步長腦心通調(diào)脂-抗炎癥-保護內(nèi)皮功能和抗動脈粥樣硬化的系列研究

西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院王東琦1.動脈粥樣硬化的進程ModifiedfromPepine,CJ,AmJCard,1998急性心肌梗死缺血性中風(fēng)/短暫性腦缺血不穩(wěn)定心絞痛泡沫細胞脂質(zhì)條紋中間階段損傷動脈粥樣化纖維斑塊復(fù)合病變破裂

從十幾歲開始

從30歲開始

從40歲開始

主要為脂肪積聚平滑肌細胞和膠原栓塞出血內(nèi)皮功能不全周圍血管疾病心臟猝死穩(wěn)定性心絞痛無臨床癥狀極高危2.Lipidloweringwithstatins

UpToDate

13.3Sep1,2005

調(diào)脂粑目標(biāo)的目的是AS-CHD-SCD動脈粥樣硬化的發(fā)病機制和危害性3.

動脈粥樣硬化

脂代謝紊亂學(xué)說

調(diào)脂治療--脂代謝平衡LDL-oxLDL-foamcell

平滑肌移行泡末細胞形成T細胞激活血小板

粘附聚集白細胞

粘附侵入4.

動脈粥樣硬化內(nèi)皮功能障礙學(xué)說

1975-1993RossR創(chuàng)立

動物模型-球囊損傷血管內(nèi)皮

循環(huán)中的單核細胞血管腔血管腔內(nèi)的LDL內(nèi)皮細胞細胞介導(dǎo)性氧化修飾oxLDL泡沫細胞平滑肌細胞內(nèi)皮下內(nèi)皮損傷內(nèi)皮功能障礙內(nèi)皮下單核細胞-巨吞噬細胞泡沫細胞壞死-屏障功能：血管內(nèi)與內(nèi)皮下組織之間的屏障作用；-分泌功能：分泌NO–ET，促凝－抗凝等；-調(diào)節(jié)功能：調(diào)節(jié)血管的收收縮和舒張，調(diào)節(jié)血壓；5.動脈粥樣硬化慢性炎癥學(xué)說

1999RossR創(chuàng)立

動物模型–

衣原體感染

RossR.Atherosclerosisisaninflammatorydisease.NEnglJMed.1999;340:115-126.慢性炎癥引起內(nèi)皮的損傷

