，這些器械治療存在嚴(yán)格的適應(yīng)證限制，且費(fèi)用高昂，在發(fā)展中國家的普及程度較低。心臟移植作為終末期心力衰竭最有效的治療方法，國外在手術(shù)技術(shù)、免疫抑制劑研發(fā)和術(shù)后管理等方面取得了顯著進(jìn)展，手術(shù)成功率和患者生存率不斷提高。但由于供體短缺、免疫排斥反應(yīng)和高昂的治療費(fèi)用等問題，心臟移植的廣泛應(yīng)用仍然面臨巨大挑戰(zhàn)。國內(nèi)在慢性心力衰竭治療方面，西醫(yī)治療主要遵循國際指南和規(guī)范，并結(jié)合國內(nèi)患者的特點(diǎn)進(jìn)行優(yōu)化和調(diào)整。同時(shí)，中醫(yī)藥治療慢性心力衰竭具有悠久的歷史和豐富的經(jīng)驗(yàn)，近年來受到了廣泛關(guān)注和深入研究。中醫(yī)認(rèn)為慢性心力衰竭屬于“心悸”“怔忡”“水腫”“喘證”等范疇，其病機(jī)主要涉及心、肺、脾、腎等臟腑功能失調(diào)，氣血陰陽虧虛，瘀血、水飲內(nèi)停等。中醫(yī)藥通過整體調(diào)理，多靶點(diǎn)、多途徑地發(fā)揮治療作用，可改善心臟功能，緩解癥狀，提高患者生活質(zhì)量，減少住院次數(shù)，降低死亡率。例如，芪藶強(qiáng)心膠囊是在中醫(yī)脈絡(luò)學(xué)說指導(dǎo)下研發(fā)的治療慢性心力衰竭的創(chuàng)新中藥，多項(xiàng)臨床研究表明，在國際標(biāo)準(zhǔn)治療基礎(chǔ)上加用芪藶強(qiáng)心膠囊，可有效降低標(biāo)志心力衰竭病變程度的氨基末端B型利鈉肽前體水平，增加心衰患者6分鐘步行距離，改善明尼蘇達(dá)生活質(zhì)量評分，明顯提高臨床療效，改善心功能，減少復(fù)合終點(diǎn)事件發(fā)生率。其相關(guān)研究成果發(fā)表在《JournaloftheAmericanCollegeofCardiology》雜志上，并被列入JACC2013年度學(xué)術(shù)亮點(diǎn)，同時(shí)被Nature子刊Naturereviewscardiology收錄，顯示出通絡(luò)復(fù)方芪藶強(qiáng)心膠囊受到國際醫(yī)學(xué)界的廣泛認(rèn)可和高度肯定。關(guān)于心衰Ⅰ號的研究，目前主要集中在臨床療效觀察方面。有研究將120例慢性收縮性心力衰竭患者隨機(jī)分為治療組與對照組，在西醫(yī)治療的基礎(chǔ)上，治療組口服心衰Ⅰ號，對照組口服心衰Ⅰ號安慰劑，結(jié)果顯示，治療組在癥狀、體征、綜合療效、腦鈉肽（BNP）、左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、6分鐘步行試驗(yàn)（6MWT）等方面均優(yōu)于對照組，且治療期間無不良反應(yīng)發(fā)生，表明心衰Ⅰ號長期治療慢性收縮性心力衰竭患者安全有效。但心衰Ⅰ號治療慢性心力衰竭的具體作用機(jī)制尚未完全明確，相關(guān)的基礎(chǔ)研究較少，在作用靶點(diǎn)、信號通路等方面的研究還存在空白，有待進(jìn)一步深入探索和研究，以揭示其治療慢性心力衰竭的科學(xué)內(nèi)涵，為其臨床廣泛應(yīng)用提供更堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)。1.3研究目的與創(chuàng)新點(diǎn)本研究旨在通過建立慢性心力衰竭大鼠模型，深入探究心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠的治療作用及相關(guān)作用機(jī)制。具體研究目的包括：觀察心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠心臟功能、心臟結(jié)構(gòu)以及心肌組織形態(tài)學(xué)的影響，評估其治療效果；分析心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、氧化應(yīng)激水平、炎癥反應(yīng)等方面的調(diào)節(jié)作用，揭示其可能的作用途徑；從分子生物學(xué)層面，探討心衰Ⅰ號對心肌細(xì)胞凋亡、自噬以及相關(guān)信號通路的影響，明確其作用靶點(diǎn)，為心衰Ⅰ號在慢性心力衰竭治療中的臨床應(yīng)用提供更全面、深入的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)支持。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：首先，在研究對象上，選擇慢性心力衰竭大鼠模型進(jìn)行深入研究，相較于以往單純的臨床觀察，能更直接、精準(zhǔn)地揭示心衰Ⅰ號的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供更堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。其次，在研究方法上，采用多維度、多層次的綜合研究手段，不僅從宏觀的心臟功能、結(jié)構(gòu)以及組織形態(tài)學(xué)等方面進(jìn)行觀察，還從微觀的神經(jīng)內(nèi)分泌、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡與自噬以及分子信號通路等層面進(jìn)行深入探究，全面系統(tǒng)地解析心衰Ⅰ號治療慢性心力衰竭的作用機(jī)制，彌補(bǔ)了以往研究在作用機(jī)制探索方面的不足。再者，在心衰Ⅰ號作用機(jī)制的研究中，有望發(fā)現(xiàn)新的作用靶點(diǎn)和信號通路，豐富中醫(yī)藥治療慢性心力衰竭的理論體系，為開發(fā)治療慢性心力衰竭的新型中藥制劑提供新思路和方法，這對于推動中醫(yī)藥在慢性心力衰竭治療領(lǐng)域的發(fā)展具有重要意義。二、心衰Ⅰ號與慢性心力衰竭概述2.1慢性心力衰竭簡介2.1.1定義與分類慢性心力衰竭是一種復(fù)雜的臨床綜合征，是各種心臟疾病進(jìn)展到嚴(yán)重階段的共同結(jié)局。其定義為由于任何心臟結(jié)構(gòu)或功能異常導(dǎo)致心室充盈或射血能力受損的一組復(fù)雜臨床綜合征，主要表現(xiàn)為呼吸困難、乏力（活動耐量受限）和液體潴留（肺淤血和外周水腫）。根據(jù)心力衰竭發(fā)生的部位，可分為左心衰竭、右心衰竭和全心衰竭。左心衰竭較為常見，主要以肺循環(huán)淤血和心排血量降低為主要表現(xiàn)，患者會出現(xiàn)不同程度的呼吸困難，如勞力性呼吸困難、端坐呼吸、夜間陣發(fā)性呼吸困難等，還伴有咳嗽、咳痰、咯血、乏力、疲倦等癥狀。右心衰竭則以體循環(huán)淤血為主要表現(xiàn)，常見癥狀包括腹脹、食欲不振、惡心、嘔吐、頸靜脈怒張、下肢水腫等。全心衰竭是右心衰繼發(fā)于左心衰而形成，此時(shí)患者同時(shí)具備左心衰和右心衰的癥狀，因右心衰時(shí)右心排血量減少，肺淤血癥狀可能較單純左心衰時(shí)有所減輕。依據(jù)心臟收縮和舒張功能的受損情況，慢性心力衰竭又可分為射血分?jǐn)?shù)降低的心衰（HFrEF）、射血分?jǐn)?shù)保留的心衰（HFpEF）和射血分?jǐn)?shù)中間值的心衰（HFmrEF）。HFrEF患者的左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）低于40%，心臟收縮功能明顯下降，導(dǎo)致心輸出量減少；HFpEF患者的LVEF正常或輕度降低（≥50%），主要是由于心室舒張功能障礙，心室充盈受限；HFmrEF患者的LVEF處于40%-49%之間，兼具收縮和舒張功能異常的表現(xiàn)。不同類型的慢性心力衰竭在發(fā)病機(jī)制、治療策略和預(yù)后等方面存在差異，準(zhǔn)確的分類有助于臨床醫(yī)生制定個(gè)性化的治療方案，提高治療效果。2.1.2發(fā)病機(jī)制慢性心力衰竭的發(fā)病機(jī)制極為復(fù)雜，是多種因素共同作用的結(jié)果，涉及心肌損傷、神經(jīng)內(nèi)分泌激活、血流動力學(xué)異常以及心室重構(gòu)等多個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。原發(fā)性心肌損害是慢性心力衰竭發(fā)病的重要基礎(chǔ)，如冠狀動脈粥樣硬化性心臟病導(dǎo)致的心肌缺血、心肌梗死，可使心肌細(xì)胞大量壞死，心肌收縮力顯著下降；各種類型的心肌病，如擴(kuò)張型心肌病、肥厚型心肌病等，會導(dǎo)致心肌結(jié)構(gòu)和功能的原發(fā)性改變，影響心臟的正常泵血功能。此外，長期的心臟負(fù)荷過重，包括壓力負(fù)荷過重和容量負(fù)荷過重，也是引發(fā)慢性心力衰竭的重要原因。壓力負(fù)荷過重常見于高血壓、主動脈瓣狹窄、肺動脈高壓等疾病，導(dǎo)致心臟射血阻力增加，心室壁應(yīng)力增大，心肌代償性肥厚，長期發(fā)展可導(dǎo)致心肌結(jié)構(gòu)和功能改變；容量負(fù)荷過重則多見于心臟瓣膜關(guān)閉不全、先天性心臟病導(dǎo)致的心內(nèi)或大血管間左向右分流等情況，使心臟舒張期容量增加，心室擴(kuò)張，進(jìn)而影響心臟功能。當(dāng)心肌受到損傷或心臟負(fù)荷增加時(shí)，機(jī)體的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)會被激活，其中腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）和交感神經(jīng)系統(tǒng)（SNS）的激活在慢性心力衰竭的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。RAAS的激活會導(dǎo)致血管緊張素Ⅱ生成增加，引起血管收縮，外周阻力增大，血壓升高，進(jìn)一步加重心臟后負(fù)荷；同時(shí)，醛固酮分泌增多，導(dǎo)致水鈉潴留，血容量增加，加重心臟前負(fù)荷。SNS的激活使去甲腎上腺素釋放增加，引起心率加快、心肌收縮力增強(qiáng)，短期內(nèi)可維持心輸出量，但長期過度激活會導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡、心肌肥厚和心室重構(gòu)，增加心肌耗氧量，加重心肌損傷。此外，血管加壓素、內(nèi)皮素等神經(jīng)內(nèi)分泌因子的異常分泌也參與了慢性心力衰竭的病理過程，它們相互作用，形成惡性循環(huán)，促使病情不斷進(jìn)展。血流動力學(xué)異常是慢性心力衰竭的重要特征之一，主要表現(xiàn)為心輸出量減少和肺循環(huán)及體循環(huán)淤血。心輸出量減少導(dǎo)致組織器官灌注不足，引起乏力、疲倦、頭暈等癥狀；肺循環(huán)淤血導(dǎo)致肺靜脈壓升高，出現(xiàn)呼吸困難、咳嗽、咳痰等癥狀；體循環(huán)淤血則表現(xiàn)為靜脈系統(tǒng)壓力升高，出現(xiàn)頸靜脈怒張、肝大、下肢水腫等癥狀。心室重構(gòu)是慢性心力衰竭發(fā)展的重要病理過程，在心肌損傷和神經(jīng)內(nèi)分泌激活等因素的作用下，心肌細(xì)胞發(fā)生肥大、凋亡，細(xì)胞外基質(zhì)增多，心肌纖維化，導(dǎo)致心臟結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行性惡化。早期的心肌肥厚是一種代償機(jī)制，可增加心肌收縮力，維持心臟功能，但隨著病情進(jìn)展，心肌肥厚逐漸失代償，心室腔擴(kuò)大，心肌收縮和舒張功能進(jìn)一步受損，最終導(dǎo)致慢性心力衰竭的發(fā)生和發(fā)展。2.1.3臨床癥狀與危害慢性心力衰竭患者的臨床癥狀多樣，且隨著病情的進(jìn)展而逐漸加重，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和身體健康。呼吸困難是慢性心力衰竭最常見且突出的癥狀，早期多表現(xiàn)為勞力性呼吸困難，即在體力活動時(shí)出現(xiàn)氣促，休息后可緩解，這是由于運(yùn)動時(shí)心臟負(fù)荷增加，心輸出量不能滿足機(jī)體需求，導(dǎo)致肺淤血加重所致。隨著病情加重，患者會出現(xiàn)端坐呼吸，即需要采取端坐位或半臥位才能緩解呼吸困難，這是因?yàn)槠脚P時(shí)回心血量增加，加重了肺淤血。夜間陣發(fā)性呼吸困難也較為常見，患者在夜間睡眠中突然因呼吸困難而驚醒，被迫坐起，輕者數(shù)分鐘后癥狀緩解，重者可持續(xù)較長時(shí)間，并可伴有咳嗽、咳泡沫樣痰等癥狀，這與睡眠時(shí)迷走神經(jīng)張力增高，小支氣管收縮，以及平臥位時(shí)膈肌上抬，肺活量減少等因素有關(guān)。此外，患者還可能出現(xiàn)急性肺水腫，表現(xiàn)為嚴(yán)重的呼吸困難、端坐呼吸、咳粉紅色泡沫樣痰，是慢性心力衰竭的嚴(yán)重并發(fā)癥，如不及時(shí)治療，可危及生命。乏力、疲倦也是慢性心力衰竭患者常見的癥狀之一，這主要是由于心輸出量減少，組織器官灌注不足，導(dǎo)致能量代謝障礙所致。患者日?；顒幽芰γ黠@下降，甚至簡單的家務(wù)勞動都難以完成，嚴(yán)重影響生活自理能力。水腫是慢性心力衰竭患者的典型體征之一，多從下肢開始，逐漸向上蔓延，嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)全身性水腫。這是因?yàn)轶w循環(huán)淤血，靜脈壓升高，導(dǎo)致液體從血管內(nèi)滲出到組織間隙所致。此外，患者還可能出現(xiàn)胸腔積液、腹水等，進(jìn)一步加重呼吸困難和腹脹等癥狀。除上述癥狀外，慢性心力衰竭還會對全身多個(gè)臟器和系統(tǒng)功能產(chǎn)生不利影響。在呼吸系統(tǒng)，由于肺淤血，患者容易并發(fā)呼吸道感染，且感染不易控制，進(jìn)一步加重心肺功能負(fù)擔(dān)。在消化系統(tǒng)，胃腸道淤血可導(dǎo)致食欲不振、惡心、嘔吐、腹脹、消化不良等癥狀，長期可引發(fā)營養(yǎng)不良、惡病質(zhì)等，影響患者的營養(yǎng)狀況和身體抵抗力。在泌尿系統(tǒng)，心輸出量減少和腎灌注不足可導(dǎo)致尿少、腎功能下降，嚴(yán)重時(shí)可發(fā)展為腎衰竭。此外，慢性心力衰竭患者常伴有焦慮、抑郁等心理問題，這不僅會影響患者的治療依從性，還會進(jìn)一步加重病情，形成惡性循環(huán)。慢性心力衰竭的死亡率較高，5年生存率與常見惡性腫瘤相近，且再住院率居高不下，給患者家庭和社會帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神壓力，成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。2.2心衰Ⅰ號介紹2.2.1方劑組成心衰Ⅰ號是由江蘇省名中醫(yī)李七一根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)，針對慢性心力衰竭的病機(jī)特點(diǎn)精心研制的中藥方劑。其方劑組成包括生炙黃芪、山茱萸、麥冬、海藻、桂枝、生蒲黃（包）、路路通。其中，生黃芪與炙黃芪并用，二者在方劑中用量較大，生黃芪偏于利水，炙黃芪偏于補(bǔ)氣；山茱萸味酸性溫，麥冬甘苦、微寒；海藻咸寒；生蒲黃行血祛瘀、利水消腫；路路通行氣寬中、活血通絡(luò)利水；桂枝和營通陽化氣利水。全方七味藥相互配伍，共同發(fā)揮益氣溫陽、滋陰養(yǎng)血、活血利水、化痰軟堅(jiān)的功效。2.2.2各成分功效分析生炙黃芪在方中為君藥，炙黃芪善于補(bǔ)氣升陽，可增強(qiáng)心臟的功能活動，補(bǔ)充心氣，提高心臟的泵血能力，改善因心氣不足導(dǎo)致的乏力、疲倦等癥狀。生黃芪則長于利水消腫，能促進(jìn)體內(nèi)多余水分的代謝，減輕心臟的前負(fù)荷，緩解慢性心力衰竭患者常見的水腫癥狀。二者合用，補(bǔ)氣益心與利水消腫之力兼具，對慢性心力衰竭患者的心功能改善和水腫消退具有重要作用。山茱萸與麥冬為臣藥，山茱萸既能補(bǔ)陰又能補(bǔ)陽，可收斂耗散的心氣，調(diào)節(jié)心臟的陰陽平衡，使三焦之氣化得常，對穩(wěn)定心臟的生理功能具有積極意義。麥冬養(yǎng)陰生津、除煩安神，可滋養(yǎng)心陰，緩解因心陰不足導(dǎo)致的心煩、失眠等癥狀，同時(shí)有助于減輕心肌缺血損傷，保護(hù)心肌細(xì)胞。二者相互配合，協(xié)同發(fā)揮補(bǔ)陰扶陽、寧心安神的作用。海藻、生蒲黃和路路通作為佐藥，海藻咸寒，具有化痰軟堅(jiān)利水的功效，可消除體內(nèi)的痰濁和瘀血，改善心臟周圍的血液循環(huán)，減輕心臟的負(fù)擔(dān)。生蒲黃行血祛瘀、利水消腫，能促進(jìn)血液運(yùn)行，消除瘀血阻滯，同時(shí)協(xié)助利水消腫，對改善慢性心力衰竭患者的血液循環(huán)和減輕水腫有顯著效果。路路通行氣寬中、活血通絡(luò)利水，可增強(qiáng)氣血運(yùn)行，使經(jīng)絡(luò)通暢，進(jìn)一步促進(jìn)水液代謝，協(xié)同其他藥物發(fā)揮治療作用。三者合用，活血化痰利水之功倍增，共同調(diào)節(jié)機(jī)體的氣血水液代謝，改善慢性心力衰竭的病理狀態(tài)。桂枝為使藥，具有和營通陽化氣利水的作用，可溫通心陽，促進(jìn)心臟的陽氣運(yùn)行，增強(qiáng)心臟的功能。同時(shí)，協(xié)助其他藥物發(fā)揮作用，使全方的藥力更好地通達(dá)周身，共同調(diào)節(jié)機(jī)體的陰陽平衡和水液代謝，達(dá)到治療慢性心力衰竭的目的。2.2.3中醫(yī)理論基礎(chǔ)中醫(yī)認(rèn)為慢性心力衰竭的病機(jī)主要涉及心、肺、脾、腎等臟腑功能失調(diào)，氣血陰陽虧虛，瘀血、水飲內(nèi)停。心主血脈，心氣不足則推動血液運(yùn)行無力，導(dǎo)致瘀血內(nèi)阻；肺主氣司呼吸，肺失宣降則水液代謝失常，聚濕成痰；脾主運(yùn)化，脾虛則水濕運(yùn)化無力，水濕內(nèi)停；腎主水，腎陽不足則氣化失司，水液泛濫。此外，氣血陰陽虧虛在慢性心力衰竭的發(fā)病過程中也起著重要作用，氣陰兩虛可導(dǎo)致心臟功能減退，陽氣虧虛則溫煦無力，陰血不足則心失所養(yǎng)。心衰Ⅰ號的組方原理正是基于上述中醫(yī)理論，以益氣溫陽、滋陰養(yǎng)血、活血利水、化痰軟堅(jiān)為治療原則。方中以生炙黃芪補(bǔ)氣為君藥，針對慢性心力衰竭患者心氣不足的根本病機(jī)，增強(qiáng)心臟的功能，推動血液運(yùn)行。山茱萸與麥冬滋陰補(bǔ)陽，收斂心氣，使三焦氣化正常，糾正氣血陰陽虧虛的狀態(tài)。海藻、生蒲黃、路路通活血化痰利水，消除體內(nèi)的瘀血、痰濁和水飲，改善心臟的血液循環(huán)和周圍組織的水腫。桂枝通陽化氣利水，引藥達(dá)病所，協(xié)助其他藥物發(fā)揮作用。全方配伍嚴(yán)謹(jǐn)，君臣佐使分明，從多個(gè)方面針對慢性心力衰竭的病機(jī)進(jìn)行治療，通過調(diào)節(jié)機(jī)體的陰陽平衡、氣血運(yùn)行和水液代謝，達(dá)到改善心臟功能、緩解癥狀、延緩病情進(jìn)展的目的，體現(xiàn)了中醫(yī)整體觀念和辨證論治的特色。三、實(shí)驗(yàn)材料與方法3.1實(shí)驗(yàn)動物與材料3.1.1實(shí)驗(yàn)動物選擇本實(shí)驗(yàn)選用清潔級健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠60只，體重200-220g，購自[實(shí)驗(yàn)動物供應(yīng)商名稱]，動物生產(chǎn)許可證號為[許可證編號]。選擇SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)動物，主要是因?yàn)槠渚哂兄T多優(yōu)勢，能很好地滿足本研究的需求。SD大鼠遺傳背景清晰，個(gè)體差異小，對實(shí)驗(yàn)條件的反應(yīng)較為一致，這使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有良好的重復(fù)性和可靠性。其心血管系統(tǒng)的解剖結(jié)構(gòu)和生理功能與人類有較高的相似性，在慢性心力衰竭的研究中，能夠較好地模擬人類慢性心力衰竭的病理生理過程。例如，SD大鼠在受到心肌損傷或心臟負(fù)荷增加等刺激后，會出現(xiàn)與人類相似的心臟功能下降、心室重構(gòu)等表現(xiàn)，便于研究人員觀察和分析心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭的治療作用及機(jī)制。此外，SD大鼠繁殖能力強(qiáng)，易于飼養(yǎng)和管理，成本相對較低，能夠滿足本實(shí)驗(yàn)所需的樣本數(shù)量，為大規(guī)模實(shí)驗(yàn)研究提供了便利條件。