高血壓糖尿病高LDL/TG/TC，低HDL

吸煙肥胖少動

高齡高半胱氨酸血癥高尿酸血癥促凝與抗凝紊亂交感副交感紊亂衣原體感染各種病毒感染遺傳因素MEF2A6.1、在各種慢性炎癥和危險因素的作用下，氧化修飾的低密度脂蛋白（ox-LDLc）致使內(nèi)皮損傷，內(nèi)皮功能障礙。2、損傷的內(nèi)皮細胞激活，使單核細胞、血小板在血管內(nèi)膜表面聚集和粘附。3、炎癥性單核細胞遷移進入內(nèi)皮下。4、炎癥細胞—單核細胞和巨噬細胞激活，刺激平滑肌細胞、產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）。DynamicBalanceofatherosclerosisEricJ.Topol:TextbookofCardiovascularMedicine2003;AtherosclerosisP.5-117.5、平滑肌細胞遷移進入內(nèi)皮下組織,形成新的粥樣斑塊的纖維帽。斑塊增大．6、平滑肌細胞遷移進入內(nèi)皮下組織和粥樣斑塊的纖維帽。6-7、內(nèi)皮細胞遷移并且在各種保護因素的作用下形成纖維帽。8-9、纖維帽在各種促炎癥因素下破裂或損害，表面血小板聚集，形成血栓，導(dǎo)致急生冠脈事件。纖維帽破裂或損傷后，血栓形成，在各種保護因素的作用下，在血栓的表面形成新的纖維帽，使急性冠脈事件，得到新的平衡。DynamicBalanceofatherosclerosis:EricJ.Topol:TextbookofCardiovascularMedicine2003;AtherosclerosisP.5-118.步長腦心通中醫(yī)藥是中華文明的寶庫，應(yīng)當(dāng)在動脈粥樣硬化的防治中有更大的貢獻。腦心通是中藥復(fù)方制劑，由黃芪、丹參、川芎、地龍、水蛭等十六味藥物制成，具有益氣活血、化瘀通脈的功效。現(xiàn)代藥理學(xué)證明，該藥的主要成分地龍、水蛭有抗血栓形成的作用。川芎有擴管、抑制炎癥反應(yīng)的作用。丹參有降脂、抗炎等多種作用……步長腦心通可能在多個環(huán)節(jié)、廣泛領(lǐng)域具有抗動脈粥樣硬化的作用。我們借鑒西藥研究的手段和經(jīng)驗研究步長腦心通抗動脈粥樣硬化的作用原理，試圖從西藥的角度論證中醫(yī)藥理論，為新藥研發(fā)開拓新的途徑。9.動脈粥樣硬化是炎性細胞（主要是單核巨噬細胞）吞噬“入侵”動脈壁的“病原性”脂蛋白即oxLDL的慢性炎癥反應(yīng)過程。巨噬細胞表面清道夫受體（SR）尤其是SR-A和CD36均介導(dǎo)巨噬細胞吞噬oxLDL。其表達量與泡沫細胞的多少及AS的發(fā)展進程有密切關(guān)系。本研究顯示阿托法伐他汀明顯抑制SR-A和CD36的表達，較對照組分別降低了63.3%和70.5%。腦心通則輕度抑制兩者表達，并呈劑量依賴性，1g/L腦心通使CD36及SR-A表達分別降低22.3%和25%，大約是阿托伐他汀的1/3。10.

controlAtorvastatin(1μmol/L)Naoxintong(g/L)

0.1250.250.51SR-A19.67±0.045.81±0.03▲★18.82±0.02▲※17.63±0.15▲※16.75±0.01▲※14.75±0.01▲※CD3615.24±0.045.59±0.03▲★14.93±0.04▲※14.11±0.04▲※13.01±0.04▲※11.84±0.03▲※

EffectsofNaoxintongandAtorvastatinononSR-Aexpression▲P＜0.05vs.control；★P＜0.05vs.eachgroupofNXT；※P＜0.05

vs.othergroupsofNXT11.在AS慢性炎癥反應(yīng)過程中，IL-6和TNF-α是兩個傳統(tǒng)的細胞炎癥因子，主要由單核巨噬細胞分泌。腦心通抑制IL-6和TNF-α分泌，最大抑制效果分別為1μmol/L阿托法他汀的32%和33.9%。12.

controlAtorvastatin（1μmol/L）Naoxintong（g/L）0.1250.250.51IL-6(pg/ml)700.6±1.8153.4±1.4▲▲★★624.5±1.8▲▲※※524.6±1.2▲▲※※572.4±1.4▲▲※※529.3±1.5▲▲※※TNFα(pg/ml)899.3±1.9252.4±1.1▲▲★★835.7±1.4▲▲※※802.4±1.6▲▲※※745.3±1.3▲▲※※679.5±1.7▲▲※※▲▲P＜0.01vs.control；★★P＜0.01vs.eachgroupofNaoxintong；※※P＜0.01vs.othergroupsofNaoxintong