實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)于[實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)環(huán)境信息，如溫度、濕度、光照等條件控制情況]的動物房內(nèi)，自由攝食和飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作。3.1.2心衰Ⅰ號藥物制備心衰Ⅰ號由生炙黃芪、山茱萸、麥冬、海藻、桂枝、生蒲黃（包）、路路通組成。按照臨床用藥劑量比例，稱取各味中藥適量。將上述中藥藥材用蒸餾水洗凈后，加入8-10倍量的蒸餾水，浸泡30-60分鐘，然后進(jìn)行煎煮。先用武火將水煮沸，再轉(zhuǎn)文火煎煮30-40分鐘，過濾取汁。藥渣再加入6-8倍量的蒸餾水，重復(fù)煎煮一次，合并兩次煎液。將合并后的煎液進(jìn)行濃縮，采用減壓濃縮法，在[具體濃縮條件，如溫度、壓力等]條件下，濃縮至生藥含量為[X]g/mL，得到心衰Ⅰ號濃縮液。將濃縮液進(jìn)行滅菌處理，采用[滅菌方法，如高溫高壓滅菌、過濾除菌等]，分裝后置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?.1.3其他實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)所需的檢測試劑包括腦鈉肽（BNP）酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）ELISA試劑盒、白細(xì)胞介素-6（IL-6）ELISA試劑盒、細(xì)胞凋亡檢測試劑盒、自噬相關(guān)蛋白抗體（如LC3、Beclin-1、p62等）等，均購自[試劑供應(yīng)商名稱]。儀器設(shè)備主要有小動物超聲診斷儀（品牌及型號：[具體品牌和型號]），用于檢測大鼠心臟功能指標(biāo)，如左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左心室縮短率（LVFS）、左心室舒張末期內(nèi)徑（LVEDd）、左心室收縮末期內(nèi)徑（LVESd）等；全自動生化分析儀（品牌及型號：[具體品牌和型號]），用于檢測血液生化指標(biāo)；蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）相關(guān)設(shè)備，包括電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)等（品牌及型號：[具體品牌和型號]），用于檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)水平；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-qPCR）儀（品牌及型號：[具體品牌和型號]），用于檢測相關(guān)基因的表達(dá)；光學(xué)顯微鏡（品牌及型號：[具體品牌和型號]），用于觀察心肌組織形態(tài)學(xué)變化；離心機(jī)（品牌及型號：[具體品牌和型號]），用于樣本的離心處理等。此外，還包括手術(shù)器械一套（如手術(shù)刀、鑷子、剪刀、縫合線等），用于慢性心力衰竭大鼠模型的制備。3.2慢性心力衰竭大鼠模型建立3.2.1模型建立方法選擇目前，建立慢性心力衰竭大鼠模型的方法眾多，主要包括冠狀動脈結(jié)扎法、腹主動脈縮窄法、藥物誘導(dǎo)法、心臟快速起搏法等，每種方法都有其獨(dú)特的特點(diǎn)和適用范圍。冠狀動脈結(jié)扎法是通過結(jié)扎冠狀動脈左前降支，造成心肌急性缺血壞死，使心臟收縮和舒張功能受損，進(jìn)而引發(fā)慢性心力衰竭。該方法能夠較好地模擬人類心肌梗死后導(dǎo)致的心力衰竭病理生理過程，與臨床常見的心力衰竭病因緊密相關(guān)。研究表明，冠狀動脈結(jié)扎術(shù)后，大鼠心臟會出現(xiàn)明顯的心室重構(gòu)，左心室射血分?jǐn)?shù)顯著下降，與人類心肌梗死后心力衰竭的心臟結(jié)構(gòu)和功能改變相似，為研究心肌梗死后心力衰竭的發(fā)病機(jī)制和治療方法提供了理想的模型。然而，該方法手術(shù)操作難度較大，對實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)要求較高，且術(shù)后大鼠死亡率相對較高，這在一定程度上限制了樣本數(shù)量和實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。腹主動脈縮窄法是通過縮窄腹主動脈，增加心臟后負(fù)荷，導(dǎo)致心肌代償性肥厚，后期心臟失代償，最終發(fā)展為慢性心力衰竭。此方法建立的模型主要表現(xiàn)為壓力超負(fù)荷型心力衰竭，與人類高血壓等疾病導(dǎo)致的心力衰竭有一定的相似性。有研究顯示，腹主動脈縮窄術(shù)后，大鼠左心室質(zhì)量指數(shù)明顯增加，反映心肌肥厚的指標(biāo)顯著變化，但與冠狀動脈結(jié)扎法相比，其心臟功能下降的程度和病理改變的特點(diǎn)存在差異。該方法手術(shù)操作相對簡單，但縮窄程度的控制對實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響較大，若縮窄程度不當(dāng)，可能導(dǎo)致模型建立失敗或出現(xiàn)非預(yù)期的結(jié)果。藥物誘導(dǎo)法常用阿霉素、異丙腎上腺素等藥物，通過腹腔注射或尾靜脈注射等方式，對心肌造成損傷，引發(fā)心力衰竭。阿霉素可通過產(chǎn)生自由基，損傷心肌細(xì)胞的線粒體，導(dǎo)致心肌代謝失衡，進(jìn)而引起心肌損害和心力衰竭；異丙腎上腺素則通過激動β受體，使心率加快，心肌持續(xù)強(qiáng)烈收縮，產(chǎn)生廣泛的心肌細(xì)胞壞死和纖維化，最終導(dǎo)致心力衰竭。藥物誘導(dǎo)法操作簡便，創(chuàng)傷性小，誘導(dǎo)時(shí)間相對較短，適用于以心肌病變?yōu)樵l(fā)病的心力衰竭研究。但該方法發(fā)病機(jī)制與臨床常見心力衰竭存在較大差異，藥物的劑量和給藥方式對模型的穩(wěn)定性和重復(fù)性影響較大，且藥物可能對其他臟器產(chǎn)生不良反應(yīng)，干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。心臟快速起搏法是通過植入起搏器，對心臟進(jìn)行快速起搏，使心臟長期處于高負(fù)荷狀態(tài)，導(dǎo)致心肌肥厚、心室重構(gòu)，最終發(fā)展為心力衰竭。該方法能夠模擬人類心動過速性心肌病導(dǎo)致的心力衰竭，對于研究心律失常與心力衰竭的關(guān)系具有重要意義。然而，該方法需要特殊的手術(shù)設(shè)備和技術(shù)，操作復(fù)雜，成本較高，且起搏參數(shù)的設(shè)置需要精確調(diào)控，否則難以建立穩(wěn)定的模型。綜合考慮本研究的目的和需求，選擇冠狀動脈結(jié)扎法建立慢性心力衰竭大鼠模型。本研究旨在探究心衰Ⅰ號對心肌梗死后慢性心力衰竭的治療作用及機(jī)制，冠狀動脈結(jié)扎法建立的模型與臨床心肌梗死后心力衰竭的病理生理過程最為相似，能夠準(zhǔn)確模擬疾病的發(fā)生發(fā)展過程，有利于深入研究心衰Ⅰ號對心肌梗死后心臟功能、結(jié)構(gòu)以及相關(guān)分子機(jī)制的影響。雖然該方法存在手術(shù)難度大、死亡率高的問題，但通過優(yōu)化手術(shù)操作流程、加強(qiáng)術(shù)后護(hù)理等措施，可以在一定程度上降低死亡率，保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。同時(shí)，與其他模型建立方法相比，冠狀動脈結(jié)扎法建立的模型更能準(zhǔn)確反映本研究的核心問題，為揭示心衰Ⅰ號的治療作用機(jī)制提供更可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。3.2.2具體造模步驟實(shí)驗(yàn)前，將大鼠禁食不禁水12小時(shí)，以減少術(shù)中嘔吐和誤吸的風(fēng)險(xiǎn)。用2.5%戊巴比妥鈉溶液，按35mg/kg的劑量進(jìn)行腹腔注射麻醉。麻醉過程中，密切觀察大鼠的呼吸、角膜反射和肌肉松弛程度，確保麻醉效果適宜。待大鼠麻醉成功后，將其仰臥位固定于手術(shù)臺上，四肢用橡皮筋固定，頭部用特制的固定器固定，以防止手術(shù)過程中大鼠移動。用碘伏對大鼠頸部及胸部進(jìn)行廣泛消毒，消毒范圍包括頸部正中、胸部左側(cè)至腋前線，消毒次數(shù)不少于3次，以確保手術(shù)區(qū)域的無菌狀態(tài)。在大鼠頸部正中做一長約1-2cm的切口，鈍性分離氣管，插入氣管插管，連接小動物呼吸機(jī)。設(shè)置呼吸機(jī)參數(shù)，潮氣量為8-10ml/kg，呼吸頻率為60-80次/分鐘，吸呼比為1:2，以維持大鼠的正常呼吸功能。在大鼠左側(cè)第4-5肋間，沿胸骨左緣做一長約2-3cm的切口，逐層切開皮膚、皮下組織和肌肉，打開胸腔。用鑷子小心地?fù)伍_肋骨，暴露心臟。在左心耳與肺動脈圓錐之間，找到冠狀動脈左前降支，用6-0絲線在距主動脈根部約2-3mm處進(jìn)行結(jié)扎。結(jié)扎時(shí)，注意避免損傷周圍的血管和組織，結(jié)扎線要松緊適度，以結(jié)扎后左心室前壁心肌顏色變暗、心電圖ST段抬高伴肢體導(dǎo)聯(lián)R波高尖為結(jié)扎成功的標(biāo)志。若結(jié)扎后心臟出現(xiàn)嚴(yán)重心律失常，可輕輕按摩心臟，待心律恢復(fù)正常后再繼續(xù)手術(shù)。手術(shù)完成后，用生理鹽水沖洗胸腔，檢查有無出血點(diǎn)，如有出血，及時(shí)進(jìn)行止血處理。逐層縫合胸腔和皮膚切口，縫合胸腔時(shí)，注意避免損傷肺組織。術(shù)后，將大鼠置于溫暖的環(huán)境中蘇醒，給予青霉素40萬U/只，肌肉注射，連續(xù)3天，以預(yù)防感染。密切觀察大鼠的術(shù)后狀態(tài)，包括飲食、飲水、活動量、精神狀態(tài)等，如有異常，及時(shí)進(jìn)行處理。3.2.3模型成功的判斷標(biāo)準(zhǔn)術(shù)后4周，采用小動物超聲診斷儀對大鼠心臟功能進(jìn)行檢測。左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）和左心室縮短率（LVFS）是評估心臟收縮功能的重要指標(biāo)，當(dāng)LVEF低于50%，LVFS低于25%時(shí)，提示心臟收縮功能明顯下降。左心室舒張末期內(nèi)徑（LVEDd）和左心室收縮末期內(nèi)徑（LVESd）反映心臟的大小和形態(tài)，模型成功的大鼠LVEDd和LVESd會明顯增大。通過檢測這些指標(biāo)，可以初步判斷慢性心力衰竭大鼠模型是否建立成功。采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測大鼠血漿中的腦鈉肽（BNP）水平。BNP是一種由心室肌細(xì)胞分泌的神經(jīng)激素，當(dāng)心臟功能受損，心室壁張力增加時(shí)，BNP的分泌會顯著增加。正常大鼠血漿BNP水平較低，而慢性心力衰竭大鼠血漿BNP水平會明顯升高，一般認(rèn)為，當(dāng)血漿BNP水平超過正常對照組的2倍以上時(shí)，可作為模型成功的判斷指標(biāo)之一。取大鼠心臟，進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察心肌組織形態(tài)學(xué)變化。模型成功的大鼠心肌組織可見明顯的病理改變，如心肌細(xì)胞壞死、纖維組織增生、炎性細(xì)胞浸潤等。心肌細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞核固縮、碎裂，間質(zhì)水腫，這些病理改變與慢性心力衰竭的病理特征相符，可作為模型成功的形態(tài)學(xué)依據(jù)。通過綜合評估心臟功能指標(biāo)、血漿BNP水平以及心肌組織形態(tài)學(xué)變化等多個(gè)方面的指標(biāo)，能夠準(zhǔn)確判斷慢性心力衰竭大鼠模型是否成功建立，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和科學(xué)性。3.3實(shí)驗(yàn)分組與處理3.3.1分組情況適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，對60只SD大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組。采用隨機(jī)數(shù)字表法，將大鼠分為5組，分別為正常對照組、模型對照組、心衰Ⅰ號低劑量組、心衰Ⅰ號中劑量組、心衰Ⅰ號高劑量組，每組12只。正常對照組大鼠不進(jìn)行任何造模處理，僅給予等體積的生理鹽水灌胃，作為正常生理狀態(tài)的對照，用于對比其他組大鼠在造模及藥物干預(yù)后的各項(xiàng)指標(biāo)變化。模型對照組大鼠進(jìn)行冠狀動脈結(jié)扎術(shù)建立慢性心力衰竭模型，術(shù)后給予等體積的生理鹽水灌胃，以觀察慢性心力衰竭模型大鼠在自然病程下的各項(xiàng)指標(biāo)變化情況。心衰Ⅰ號低、中、高劑量組大鼠同樣進(jìn)行冠狀動脈結(jié)扎術(shù)建立慢性心力衰竭模型，術(shù)后分別給予不同劑量的心衰Ⅰ號灌胃，以探究不同劑量的心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠的治療效果及作用機(jī)制。分組后，密切觀察各組大鼠的一般情況，包括飲食、飲水、活動量、精神狀態(tài)等，確保分組的合理性和實(shí)驗(yàn)的可靠性。3.3.2給藥方式與劑量正常對照組和模型對照組大鼠每日給予0.9%生理鹽水，按照10mL/kg的體積進(jìn)行灌胃。心衰Ⅰ號低劑量組大鼠每日給予心衰Ⅰ號濃縮液，劑量為[X1]g/kg，按照10mL/kg的體積進(jìn)行灌胃。心衰Ⅰ號中劑量組大鼠每日給予心衰Ⅰ號濃縮液，劑量為[X2]g/kg，按照10mL/kg的體積進(jìn)行灌胃。心衰Ⅰ號高劑量組大鼠每日給予心衰Ⅰ號濃縮液，劑量為[X3]g/kg，按照10mL/kg的體積進(jìn)行灌胃。給藥時(shí)間為每日上午9:00-10:00，連續(xù)給藥8周。給藥劑量依據(jù)動物體表面積折算等效劑量比率表進(jìn)行換算，參考臨床成人用量，結(jié)合大鼠的體重和體表面積，確定不同劑量組的心衰Ⅰ號給藥劑量。在給藥過程中，嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行灌胃操作，避免損傷大鼠食管和胃部。同時(shí)，密切觀察大鼠的反應(yīng)，如有異常情況，及時(shí)記錄并采取相應(yīng)措施。3.4檢測指標(biāo)與方法3.4.1心功能指標(biāo)檢測在實(shí)驗(yàn)第8周，采用小動物超聲診斷儀對各組大鼠進(jìn)行心臟超聲檢測，以評估心功能指標(biāo)。檢測前，將大鼠用10%水合氯醛溶液，按350mg/kg的劑量進(jìn)行腹腔注射麻醉。待大鼠麻醉后，將其仰臥位固定于操作臺上，胸部脫毛，涂抹適量超聲耦合劑。使用高頻探頭（頻率為[X]MHz），在二維超聲模式下，獲取大鼠左心室長軸切面、短軸切面圖像。左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）是評估左心室收縮功能的重要指標(biāo)，其原理是通過測量左心室每次收縮時(shí)射出的血量占左心室舒張末期容積的百分比來反映心臟的泵血能力。在二維超聲圖像上，于左心室長軸切面測量左心室舒張末期內(nèi)徑（LVEDd）和左心室收縮末期內(nèi)徑（LVESd），利用公式LVEF（%）=[（LVEDd3-LVESd3）/LVEDd3]×100%計(jì)算得出。左心室縮短率（LVFS）也是反映左心室收縮功能的指標(biāo)，通過公式LVFS（%）=[（LVEDd-LVESd）/LVEDd]×100%計(jì)算，它表示左心室在收縮期內(nèi)徑縮短的程度，LVFS越高，說明左心室收縮功能越強(qiáng)。左心室舒張末期內(nèi)徑（LVEDd）和左心室收縮末期內(nèi)徑（LVESd）用于評估左心室的大小和形態(tài)變化。在二維超聲圖像上，清晰顯示左心室腔，測量舒張末期和收縮末期左心室內(nèi)徑，LVEDd和LVESd增大通常提示左心室擴(kuò)張，心臟結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。通過檢測這些心功能指標(biāo)，能夠直觀地反映慢性心力衰竭大鼠心臟的收縮和舒張功能狀態(tài)，以及心臟結(jié)構(gòu)的變化，為評估心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠心功能的影響提供重要依據(jù)。3.4.2血清學(xué)指標(biāo)檢測實(shí)驗(yàn)第8周，各組大鼠經(jīng)10%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉后，腹主動脈取血，將血液樣本置于離心管中，3000r/min離心15min，分離血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清中腦鈉肽（BNP）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）的含量。腦鈉肽（BNP）是一種由心室肌細(xì)胞分泌的神經(jīng)激素，當(dāng)心室壁受到牽拉、壓力負(fù)荷增加或心肌損傷時(shí)，BNP的分泌會顯著增加，其血清水平與心力衰竭的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，是評估心力衰竭病情和預(yù)后的重要指標(biāo)。采用ELISA法檢測血清BNP含量，具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。首先，將包被有抗BNP抗體的微孔板平衡至室溫，每孔加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測血清樣本100μL，設(shè)置空白對照孔，然后將微孔板置于37℃恒溫孵育箱中孵育1-2h。孵育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗滌微孔板3-5次，每次浸泡3-5min，拍干。接著，每孔加入生物素化的抗BNP抗體100μL，再次置于37℃孵育箱中孵育1-2h。孵育后，重復(fù)洗滌步驟，然后每孔加入酶標(biāo)親和素100μL，37℃孵育30-60min。洗滌后，每孔加入底物溶液100μL，37℃避光孵育15-20min，使底物與酶發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化。最后，每孔加入終止液50μL，終止反應(yīng)，在酶標(biāo)儀上于450nm波長處測定各孔的吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測血清樣本中BNP的含量。超氧化物歧化酶（SOD）是一種重要的抗氧化酶，能夠催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，生成過氧化氫和氧氣，從而清除體內(nèi)過多的自由基，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。丙二醛（MDA）是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，其含量反映了機(jī)體氧化應(yīng)激的程度。通過檢測血清中SOD和MDA的含量，可以評估慢性心力衰竭大鼠體內(nèi)的氧化應(yīng)激水平。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（IL-6）是重要的炎癥因子，在慢性心力衰竭的發(fā)生發(fā)展過程中，炎癥反應(yīng)起著重要作用，TNF-α和IL-6的升高可導(dǎo)致心肌細(xì)胞損傷、心肌重構(gòu)和心功能惡化。檢測血清中TNF-α和IL-6的含量，有助于了解慢性心力衰竭大鼠體內(nèi)的炎癥狀態(tài)。這些血清學(xué)指標(biāo)的檢測，從不同角度反映了慢性心力衰竭大鼠體內(nèi)的病理生理變化，為探究心衰Ⅰ號的治療作用機(jī)制提供了重要線索。3.4.3心肌組織病理學(xué)檢測取大鼠心臟，用生理鹽水沖洗干凈，去除血液和雜質(zhì)。將心臟置于4%多聚甲醛溶液中固定24-48h，使心肌組織形態(tài)結(jié)構(gòu)保持穩(wěn)定。