InfluencesofNaoxintongandAtorvastatin

oncellinflammatoryreactionpromotedbyoxLDL13.VSMC增殖是AS發(fā)生、發(fā)展過程中最重要的環(huán)節(jié)之一。ox-LDL通過誘發(fā)一系列與細胞增殖有關(guān)的反應(yīng)，包括增加原癌基因的表達，刺激白細胞介素-1及血小板源性生長因子的產(chǎn)生等，促進VSMC的增殖。本研究結(jié)果顯示10mg/L的ox-LDL可刺激VSMC增殖，腦心通具有抑制ox-LDL誘導(dǎo)VSMC增殖的作用。14.不同藥物對VSMC增殖的影響）組別劑量OD值對照——0.509±0.036*Ox-LDL10mg/mL0.733±0.033Ox-LDL+阿托伐他汀0.1mmol/L0.519±0.057*Ox-LDL+腦心通1g/L0.672±0.035**Ox-LDL+腦心通0.5g/L0.702±0.058Ox-LDL+腦心通0.1g/L0.700±0.041與ox-LDL組相比*P<0.01，**P<0.0515.血管內(nèi)皮損傷及功能障礙的特征表現(xiàn)為由內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的NO水平降低及所介導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性血管舒張功能受損，同時伴有ET-1含量的增加。腦心通不但能夠促進正常狀態(tài)下的血管內(nèi)皮細胞NO的表達與釋放，而且能夠促進損傷狀態(tài)下的內(nèi)皮細胞NO表達與釋放，在高劑量組尤為明顯，呈現(xiàn)出劑量依賴性的趨勢和效應(yīng)。說明腦心通能夠促進血管內(nèi)皮細胞的NO的表達釋放而發(fā)揮保護性作用，16.

腦心通對ox-LDL損傷HUVEC前NO分泌量的影響

*P＜0.01vs對照組比較；**P＜0.05vs對照組比較；a

P＜0.01vs其余腦心通組比較.17.腦心通對ox-LDL損傷HUVEC后NO分泌量的影響*P＜0.01vsox-LDL組比較；**P＜0.05vsox-LDL組比較；b

P＜0.05vs其余腦心通組比較18.各組動物血脂水平的比較分組NCHLDL-CHDL-CTG高脂組

0周

8周

16周腦心通組

0周

8周

16周辛伐他丁組

0周

8周

16周20

20

20

1.62±0.13b42.35±4.21f43.28±4.14

1.87±0.13b35.71±1.29cf31.78±0.63adf

1.73±0.13d23.34±0.85d13.89±0.44d

0.87±0.10b8.43±0.838.48±0.98a

1.08±0.11b7.14±0.19cf6.62±0.26cf

0.98±0.13d4.20±0.15d4.56±0.22d

0.46±0.300.44±0.070.46±0.07

0.54±0.32b0.64±0.06cf0.74±0.08adf

0.49±0.37a0.89±0.04d1.01±0.05d

1.04±0.18b2.81±0.502.69±0.53

1.14±0.23b2.35±0.38ae2.43±0.39e

0.89±0.25a1.09±0.12e1.07±0.12ea為p＜0.05，b為p＜0.01，與8周時相比較;c為p＜0.05,d為p＜0,01,與高脂組相比較;e為p＜0.05,f為p＜0,01,與辛伐他汀組相比較19.圖C圖B圖A肉眼觀察可見高脂組腹主動脈內(nèi)膜蘇丹Ⅳ染色顯示陽性區(qū)廣泛,有明顯粥樣斑塊形成,

脂質(zhì)斑塊增厚卷曲，彌漫至整個腹主動脈管壁。腦心通治組可見斑塊成顆粒狀，較薄，面積雖多辛伐他汀組，但顯著少于高脂組。兔腹主動脈蘇丹Ⅳ染色（1×）A為高脂組，B為腦心通組，C為辛伐他汀組。紅色區(qū)為粥樣脂紋和斑塊。20.圖A圖B圖C40倍40倍40倍可見高脂組粥樣斑塊形成，內(nèi)皮細胞消失，粥樣斑塊明顯增厚，大量無定形壞死物聚集，并可見灶狀泡沫細胞及炎細胞浸潤，病變累及肌壁淺肌層（圖A）。腦心通組斑塊厚度較辛伐他汀組增厚，但明顯較高脂組薄，由少量泡沫細胞聚集，肌層及外膜無明顯異常（圖B）。辛伐他汀組斑塊最少。