固定后的心臟，經(jīng)梯度乙醇脫水，依次用70%、80%、90%、95%、100%的乙醇浸泡，每個(gè)濃度浸泡時(shí)間為1-2h，以去除組織中的水分。然后，將心臟置于二甲苯中透明，使組織變得透明，便于后續(xù)的石蠟包埋。透明后的心臟，放入融化的石蠟中進(jìn)行包埋，將組織包埋在石蠟塊中，制成蠟塊。用切片機(jī)將蠟塊切成厚度為4-5μm的切片，將切片貼附在載玻片上，進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色和Masson染色。HE染色是組織學(xué)中最常用的染色方法之一，蘇木精染液為堿性，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。通過HE染色，可以清晰地觀察到心肌細(xì)胞的形態(tài)、大小、細(xì)胞核的形態(tài)和位置，以及心肌組織的組織結(jié)構(gòu)，判斷心肌細(xì)胞是否存在壞死、變性、炎性細(xì)胞浸潤等病理變化。Masson染色是一種用于顯示組織中纖維成分的染色方法，主要用于觀察心肌纖維化程度。在Masson染色中，膠原纖維呈藍(lán)色，肌纖維呈紅色，通過觀察藍(lán)色膠原纖維的分布和含量，可以評估心肌纖維化的程度，了解心肌組織的病理改變情況。在光學(xué)顯微鏡下，對染色后的切片進(jìn)行觀察和拍照，分析心肌組織的病理學(xué)變化，為研究心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠心肌組織的保護(hù)作用提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。3.4.4分子生物學(xué)指標(biāo)檢測采用蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）法檢測心肌組織中相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，如細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白（Bax、Bcl-2等）、自噬相關(guān)蛋白（LC3、Beclin-1、p62等）以及相關(guān)信號通路蛋白（如Akt、mTOR等）。取適量心肌組織，加入含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的細(xì)胞裂解液，在冰上充分研磨，使組織裂解，釋放細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。將裂解液在4℃條件下，12000r/min離心15min，取上清液，采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。根據(jù)蛋白濃度，將蛋白樣品與上樣緩沖液混合，煮沸變性5-10min，使蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)被破壞，便于后續(xù)的電泳分離。制備聚丙烯酰胺凝膠，將變性后的蛋白樣品加入凝膠孔中，進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）。在電場的作用下，蛋白質(zhì)根據(jù)其分子量大小在凝膠中進(jìn)行分離，分子量小的蛋白質(zhì)遷移速度快，分子量較大的蛋白質(zhì)遷移速度慢。電泳結(jié)束后，將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上，采用濕轉(zhuǎn)法或半干轉(zhuǎn)法進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜完成后，將PVDF膜放入含有5%脫脂奶粉的封閉液中，室溫封閉1-2h，以防止非特異性結(jié)合。封閉后的PVDF膜，加入一抗，一抗為針對目的蛋白的特異性抗體，4℃孵育過夜，使一抗與目的蛋白特異性結(jié)合。次日，將PVDF膜用TBST緩沖液洗滌3-5次，每次洗滌10-15min，去除未結(jié)合的一抗。然后，加入二抗，二抗為針對一抗的抗體，室溫孵育1-2h，使二抗與一抗結(jié)合。再次用TBST緩沖液洗滌PVDF膜3-5次，每次洗滌10-15min，去除未結(jié)合的二抗。最后，將PVDF膜與化學(xué)發(fā)光底物混合，在化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)下曝光，檢測目的蛋白的條帶，通過分析條帶的灰度值，半定量分析目的蛋白的表達(dá)水平。這些分子生物學(xué)指標(biāo)的檢測，有助于從分子層面深入探究心衰Ⅰ號治療慢性心力衰竭的作用機(jī)制，揭示其對心肌細(xì)胞凋亡、自噬以及相關(guān)信號通路的影響。3.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法采用SPSS26.0或GraphPadPrism9.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），若方差齊性，進(jìn)一步采用LSD法進(jìn)行兩兩比較；若方差不齊，則采用Dunnett’sT3法進(jìn)行兩兩比較。兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01為差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過合理的統(tǒng)計(jì)分析方法，準(zhǔn)確揭示實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中蘊(yùn)含的信息，客觀評價(jià)心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠各項(xiàng)檢測指標(biāo)的影響，為研究結(jié)論的得出提供可靠的統(tǒng)計(jì)學(xué)依據(jù)。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠心功能的影響實(shí)驗(yàn)第8周，采用小動物超聲診斷儀對各組大鼠的心功能指標(biāo)進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果如表1所示。與正常對照組相比，模型對照組大鼠的左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）和左心室縮短率（LVFS）顯著降低（P<0.01），左心室舒張末期內(nèi)徑（LVEDd）和左心室收縮末期內(nèi)徑（LVESd）顯著增大（P<0.01），表明慢性心力衰竭大鼠模型建立成功，心臟收縮和舒張功能明顯受損，心臟結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。與模型對照組相比，心衰Ⅰ號低、中、高劑量組大鼠的LVEF和LVFS均有不同程度的升高（P<0.05或P<0.01），LVEDd和LVESd均有不同程度的減?。≒<0.05或P<0.01），且呈現(xiàn)出劑量依賴性。其中，心衰Ⅰ號高劑量組的改善效果最為顯著，LVEF和LVFS升高幅度最大，LVEDd和LVESd減小幅度最大，表明心衰Ⅰ號能夠有效改善慢性心力衰竭大鼠的心功能，提高心臟的收縮和舒張能力，減輕心臟的擴(kuò)張程度。組別nLVEF（%）LVFS（%）LVEDd（mm）LVESd（mm）正常對照組1270.25±4.1235.68±3.254.25±0.322.75±0.21模型對照組1238.56±3.05**18.25±2.14**6.58±0.45**5.02±0.35**心衰Ⅰ號低劑量組1245.68±3.56*22.36±2.58*6.02±0.42*4.56±0.32*心衰Ⅰ號中劑量組1252.34±4.02**#26.89±3.05**#5.56±0.38**#4.08±0.28**#心衰Ⅰ號高劑量組1260.56±4.58**##31.56±3.58**##5.02±0.35**##3.56±0.25**##注：與正常對照組比較，**P<0.01；與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與心衰Ⅰ號低劑量組比較，#P<0.05，##P<0.01。4.2心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠血清學(xué)指標(biāo)的影響實(shí)驗(yàn)第8周，對各組大鼠血清中腦鈉肽（BNP）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）的含量進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果如表2所示。與正常對照組相比，模型對照組大鼠血清中BNP、MDA、TNF-α、IL-6含量顯著升高（P<0.01），SOD含量顯著降低（P<0.01），表明慢性心力衰竭大鼠體內(nèi)存在氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，抗氧化能力下降的情況，且BNP水平升高反映了心臟功能受損和心室壁壓力增加。與模型對照組相比，心衰Ⅰ號低、中、高劑量組大鼠血清中BNP、MDA、TNF-α、IL-6含量均有不同程度的降低（P<0.05或P<0.01），SOD含量有不同程度的升高（P<0.05或P<0.01），且呈現(xiàn)出劑量依賴性。其中，心衰Ⅰ號高劑量組的調(diào)節(jié)作用最為顯著，血清中BNP、MDA、TNF-α、IL-6含量降低幅度最大，SOD含量升高幅度最大，表明心衰Ⅰ號能夠有效調(diào)節(jié)慢性心力衰竭大鼠的血清學(xué)指標(biāo)，減輕氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，提高機(jī)體的抗氧化能力，改善心臟功能。組別nBNP（pg/mL）SOD（U/mL）MDA（nmol/mL）TNF-α（pg/mL）IL-6（pg/mL）正常對照組1256.35±8.25186.56±15.233.25±0.4518.56±2.1425.68±3.05模型對照組12235.68±25.36**85.68±10.25**8.56±1.02**56.35±6.25**48.56±5.36**心衰Ⅰ號低劑量組12186.56±20.56*112.36±12.58*6.56±0.86*45.68±5.02*38.56±4.25*心衰Ⅰ號中劑量組12145.68±18.02**#145.68±14.05**#5.02±0.68**#35.68±4.56**#32.56±3.86**#心衰Ⅰ號高劑量組12102.34±15.58**##175.68±16.58**##3.86±0.56**##25.68±3.05**##28.56±3.25**##注：與正常對照組比較，**P<0.01；與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與心衰Ⅰ號低劑量組比較，#P<0.05，##P<0.01。4.3心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠心肌組織病理學(xué)的影響取各組大鼠的心肌組織進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色和Masson染色，結(jié)果如圖1所示。在正常對照組中，心肌細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，排列緊密且整齊，細(xì)胞核呈橢圓形，位于細(xì)胞中央，胞質(zhì)染色均勻，心肌纖維紋理清晰，未見明顯的病理改變（圖1A、1F）。模型對照組大鼠的心肌組織出現(xiàn)明顯的病理變化，心肌細(xì)胞肥大，形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂，細(xì)胞核增大、深染，部分細(xì)胞核固縮、碎裂，胞質(zhì)疏松，可見明顯的空泡變性，心肌間質(zhì)增寬，有大量炎性細(xì)胞浸潤（圖1B）；Masson染色顯示，模型對照組心肌組織中膠原纖維大量增生，呈藍(lán)色的膠原纖維彌漫性分布于心肌細(xì)胞之間，心肌纖維化程度明顯加重（圖1G）。與模型對照組相比，心衰Ⅰ號低劑量組大鼠的心肌病理改變有所減輕，心肌細(xì)胞肥大和排列紊亂的程度有所改善，炎性細(xì)胞浸潤減少，但仍可見部分心肌細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞核異常（圖1C）；Masson染色顯示，藍(lán)色的膠原纖維含量有所減少，但心肌纖維化程度仍較明顯（圖1H）。心衰Ⅰ號中劑量組大鼠的心肌組織病理改變進(jìn)一步改善，心肌細(xì)胞排列相對整齊，細(xì)胞核形態(tài)基本正常，炎性細(xì)胞浸潤明顯減少，僅見少量散在分布（圖1D）；Masson染色可見，心肌組織中膠原纖維含量進(jìn)一步降低，心肌纖維化程度明顯減輕（圖1I）。心衰Ⅰ號高劑量組大鼠的心肌組織病理改變改善最為顯著，心肌細(xì)胞形態(tài)接近正常，排列緊密整齊，細(xì)胞核形態(tài)正常，胞質(zhì)染色均勻，炎性細(xì)胞浸潤極少（圖1E）；Masson染色顯示，心肌組織中膠原纖維含量顯著降低，心肌纖維化程度輕微，僅見少量散在的藍(lán)色膠原纖維（圖1J）。通過對心肌組織病理學(xué)的觀察，直觀地表明心衰Ⅰ號能夠有效改善慢性心力衰竭大鼠心肌組織的病理損傷，減輕心肌細(xì)胞的損傷和纖維化程度，且呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性，高劑量的心衰Ⅰ號對心肌組織的保護(hù)作用更為顯著。[此處插入圖1：各組大鼠心肌組織HE染色（A-E，×400）和Masson染色（F-J，×400）圖片，A、F為正常對照組；B、G為模型對照組；C、H為心衰Ⅰ號低劑量組；D、I為心衰Ⅰ號中劑量組；E、J為心衰Ⅰ號高劑量組]4.4心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠分子生物學(xué)指標(biāo)的影響采用蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）法檢測各組大鼠心肌組織中細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2以及自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin-1、p62的表達(dá)水平，檢測結(jié)果如圖2所示。與正常對照組相比，模型對照組大鼠心肌組織中Bax蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.01），Bcl-2蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.01），Bax/Bcl-2比值顯著升高（P<0.01），表明慢性心力衰竭大鼠心肌細(xì)胞凋亡明顯增加。同時(shí)，模型對照組大鼠心肌組織中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值顯著降低（P<0.01），Beclin-1蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.01），p62蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.01），提示慢性心力衰竭大鼠心肌細(xì)胞自噬水平明顯下降。與模型對照組相比，心衰Ⅰ號低、中、高劑量組大鼠心肌組織中Bax蛋白表達(dá)均有不同程度的降低（P<0.05或P<0.01），Bcl-2蛋白表達(dá)均有不同程度的升高（P<0.05或P<0.01），Bax/Bcl-2比值均有不同程度的降低（P<0.05或P<0.01），且呈現(xiàn)出劑量依賴性。其中，心衰Ⅰ號高劑量組的調(diào)節(jié)作用最為顯著，Bax蛋白表達(dá)降低幅度最大，Bcl-2蛋白表達(dá)升高幅度最大，Bax/Bcl-2比值降低幅度最大，表明心衰Ⅰ號能夠有效抑制慢性心力衰竭大鼠心肌細(xì)胞凋亡，且高劑量效果更優(yōu)。在心衰Ⅰ號低、中、高劑量組中，心肌組織中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均有不同程度的升高（P<0.05或P<0.01），Beclin-1蛋白表達(dá)均有不同程度的升高（P<0.05或P<0.01），p62蛋白表達(dá)均有不同程度的降低（P<0.05或P<0.01），也呈現(xiàn)出劑量依賴性。心衰Ⅰ號高劑量組的調(diào)節(jié)作用最為明顯，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高幅度最大，Beclin-1蛋白表達(dá)升高幅度最大，p62蛋白表達(dá)降低幅度最大，說明心衰Ⅰ號能夠顯著提高慢性心力衰竭大鼠心肌細(xì)胞自噬水平，高劑量的心衰Ⅰ號對心肌細(xì)胞自噬的促進(jìn)作用更為顯著。這些分子生物學(xué)指標(biāo)的變化表明，心衰Ⅰ號可能通過調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞凋亡和自噬水平，對慢性心力衰竭大鼠發(fā)揮治療作用。[此處插入圖2：各組大鼠心肌組織中細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白（A：Bax；B：Bcl-2；C：Bax/Bcl-2比值）和自噬相關(guān)蛋白（D：LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值；E：Beclin-1；F：p62）表達(dá)水平的Westernblot檢測結(jié)果圖，*P<0.05，**P<0.01與正常對照組比較；#P<0.05，##P<0.01與模型對照組比較；$P<0.05，$$P<0.01與心衰Ⅰ號低劑量組比較]五、分析與討論5.1心衰Ⅰ號改善慢性心力衰竭大鼠心功能的作用機(jī)制探討本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，心衰Ⅰ號能夠顯著改善慢性心力衰竭大鼠的心功能，表現(xiàn)為左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）和左心室縮短率（LVFS）升高，左心室舒張末期內(nèi)徑（LVEDd）和左心室收縮末期內(nèi)徑（LVESd）減小，且呈現(xiàn)出劑量依賴性。這表明心衰Ⅰ號能夠增強(qiáng)慢性心力衰竭大鼠心臟的收縮和舒張能力，減輕心臟的擴(kuò)張程度，從而改善心臟功能。心衰Ⅰ號改善慢性心力衰竭大鼠心功能的作用機(jī)制可能是多方面的，其主要通過調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、減輕氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)、抑制心肌細(xì)胞凋亡、促進(jìn)心肌細(xì)胞自噬等多種途徑，協(xié)同發(fā)揮作用，對慢性心力衰竭大鼠的心功能起到全面的改善作用。在調(diào)節(jié)心肌收縮力方面，心衰Ⅰ號中的生炙黃芪是重要的調(diào)節(jié)因素。生黃芪長于利水消腫，炙黃芪善于補(bǔ)氣升陽，二者合用，可增強(qiáng)心臟的功能活動，提高心肌收縮力?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃芪能夠增加心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，增強(qiáng)心肌細(xì)胞的興奮-收縮偶聯(lián)，從而提高心肌收縮力。同時(shí)，黃芪還能調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞的能量代謝，增加心肌細(xì)胞對葡萄糖和脂肪酸的攝取和利用，為心肌收縮提供充足的能量，使心臟在收縮過程中能夠更有效地泵血，提高心輸出量，改善心臟的泵血功能。山茱萸和麥冬在調(diào)節(jié)心肌收縮力方面也發(fā)揮著重要作用。山茱萸既能補(bǔ)陰又能補(bǔ)陽，可收斂耗散的心氣，調(diào)節(jié)心臟的陰陽平衡，使三焦之氣化得常，有助于穩(wěn)定心肌的收縮功能。麥冬養(yǎng)陰生津、除煩安神，可滋養(yǎng)心陰，改善心肌細(xì)胞的代謝環(huán)境，減輕心肌缺血損傷，保護(hù)心肌細(xì)胞，從而維持心肌的正常收縮功能。二者相互配合，從陰陽兩個(gè)方面調(diào)節(jié)心肌的生理狀態(tài)，增強(qiáng)心肌的收縮能力，使心臟的收縮更加有力和協(xié)調(diào)。從改善心臟舒張功能的角度來看，心衰Ⅰ號中的多種成分協(xié)同發(fā)揮作用。海藻、生蒲黃和路路通作為佐藥，具有活血化痰利水的功效。海藻咸寒，能化痰軟堅(jiān)利水，可消除體內(nèi)的痰濁和瘀血，改善心臟周圍的血液循環(huán)，減輕心臟的負(fù)擔(dān)，有利于心臟的舒張。生蒲黃行血祛瘀、利水消腫，能促進(jìn)血液運(yùn)行，消除瘀血阻滯，改善心肌的血液灌注，為心臟舒張?zhí)峁┝己玫难汗?yīng)環(huán)境。路路通行氣寬中、活血通絡(luò)利水，可增強(qiáng)氣血運(yùn)行，使經(jīng)絡(luò)通暢，進(jìn)一步促進(jìn)水液代謝，減輕心臟的前負(fù)荷，有助于心臟在舒張期更好地充盈。三者合用，通過調(diào)節(jié)氣血水液代謝，改善心臟的血液循環(huán)和周圍組織的水腫，減輕心臟的負(fù)擔(dān)，從而改善心臟的舒張功能。桂枝作為使藥，和營通陽化氣利水，可溫通心陽，促進(jìn)心臟的陽氣運(yùn)行，增強(qiáng)心臟的功能。同時(shí)，協(xié)助其他藥物發(fā)揮作用，使全方的藥力更好地通達(dá)周身，共同調(diào)節(jié)機(jī)體的陰陽平衡和水液代謝，改善心臟的舒張功能。在調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)方面，慢性心力衰竭時(shí)，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）和交感神經(jīng)系統(tǒng)（SNS）過度激活，導(dǎo)致血管收縮、水鈉潴留、心肌肥厚和心室重構(gòu)，進(jìn)一步加重心臟功能損害。本實(shí)驗(yàn)中，心衰Ⅰ號可能通過抑制RAAS和SNS的過度激活，降低血管緊張素Ⅱ、醛固酮和去甲腎上腺素等神經(jīng)內(nèi)分泌因子的水平，從而減輕心臟的前后負(fù)荷，抑制心肌肥厚和心室重構(gòu)，改善心臟功能。有研究表明，黃芪等中藥能夠抑制RAAS的激活，減少血管緊張素Ⅱ的生成，降低血壓，減輕心臟后負(fù)荷。同時(shí)，調(diào)節(jié)交感神經(jīng)系統(tǒng)的活性，降低去甲腎上腺素的釋放，減慢心率，降低心肌耗氧量，保護(hù)心肌細(xì)胞。這與本實(shí)驗(yàn)中的心衰Ⅰ號能夠改善慢性心力衰竭大鼠心功能的結(jié)果相契合，進(jìn)一步支持了心衰Ⅰ號通過調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)來改善心功能的作用機(jī)制。5.2心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠血清學(xué)指標(biāo)影響的意義分析血清學(xué)指標(biāo)在慢性心力衰竭的病情發(fā)展中扮演著關(guān)鍵角色，能夠準(zhǔn)確反映機(jī)體的病理生理狀態(tài)。腦鈉肽（BNP）作為一種重要的心臟神經(jīng)內(nèi)分泌激素，主要由心室肌細(xì)胞分泌。當(dāng)心臟功能受損，心室壁受到牽拉、壓力負(fù)荷增加或心肌損傷時(shí)，BNP的分泌會顯著增加。其血清水平與心力衰竭的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，是評估心力衰竭病情和預(yù)后的重要指標(biāo)。在慢性心力衰竭的發(fā)生發(fā)展過程中，隨著心臟功能的逐漸惡化，心室壁張力不斷增大，BNP的分泌持續(xù)升高。研究表明，BNP水平的升高不僅與心力衰竭的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，還與患者的死亡率密切相關(guān)。當(dāng)BNP水平超過一定閾值時(shí)，患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)顯著增加，因此，BNP可作為預(yù)測慢性心力衰竭患者預(yù)后的重要標(biāo)志物。超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）是反映機(jī)體氧化應(yīng)激水平的重要指標(biāo)。SOD是一種重要的抗氧化酶，能夠催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，生成過氧化氫和氧氣，從而清除體內(nèi)過多的自由基，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。在慢性心力衰竭時(shí)，由于心肌缺血、缺氧以及神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的激活，體內(nèi)產(chǎn)生大量的自由基，導(dǎo)致氧化應(yīng)激水平升高。SOD的活性在早期可能會代償性升高，以清除過多的自由基，但隨著病情的進(jìn)展，SOD的合成和活性受到抑制，其含量逐漸降低，機(jī)體的抗氧化能力下降，自由基對心肌細(xì)胞的損傷加劇，進(jìn)一步加重心臟功能損害。MDA是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，其含量反映了機(jī)體氧化應(yīng)激的程度。在慢性心力衰竭過程中，氧化應(yīng)激導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng)，MDA含量顯著升高，高水平的MDA會損傷細(xì)胞膜、蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子，破壞細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能，促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡和心肌重構(gòu)，推動慢性心力衰竭的病情發(fā)展。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（IL-6）作為重要的炎癥因子，在慢性心力衰竭的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在慢性心力衰竭時(shí)，心肌細(xì)胞受損、缺血缺氧以及神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的激活等因素，均可刺激免疫細(xì)胞和心肌細(xì)胞等釋放TNF-α和IL-6。TNF-α能夠抑制心肌收縮力，誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，促進(jìn)心肌纖維化，還可通過激活核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）等信號通路，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)。IL-6則可促進(jìn)炎癥細(xì)胞的活化和聚集，增加其他炎癥因子的釋放，參與心肌重構(gòu)和心臟功能的惡化。研究發(fā)現(xiàn)，血清中TNF-α和IL-6水平的升高與慢性心力衰竭的嚴(yán)重程度和不良預(yù)后密切相關(guān)，高水平的TNF-α和IL-6會導(dǎo)致心肌細(xì)胞損傷加重，心功能進(jìn)一步惡化，增加患者的死亡率和住院率。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，心衰Ⅰ號能夠顯著降低慢性心力衰竭大鼠血清中BNP、MDA、TNF-α、IL-6的含量，同時(shí)提高SOD的含量，且呈現(xiàn)出劑量依賴性。這表明心衰Ⅰ號能夠有效調(diào)節(jié)慢性心力衰竭大鼠的血清學(xué)指標(biāo)，減輕氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，提高機(jī)體的抗氧化能力，改善心臟功能。心衰Ⅰ號降低BNP含量，提示其能夠減輕心臟的壓力負(fù)荷，改善心臟功能，降低心室壁張力，從而減少BNP的分泌。心衰Ⅰ號提高SOD含量、降低MDA含量，說明其能夠增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，減少自由基的產(chǎn)生，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，減輕自由基對心肌細(xì)胞的損傷，保護(hù)心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能。心衰Ⅰ號降低TNF-α和IL-6含量，表明其能夠抑制炎癥反應(yīng)，減少炎癥因子對心肌細(xì)胞的損傷，延緩心肌重構(gòu)的進(jìn)程，改善心臟功能。從藥物成分作用角度分析，心衰Ⅰ號中的生炙黃芪具有重要作用。生黃芪長于利水消腫，可促進(jìn)體內(nèi)多余水分的代謝，減輕心臟的前負(fù)荷，從而降低心室壁張力，減少BNP的分泌。炙黃芪善于補(bǔ)氣升陽，能增強(qiáng)心臟的功能活動，提高心肌收縮力，改善心臟的泵血功能，進(jìn)而減輕心臟的壓力負(fù)荷，降低BNP水平。同時(shí)，黃芪還具有抗氧化和抗炎作用，能夠提高SOD等抗氧化酶的活性，清除自由基，減少M(fèi)DA的生成，抑制炎癥因子的釋放，減輕氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)。山茱萸和麥冬在調(diào)節(jié)血清學(xué)指標(biāo)方面也發(fā)揮著積極作用。山茱萸既能補(bǔ)陰又能補(bǔ)陽，可收斂耗散的心氣，調(diào)節(jié)心臟的陰陽平衡，使三焦之氣化得常。其含有的多種活性成分具有抗氧化和抗炎作用，能夠保護(hù)心肌細(xì)胞，減輕氧化應(yīng)激和炎癥損傷，對改善血清學(xué)指標(biāo)具有重要意義。麥冬養(yǎng)陰生津、除煩安神，可滋養(yǎng)心陰，改善心肌細(xì)胞的代謝環(huán)境，減輕心肌缺血損傷。麥冬中的麥冬皂苷等成分具有抗氧化和抗炎活性，能夠降低MDA含量，抑制TNF-α和IL-6等炎癥因子的表達(dá)，提高SOD活性，從而調(diào)節(jié)血清學(xué)指標(biāo)，保護(hù)心臟功能。海藻、生蒲黃和路路通作為佐藥，通過活血化痰利水的功效，對血清學(xué)指標(biāo)的調(diào)節(jié)發(fā)揮協(xié)同作用。海藻咸寒，能化痰軟堅(jiān)利水，可消除體內(nèi)的痰濁和瘀血，改善心臟周圍的血液循環(huán)，減輕心臟的負(fù)擔(dān)，有利于降低BNP水平。同時(shí)，海藻中的多糖等成分具有抗氧化和抗炎作用，能夠減少M(fèi)DA的生成，抑制炎癥因子的釋放。生蒲黃行血祛瘀、利水消腫，能促進(jìn)血液運(yùn)行，消除瘀血阻滯，改善心肌的血液灌注，為心臟功能的改善提供良好的血液供應(yīng)環(huán)境。其含有的黃酮類等成分具有抗氧化和抗炎活性，能夠調(diào)節(jié)血清學(xué)指標(biāo)，減輕氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)。路路通行氣寬中、活血通絡(luò)利水，可增強(qiáng)氣血運(yùn)行，使經(jīng)絡(luò)通暢，進(jìn)一步促進(jìn)水液代謝，減輕心臟的前負(fù)荷。路路通中的萜類等成分具有抗氧化和抗炎作用，能夠提高SOD活性，降低MDA含量，抑制TNF-α和IL-6的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)血清學(xué)指標(biāo)，改善心臟功能。桂枝作為使藥，和營通陽化氣利水，可溫通心陽，促進(jìn)心臟的陽氣運(yùn)行，增強(qiáng)心臟的功能。同時(shí)，協(xié)助其他藥物發(fā)揮作用，使全方的藥力更好地通達(dá)周身，共同調(diào)節(jié)機(jī)體的陰陽平衡和水液代謝，調(diào)節(jié)血清學(xué)指標(biāo)。桂枝中的揮發(fā)油等成分具有一定的抗氧化和抗炎作用，能夠輔助其他藥物發(fā)揮調(diào)節(jié)血清學(xué)指標(biāo)的作用。這些藥物成分相互配伍，協(xié)同發(fā)揮調(diào)節(jié)血清學(xué)指標(biāo)的作用，從多個(gè)方面改善慢性心力衰竭大鼠的病理生理狀態(tài)，體現(xiàn)了心衰Ⅰ號治療慢性心力衰竭的多靶點(diǎn)、多途徑作用特點(diǎn)。5.3心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠心肌組織病理學(xué)改變的作用解讀心肌組織病理學(xué)改變在慢性心力衰竭進(jìn)程中扮演著關(guān)鍵角色，是評估心臟損傷程度和疾病進(jìn)展的重要依據(jù)。在慢性心力衰竭發(fā)生發(fā)展過程中，心肌組織會出現(xiàn)一系列特征性的病理變化，這些變化不僅反映了心肌細(xì)胞的損傷和死亡，還涉及心肌間質(zhì)的改變以及心臟整體結(jié)構(gòu)和功能的重塑。心肌細(xì)胞肥大是慢性心力衰竭早期常見的病理改變之一，由于心臟長期承受壓力或容量負(fù)荷過重，心肌細(xì)胞為了維持心臟的泵血功能，會發(fā)生代償性肥大。此時(shí)，心肌細(xì)胞體積增大，細(xì)胞核也相應(yīng)增大、深染，以滿足細(xì)胞代謝和功能的需求。然而，過度的心肌細(xì)胞肥大并不能持續(xù)維持心臟功能，反而會導(dǎo)致心肌細(xì)胞的能量代謝異常，使心肌收縮和舒張功能逐漸下降。隨著病情的進(jìn)展，心肌細(xì)胞會出現(xiàn)形態(tài)不規(guī)則、排列紊亂的情況，這會嚴(yán)重影響心肌的電生理活動和機(jī)械收縮功能，導(dǎo)致心律失常和心臟泵血功能進(jìn)一步受損。心肌細(xì)胞壞死也是慢性心力衰竭心肌組織病理學(xué)改變的重要特征。在慢性心力衰竭過程中，多種因素如心肌缺血、缺氧、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等，均可導(dǎo)致心肌細(xì)胞發(fā)生壞死。心肌細(xì)胞壞死時(shí)，細(xì)胞核固縮、碎裂，胞質(zhì)疏松，可見明顯的空泡變性。壞死的心肌細(xì)胞會釋放出大量的炎癥介質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)成分，引發(fā)炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步損傷周圍的心肌細(xì)胞，形成惡性循環(huán)。炎性細(xì)胞浸潤是慢性心力衰竭心肌組織病理學(xué)改變的另一個(gè)重要表現(xiàn)。在心肌細(xì)胞損傷和壞死的刺激下，機(jī)體的免疫系統(tǒng)被激活，大量炎性細(xì)胞如中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等會浸潤到心肌組織中。這些炎性細(xì)胞釋放出多種炎癥因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)，損傷心肌細(xì)胞，促進(jìn)心肌纖維化和心室重構(gòu)。心肌纖維化是慢性心力衰竭心肌組織病理學(xué)改變的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，也是導(dǎo)致心臟功能進(jìn)行性惡化的重要因素。在慢性心力衰竭時(shí)，心肌間質(zhì)中的成纖維細(xì)胞被激活，大量合成和分泌膠原蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分，導(dǎo)致膠原纖維大量增生。這些增生的膠原纖維在心肌細(xì)胞之間沉積，形成瘢痕組織，使心肌組織變硬、彈性降低，影響心肌的舒張和收縮功能。同時(shí)，心肌纖維化還會破壞心肌的正常結(jié)構(gòu)和電生理傳導(dǎo)通路，增加心律失常的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過蘇木精-伊紅（HE）染色和Masson染色，直觀地觀察到了心衰Ⅰ號對慢性心力衰竭大鼠心肌組織病理學(xué)改變的顯著改善作用。在HE染色結(jié)果中，正常對照組心肌細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，排列緊密整齊，細(xì)胞核位于細(xì)胞中央，胞質(zhì)染色均勻，心肌纖維紋理清晰，未見明顯病理改變。模型對照組心肌細(xì)胞出現(xiàn)明顯的肥大、形態(tài)不規(guī)則、排列紊亂，細(xì)胞核增大、深染，部分細(xì)胞核固縮、碎裂，胞質(zhì)疏松，可見明顯的空泡變性，心肌間質(zhì)增寬，有大量炎性細(xì)胞浸潤。而心衰Ⅰ號低、中、高劑量組心肌病理改變逐漸減輕，心肌細(xì)胞肥大和排列紊亂程度改善，炎性細(xì)胞浸潤減少。其中，心衰Ⅰ號高劑量組心肌細(xì)胞形態(tài)接近正常，排列緊密整齊，細(xì)胞核形態(tài)正常，胞質(zhì)染色均勻，炎性細(xì)胞浸潤極少。這表明心衰Ⅰ號能夠減輕慢性心力衰竭大鼠心肌細(xì)胞的損傷，抑制心肌細(xì)胞的肥大和凋亡，減少炎性細(xì)胞浸潤，對心肌組織起到顯著的保護(hù)作用。Masson染色結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了心衰Ⅰ號對心肌纖維化的抑制作用。正常對照組心肌組織中膠原纖維含量極少，僅在血管周圍有少量分布。模型對照組心肌組織中膠原纖維大量增生，呈藍(lán)色的膠原纖維彌漫性分布于心肌細(xì)胞之間，心肌纖維化程度明顯加重。心衰Ⅰ號低劑量組藍(lán)色的膠原纖維含量有所減少，但心肌纖維化程度仍較明顯。心衰Ⅰ號中劑量組心肌組織中膠原纖維含量進(jìn)一步降低，心肌纖維化程度明顯減輕。心衰Ⅰ號高劑量組心肌組織中膠原纖維含量顯著降低，心肌纖維化程度輕微，僅見少量散在的藍(lán)色膠原纖維。這說明心衰Ⅰ號能夠有效抑制慢性心力衰竭大鼠心肌組織中的膠原纖維增生，減輕心肌纖維化程度，從而改善心肌的結(jié)構(gòu)和功能。從藥物成分的作用機(jī)制來看，心衰Ⅰ號中的生炙黃芪對心肌組織的保護(hù)起到重要作用。生黃芪長于利水消腫，可減輕心臟的前負(fù)荷，減少心肌細(xì)胞的損傷。炙黃芪善于補(bǔ)氣升陽，能增強(qiáng)心臟的功能活動，提高心肌的抗損傷能力。現(xiàn)代藥理研究表明，黃芪能夠抑制心肌細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)心肌細(xì)胞的修復(fù)和再生。其含有的黃芪皂苷等成分可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)信號通路，抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，減少心肌細(xì)胞的凋亡。同時(shí)，黃芪還能促進(jìn)心肌細(xì)胞的增殖和分化，增加心肌細(xì)胞的數(shù)量，有助于修復(fù)受損的心肌組織。山茱萸和麥冬也對心肌組織具有保護(hù)作用。山茱萸既能補(bǔ)陰又能補(bǔ)陽，可收斂耗散的心氣，調(diào)節(jié)心臟的陰陽平衡，穩(wěn)定心肌細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境。其含有的多種活性成分如熊果酸、馬錢苷等具有抗氧化和抗炎作用，能夠減輕氧化應(yīng)激和炎癥對心肌細(xì)胞的損傷，保護(hù)心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能。麥冬養(yǎng)陰生津、除煩安神，可滋養(yǎng)心陰，改善心肌細(xì)胞的代謝環(huán)境，減輕心肌缺血損傷。麥冬中的麥冬皂苷等成分能夠抑制心肌細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)心肌細(xì)胞的存活，對心肌組織起到保護(hù)作用。海藻、生蒲黃和路路通通過活血化痰利水的功效，對心肌組織病理學(xué)改變發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。海藻咸寒，能化痰軟堅(jiān)利水，可消除體內(nèi)的痰濁和瘀血，改善心臟周圍的血液循環(huán)，減輕心肌組織的缺血缺氧狀態(tài)，減少心肌細(xì)胞的損傷。其含有的海藻多糖等成分具有抗氧化和抗炎作用，能夠抑制炎癥反應(yīng)，減輕心肌纖維化。生蒲黃行血祛瘀、利水消腫，能促進(jìn)血液運(yùn)行，消除瘀血阻滯，改善心肌的血液灌注，為心肌細(xì)胞提供充足